微生物生物量 - 360文档中心

土壤微生物生物量的测定方法

土壤微生物生物量的测定方法1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器分析法）基本原理新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物生物量碳，用一定体积的LK2SO4溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。

根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（K EC），从而计算土壤微生物生物量碳。

实验仪器自动总有机碳（TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC—500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。

实验试剂1）无乙醇氯仿（CHCL3）；2）L硫酸钾溶液：称取87g K2SO4溶于1L蒸馏水中3）工作曲线的配制：用L硫酸钾溶液配制10ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、70ugC/L、100ugC/L系列标准碳溶液。

（其实一般情况下，仪器会自带的标曲，一般不用自己做的）操作步骤土壤的前处理（过筛和水分调节略）熏蒸称取新鲜（相当于干土，这个可以根据自己土样的情况而定）3份分别放入25ml小烧杯中。

将烧杯放入真空干燥器中，并放置盛有无乙醇氯仿（约2/3）的15ml烧杯2或3只，烧杯内放入少量防暴沸玻璃珠，同时放入一盛有NaOH溶液的小烧杯，以吸收熏蒸过程中释放出来的CO2，干燥器底部加入少量水以保持容器湿度。

盖上真空干燥器盖子，用真空泵抽真空，使氯仿沸腾5分钟。

关闭真空干燥器阀门，于25℃黑暗条件下培养24小时。

抽真空处理熏蒸结束后，打开真空干燥器阀门（应听到空气进入的声音，否则熏蒸不完全，重做），取出盛有氯仿（可重复利用）和稀NaOH溶液的小烧杯，清洁干燥器，反复抽真空（5或6次，每次3min，每次抽真空后最好完全打开干燥器盖子），直到土壤无氯仿味道为止。

同时，另称等量的3份土壤，置于另一干燥器中为不熏蒸对照处理。

（注意：熏蒸后不可久放，应该快速浸提）※浸提过滤从干燥器中取出熏蒸和未熏蒸土样，将土样完全转移到80ml聚乙烯离心管中，加入40ml L硫酸钾溶液（土水比为1:4，考虑到土样的原因，此部分熏蒸和不熏蒸土均为4g，即，4g土：16ml的硫酸钾溶液，当然这个加入量要根据TOC仪器的进入量决定）300r/min振荡30min，用中速定量滤纸过滤。

土壤微生物量测定方法

土壤微生物量测定方法常规培养法是最早也是最常用的土壤微生物量测定方法之一、该方法是将土壤样品经过稀释后接种到含有特定培养基的培养皿中，经过一段时间的培养，根据培养皿上的菌落数量计算土壤中微生物的数量。

常用的培养基有营养琼脂培养基、土壤细菌培养基和土壤真菌培养基等。

常规培养法的优点是简单易行，可以同时测定不同类型微生物的数量，但该方法有一些局限性，如只能测定能够在培养基上生长的微生物，不能测定需异养条件才能生长的微生物，而且该方法容易低估土壤中微生物的真实数量。

生物量测定法是一种利用土壤微生物的生物学过程测定微生物量的方法。

该方法一般分为碳饥饿法和氮饥饿法两种。

碳饥饿法是将土壤样品暴露在低碳条件下（如0.01%葡萄糖溶液中）一段时间后，测定土壤中的微生物的生物量。

氮饥饿法是将土壤样品暴露在低氮条件下（如0.01%硝酸铵溶液中）一段时间后，测定土壤中的微生物的生物量。

这两种方法都是利用微生物的生物学特性，通过测定微生物对不同养分的响应来估计微生物的数量。

生物量测定法的优点是准确度较高，可以测定土壤中广泛类型的微生物，但该方法也有一些局限性，如需要较长的试验周期，测定过程中需要严格控制温度、湿度等环境条件，且操作较为繁琐。

生物学特征法是一种通过测定土壤微生物的生物学特征来评估微生物群体数量的方法。

该方法常用的特征包括土壤酶活性、呼吸作用速率、微生物生长速率和微生物群体的磷脂脂肪酸组成等。

这些特征的测定可以通过色谱、酶反应和分子生物学技术等手段进行。

生物学特征法的优点是操作简便，消耗土壤样品较少，时间短，结果可靠。

但该方法也有一些问题，如不同微生物对环境的响应不同，结果受环境因素影响较大。

综上所述，土壤微生物量的测定方法有常规培养法、生物量测定法和生物学特征法等。

不同的测定方法各有优缺点，使用时可以根据具体的研究目的和所需数据的准确度进行选择。

此外，单一的方法往往无法全面准确地评估土壤微生物量，因此常采用多种方法综合分析，以得到更准确的结果。

土壤微生物量及土壤酶活性测定方法

2 土壤微生物量测定土壤微生物量（MB）是指土壤中体积小于5x103叩3的生物总量，但活的植物体如植物根系等不包括在内］。

它通过调控土壤中能量和养分循环以及有机物转化，来反映土壤同化和矿化能力。

土壤微生物生物量包括土壤微生物生物量碳、土壤微生物生物量氮、土壤微生物生物量磷和土壤微生物生物量硫，但一般情况下土壤微生物生物量的大小以土壤微生物生物量碳来表示。

2.1熏蒸浸提法2.1.1原理利用不同的浸提剂，通过氧化滴定法来测定土壤浸提液中有机C、N和P提取的可溶性有机碳含量和微生物量C之间存在较稳定的比例关系。

2.1.2则定步骤1.根据土壤样品含水量，调节土壤含水量为田间持水量的50%，25 ℃下密封培养10 d，以保持土壤均匀和不同地方所得结果的可比性。

2.氯仿熏蒸24 h后，用真空泵反复抽气，直到土壤闻不到氯仿气味为止。

根据所测对象不同选择不同的提取剂浸提，振荡浸提30 min后，立即分析浸提液中所测对象的含量或放入-15 ℃下保存。

表1指出氯仿熏蒸浸提法测定不同土壤微生物量所选用的浸提剂及其条件。

表1姓熏薪髓喉土就生帽条件Table I F'E fcrdieneasuirm aitcondiocnsof soilm riobialbmass土情即鄢Detemiia血cfhdicaMr Eitatnt土觥生醯K(=D,3S 或D.45土觥物1小K国加士躺蜘M恻般注®拓牖腌雄魂航觥刎楠融脑机装痴螭定雕耐帕帆小麒眼3 土壤酶活性测定土壤酶活性均用风干土壤。

土壤转化酶活性和过氧化氢酶活性、脲酶活性、磷酸酶活性依次用硫代硫酸钠滴定法、高锰酸钾滴定法、靛酚蓝比色法和磷酸苯二钠比色法测定（关松荫,1986）3.1脲酶一一靛酚蓝比色法脲酶的活性可以用来表示土壤供氮能力（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。

土壤微生物生物量的测定方法

土壤微生物生物量的测定方法1.直接计数法：直接计数法是通过显微镜观察土壤样品中微生物数量来测定土壤微生物生物量。

常用的直接计数法包括滴定法、薄层计数法和电镜计数法。

滴定法是将土壤样品溶解后，通过滴定法来计数微生物细胞的数量。

滴定法主要包括用荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）作为参比菌，将细菌与土壤样品混合，经一系列稀释后进行滴定。

通过观察滴定液中菌落的数量，可以推算出原始土壤样品中微生物的生物量。

薄层计数法是将土壤样品制成薄层，然后在显微镜下进行计数。

这种方法可以直接观察微生物的形态特征，通过计算单位面积上微生物的数量来估算微生物生物量。

电镜计数法是利用电镜的高分辨率特性，观察土壤样品中微生物的形态和数量。

这种方法可以观察到更小的微生物和微生物的形态细节，但是操作复杂，成本较高。

2.间接测定法：间接测定法通过测定土壤中微生物活性代谢产物来估算微生物生物量。

常用的间接测定法包括ATP测定法、细胞膜脂肪酸测定法和氮素代谢产物测定法等。

ATP测定法是通过测定土壤中的三磷酸腺苷(ATP)含量来估算微生物生物量。

微生物的ATP含量与其生物量有一定的关系，因此可以通过测定ATP含量来间接估算土壤微生物生物量。

细胞膜脂肪酸测定法是通过测定土壤样品中微生物细胞膜中的脂肪酸含量来估算微生物生物量。

微生物细胞膜中的脂肪酸种类和含量与微生物群落的组成和数量有关，因此可以通过测定脂肪酸的含量来间接估算微生物生物量。

氮素代谢产物测定法是通过测定土壤样品中微生物氮素代谢产物的含量来估算微生物生物量。

微生物的氮素代谢活动与其生物量有关，因此可以通过测定氮素代谢产物的含量来间接估算微生物生物量。

3.分子生物学方法：分子生物学方法是利用PCR技术对土壤样品中微生物的DNA或RNA进行扩增和测定来估算微生物生物量。

常用的分子生物学方法包括引物扩增法、荧光原位杂交法和高通量测序法等。

引物扩增法是通过设计特定的引物对微生物的DNA或RNA进行扩增，并通过PCR反应的产物数量来估算微生物生物量。

土壤微生物量测定方法

土壤微生物量测定方法一、土壤微生物生物量碳（氯仿熏蒸－K2SO4提取-碳分析仪器法）1、试剂（1）去乙醇氯仿制备：在通风橱中，将分析纯氯仿与蒸馏水按1 2（v : v）加入分液漏斗中，充分摇动1 min，慢慢放出底层氯仿于烧杯中，如此洗涤3次。

得到的无乙醇氯仿中加入无水氯化钙，以除去氯仿中的水分。

纯化后的氯仿置于试剂瓶中，在低温（4℃）、黑暗状态下保存。

（2）氢氧化钠溶液[c（NaOH）= 1 mol L-1]：通常分析纯固体氢氧化钠中含有碳酸钠，与酸作用时生成二氧化碳，从而影响滴定终点判断和测定的准确度。

配制时应先除去碳酸钠，根据碳酸钠不溶于浓碱，可先将氢氧化钠配成50%（w : v）的浓氧溶液，密闭放置3～4 d。

待碳酸钠沉降后，取56 ml 50%氢氧化钠上清液（约19 mol L-1），用新煮沸冷却的除去二氧化碳的蒸馏水释稀到1 L，即为浓度1 mol L-1 NaOH溶液，用橡皮塞密闭保存。

（3）硫酸钾提取剂[c（K2SO4）= 0.5 mol L-1]：取1742.5 g分析纯硫酸钾，用研钵磨成粉末状，倒于25 L塑料桶中，加蒸馏水至20 L，盖紧螺旋盖置于摇床（150 r min-1）上溶解24 h即可。

（4）六偏磷酸钠溶液[ρ（Na）= 5 g 100 ml-1，pH 2.0]：称取50.0 g分析纯六偏磷酸钠溶于800 ml高纯度去离子水中，用分析纯浓磷酸调节至pH 2.0，用高纯度去离子水定容至1 L。

要注意的是六偏磷酸钠溶解速度很慢应提前配制；由于其易粘于烧杯底部，若加热常因受热不均使烧杯破裂。

（5）过硫酸钾溶液[ρ（K2S2O8）= 2 g 100 ml-1]：称取20.0 g分析纯过硫酸钾，溶于高纯度去离子水中，定容至1 L。

值得注意过硫酸钾溶液易被氧化，应避光存放且最多使用7 d。

（6）磷酸溶液[ρ（H3PO4）= 21 g 100 ml-1]：量取37 ml 分析纯浓磷酸（85%），慢慢加入到188 ml高纯度去离子水中即可。

土壤微生物量的测定方法

土壤微生物量的测定方法：现状和展望何振立(浙江农业大学土化系．3 10029)摘要本文综述了土壤微生物量包括微生物量碳．微生物量氮、微生物量礴和缴生物量硫的测定方法的发展和现状，对现存各种方{击的特点和局限性作了简要的评述，指出了应用这些方法须注意的阀题和今后的研究方向．一、土壤微生物量及其研究意义土壤微生物量指土壤中体积小于5×10 m 的生物总量，但活的植物体如植物根系等不包括在内．它是活的土壤有机质部分．众所周知，土壤生物是植物养料转化．有机碳代谢及污染物降解的驱动力．在土壤肥力和生态系统中具有重要的作用．土壤微生物量作为土壤中植物有效养料的储备库或源，取决于土壤环境条件及养分耗竭状况“”。

70年代中期以来，薰蒸法的出现大大提高了人们对土壤微生物量研究的兴趣．虽然现存的定量测定方法仍有不尽人意之处．但它们在土壤生物与环境的研究中，对人们更好了解土壤微生物一植物一环境相互作用方面已显示出了它的重要作用．二、土壤微生物量的测定(一)平板计数法平板计数法比较原始，但仍不失为最直接的土壤微生物量测定方法．土壤样品加水制成悬液，在显微镜下计数，并测定各类微生物体的大小。

根据一定观察面积上微生物的数目、体积及微生物的比重(一般采用1．18克cm- )计算出每克干土所含的微生物量．或根据微生物体的干物质含量(一般采用25％)及干物质含碳量(通常为47％)，进一步换算成每克土壤微生物体的碳含量．微生物的比重、干物质含量及含碳量等参数一般通过纯培养试验获得．直接计数法技术难度大．计数和体积测量都可能发生较大误差，因此不太适宜用作常规分析．读者若有兴趣．可参阅文献[】、3、4]．(二)成份分析法根据土壤中某种特定的生物代谢成份的含量嘧定土壤微生物量．这种标记成份理论上必须满足下列条件： 1，该成份存在于生物体各部分．其浓度不随时问和其它条件而变定浸提液中的这种标记成份。

目前比较常用的成份分析法是根据测定土壤中ATP含量来估算土壤微生物量．ATP的测定步骤包括破坏微生物的细胞，使其所含的ATP释放出来，并被提取到适当的溶液中。

微生物生物量的测定方法研究

微生物生物量的测定方法研究微生物是生态系统最小的组成部分，其数量和活性对土壤、水体等自然环境质量的评估具有重要意义。

因此，测定微生物生物量的数量远远超过单纯的科学研究。

本文将会介绍微生物生物量的测定方法研究。

第一部分：微生物生物量的概念和意义微生物生物量是指单位土壤（或水体）中存活着的微生物的数量。

在微生物领域已有很多关于其生物量测定和影响因素方面的研究。

微生物生物量的测定是微生物社群结构和功能评估的一个重要方面。

微生物生物量的测定方法可以揭示不同土壤样品中微生物群落代谢和生长活性的变化，有助于理解土壤和水体健康、功能、枯萎、受污染和恢复过程。

通过微生物生物量的测定，可以较准确地评估不同生态系统中的微生物多样性和群落代谢与生理水平。

第二部分：常见的微生物生物量测定方法苏氏方法(SUA)，基于生物量是与微生物胞体的碳和氮直接相关的原则，是最常用的微生物生物量测定方法。

同时，SUVA氯仿抑制法是常用的测定土壤碳氮各组分和微生物生物量的方法之一。

在微生物研究中常用的微生物生物量测定法包括直接测定法和间接测定法两种类型。

1. 直接测定法直接测定微生物生物量的方法就是通过直接分离和计数微生物，并且每种微生物生物量都相加得到微生物生物量的总数。

其中普通计数是最常用的方法之一，在肉汤半固体培养基中培养微生物并进行计数。

2. 间接测定法间接测定法是基于微生物群落元素转化过程中，养分互相作用的过程。

典型间接方法是通过测试微生物对特定底物的反应，如通过在土壤样品中添加硝酸钾、葡萄糖或氨等元素，测定微生物对特定底物的呼吸速率、生长和活性浓度等量。

当然，在微生物测定中，还有其他常用测定方法如：测定异丙酚氧化速率、碳源利用能力、醋酸级联浓度、硝酸盐还原速率等，但以上方法和描述的方法一样，均基于微生物群落中元素或化合物的代谢和转化过程，以间接或直接方式实现微生物生物量和群落数量的测定。

第三部分：微生物生物量测定方法数据解释及局限性1. 数据解释在微生物生物量测定的研究中，表现微生物量的数据通常分为两个组分：微生物碳水平和微生物氮水平。

土壤微生物生物量的测定方法(氯仿熏蒸)

土壤微生物生物量的测定方法1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器分析法）1.1 基本原理新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物生物量碳，用一定体积的0.5mol/LK2SO4溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。

根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（K EC），从而计算土壤微生物生物量碳。

1.2 实验仪器自动总有机碳（TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC—500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。

1.3 实验试剂1）无乙醇氯仿（CHCL3）；2）0.5mol/L硫酸钾溶液：称取87g K2SO4溶于1L蒸馏水中3）工作曲线的配制：用0.5mol/L硫酸钾溶液配制10ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、70ugC/L、100ugC/L系列标准碳溶液。

（其实一般情况下，仪器会自带的标曲，一般不用自己做的）1.4 操作步骤1.4.1 土壤的前处理（过筛和水分调节略）1.4.2 熏蒸称取新鲜（相当于干土10.0g，这个可以根据自己土样的情况而定）3份分别放入25ml小烧杯中。

将烧杯放入真空干燥器中，并放置盛有无乙醇氯仿（约2/3）的15ml烧杯2或3只，烧杯内放入少量防暴沸玻璃珠，同时放入一盛有NaOH溶液的小烧杯，以吸收熏蒸过程中释放出来的CO2，干燥器底部加入少量水以保持容器湿度。

盖上真空干燥器盖子，用真空泵抽真空，使氯仿沸腾5分钟。

关闭真空干燥器阀门，于25℃黑暗条件下培养24小时。

1.4.2 抽真空处理熏蒸结束后，打开真空干燥器阀门（应听到空气进入的声音，否则熏蒸不完全，重做），取出盛有氯仿（可重复利用）和稀NaOH溶液的小烧杯，清洁干燥器，反复抽真空（5或6次，每次3min，每次抽真空后最好完全打开干燥器盖子），直到土壤无氯仿味道为止。

同时，另称等量的3份土壤，置于另一干燥器中为不熏蒸对照处理。

微生物量微生物大小及数量的测定

微生物量：微生物大小及数量的测定微生物量：微生物大小及数量的测定微生物大小及数量的测定一、实验目的1.学习并掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方法。

2.了解血细胞计数板的构造及计数原理。

3.掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

二、实验原理1.微生物大小测定原理微生物细胞的大小是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。

其测量工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

镜台测微尺是中央部分刻标准刻尺的载玻片，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100小格，每一小格长度为0.01mm，即10μm。

如图1。

图1镜台测微尺中央部分及镜台测微尺校正目镜测微尺目镜测微尺，如图2，是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般有等分为50小格和100小格两种。

测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微放大后的细胞物象。

由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。

图2目镜测微尺2.血球计数板测定微生物数量的原理血细胞计数板是一块特制的载玻片，其上由4条槽构成3个平台。

中间较宽的平台又被一段横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分9个大方格，中间的大方格即为计数室。

计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16小方格（图5-2）；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是2400个。

每一个大方格边长为1mm，则每一个大方格的面积为1mm，盖上盖玻片后，盖玻片3与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm（10-4mL）。

以25个中方格的计数板为例，设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，则：1mL菌液中的总菌数=A/5×25×10×B图3血球计数板侧面及两种类型的计数室三、实验1.菌种枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)斜面培养物；酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)液体培养基培养物。

熏蒸培养法测量土壤微生物生物量碳

熏蒸培养法测量土壤微生物生物量碳一、实验原理：用氯仿杀死土壤中的微生物，并接种新的土壤，培养微生物使之释放二氧化碳。

测量一定时间内熏蒸土壤与为熏蒸土壤中微生物释放的二氧化碳量来估算土壤中微生物的生物量碳。

二、实验步骤：1.氯仿去乙醇。

用锡箔纸包裹分液漏斗（纵向留出一条细缝，以便观察分层情况）。

向分液漏斗中加入氯仿和氯仿一半体积的蒸馏水，盖上分液漏斗的盖子，上下摇晃数次。

静置片刻，放出分液漏斗下层的氯仿。

2.抽气。

用细筛筛选250g土壤于500mL烧杯中，并将烧杯至于干燥器中。

干燥器内放入盛有少量蒸馏水的小烧杯。

另取100mL干燥的烧杯一个，向其中加入50mL去乙醇氯仿和干燥的玻璃珠（防止氯仿爆沸，且要铺满整个烧杯底部）后，将之放入干燥器中。

在盖子内侧贴上一条蒸馏水润湿的滤纸条。

盖好干燥器的盖子，用真空泵抽气至氯仿沸腾，关闭干燥器的活塞。

把干燥器放入遮光恒温（25℃）的条件下培养24小时。

3.排出氯仿。

取出干燥器内的氯仿和湿润的滤纸条，在次抽气三分钟后打开盖子散发土壤中的氯仿，如此连续反复三次，就能排出土壤中的氯仿。

4.另筛取250g土壤，不熏蒸。

分别在熏蒸土壤和未熏蒸土壤中加入1g新鲜土壤且充分混匀。

调节土壤水分至罪大含水量的55％。

将两份土壤各放入一个未放干燥剂的干燥器中。

在干燥器中放入盛有20mL蒸馏水的烧杯盛有100mL 1mol/L NaOH溶液，盖好盖子，培养十天。

5.滴定。

取出NaOH溶液，取25mL于250mL容量瓶中，定溶。

从容量瓶中取出20mL于150mL三角瓶中，用1mol/L的HCl溶液调节Ph至10。

再用0.05mol/L的HCl溶液滴定至Ph为8.3，继续滴定至Ph为3.7，记录Ph从8.3到3.7所消耗HCl溶液的体积。

.三、计算K YX B -=土壤微生物生物量碳其中，X为熏蒸土壤释放的CO2量，Y为未熏蒸土壤释放的CO2量，由滴定所消耗的HCl溶液的体积计算得出。

土壤微生物量及土壤酶活性测定方法

土壤微生物量及土壤酶活性测定方法土壤中的微生物是维持土壤生态系统健康的重要组成部分，土壤酶活性则可以作为评价土壤肥力和生物活性的重要指标。

因此，在土壤微生物量和土壤酶活性测定方面的研究非常重要。

本文将介绍几种常用的土壤微生物量和土壤酶活性的测定方法。

一、土壤微生物量测定方法1.铺平法：将土壤样品铺平在玻璃板上，使用显微镜对土壤中的微生物进行直接观察和计数。

这种方法的优点是简单易行，但需要大量的时间和人力。

2.累积碳法：通过测定土壤中的有机碳含量来间接估算土壤微生物量。

有机碳水平与微生物量密切相关，所以可以通过测定土壤中的有机碳来推测微生物的数量和活性。

3.培养法：将土壤样品接种到适当的培养基上进行培养，然后通过菌落计数或直接计数来估算微生物的数量。

这种方法适用于数量较多的微生物，如细菌和真菌。

4.傅里叶变换红外光谱法（FTIR）：通过测量土壤样品的傅里叶变换红外光谱，分析土壤中的微生物量。

该方法具有快速、准确、非破坏性等优点。

1.浊液法：通过观察测定液中的混浊度来测定土壤中的脲酶、过氧化氢酶等氧化酶的活性。

这种方法简单易行，但对于不同种类的土壤酶效果不一样。

2.比色法：采用酶底物与酶催化产物之间的化学反应，通过测定反应产物的颜色来估算土壤酶活性。

比色法可以用于测定脱氢酶、脱氢酶、脱氧核苷酸酶等酶的活性。

3.荧光法：将有机物和荧光试剂一起加入土壤样品中，经过反应后，在荧光分析仪中测定产生的荧光强度来测定土壤酶的活性。

荧光法适用于测定蔗糖酶、酚氧化酶和脱氢酶等酶的活性。

4.比浊法：通过加入酶底物后，观察土壤样品的混浊度来测定土壤中酶的活性。

比浊法适用于黄酶、脱氢酶等酶的活性测定。

5.电导法：通过测定土壤样品溶液中的电导率变化来估算土壤中酶的活性。

电导法适用于磷酸酶和脱氢酶等酶的活性测定。

总结起来，土壤微生物量和土壤酶活性的测定方法多种多样，选择合适的方法需要考虑样品特性和实验条件等因素。

每种方法都有其优点和局限性，研究者应根据需要选取合适的方法进行测定。

土壤微生物生物量的测定方法(氯仿熏蒸)汇总

土壤微生物生物量的测定方法1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器分析法）1.1 基本原理新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物生物量碳，用一定体积的0.5mol/LK2SO4溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。

根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（K EC），从而计算土壤微生物生物量碳。

1.2 实验仪器自动总有机碳（TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC—500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。

1.3 实验试剂1）无乙醇氯仿（CHCL3）；2）0.5mol/L硫酸钾溶液：称取87g K2SO4溶于1L蒸馏水中3）工作曲线的配制：用0.5mol/L硫酸钾溶液配制10ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、70ugC/L、100ugC/L系列标准碳溶液。

（其实一般情况下，仪器会自带的标曲，一般不用自己做的）1.4 操作步骤1.4.1 土壤的前处理（过筛和水分调节略）1.4.2 熏蒸称取新鲜（相当于干土10.0g，这个可以根据自己土样的情况而定）3份分别放入25ml小烧杯中。

将烧杯放入真空干燥器中，并放置盛有无乙醇氯仿（约2/3）的15ml烧杯2或3只，烧杯内放入少量防暴沸玻璃珠，同时放入一盛有NaOH溶液的小烧杯，以吸收熏蒸过程中释放出来的CO2，干燥器底部加入少量水以保持容器湿度。

盖上真空干燥器盖子，用真空泵抽真空，使氯仿沸腾5分钟。

关闭真空干燥器阀门，于25℃黑暗条件下培养24小时。

1.4.2 抽真空处理熏蒸结束后，打开真空干燥器阀门（应听到空气进入的声音，否则熏蒸不完全，重做），取出盛有氯仿（可重复利用）和稀NaOH溶液的小烧杯，清洁干燥器，反复抽真空（5或6次，每次3min，每次抽真空后最好完全打开干燥器盖子），直到土壤无氯仿味道为止。

同时，另称等量的3份土壤，置于另一干燥器中为不熏蒸对照处理。

土壤微生物量的影响因素

土壤微生物量的影响因素1.引言1.1 概述概述部分的内容可以如下编写：土壤是地球上最重要的自然资源之一，它承载着植物的生长和生态系统的平衡。

土壤微生物是土壤生态系统中一个重要的组成部分，其数量和活性对土壤质量和生态系统功能具有重要影响。

土壤微生物量是指单位土壤质量或体积中的微生物生物量。

它包括细菌、真菌、放线菌、古菌等多种微生物群体。

土壤微生物量的测定能够反映土壤生态系统的健康状况、土壤肥力和生物地球化学循环的强度。

土壤微生物量的影响因素是多种多样的。

首先，土壤环境因素是影响土壤微生物量的重要因素之一。

例如，土壤温度、湿度、酸碱度和氧气含量等环境因素会对土壤微生物的生存和繁殖产生影响，从而对土壤微生物量产生影响。

其次，土壤养分状况也是影响土壤微生物量的关键因素。

不同类型的养分含量和比例都会对土壤微生物的生理代谢和生长繁殖产生重要影响。

另外，土壤地理因素如海拔、土壤类型和土壤质地等也会对土壤微生物量产生影响。

此外，人为活动如农药使用、施肥、土壤耕作方式等也会对土壤微生物量产生直接或间接的影响。

总之，土壤微生物量的影响因素是多方面综合作用的结果。

深入研究这些影响因素，有助于我们更好地理解土壤微生物生态系统的运行机制和土壤生态功能的发挥。

在这篇文章中，我们将重点探讨土壤微生物量的几个重要影响因素，以期为土壤生态系统的管理和保护提供科学依据。

1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包含以下内容：文章结构部分的主要目的是为读者提供文章内容的整体框架，让读者清楚地了解文章的组织结构和内容安排。

通过明确的结构，读者可以更好地理解文章的逻辑关系，掌握主题的发展思路。

本文的结构分为三个主要部分：引言、正文和结论。

引言部分将给出文章的背景和动机，概述土壤微生物量的研究现状以及存在的问题和挑战。

接下来，文章将介绍本文的结构安排，即引言、正文和结论部分具体的内容和组成。

正文部分将围绕土壤微生物量的影响因素展开讨论。

首先介绍影响因素1，包括XX、XX和XX等方面的内容。

微生物检测方法

3）将接种好的试管与28摄氏度培养4D后，检查有无细菌，如有培养液会变浑浊甚至有气泡出现
4）吸取1或2滴培养液于白瓷板孔中，加入1，2滴奈氏试剂后出现棕红色或浅褐色沉淀表明培养基有氨产生。用格里斯试剂和二苯胺分别检查是否有亚硝酸和硝酸的产生
5）对反硝化细菌进一步分离和纯化，可吸取培养液1ml到新鲜培养液中富集培养，必要时可反复两次富集培养。吸取浓缩10倍的反硝化细菌培养液2ml，加入到经紫外线消毒的硅胶板上，涂匀置于40摄氏度恒温箱中干燥至平板表面无积水，然后将富集培养的样品进行悬液接种培养。14D后观察菌落生长的情况，并纯化单菌落
3）二苯胺试剂：0.5g二苯胺溶于20ml蒸馏水以及100ml浓硫酸中
2
1）每支试管（1.8cmx18cm）中装入10ml培养基（深层培养，造成厌氧条件，培养基成分及其含量见表6-1）在培养基倒放一小根玻璃管（杜氏发酵管）121摄氏度下灭菌30min
2）选取五个稀释度（10^-7-10^-3)沉积物悬液，每一稀释度的悬液接种四支试管，每管接种1ml。另取四支培养基不接种悬液而接种无菌水作为对照。
操作步骤
（1）NH4+—N标线绘制
7支50ml比色管,分别加入0、0.25、0.50、1.50、2.50、3.50、5.00ml铵标准使用液，用水定容至50ml。
（2）样品测定
氯仿熏蒸处理
在低温下保存的沉积物样品从冰箱中取出，室温再称取，称取5g新鲜沉积物样品到50ml的小烧杯中，置于真空干燥器内，干燥器底部预放一张湿润粗滤纸保持湿度，真空干燥器内放置装有氯仿的小烧杯，烧杯内放置几粒无水氯化钙防止爆沸。少量凡士林密封干燥器，用真空泵抽气至干燥器内氯仿沸腾，关闭真空干燥器阀门，在25摄氏度暗处放24小时，熏蒸完成后，打开干燥器阀门，取出氯仿烧杯，用真空泵反复抽真空，打开干燥器去除沉积物中残留的氯仿。

土壤微生物生物量的测定方法(氯仿熏蒸)

土壤微生物生物量的测定方法(氯仿熏蒸)土壤微生物生物量的测定方法1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器分析法）1.1 基本原理新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物生物量碳，用一定体积的0.5mol/LK2SO4溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。

根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（K EC），从而计算土壤微生物生物量碳。

1.2 实验仪器自动总有机碳（TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC—500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。

1.3 实验试剂1）无乙醇氯仿（CHCL3）；2）0.5mol/L硫酸钾溶液：称取87g K2SO4溶于1L蒸馏水中3）工作曲线的配制：用0.5mol/L硫酸钾溶液配制10ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、70ugC/L、100ugC/L系列标准碳溶液。

（其实一般情况下，仪器会自带的标曲，一般不用自己做的）1.4 操作步骤1.4.1 土壤的前处理（过筛和水分调节略）1.4.2 熏蒸称取新鲜（相当于干土10.0g，这个可以根据自己土样的情况而定）3份分别放入25ml小烧杯中。

将烧杯放入真空干燥器中，并放置盛有无乙醇氯仿（约2/3）的15ml烧杯2或3只，烧杯内放入少量防暴沸玻璃珠，同时放入一盛有NaOH溶液的小烧杯，以吸收熏蒸过程中释放出来的CO2，干燥器底部加入少量水以保持容器湿度。

盖上真空干燥器盖子，用真空泵抽真空，使氯仿沸腾5分钟。

关闭真空干燥器阀门，于25℃黑暗条件下培养24小时。

1.4.2 抽真空处理熏蒸结束后，打开真空干燥器阀门（应听到空气进入的声音，否则熏蒸不完全，重做），取出盛有氯仿（可重复利用）和稀NaOH溶液的小烧杯，清洁干燥器，反复抽真空（5或6次，每次3min，每次抽真空后最好完全打开干燥器盖子），直到土壤无氯仿味道为止。

土壤微生物生物量的测定(滴定法)

土壤微生物生物量(碳、氮）的测定(滴定法)一、实验目的和内容土壤微生物生物量是指土壤中体积小于5～10μm3活的微生物总量，是土壤有机质中最活跃的和最易变化的部分。

耕地表层土壤中，土壤微生物量碳（Bc）一般占土壤有机碳总量的3％左右，其变化可直接或间接地反映土壤耕作制度和微生物肥力的变化，并可以反映土壤污染的程度。

近30年来，国外许多学者对土壤微生物生物量的测定方法进行了比较系统的研究，但由于土壤微生物的多样性和复杂性，还没有发现一种简单、快速、准确、适应性广的方法。

目前广泛应用的方法包括：氯仿熏蒸培养法（FI）、氯仿熏蒸浸提法（FE）、基质诱导呼吸法（SIR）、精氨酸诱导氨化法和三磷酸腺苷（ATP）法。

氯仿熏蒸浸提法（FE）的原理是：土壤经氯仿熏蒸处理，微生物被杀死，细胞破裂后，细胞内容物释放到土壤中，导致土壤中的可提取碳、氨基酸、氮、磷和硫等大幅度增加。

通过测定浸提液中全碳的含量可以计算土壤微生物生物量碳。

二、实验材料和用具仪器：培养箱；真空干燥器；真空泵；往复式振荡机（速率200次每min）；1L广口玻璃瓶；定量滤纸；紫外分光光度计；LNK-872型消煮炉（江苏省宜兴市科教仪器研究所）试剂：1.无乙醇氯仿：市售的氯仿都含有乙醇（作为稳定剂），使用前必须除去乙醇。

方法为：量取500ml氯仿于1000ml 分液漏斗中，加入50ml硫酸溶液[ρ(H2SO4)=5%]，充分摇匀，弃除下层硫酸溶液，如此进行3次。

再加入50ml去离子水，同上摇匀，弃去上部的水分，如此进行5次。

将下层的氯仿转移存放在棕色瓶中，并加入约20g无水K2CO3，在冰箱的冷藏室中保存备用。

2.硫酸钾溶液[c(K2SO4)=0.5mol·L-1]称取硫酸钾（K2SO4，化学纯）87.10g，先溶于300ml去离子水中，加热，转移溶液至容器中，再加少量去离子水溶解余下的部分，转移溶液至同一容器中，如此反复多次。

最后定容至1L；3.重铬酸钾[c(1/6 K2Cr2O7)=0.4000mol·L-1]：称取经130℃烘干2～3h的重铬酸钾（K2Cr2O7，分析纯）19.622g，溶于1000ml去离子水中；4.邻啡罗啉亚铁指示剂：称取邻啡罗啉（C12H8N2H2O，分析纯）1.49g，溶于含有0.70gFeSO4·7H2O的100ml 去离子水中，密闭保存于棕色瓶中；5.硫酸亚铁溶液[c（FeSO4·7H2O）＝0.0667mol·L-1]：称取硫酸亚铁（FeSO4·7H2O，化学纯）18.52g，溶解于600ml～800ml去离子水中，加浓硫酸（化学纯）15ml，搅拌均匀，定容至1000ml，于棕色瓶中保存。

微生物生物量对微生物残体碳的影响机制

微生物生物量对微生物残体碳的影响机制下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

文档下载后可定制修改，请根据实际需要进行调整和使用，谢谢!本店铺为大家提供各种类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!微生物生物量对微生物残体碳的影响机制引言微生物在地球生态系统中扮演着至关重要的角色，其生物量和代谢活动对碳循环过程具有重要影响。