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动物细胞工程动物细胞与组织培养课件
动物细胞工程动物细胞与组织培养课件汇报人：2024-01-10•动物细胞工程概述•动物细胞培养技术•动物细胞与组织的体外培养目录•动物细胞工程的应用案例•展望与挑战01动物细胞工程概述定义与特点定义动物细胞工程是以动物细胞为研究对象，通过细胞培养、细胞融合、基因转移等技术手段，实现动物细胞和组织的体外培养、繁殖和生产，以及动物疾病治疗和生物医学研究的技术。
特点动物细胞工程具有高度的技术性、复杂性和应用性，涉及多个学科领域，如生物学、医学、生物工程等。
它能够实现动物细胞的体外大规模培养，生产出大量的生物制品，如疫苗、单克隆抗体等，为人类疾病预防和治疗提供重要的技术支持。
利用动物细胞大规模培养技术，生产出大量的疫苗、单克隆抗体等生物制品，用于疾病的预防和治疗。
生物制品生产通过动物细胞培养和基因工程技术，实现新药的筛选和开发，提高药物研发的效率和成功率。
药物筛选与开发利用动物细胞工程技术，体外培养出人体组织和器官，用于移植和修复人体损伤的组织和器官。
组织工程通过动物细胞培养和基因工程技术，建立各种疾病模型，用于疾病的发病机制研究和药物筛选。
疾病模型建立动物细胞工程的应用德国科学家Rudolf Virchow首次提出“细胞来源于细胞”的著名论断，为动物细胞工程的发展奠定了基础。
1907年美国科学家Graham和Milstein首次成功实现了哺乳动物细胞的体外培养，开启了动物细胞工程的新篇章。
1958年美国科学家Kohler和Milstein首次成功制备出了单克隆抗体，为动物细胞工程在生物制品生产领域的应用奠定了基础。
1975年随着基因工程技术的发展和应用，动物细胞工程进入了一个新的发展阶段，实现了基因转移和基因编辑等先进技术的应用。
1990年代动物细胞工程的发展历程02动物细胞培养技术细胞生存和增殖条件动物细胞培养需要提供适宜的温度、湿度、pH值、营养物质等条件，以维持细胞的生存和增殖。
细胞贴壁与生长动物细胞在培养过程中需要贴附在培养器皿的表面才能生长，因此需要选择适当的细胞培养器皿和贴壁介质。
动物细胞工程复习课件
体内的
细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应
给小鼠注射效应__B___________类物质。 常用（__2__）__d_过___程__是_或一_个____抗____原_______________的__诱过导程。，该过程的进行
(3)假设仅考虑某两个细细胞胞融合的融合，则可形成 种类 型培养的C，细D胞细聚，胞乙因二的醇此名需称用是___灭__活__的__病，_培毒其养特基点筛是选出D细胞3用于 _____________________________选_择__性_________。
单克隆抗体最主要的优点：特异 性强，灵敏度高，并能大量制备。
抗体的传统生产方法 抗原 反复注射动物 从动物的血清中分离抗体
该法制备抗体的缺点：
产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度 低。 如何解决这个问题呢？ 单克隆抗体！
⑵用于治疗疾病和运载药物 ①特异性强、灵敏度高 生物导弹——单克隆抗体＋抗癌药物 ②疗效高、毒副作用小
杂交瘤细胞特点： 既能产生特异性抗 体，又能大量增殖。
（二选）：选 能产生所需专 一抗体的杂交 瘤细胞
体外培养 小鼠腹腔内培养
获得产生相应 抗体的B细胞
√ B-B 、B-瘤 、瘤-瘤
（未融合的B、瘤）
（一选）选择 性培养基：只 有杂交瘤细胞 才能存活
2.3单克隆抗体的应用
诊断试剂——最广泛应用 准确、高效、简易、快速
杂交瘤细胞
既能无限增殖又能产生特异性抗体
(4)在培养时通过___有__丝___分裂方式大量繁殖。D细胞体 外培养需要注意的条件是（要求答5项） __________________________________。 无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pH；适宜 的气（体5）环单境克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与 常规抗体相比，其特点是_________________。
动物细胞工程ppt课件
4.气体环境 ①气体的组成及作用 95%空气（O2）：细胞代谢所必需
5%CO2：维持培养液的pH ②培养装置: 培养皿或松盖培养瓶 置于 CO2培养箱中进行培养
（含有95%空气和5%CO2的混合气体）
培养皿
培养瓶
CO2培养箱
二、动物细胞培养的过程
①培养前用什么方法分散成单个细 胞？ ②体外培养动物细胞有哪些类型？ ③什么是细胞贴壁？什么是接触抑 制？ ④什么是原代培养和传代培养？ ⑤为什么要进行分瓶培养？怎么处 理？ ⑥动物细胞培养与植物组织培养有 什么相同之处与不同之处？
像建立骨髓库一样，有研究团队正在尝试建立HLA（Human Leukocyte Antigen，人类白细胞抗原）多态性丰富的iPS细胞库，可以为 需要的人找到HLA匹配度较高的iPS细胞，这样不仅可以节省时间、成本 ，还能减轻异体干细胞移植后发生的免疫排斥反应。
二、拓展应用 现在关于iPS细胞的研究正在不断深入。请你从以下两个方面来查阅
基本营养：水、无机盐、有机碳源、有机氮源 特殊物质：维生素、血清
血清
含有尚未研究清楚的细胞所需的营养物质 营养基构成：合成培养基 + 血清等一些天然成分
将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成 的培养基。
培养基的类型：固体培养基 or 液体培养基（培养液）
一、动物细胞培养的条件 2.无菌、无毒的环境 措施1: 灭菌处理——对象？ 培养液和所有培养用具 措施2: 操作在无菌环境下进行。 措施3: 培养液中适量添加 抗生素 。——抑制细菌生长 措施4：定期更换培养液——目的？清除代谢物，防止细胞代谢物积累对
【思考】动物细胞的整个培养过程中可能多次用到胰蛋白酶或胶原蛋白酶？
第一次使用的目的是使组织细胞分散开；
5%CO2：维持培养液的pH ②培养装置: 培养皿或松盖培养瓶 置于 CO2培养箱中进行培养
（含有95%空气和5%CO2的混合气体）
培养皿
培养瓶
CO2培养箱
二、动物细胞培养的过程
①培养前用什么方法分散成单个细 胞？ ②体外培养动物细胞有哪些类型？ ③什么是细胞贴壁？什么是接触抑 制？ ④什么是原代培养和传代培养？ ⑤为什么要进行分瓶培养？怎么处 理？ ⑥动物细胞培养与植物组织培养有 什么相同之处与不同之处？
像建立骨髓库一样，有研究团队正在尝试建立HLA（Human Leukocyte Antigen，人类白细胞抗原）多态性丰富的iPS细胞库，可以为 需要的人找到HLA匹配度较高的iPS细胞，这样不仅可以节省时间、成本 ，还能减轻异体干细胞移植后发生的免疫排斥反应。
二、拓展应用 现在关于iPS细胞的研究正在不断深入。请你从以下两个方面来查阅
基本营养：水、无机盐、有机碳源、有机氮源 特殊物质：维生素、血清
血清
含有尚未研究清楚的细胞所需的营养物质 营养基构成：合成培养基 + 血清等一些天然成分
将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成 的培养基。
培养基的类型：固体培养基 or 液体培养基（培养液）
一、动物细胞培养的条件 2.无菌、无毒的环境 措施1: 灭菌处理——对象？ 培养液和所有培养用具 措施2: 操作在无菌环境下进行。 措施3: 培养液中适量添加 抗生素 。——抑制细菌生长 措施4：定期更换培养液——目的？清除代谢物，防止细胞代谢物积累对
【思考】动物细胞的整个培养过程中可能多次用到胰蛋白酶或胶原蛋白酶？
第一次使用的目的是使组织细胞分散开；
《动物细胞工程》课件
1
2
3
利用动物细胞工程可以将外源基因导入动物细胞，培育出转基因动物，提高其生产性能和抗病能力。
转基因技术
动物细胞工程可用于生产疫苗，通过培养动物细胞并表达病毒抗原，制备出高效、安全的动物疫苗。
动物疫苗
动物细胞工程可以用于构建生物反应器，通过大规模培养动物细胞生产各类蛋白质和生物活性物质。
生物反应器
选择适当的细胞
通过物理、化学或生物方法诱导细胞融合。常用的物理方法有电融合和激光融合，化学方法有聚乙二醇（PEG）诱导融合，生物方法有病毒诱导融合。
诱导细胞融合
通过特定的筛选和鉴定方法，从大量细胞中筛选出融合细胞，并进行鉴定。常用的筛选和鉴定方法有荧光染色法、免疫学检测法和分子生物学检测法等。
筛选和鉴定融合细胞
技术难度大
动物细胞工程的实施需要高超的技术水平和精细的操作技巧，如何提高技术成熟度和降低成本是亟待解决的问题。
伦理和法律问题
动物细胞工程的实践涉及到伦理和法律问题，如人道关怀、动物权益保护等，需要在实践中严格遵守相关法规和伦理准则。
安全性和有效性问题
动物细胞工程产品的安全性和有效性需要经过严格的评估和验证，以确保其不会对人类健康和生态环境造成不良影响。
1970年代
随着技术的不断进步和应用领域的拓展，动物细胞工程在医学、农业、工业等领域得到广泛应用。
1990年代至今
02
动物细胞培养技术
细胞具有增殖和分化的能力
动物细胞具有自我复制和分化的能力，可以在适宜的环境下生长和繁殖。
03
动物细胞融合技术
选择要进行融合的细胞，通常选择同种或同种的细胞进行融合。
感谢观看
THANKS
基因转移技术
02
动物细胞工程ppt
1. 既然胰蛋白酶能将细胞消化 掉，那将动物组织分散成单 个细胞要注意什么问题呢？
2. 能够用胃蛋白酶代替胰蛋白 酶吗？为什么？
（四）、动物细胞培养的条件
1、无菌、无毒的环境
添加一定量的抗生素，定期更换培养液
2、营养
添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无 机盐、微量元素、动物血清等。
保证细胞 顺利的生 长增殖
课堂反馈练习
A
0
2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是
（）
1
A．获得不死性的细胞 B．10代以内细胞
D
C．原代细胞
D．传代细胞
0
1、动物细胞工程技术的基础是 （ ）
2
A.动物细胞融合 B.单克隆抗体
C.胚胎移植 D.动物细胞培养
3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（ ） A、动B物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞 分 泌蛋白
1
2
二、单克隆抗体
抗体是机体受抗原刺激 01 后产生的、并能与该抗 原发生特异性结合的具 有免疫功能的球蛋白。
什么是抗体？
02 B淋巴细胞产生抗体。
单克隆抗体
01
由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型 相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、
特异性强的抗体称为单克隆抗体。
202X
专题2.2动物细 胞工程
单击此处添加文本具体内容，简明扼要地 阐述你的观点
动物细胞培养 单克隆抗体制备 动物细胞工程技术
动物细胞融合
细胞核移植 动物细胞工程的基
础
01
动物细胞培养和核移植技术
单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发 布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。
2. 能够用胃蛋白酶代替胰蛋白 酶吗？为什么？
（四）、动物细胞培养的条件
1、无菌、无毒的环境
添加一定量的抗生素，定期更换培养液
2、营养
添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无 机盐、微量元素、动物血清等。
保证细胞 顺利的生 长增殖
课堂反馈练习
A
0
2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是
（）
1
A．获得不死性的细胞 B．10代以内细胞
D
C．原代细胞
D．传代细胞
0
1、动物细胞工程技术的基础是 （ ）
2
A.动物细胞融合 B.单克隆抗体
C.胚胎移植 D.动物细胞培养
3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（ ） A、动B物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞 分 泌蛋白
1
2
二、单克隆抗体
抗体是机体受抗原刺激 01 后产生的、并能与该抗 原发生特异性结合的具 有免疫功能的球蛋白。
什么是抗体？
02 B淋巴细胞产生抗体。
单克隆抗体
01
由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型 相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、
特异性强的抗体称为单克隆抗体。
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专题2.2动物细 胞工程
单击此处添加文本具体内容，简明扼要地 阐述你的观点
动物细胞培养 单克隆抗体制备 动物细胞工程技术
动物细胞融合
细胞核移植 动物细胞工程的基
础
01
动物细胞培养和核移植技术
单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发 布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。
《动物细胞工程》课件
动物胚胎
剪碎
胰蛋白酶
或幼龄动
物的组织、 器官，它
细胞悬浮液
用胰蛋白酶分散细 胞，说明细胞间的
们细胞增 殖能力强，
原代培养
物质主要是蛋白质。 动物细胞培养适宜
分裂旺盛， 分化程度
10代细胞
的PH为7.2—7.4， 此环境下胃蛋白酶
低，容易 培养。
洗涤、稀释、
细胞株
（2.0）没有活性， 而胰蛋白酶(7.2-8.4)
（2）单克隆抗体制备过程中应 用哪些细胞 工程技术手段？ （3）制备过程为何要经过两次筛选？
10
单克隆抗体的制备 抗原 小鼠
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
细胞培养
细胞融合，
杂交瘤细胞
筛选
筛选，继续培养
体外培养
体内培养
单克隆抗体
11
单克隆抗体有何应用？
主要用于疾病的诊断、治疗和预防。 与常规抗体相比，具有特异性强、灵敏度 高的优点。如；各种癌症、肝炎病毒、 SARS病毒、细菌及血吸虫等数百种疾病的 诊断；在疾病治疗方面，单克隆抗体犹如 人体卫士，能识别“自己”与“异己”， 一旦发现 致病因素便与之结合将其杀死。 若在单抗上带上抗癌药物制成“生物导 弹”，将药物定向带到癌细胞所在部位， 既消灭了癌细胞又不会伤害健康细胞。
保留融合活性 （诱导细胞融合）
3、动物细胞融合的用途
制备单克隆抗体
5
(三)单克隆抗体
提出问题：长期以来，人们为了获得抗体，采用的是 把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中 分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不 仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够 灵敏。
• 思考：
（1）请概括单克隆抗体的概念 （2）根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验
动物细胞工程(完整ppt课件
.
动物细胞培养过程
动物胚胎或幼龄动
胰蛋白酶
加培养液
单个细胞
细胞
物的组织、器官 剪碎
制成 悬浮
液
细胞部系分细胞“癌变”，细胞株
遗传物质改变，无 限传代
养原 代 培
壁细 胞 贴
细胞
50代细胞 剥离、分瓶
10代 细胞
动物细胞培养不能 最终培养成动物体
传代培养
.
动物细胞生长特性
细胞贴壁：
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。
3、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细 胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？
不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞 核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA） 来自受体卵母细胞
4.动物克隆实例很多，为何多莉就举世闻名呢？
在1997年2月英国罗斯林研究所维尔穆特博士科研组 公布体细胞克隆羊“多莉”培育成功之前，胚胎细胞核 移植技术已经有了很大的发展。实际上，“多莉”的克 隆在核移植技术上沿袭了胚胎细胞核移植的全部过程， 但这并不能减低“多莉”的重大意义，因为它是世界上 第一例经体细胞核移植出生的动物，是克隆技术领域研 究的巨大突破。这一巨大进展意味着：在理论上证明了，
程
妊娠、出生
克隆羊多利
.
思考题
１、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之 前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？
为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用 价值的动物提供的细胞。 ２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10 代以内的细胞，为什么？ 10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型， 未发生突变
.
脱组 分织
化
植物细胞B
胞 促进融合 壁
的方法？
动物细胞培养过程
动物胚胎或幼龄动
胰蛋白酶
加培养液
单个细胞
细胞
物的组织、器官 剪碎
制成 悬浮
液
细胞部系分细胞“癌变”，细胞株
遗传物质改变，无 限传代
养原 代 培
壁细 胞 贴
细胞
50代细胞 剥离、分瓶
10代 细胞
动物细胞培养不能 最终培养成动物体
传代培养
.
动物细胞生长特性
细胞贴壁：
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。
3、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细 胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？
不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞 核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA） 来自受体卵母细胞
4.动物克隆实例很多，为何多莉就举世闻名呢？
在1997年2月英国罗斯林研究所维尔穆特博士科研组 公布体细胞克隆羊“多莉”培育成功之前，胚胎细胞核 移植技术已经有了很大的发展。实际上，“多莉”的克 隆在核移植技术上沿袭了胚胎细胞核移植的全部过程， 但这并不能减低“多莉”的重大意义，因为它是世界上 第一例经体细胞核移植出生的动物，是克隆技术领域研 究的巨大突破。这一巨大进展意味着：在理论上证明了，
程
妊娠、出生
克隆羊多利
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思考题
１、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之 前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？
为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用 价值的动物提供的细胞。 ２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10 代以内的细胞，为什么？ 10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型， 未发生突变
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脱组 分织
化
植物细胞B
胞 促进融合 壁
的方法？
动物细胞工程教学PPT
传代培养
将原代细胞进行传代培养， 使其在体外持续增殖的过 程。
细胞冻存与复苏
通过冷冻保存细胞，以便 在需要时进行复苏和培养。
动物细胞培养的常见问题与解决方案
01 02
污染问题
动物细胞培养过程中常见的污染源包括细菌、霉菌和支原体等。解决方 案包括定期检查培养环境、严格控制培养基和器具的灭菌过程以及及时 处理污染细胞。
动物细胞工程实验技术
动物细胞融合技术
动物细胞融合技术是指将两个或多个 动物细胞融合成一个细胞的过程，是 动物细胞工程中的重要技术之一。
动物细胞融合技术需要使用特定的融 合剂或电刺激等方法，使细胞膜融合， 形成异核或多核细胞。
该技术可用于制备单克隆抗体、诱导 多功能干细胞、研究细胞分化机制等 方面。
动物染色体工程需要严格遵守 伦理和法律规定，确保实验动 物的福利和安全。
动物基因编辑技术
动物基因编辑技术是指通过特定的基 因编辑工具对动物基因进行精确的修 饰和改造的技术。
动物基因编辑技术可以采用CRISPRCas9等基因编辑系统，对目标基因进 行敲除、敲入或定点突变等操作。
该技术可用于研究基因功能、治疗遗 传性疾病、制备转基因动物等方面。
经济和社会发展
动物细胞工程的发展将带动相关产业的发展，创 造就业机会，促进经济发展和社会进步。
THANKS
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动物细胞工程教学
• 动物细胞工程概述 • 动物细胞培养技术 • 动物细胞工程实验技术 • 动物细胞工程的应用案例 • 动物细胞工程的未来展望
01
动物细胞工程概述
定义与特点
定义
动物细胞工程是以动物细胞为研究对象，通过细胞培养、细胞融合、基因转移 等技术手段，实现动物细胞在数量和质量上的改变，以应用于医学、农业、生 物工程等领域的技术。
动物细胞工程ppt
二、单克隆抗体
（一）获得抗体的传统方法
2、缺点：
产量低，纯度低，特异性差。
把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。
人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
单击添加副标题
专题2 细胞工程
植物体细胞杂交的意义：
打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育作物新品种。
一、动物细胞融合
细胞融合是正常的生命活动。 两个细胞正在融合 受精作用
(一)动物细胞融合的概念
02
03
01
04
添加标题
细胞A
添加标题
物理法 化学法
我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细胞（含B淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。
添加标题
细胞B
添加标题
杂种细胞 灭活的病毒
ห้องสมุดไป่ตู้
用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程
细胞核
病毒颗粒
细胞核
灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面
细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性）
两个核的融合是在杂种细胞第一次有丝分裂时进行的
01
03
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04
05
(三)动物细胞融合的应用
（一）获得抗体的传统方法
2、缺点：
产量低，纯度低，特异性差。
把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。
人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
单击添加副标题
专题2 细胞工程
植物体细胞杂交的意义：
打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育作物新品种。
一、动物细胞融合
细胞融合是正常的生命活动。 两个细胞正在融合 受精作用
(一)动物细胞融合的概念
02
03
01
04
添加标题
细胞A
添加标题
物理法 化学法
我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细胞（含B淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。
添加标题
细胞B
添加标题
杂种细胞 灭活的病毒
ห้องสมุดไป่ตู้
用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程
细胞核
病毒颗粒
细胞核
灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面
细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性）
两个核的融合是在杂种细胞第一次有丝分裂时进行的
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(三)动物细胞融合的应用
动物细胞工程 上课课件
1、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么 必须先去掉受体卵母细胞的核？
提示：为使克隆动物的遗传物质全部来自优良性状的供体动物 提供的体细胞。
2、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细 胞，想一想，这是为什么？
提示：10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。
3、你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物， 是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？
用纤维素酶、 果胶酶去壁
细胞膜的流动性、 细胞增殖
用胰蛋白酶 使细胞分散
物理法:离心、振动、电激 物理法:离心、振动、电激
诱导方法 化学法：聚乙二醇
化学法：聚乙二醇
生物法：灭活的病毒
用途和 意义
克服远缘杂交的不亲和障 （1）制备单克隆抗体
碍，大大扩展杂交的亲本 （2）诊断、治疗、预防疾
组合范围
病，例如“生物导弹”
１）作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与 抗原特异性结合
优点：准确、高效、简易、快速
治疗疾病：主要用于癌症治疗
2）用于
运载药物：制成“生物导弹”
优点:疗效高、毒副作用小
课堂练习
1、动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确
的是（ C ）
①诱导融合的方法完全相同
②所用的技术手段不相同
③所采用的原理完全相同
提示：克隆动物绝大部分DNA来自于供体细胞核，但还有少量的 DNA来自于受体卵母细胞。此外，动物的一些行为、习性的形成 与所处环境有很大关系。
3.克隆动物的研究意义：
1）克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 2）改良动物品种 3）治疗人类疾病，作为供体 4）保护濒危动物
4．体细胞核移植技术存在的问题：
相关主题
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8、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 能
9、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物 组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？
注意时间的控制 １０、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组 织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细 胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容 易培养。
11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无 毒？ 易于培养细胞贴壁，进行生长增殖
３、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个 细胞的呢？
成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生 长和增殖
（分散成单个细胞、细胞群(团）后容易培养，细胞所需的营 养容易供应，其代谢废物容易排出；而用大块组织培养时，内 部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难，因此，这些细 胞在体外长时间的生存和生长就较困难。）
考点解读
❖ 动物细胞培养与体细胞克隆——要注意注意 原理、步骤、方法，
❖ 细胞融合与单克隆抗体——要注意与必修整 合（细胞结构、遗传、免疫等），注意技术 步骤
皮肤烧伤，如果创面很小（不大于硬币）只 要保持清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。如果 下层真皮受损面积较大，常常需要植皮。植皮需 要的健康皮片，可以取自烧伤病人自身未烧伤的 部位（自体植皮），也可取自其他活人或尸体 （异体植皮）等。自体植皮是永久性的，取自其 他人或动物的植皮是暂时性的，是在创面愈合过 程中为保护创面而采取的措施，10～14天后就要
原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原 代细胞。（分装前的细胞培养）
传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制 成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养 瓶中继续培养，称为传代培养。
（在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转 移到其它培养瓶中培养就是传代培养） 15、传代培养的细胞能一直传代下去吗？不都能Biblioteka 16、有些为何能一直传下去吗？
发生突变，朝着癌细胞方向发展 17、动物细胞培养就是为了得到这些细胞 吗？ 不是 18、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？
保存10代以内的细胞，因为传至10－50代 时部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少 部分还发生突变向癌细胞方向发展
有关概念
细胞株：传代培养的细胞一般传至10代左 右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数 细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。
细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞 生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的 改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这 种传代细胞为细胞系。
细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传 物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制， 容易传代培养。
19、动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？ 为什么？
一般而言，动物细胞培养不需经过脱分 化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变 窄，失去了发育成完整个体的能力，所以， 动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养 时的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞 定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞， 使其分化成所需要的组织或器官。
被身体排斥。
如果一个大面积烧伤的病人来说，自体皮 肤有限，其他渠道的皮肤来源不足。如何才能 获得大量的自体健康皮肤？
取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植
动物细胞培养
请同学们阅读课本后，简述动物 细胞培养的基本过程？
1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞 的吗？ 没有
２、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞 的吗？ 是
无菌、无毒
动物细胞培养条件：
1、无菌、无毒的环境
防止培养过程 的污染
（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
2、营养——合成培养基
防止细胞代谢产物
（葡萄糖、氨基酸、促生长因子积、累造成危害
无机盐、微量元素、动物血清等。）
3、温度和PH 36.5±0.5度, 7.2-7.4
保证细胞顺利的 生长增殖
4、气体环境——CO2培养箱 维持培养液的pH
12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再 分裂、增殖？
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫 接触抑制。 13、如此时细胞数量并未达到人们的需求， 应该怎样办？ 将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然 后继续增殖。这样的过程叫做传代培养
14、如何理解原代培养和传代培养？
O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血 清？
血清是天然培养基中最有效和最常用的培养 成分。血清中已知的成分主要有蛋白质、氨基酸 、葡萄糖、激素等。蛋白质主要是白蛋白和球蛋 白。氨基酸有多种，其中有些氨基酸动物细胞本 身不能合成，必须由培养液提供。血清激素有胰 岛素、生长激素等。此外，它含有许多维持细胞 生长繁殖和保持细胞生物学性状不可缺少的未知 成分，如多种细胞生长因子、促贴附因子及其多 活性物质。与合成培养基合用，能使细胞顺利增 殖生长。
４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？
先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理
５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明 细胞间的物质是什么成份？
胰蛋白酶水解蛋白质 细胞间的成份是蛋白质 6、用胃蛋白酶行吗？为什么？ 不行。因为多数动物细胞培养的适宜pH 为7.2~7.4，胃蛋白酶在此环境中没有 活性。
7、细胞膜的主要成份是什么？蛋白质和磷脂
无限传代
请总结出动物细胞培养的定义
• 动物细胞培养就是从动物机体内取出 相关的组织，将它分散成单个细胞， 然后，放在适宜的培养基中，让这些 细胞生长和增殖。
多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中 ，根据你所学的知识，思考并讨论以下问题： 1、体外培养细胞时需要提供哪些物质？
充足的营养供给、适宜的温度、适宜 的pH和气体环境 2、体外培养的细胞需要什么样的环境条件？
动物胚胎或幼龄动 动物细胞培养过程： 物的组织、器官
动物组织细胞间隙中 含有一定量的弹性纤 维等蛋白质，将细胞
胰蛋白酶 （分解弹性纤维蛋白）
单个细胞
加培养液
网络起来形成具有一 定弹性和韧性的组织 和器官。
细胞悬浮液 原代培养
10代细胞
遗传物质 细胞株
未改变
50代细胞 传代培养
遗传物质 细胞系
已改变
动物细胞工程
动物 细胞 工程 常用 技术
动物细胞培养 核移植 动物细胞融合 单克隆抗体技术
细胞工程考纲
要求备注： I：对所列知识点要知道其含义，能够在试题所给予的相对简单的情境中识别和使用它 们。 Ⅱ：理解所列知识和其他相关知识之间的联系和区别，并能在较复杂的情境中综合运 用其进行分析、判断、推理和评价。
9、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物 组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？
注意时间的控制 １０、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组 织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细 胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容 易培养。
11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无 毒？ 易于培养细胞贴壁，进行生长增殖
３、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个 细胞的呢？
成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生 长和增殖
（分散成单个细胞、细胞群(团）后容易培养，细胞所需的营 养容易供应，其代谢废物容易排出；而用大块组织培养时，内 部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难，因此，这些细 胞在体外长时间的生存和生长就较困难。）
考点解读
❖ 动物细胞培养与体细胞克隆——要注意注意 原理、步骤、方法，
❖ 细胞融合与单克隆抗体——要注意与必修整 合（细胞结构、遗传、免疫等），注意技术 步骤
皮肤烧伤，如果创面很小（不大于硬币）只 要保持清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。如果 下层真皮受损面积较大，常常需要植皮。植皮需 要的健康皮片，可以取自烧伤病人自身未烧伤的 部位（自体植皮），也可取自其他活人或尸体 （异体植皮）等。自体植皮是永久性的，取自其 他人或动物的植皮是暂时性的，是在创面愈合过 程中为保护创面而采取的措施，10～14天后就要
原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原 代细胞。（分装前的细胞培养）
传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制 成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养 瓶中继续培养，称为传代培养。
（在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转 移到其它培养瓶中培养就是传代培养） 15、传代培养的细胞能一直传代下去吗？不都能Biblioteka 16、有些为何能一直传下去吗？
发生突变，朝着癌细胞方向发展 17、动物细胞培养就是为了得到这些细胞 吗？ 不是 18、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？
保存10代以内的细胞，因为传至10－50代 时部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少 部分还发生突变向癌细胞方向发展
有关概念
细胞株：传代培养的细胞一般传至10代左 右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数 细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。
细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞 生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的 改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这 种传代细胞为细胞系。
细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传 物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制， 容易传代培养。
19、动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？ 为什么？
一般而言，动物细胞培养不需经过脱分 化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变 窄，失去了发育成完整个体的能力，所以， 动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养 时的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞 定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞， 使其分化成所需要的组织或器官。
被身体排斥。
如果一个大面积烧伤的病人来说，自体皮 肤有限，其他渠道的皮肤来源不足。如何才能 获得大量的自体健康皮肤？
取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植
动物细胞培养
请同学们阅读课本后，简述动物 细胞培养的基本过程？
1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞 的吗？ 没有
２、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞 的吗？ 是
无菌、无毒
动物细胞培养条件：
1、无菌、无毒的环境
防止培养过程 的污染
（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
2、营养——合成培养基
防止细胞代谢产物
（葡萄糖、氨基酸、促生长因子积、累造成危害
无机盐、微量元素、动物血清等。）
3、温度和PH 36.5±0.5度, 7.2-7.4
保证细胞顺利的 生长增殖
4、气体环境——CO2培养箱 维持培养液的pH
12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再 分裂、增殖？
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫 接触抑制。 13、如此时细胞数量并未达到人们的需求， 应该怎样办？ 将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然 后继续增殖。这样的过程叫做传代培养
14、如何理解原代培养和传代培养？
O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血 清？
血清是天然培养基中最有效和最常用的培养 成分。血清中已知的成分主要有蛋白质、氨基酸 、葡萄糖、激素等。蛋白质主要是白蛋白和球蛋 白。氨基酸有多种，其中有些氨基酸动物细胞本 身不能合成，必须由培养液提供。血清激素有胰 岛素、生长激素等。此外，它含有许多维持细胞 生长繁殖和保持细胞生物学性状不可缺少的未知 成分，如多种细胞生长因子、促贴附因子及其多 活性物质。与合成培养基合用，能使细胞顺利增 殖生长。
４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？
先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理
５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明 细胞间的物质是什么成份？
胰蛋白酶水解蛋白质 细胞间的成份是蛋白质 6、用胃蛋白酶行吗？为什么？ 不行。因为多数动物细胞培养的适宜pH 为7.2~7.4，胃蛋白酶在此环境中没有 活性。
7、细胞膜的主要成份是什么？蛋白质和磷脂
无限传代
请总结出动物细胞培养的定义
• 动物细胞培养就是从动物机体内取出 相关的组织，将它分散成单个细胞， 然后，放在适宜的培养基中，让这些 细胞生长和增殖。
多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中 ，根据你所学的知识，思考并讨论以下问题： 1、体外培养细胞时需要提供哪些物质？
充足的营养供给、适宜的温度、适宜 的pH和气体环境 2、体外培养的细胞需要什么样的环境条件？
动物胚胎或幼龄动 动物细胞培养过程： 物的组织、器官
动物组织细胞间隙中 含有一定量的弹性纤 维等蛋白质，将细胞
胰蛋白酶 （分解弹性纤维蛋白）
单个细胞
加培养液
网络起来形成具有一 定弹性和韧性的组织 和器官。
细胞悬浮液 原代培养
10代细胞
遗传物质 细胞株
未改变
50代细胞 传代培养
遗传物质 细胞系
已改变
动物细胞工程
动物 细胞 工程 常用 技术
动物细胞培养 核移植 动物细胞融合 单克隆抗体技术
细胞工程考纲
要求备注： I：对所列知识点要知道其含义，能够在试题所给予的相对简单的情境中识别和使用它 们。 Ⅱ：理解所列知识和其他相关知识之间的联系和区别，并能在较复杂的情境中综合运 用其进行分析、判断、推理和评价。