研究生现代微生物学-微生物(实验)技术3
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第二章 微生物（实验）技术概论
1. 灭菌技术 灭菌、消毒、除菌与操作，尤其强调无菌操作在微
生物学研究中的重要意义。 2. 微生物采集和分离技术
微生物样品采集、富集和微生物纯培养的分离 3. 菌种分离方法，培养基设计制备与大规模细胞培养、菌 体收集与菌种保藏 4. 微生物育种方法：
标记菌种获得与应用， 体外诱变育种、杂交育种、原生质育种、基因工程育种 离心、电泳原理和方法，层析技术，紫外、红外、质谱 、核磁共振原理及微生物研究中的应用
化学消毒法包括：
①过氧乙酸(PAA)消毒。②甲醛消毒。③环氧乙烷消毒。④戊二醛消毒 。⑤84消毒液消毒。⑥乙醇消毒。⑦碘消毒。⑧高猛酸钾消毒。⑨洗必太 消毒等。
2、保证环境空气的质量的现代化设施：
（1）空调超净：
人员流动频繁，空气中浮游菌大量传播。近30年来，继 工业性洁净室后，又开展了生物洁净室。通过空气净化系统过 滤(层流装置)，控制空气中含细菌程度。高效过滤的空气细菌 过滤的有效率可达99. 97%，能够有效地控制和稳定环境。
现代消毒灭菌的方法很多，为有效实施无菌技术 操作打下了坚实基础。在日常运用时，要注意将消毒 、灭菌、无菌和清洁几个词的概念区别清楚。
消毒，即用物理的或化学的方法，杀死和清除传 播物体上病原微生物，达到无害化的目的，即要求将 有害微生物的数量减少到无害的程度而非全部杀灭。
灭菌，是将传播物体上的一切微生物全部杀灭。
1865年，当时Lister发现受伤感染是由细菌引起的。李斯特了解到石 碳酸可以被用来清除污水发出的臭味，如果使用石碳酸的话则可能降低疾 病的传染性。于是决定试着利用它治疗1例小男孩腿部的复合骨折，并获 得成功。
此后，从事外科手术的医生逐渐从身穿便衣更换为消毒衣和帽子，消 毒衣逐步地引入了手术台，并且开始对手术台进行消毒，这就有效地降低 了病人感染的几率。发展到橡胶手套、用热力灭菌来消毒器械，推动了无 菌技术的发展。1897年，波兰医生米库利奇提出：在为病人施行手术过程 中外科医生应该将自己的口腔、鼻腔、胡须用一层纱布遮住以避免唾液飞 溅到伤口上，于是口罩便逐步形成了，它进一步促进了无菌技术的发展。
3M压力灭菌指示胶带------型号3M-1222：用于各种下排气，预真空锅， 指示灭菌包是否灭菌，并判读包外灭菌效果。胶带上有指示剂，只有在一 定温度压力的饱和蒸汽作用下， 经一定时间后，才能变成深褐色。胶带不 会因蒸汽而自行脱落，不留残胶。圆珠笔及标记笔，在胶带上可作相关记 录。可用于封包，保证灭菌包裹既不紧也不松。
于空气中，随空气的流动而扩散，抖动单、巾、开关门窗 等均可增加空中细菌含量。另外，空气、物体表面监测发 现，室内人员数量的增加，人员活动幅度大，极容易污染 空气。
（3）监测概念 （4）严格要求概念：每个工作人员都自觉遵守、严格执行各
种规章制度。为了消除杂菌污染的机会，我们必须对实验 室进行严格的消毒、灭菌，对所用培养基及器皿进行彻底 灭菌，严格进行无菌操作。
层流式通风将空气由一侧全面地以均匀速度流至另一侧， 使污染空气平推而出，通风时气流在室中按整个横切面平推前 进，故称层流式通风。层流式通风送风量大，最多可相当于每 小时换气600~700次。通风中使用过滤器的面积大，气流通过 过滤器的流速较慢，但保持空气灭菌环境彻底。
（2）超声波清洗机：
超声波清洗机的声波可更加彻底地清洗器械，是现代清 洗器械较为理想的设施。机器的发电机向换能器提供电能，换 能器将电能转换为振动声波形式的机械能，声波经过盛有洗涤 液的容器，通过一个称为空穴作用的过程，有机物碎屑和其它 污垢能被迅速彻底地从浸于溶液中的物品上清除。这一方法可 清洗手术器械、玻璃器皿和其它设备的表面，有些部位是无法 用其它方法清洗的。
（3）无菌室的门
膝式或足踏式开关电动门、感应门。人员无需用手可使 门开启或关闭，使用理想。光电式开关门适用于无菌室大门 口。
3、实行实验室现代化管理
即监测-控制-管理一体化系统。 凡进入手术室的工作人员，必须牢固树立以下基本概念 。
（1）分区概念：即限制区，半限制区，非限制区。 （2）空气传菌概念：快速气流可使物体表面的细菌飞起漂浮
无菌，是使传播物体不存在任何微生物的状态， 是在灭菌和消毒的基础上才能实现。
清洁，是将污染物体上的微生物的数量降低到安 全水平以内的一种方法，比如清洗及洗刷等，它达不 到消毒的要求。
Байду номын сангаас
1、现代消毒灭菌的方法
可分为两大类：即物理消毒法和化学消毒法。
物理消毒法包括：
①下排式高压灭菌消毒法。②预真空高压灭菌法。③低温甲醛蒸气消 毒器灭菌法。④煮沸消毒灭菌法。⑤三氧消毒法。⑥干热灭菌法。⑦其它 ， 如光照消毒，γ射线(两种射线)灭菌等。
第一节 灭菌、除菌和消毒技术
灭菌、消毒、除菌与操作，尤其强调 无菌操作在微生物学研究中的重要意义。
无菌技术是指在操作过程中，防止一切微生物侵入机体和 保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法。
盖伦坚持化脓是伤口恢复所必须过程的观点，并且由于他 在医学界的统治地位，在很大程度上影响了后来的医生对伤口 处理的探索。直到近代微生物学的奠基人、法国杰出的生物学 家化学家路易斯-巴斯德(Louis Pasteur)于19世纪50年代证明 伤口的脓汁是由于空气中存在的微生物导致的，盖伦对感染的 错误认识才被彻底纠正。巴斯德同时还提出，如果是微生物引 起了感染，那么可以通过去除这些微生物来控制感染，而去除 微生物的方法有：过滤、加热、将它们暴露于化学环境中。前 两种方法显然是不适合应用于人类的，与巴斯德同一时代的他 的朋友、苏格兰的外科教授约瑟·李斯特(Joseph Lister)于是 选择了第3种方法来控制伤口的感染。
但是由于手术室内大多处于封闭的状态，内部的空气很难流通，这也 就造成了感染的几率依然是很大的，直到后来的20世纪40年代引入了空气 过滤系统，病人的感染几率才得到了有效控制，从过去的10%下降至1% ，这不得不说是一个伟大的改变。也正因为此，人们从此意识到了无菌技 术的重要性，而隔离技术也正式地被运用开来。
1. 灭菌技术 灭菌、消毒、除菌与操作，尤其强调无菌操作在微
生物学研究中的重要意义。 2. 微生物采集和分离技术
微生物样品采集、富集和微生物纯培养的分离 3. 菌种分离方法，培养基设计制备与大规模细胞培养、菌 体收集与菌种保藏 4. 微生物育种方法：
标记菌种获得与应用， 体外诱变育种、杂交育种、原生质育种、基因工程育种 离心、电泳原理和方法，层析技术，紫外、红外、质谱 、核磁共振原理及微生物研究中的应用
化学消毒法包括：
①过氧乙酸(PAA)消毒。②甲醛消毒。③环氧乙烷消毒。④戊二醛消毒 。⑤84消毒液消毒。⑥乙醇消毒。⑦碘消毒。⑧高猛酸钾消毒。⑨洗必太 消毒等。
2、保证环境空气的质量的现代化设施：
（1）空调超净：
人员流动频繁，空气中浮游菌大量传播。近30年来，继 工业性洁净室后，又开展了生物洁净室。通过空气净化系统过 滤(层流装置)，控制空气中含细菌程度。高效过滤的空气细菌 过滤的有效率可达99. 97%，能够有效地控制和稳定环境。
现代消毒灭菌的方法很多，为有效实施无菌技术 操作打下了坚实基础。在日常运用时，要注意将消毒 、灭菌、无菌和清洁几个词的概念区别清楚。
消毒，即用物理的或化学的方法，杀死和清除传 播物体上病原微生物，达到无害化的目的，即要求将 有害微生物的数量减少到无害的程度而非全部杀灭。
灭菌，是将传播物体上的一切微生物全部杀灭。
1865年，当时Lister发现受伤感染是由细菌引起的。李斯特了解到石 碳酸可以被用来清除污水发出的臭味，如果使用石碳酸的话则可能降低疾 病的传染性。于是决定试着利用它治疗1例小男孩腿部的复合骨折，并获 得成功。
此后，从事外科手术的医生逐渐从身穿便衣更换为消毒衣和帽子，消 毒衣逐步地引入了手术台，并且开始对手术台进行消毒，这就有效地降低 了病人感染的几率。发展到橡胶手套、用热力灭菌来消毒器械，推动了无 菌技术的发展。1897年，波兰医生米库利奇提出：在为病人施行手术过程 中外科医生应该将自己的口腔、鼻腔、胡须用一层纱布遮住以避免唾液飞 溅到伤口上，于是口罩便逐步形成了，它进一步促进了无菌技术的发展。
3M压力灭菌指示胶带------型号3M-1222：用于各种下排气，预真空锅， 指示灭菌包是否灭菌，并判读包外灭菌效果。胶带上有指示剂，只有在一 定温度压力的饱和蒸汽作用下， 经一定时间后，才能变成深褐色。胶带不 会因蒸汽而自行脱落，不留残胶。圆珠笔及标记笔，在胶带上可作相关记 录。可用于封包，保证灭菌包裹既不紧也不松。
于空气中，随空气的流动而扩散，抖动单、巾、开关门窗 等均可增加空中细菌含量。另外，空气、物体表面监测发 现，室内人员数量的增加，人员活动幅度大，极容易污染 空气。
（3）监测概念 （4）严格要求概念：每个工作人员都自觉遵守、严格执行各
种规章制度。为了消除杂菌污染的机会，我们必须对实验 室进行严格的消毒、灭菌，对所用培养基及器皿进行彻底 灭菌，严格进行无菌操作。
层流式通风将空气由一侧全面地以均匀速度流至另一侧， 使污染空气平推而出，通风时气流在室中按整个横切面平推前 进，故称层流式通风。层流式通风送风量大，最多可相当于每 小时换气600~700次。通风中使用过滤器的面积大，气流通过 过滤器的流速较慢，但保持空气灭菌环境彻底。
（2）超声波清洗机：
超声波清洗机的声波可更加彻底地清洗器械，是现代清 洗器械较为理想的设施。机器的发电机向换能器提供电能，换 能器将电能转换为振动声波形式的机械能，声波经过盛有洗涤 液的容器，通过一个称为空穴作用的过程，有机物碎屑和其它 污垢能被迅速彻底地从浸于溶液中的物品上清除。这一方法可 清洗手术器械、玻璃器皿和其它设备的表面，有些部位是无法 用其它方法清洗的。
（3）无菌室的门
膝式或足踏式开关电动门、感应门。人员无需用手可使 门开启或关闭，使用理想。光电式开关门适用于无菌室大门 口。
3、实行实验室现代化管理
即监测-控制-管理一体化系统。 凡进入手术室的工作人员，必须牢固树立以下基本概念 。
（1）分区概念：即限制区，半限制区，非限制区。 （2）空气传菌概念：快速气流可使物体表面的细菌飞起漂浮
无菌，是使传播物体不存在任何微生物的状态， 是在灭菌和消毒的基础上才能实现。
清洁，是将污染物体上的微生物的数量降低到安 全水平以内的一种方法，比如清洗及洗刷等，它达不 到消毒的要求。
Байду номын сангаас
1、现代消毒灭菌的方法
可分为两大类：即物理消毒法和化学消毒法。
物理消毒法包括：
①下排式高压灭菌消毒法。②预真空高压灭菌法。③低温甲醛蒸气消 毒器灭菌法。④煮沸消毒灭菌法。⑤三氧消毒法。⑥干热灭菌法。⑦其它 ， 如光照消毒，γ射线(两种射线)灭菌等。
第一节 灭菌、除菌和消毒技术
灭菌、消毒、除菌与操作，尤其强调 无菌操作在微生物学研究中的重要意义。
无菌技术是指在操作过程中，防止一切微生物侵入机体和 保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法。
盖伦坚持化脓是伤口恢复所必须过程的观点，并且由于他 在医学界的统治地位，在很大程度上影响了后来的医生对伤口 处理的探索。直到近代微生物学的奠基人、法国杰出的生物学 家化学家路易斯-巴斯德(Louis Pasteur)于19世纪50年代证明 伤口的脓汁是由于空气中存在的微生物导致的，盖伦对感染的 错误认识才被彻底纠正。巴斯德同时还提出，如果是微生物引 起了感染，那么可以通过去除这些微生物来控制感染，而去除 微生物的方法有：过滤、加热、将它们暴露于化学环境中。前 两种方法显然是不适合应用于人类的，与巴斯德同一时代的他 的朋友、苏格兰的外科教授约瑟·李斯特(Joseph Lister)于是 选择了第3种方法来控制伤口的感染。
但是由于手术室内大多处于封闭的状态，内部的空气很难流通，这也 就造成了感染的几率依然是很大的，直到后来的20世纪40年代引入了空气 过滤系统，病人的感染几率才得到了有效控制，从过去的10%下降至1% ，这不得不说是一个伟大的改变。也正因为此，人们从此意识到了无菌技 术的重要性，而隔离技术也正式地被运用开来。