定量项目分析性能验证PPT课件
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5
分析性能验证
➢ 需要验证哪些内容？
CNAS-CL38 医学实验室质量和能力认可准则在临床化学领域的应用：
CNAS-CL39 医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学领域的应用(仅针对定性项目): 6
分析性能验证
生化项目：
精密度
免疫定性项目： 精密度
免疫定量项目： 精密度
正确度 可报告范围
符合率 正确度
医学决定 水平及精 密度最佳
浓度
覆盖线 性范围
每浓度水平 15个 2个
10个
2个
最低用量 测试 测试
测试
测试
—
—
1个 测试
—
—
—
在厂家 声明检 出限以 下，配 置梯度
浓度
20个 测试
接近分 析测量 范围上
限
2个 测试
覆盖检 测范围
2个 测试
注意：应按照厂家声明的样本类型、稳定期等进行样本的挑选以及保存。11
10
准备工作
正确度 正确度 精密度 (比对 (定值物
方案) 质)
线性 范围
参考 区间
检出 限
稀释 分析特 倍数 异性
可选用的样 患者血 患者血 室间质评 患者血 健康个 患者血 患者血 患者血
本类型
清
清
物质
清 体血清 清
清
清
需要的浓度 水平
≥2
20
≥2
5~7
挑选浓度水 平依据
医学决 定水平
覆盖检 测区间
数据处理
• 数据有效性判断 随机误差、操作失误、标本问题等等； 产生的有问题数据若参与计算，会使结果判读有较大偏差； 根据统计学方法找出离群值，剔除； 剔除离群值后应找出问题原因并改正，缺少的标本数应补全。
• 数据计算 借助Excel工具，行标和EP文件中都给了完整的数据统计表格形式。
14
结果判读——精密度
与厂家声明相比较 or 与实验室质量目标相比较？
➢ 性能验证的目的，是为了确定实验室现行方法能够满足临 床实验室对分析性能的要求。
➢ 在模拟日常操作的情况下，满足实验室质量目标即可。
15
结果判读——精密度
• CLIA’88 允许总误差或卫生部室间质量评价标准
批内不精密度 Sr < 1/4 TEa 总不精密度 S1< 1/3 TEa
什么时候需要进行验证？ 需要验证哪些内容？
3
分析性能验证
➢ 什么时候需要进行验证？
启用新的检测方法 • 新项目开展、同一检测项目新仪器上的使用、试剂换代等 已确认过的检测程序发生变更 • 影响到检测系统的维修过后（如更换测量池、加样针等）等
4
分析性能验证
➢ 需要验证哪些内容？
CNAS-CL02 医学实验室质量和能力认可准则：
特性、临 床意义、 验证目的 等制定性 能验证方 案 • 样本准备
验证实验
定量项目分析性能验证方案
概述 定量项目的分析性能验证 小结
2
分析性能验证
临床实验室所用的检验方法、仪器等应保证检验结果的准确可靠， 临床实验室应对所选购的商品定量试剂盒进行检查，以保证所选用的试 剂盒达到临床实验室要求的临床性能、分析性能、经济性能等各方面的 要求。
对未经修改而使用的已确认的检验程序进行独立验证。
确保每日闭环质控 在控
✓
借助excel或统计 学软件
行状态
✓ 人员要求
✓ 样本准备
9
准备工作
1. 确定验证方案 根据项目的临床价值、医学决定水平、常见影响因素等确定验
证方案，即要验证的内容。 2. 仪器处于良好运行状态，人员熟练掌握性能验证相关内容
可通过质控情况监测检测系统状态，或联系厂家确认；人员应 尽量为平常做实验的操作人员，能够熟练操作仪器、进行校准等。 3. 标本准备
12
验证实验
• 校准：按照日常操作校准频率进行校准 or 每个检测批次进行校准 • 质控：闭环质控，每日实验样本检测前做室内质控，实验样本检测
结束后也应做室内质控。当日质控需均在控当日实验数据才有效。 • 样本检测：尽可能接近日常样本检测。
《标准操作流程— 检测系统定量实验分析性能评价/验证》
13
准备工作
以TSH做精密度实验为例做样本准备： 1. 说明书中声明，TSH的检测范围为0.005-100.0 uIU/mL，TSH的参考范围
为0.27-4.2 uIU/mL，2008年中国甲状腺疾病诊疗指南-甲状腺功能亢进症 诊疗指南中提出甲亢患者TSH一般小于1.0 uIU/mL。故，应挑选1.0 uIU/mL，以及接近参考范围上限4.2 uIU/mL的两水平标本。 2.普通干燥管收集，2-8℃可保存7天；-20℃可保存1个月，不可反复冻融。 3. 一次检测标本用量为50uL，每天需150uL，加上日立杯死腔量100uL，再多 预留一些，则每天至少需要300uL样本，总共需1.5mL。因标本量小，且装在 同一子弹头及日立杯中，在操作过程中应避免不必要的蒸发。（此处计算的是 最少用量，如果标本有富余应多分装一些子弹头）
检出限 可报告范围
根据检验目的、预期用途等选择需要验证的性能特征
7
分析性能验证
生物参考区间
• 实验室的参考区间可依据厂家说明书也可依据权威文献， 如存在地区、人群等差异，应自行验证
灵敏度/检出限
某些项目的诊断灵敏度对辅助临床诊断、监测病情、判断 预后有价值
稀释倍数验证
• 对于需要稀释的样本，应对稀释样本进行验证，才可将可报告 范围扩大至稀释后的结果范围。
分析特异性 （含干扰物）
• 常见的干扰如黄疸、溶血、脂血等，例如验证黄疸对肝功能相 关指标检测的影响；或是针对某一情况（术后、服用某种药物 后等）对特定项目的影响。 8
分析性能验证
结果判读
数据处理
✓ 判断依据
验证实验
✓ 数据有效性判断
准备工作
✓ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
模仿日常操作条件
✓
离群值剔除及数据 补充
✓ ✓
验证方案的选择 ✓ 仪器处于良好的运
抽样误差——确认限
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结果判读——精密度
• 确认限的计算 需要消除由于抽样误差等造成的统计学差异
1. 自由度v的计算以及假拒绝率α的选择
自由度是有关样本数的数据；假拒绝率选择后得到的为（1-α/1）区间 ，α一般取5,得到的即为95%置信区间。
2. C值的确定
由确定的自由度v和α查表得到。
3. 确认限计算
其中，
17
结果判读——正确度（室间质评样本）
18
结果判读——线性范围
19
结果判读
• 参考区间 20名表观健康个体的检测值，不少于90%在参考区间以内
• 稀释倍数 稀释延伸出的检测区间也应满足检测范围内的线性相关
• 检出限 验证浓度的20次测定结果CV%≤20%
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小结
准备工作
• 人员准备 • 根据项目
分析性能验证
➢ 需要验证哪些内容？
CNAS-CL38 医学实验室质量和能力认可准则在临床化学领域的应用：
CNAS-CL39 医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学领域的应用(仅针对定性项目): 6
分析性能验证
生化项目：
精密度
免疫定性项目： 精密度
免疫定量项目： 精密度
正确度 可报告范围
符合率 正确度
医学决定 水平及精 密度最佳
浓度
覆盖线 性范围
每浓度水平 15个 2个
10个
2个
最低用量 测试 测试
测试
测试
—
—
1个 测试
—
—
—
在厂家 声明检 出限以 下，配 置梯度
浓度
20个 测试
接近分 析测量 范围上
限
2个 测试
覆盖检 测范围
2个 测试
注意：应按照厂家声明的样本类型、稳定期等进行样本的挑选以及保存。11
10
准备工作
正确度 正确度 精密度 (比对 (定值物
方案) 质)
线性 范围
参考 区间
检出 限
稀释 分析特 倍数 异性
可选用的样 患者血 患者血 室间质评 患者血 健康个 患者血 患者血 患者血
本类型
清
清
物质
清 体血清 清
清
清
需要的浓度 水平
≥2
20
≥2
5~7
挑选浓度水 平依据
医学决 定水平
覆盖检 测区间
数据处理
• 数据有效性判断 随机误差、操作失误、标本问题等等； 产生的有问题数据若参与计算，会使结果判读有较大偏差； 根据统计学方法找出离群值，剔除； 剔除离群值后应找出问题原因并改正，缺少的标本数应补全。
• 数据计算 借助Excel工具，行标和EP文件中都给了完整的数据统计表格形式。
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结果判读——精密度
与厂家声明相比较 or 与实验室质量目标相比较？
➢ 性能验证的目的，是为了确定实验室现行方法能够满足临 床实验室对分析性能的要求。
➢ 在模拟日常操作的情况下，满足实验室质量目标即可。
15
结果判读——精密度
• CLIA’88 允许总误差或卫生部室间质量评价标准
批内不精密度 Sr < 1/4 TEa 总不精密度 S1< 1/3 TEa
什么时候需要进行验证？ 需要验证哪些内容？
3
分析性能验证
➢ 什么时候需要进行验证？
启用新的检测方法 • 新项目开展、同一检测项目新仪器上的使用、试剂换代等 已确认过的检测程序发生变更 • 影响到检测系统的维修过后（如更换测量池、加样针等）等
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分析性能验证
➢ 需要验证哪些内容？
CNAS-CL02 医学实验室质量和能力认可准则：
特性、临 床意义、 验证目的 等制定性 能验证方 案 • 样本准备
验证实验
定量项目分析性能验证方案
概述 定量项目的分析性能验证 小结
2
分析性能验证
临床实验室所用的检验方法、仪器等应保证检验结果的准确可靠， 临床实验室应对所选购的商品定量试剂盒进行检查，以保证所选用的试 剂盒达到临床实验室要求的临床性能、分析性能、经济性能等各方面的 要求。
对未经修改而使用的已确认的检验程序进行独立验证。
确保每日闭环质控 在控
✓
借助excel或统计 学软件
行状态
✓ 人员要求
✓ 样本准备
9
准备工作
1. 确定验证方案 根据项目的临床价值、医学决定水平、常见影响因素等确定验
证方案，即要验证的内容。 2. 仪器处于良好运行状态，人员熟练掌握性能验证相关内容
可通过质控情况监测检测系统状态，或联系厂家确认；人员应 尽量为平常做实验的操作人员，能够熟练操作仪器、进行校准等。 3. 标本准备
12
验证实验
• 校准：按照日常操作校准频率进行校准 or 每个检测批次进行校准 • 质控：闭环质控，每日实验样本检测前做室内质控，实验样本检测
结束后也应做室内质控。当日质控需均在控当日实验数据才有效。 • 样本检测：尽可能接近日常样本检测。
《标准操作流程— 检测系统定量实验分析性能评价/验证》
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准备工作
以TSH做精密度实验为例做样本准备： 1. 说明书中声明，TSH的检测范围为0.005-100.0 uIU/mL，TSH的参考范围
为0.27-4.2 uIU/mL，2008年中国甲状腺疾病诊疗指南-甲状腺功能亢进症 诊疗指南中提出甲亢患者TSH一般小于1.0 uIU/mL。故，应挑选1.0 uIU/mL，以及接近参考范围上限4.2 uIU/mL的两水平标本。 2.普通干燥管收集，2-8℃可保存7天；-20℃可保存1个月，不可反复冻融。 3. 一次检测标本用量为50uL，每天需150uL，加上日立杯死腔量100uL，再多 预留一些，则每天至少需要300uL样本，总共需1.5mL。因标本量小，且装在 同一子弹头及日立杯中，在操作过程中应避免不必要的蒸发。（此处计算的是 最少用量，如果标本有富余应多分装一些子弹头）
检出限 可报告范围
根据检验目的、预期用途等选择需要验证的性能特征
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分析性能验证
生物参考区间
• 实验室的参考区间可依据厂家说明书也可依据权威文献， 如存在地区、人群等差异，应自行验证
灵敏度/检出限
某些项目的诊断灵敏度对辅助临床诊断、监测病情、判断 预后有价值
稀释倍数验证
• 对于需要稀释的样本，应对稀释样本进行验证，才可将可报告 范围扩大至稀释后的结果范围。
分析特异性 （含干扰物）
• 常见的干扰如黄疸、溶血、脂血等，例如验证黄疸对肝功能相 关指标检测的影响；或是针对某一情况（术后、服用某种药物 后等）对特定项目的影响。 8
分析性能验证
结果判读
数据处理
✓ 判断依据
验证实验
✓ 数据有效性判断
准备工作
✓ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
模仿日常操作条件
✓
离群值剔除及数据 补充
✓ ✓
验证方案的选择 ✓ 仪器处于良好的运
抽样误差——确认限
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结果判读——精密度
• 确认限的计算 需要消除由于抽样误差等造成的统计学差异
1. 自由度v的计算以及假拒绝率α的选择
自由度是有关样本数的数据；假拒绝率选择后得到的为（1-α/1）区间 ，α一般取5,得到的即为95%置信区间。
2. C值的确定
由确定的自由度v和α查表得到。
3. 确认限计算
其中，
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结果判读——正确度（室间质评样本）
18
结果判读——线性范围
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结果判读
• 参考区间 20名表观健康个体的检测值，不少于90%在参考区间以内
• 稀释倍数 稀释延伸出的检测区间也应满足检测范围内的线性相关
• 检出限 验证浓度的20次测定结果CV%≤20%
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小结
准备工作
• 人员准备 • 根据项目