Masson三色染色操作规程

Masson染色,操作规程
实验目的： Masson染色,用于显示组织中纤维的染色方法之一
实验原理：Masson氏染色时胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染),肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染),这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。

不同的组织和细胞成分,它们的孔隙大小是不同的。

孔隙的大小,决定了组织的渗透性。

如孔隙小,组织结构致密,渗透性低；孔隙宽,组织结构疏松,渗透性高。

如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色,则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染.肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染,而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。

由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小,肌纤维与胞质次之,而胶原纤维具有最大的渗透性。

根据组织不同的渗透性能,选择分子大小不同的阴离子染料进行染色,便可把不同组织成分显示出来.而染料分子的大小,主要由其分子量来体现。

小分子量者易于穿透结构致密、渗透性低的组织,而大分子最者则只能进入结构疏松,渗透性高的组织。

一般来说,结构疏松,渗透性高的组织多选择大分子染料,而结构致密,渗透性低的组织多选择小分子染料。

试剂仪器：
Harris 氏苏木精：苏木精0.4g，硫酸铝钾6g，黄色氧化汞0.16g，蒸馏水80ml。

将蒸馏水预热,预热过程中加入硫酸铝钾，沸腾后拔下电源，加入苏木精，接通电源再度沸腾后，拔掉电源，缓慢加入氧化汞，搅拌混匀，冷却后第二天加入5%比例的冰醋酸即可用。

透明玻璃瓶装缓慢氧化可省略冰醋酸，长期有效。

Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml。

1%冰醋酸水溶液：冰醋酸1 ml，蒸馏水100 ml。

1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml。

1%苯胺蓝水溶液：苯胺蓝1g，蒸馏水100 ml，冰醋酸2 ml。

1%光绿水溶液：光绿 1g，蒸馏水100 ml
实验操作程序：
1、石蜡切片脱蜡至水。

2、铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）。

3、依次自来水和蒸馏水洗。

4、用Harris 氏苏木素染液或Weigert苏木素液染核1-2min。

5．充分水洗,如过染可盐酸酒精分化2-3s。

6．温水返蓝。

7、用Masson 丽春红酸性复红液5-10min。

8、1%磷钼酸水溶液分化3-5min。

（镜下观察，着色程度）
9、1%苯胺蓝或光绿液染5min
10、1%冰醋酸水溶液分化几秒。

（镜下观察，着色程度）
11、95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固。

结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色(如光绿液染色为绿色)，胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核黑蓝色。

体会与说明：
1、控制好染色步骤。

2、组织固定起着很重要的作用，根据不同的固定液可延长或缩短染色时间。

3、0.2%冰醋酸水溶液洗，可使色调清晰鲜艳。

4、磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用，分化时镜下控制，肌纤维和纤维素呈红色，胶原纤维呈淡粉红色即可。