06实验六微生物生物学
实验6 微生物液体深层培养—发酵罐的使用
实验用品】 【实验用品】
1.材料:玉米粉,豆饼粉 1.材料:玉米粉, 材料 2.试剂: 2.试剂:K2HPO43H2O,MgSO47H20,红曲霉液体菌种 试剂 3H 7H 3.仪器: 3.仪器:小型通风发酵罐 仪器
College of Life Sciences, Hubei Normal University
Central Laboratory of Biology
方法步骤】 【方法步骤】
2. 空气过滤及空气管路的消毒 1)慢慢打开蒸汽阀门,排尽冷凝水. 慢慢打开蒸汽阀门,排尽冷凝水. 2)蒸汽通过空气过滤器进入发酵罐内. 蒸汽通过空气过滤器进入发酵罐内. 3)消毒时间一般为30分钟. 消毒时间一般为30分钟. 30分钟 4)吹干空气过滤器需20分钟左右. 吹干空气过滤器需20分钟左右. 20分钟左右 3. 空消 1)排尽夹套中的水. 排尽夹套中的水. 2)排尽蒸汽管中冷凝水,使蒸汽徐徐进入发酵罐. 排尽蒸汽管中冷凝水,使蒸汽徐徐进入发酵罐. 分钟. 3)空消时间一般为30～50分钟.排尽发酵罐内的冷凝水. 空消时间一般为30 50分钟 排尽发酵罐内的冷凝水.
方法步骤】 【方法步骤】
1. 准备工作 1)培养基的配制:玉米粉5%,豆饼粉2%,K2HPO43H2O 0.5%, 培养基的配制:玉米粉5%,豆饼粉2%, 5% 2% 3H 0.5%, MgSO47H20 0.1%,pH自然. 7H 0.1%,pH自然. 自然 2)检查本系统各单件设备,确保各设备能正常运行时方可开机. 检查本系统各单件设备,确保各设备能正常运行时方可开机. 3)温度,pH,转速,消泡设定值的调节 温度,pH,转速,
微生物学实验教程
微生物学实验内容实验一 . 显微镜的使用及细菌的简单染色实验二 . 细菌的革兰氏染色实验三 . 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别实验四 . 酵母菌的数量测定实验五 . 酵母菌的大小测定实验六 . 微生物菌落的观察实验实验七 . 霉菌的形态观察实验八 . 培养基的制备与灭菌实验九 . 放线菌的形态及菌落特征的观察实验十 . 微生物的纯种分离培养实验一 . 普通光学显微镜的使用一、目的要求1. 学习并掌握油镜的原理和使用方法。
2. 复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。
二 . 显微镜的基本结构及油镜的工作原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。
与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这主要有如下二方面的原因：1. 增加照明亮度油镜的放大倍数可达 100Χ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。
从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。
所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的油镜（通常用香柏游，其折射率 n=1.52）。
2. 增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率或分辨力 (resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。
从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，可表示为：（公式 P16 ）式中λ= 光波波长；NA=物镜的数值孔径值。
光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（ 0.4--0.7μm），而数值孔径值则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率，可表示为： NA=n × sin α式中α为光线最大入射角的半数。
06第六章 微生物的生长及控制
1. 微生物生长繁殖的pH值
大多数细菌、放线菌喜欢生活在中性偏碱的环境中， 细菌最适的pH在7.0~8.0之间，放线菌的最适pH在7.5~8.5 之间； 而酵母菌和霉菌刚好相反，适合在偏酸的条件下生 长，霉菌的最适pH值在4.0~5.8之间，酵母菌在3.8~6.0之 间。
2. pH值对微生物生长的影响
稀释倒平板法
操作较麻烦，对 好氧菌、热敏感 菌效果不好！
2. 膜过滤培养法
菌数低的样品（如水）→ 膜过滤 → 培养 → 菌落计数
3. 显微镜直接计数法
缺点：
① 不能区分死菌与活菌 ② 不适于对运动细菌的计数 ③ 需要相对高的细菌浓度 ④ 个体小的细菌在显微镜下难以观察
4. 比浊法
5. 重量法
为什么氧气存在能够抑制甚至杀死厌氧菌？
氧气进入菌体后，能接受电子而产生不同还原性的氧 离子，如过氧离子、过氧化物自由基。过氧化物自由基和过 氧离子都是很强的氧化剂，对微生物有毒，能氧化微生物过 程中所必需的酶。 好氧菌、兼性需氧菌以及微量需氧菌体内含有过氧化 物歧化酶（SOD)和过氧化氢酶。这两种酶能将过氧化物自由 基和过氧离子还原成没有毒性的水分子，所以它们不会被氧 气所杀死。耐氧菌虽没有过氧化氢酶，但有过氧化物酶，能 合成SOD，而不会被氧毒害。 厌氧菌体内都没有这些酶，所以不能忍受氧气。
将单位体积培养液中的菌体，用清水洗净， 然后放入干燥器内加热或减压干燥，最后测定其 干重。一般来说，干重约为湿重的10~20%，即 1mg干菌 = 5~10mg湿菌 = 4~5×109个菌体。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 6.氮量法(生理指标法)
微生物细胞的含氮量一般比较稳定，所以 常作为生长量的指标。如细菌含氮量约为菌体 干重的14%。含氮量乘以6.25即可粗测出其蛋白 质含量。
工业微生物 实验6 化学药剂对微生物生长的影响
实验六化学药剂对微生物生长的影响一、实验目的1、了解化学药剂的杀菌和消毒作用。
2、掌握常用消毒剂的浓度和使用方法。
二、基本原理一些化学药剂对微生物的生长有抑制或杀死作用。
因此，在实验室内和生产上常利用某些化学药剂进行杀菌或消毒。
不同的药剂或同一药剂对不同微生物的杀菌能力不同。
此外，药剂浓度、作用时间及环境条件不同，其效果也不一样。
使用前需进行试验，灵活选择。
三、器材1、菌种：培养24～48h的大肠杆菌，金黄色葡萄球菌。
2、培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，75%酒精，新洁而灭，50%来苏儿，3、仪器与其他用具：恒温培养箱，无菌平皿，无菌水，无菌吸管(1mL)，镊子，直径0.6cm的无菌圆形滤纸片。
四、实验方法1.制平板：取无菌平皿三套，将已熔化并冷却至50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作法倒入平皿中，使冷凝成平板。
2.制备菌悬液：取无菌水3支，用接种环分别取大肠杆菌和金黄色葡萄球菌1～2环接入无菌水中，充分混匀，制成菌悬液。
3.接种：用无菌吸管分别吸取已制好的菌悬液0.1mL接种于平板上，用无菌玻璃涂布棒涂匀。
注意做好标记。
4.浸药：将灭菌滤纸片分别浸入四种供试药剂中。
5.加药剂：用无菌镊子夹取浸药滤纸片(注意把药液沥干)，分别平铺于同一含菌平板上，注意药剂之间勿互相沾染。
并在平皿背面做好标记。
6.培养：将平皿置于28℃下培养48～72h后观察结果。
五、实验结果取出培养平皿，观察滤纸片周围有无抑菌圈产生，并测量抑菌圈的大小，将测量结果填入表中。
不同化学药剂对细菌的抑制效果（抑菌圈直径cm）化学药剂抑菌圈直径（cm）大肠杆菌金黄色葡萄球菌75%酒精新洁而灭50%来苏儿链霉素空白对照思考：哪种化学药剂对微生物的生长影响较大。
环境微生物学-实验六 微生物大小测定和计数
实验六微生物计数和大小的测定一、实验目的1、了解目测微尺和物测微尺的结构和使用；2、了解血球记数板的结构；3、掌握血球记数板的使用和计算方法。
二、实验仪器和材料显微镜，目测微尺，物测微尺、血球记数板擦镜纸，香柏油，二甲苯，载玻片，盖玻片。
酵母悬液（或其他种微生物的悬液）。
三、实验方法和步骤1、目测微尺和物测微尺目测微尺外形与目镜相似，在中央刻有10毫米长的、等分100格的标尺，每格的长度随使用目镜和物镜的放大倍数而定。
使用前用物测微尺标定，使用时放在目镜内。
物测微尺是一厚玻片，中央有一圆形盖玻片，中央刻有1毫米长的标尺，等分为100格，每格为10微米，用以标定目测微尺在不同放大倍数下每格的实际长度。
2、用目测微尺和物测微尺测量酵母菌的大小①目测微尺的标定将目测微尺装入目镜筒后，把物测微尺放在载物台上使刻度朝上，用低倍镜找到物测微尺的刻度，移动物测微尺和目测微尺使两者的第一条线重合，顺着刻度找出另一条重合线。
再分别求出高倍镜和油镜下目测微尺每格的长度。
实验记录表格1目镜放大倍数____________。
②菌体大小的测量将物测微尺取下，换上标本片，选择适当的物镜测量目的物的大小，分别求出菌体的长和宽，再按目测微尺一格的长度算出菌体的长度和宽度。
（1）目测微尺的标定：（2）在高倍镜下测量酵母菌大小：3、血球记数板血球记数板是一块比普通载玻片厚的特制玻璃制成。
玻片中央刻有四条纵向槽，中央两条槽之间的平面比其他平面略低，中间有一横槽，槽的上下各有9个大方格，中间的一个方格为计数室，它的长和宽各为1毫米，深度为0.1毫米，其体积为0.1立方毫米。
每个大格分成16个中格，每个中格分成25个小格，共400个小格。
计算方法如下：细胞数/毫升=1个小格内的细胞数×400×10×1000×稀释倍数。
实验记录表格24、微生物记数（1）稀释菌液：为了便于记数，将样品适当稀释，使每格约有5~10个细胞。
实验六 微生物细胞大小的测定
实验六微生物细胞大小的测定一、目的要求1.学会测微尺的使用和计算方法。
2.掌握酵母菌细胞大小测定的方法。
二、基本原理微生物细胞大小, 是微生物的形态特征之一,也是分类鉴定的依据之一。
由于菌体很小, 只能在显微镜下测量。
用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片。
一般将1mm等分为100格（或2mm等分为200格）,每格长度等于0．01mm（即106μm）。
是专用于校正目镜测微尺每格长度的。
目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片, 其中央刻有精确的刻度, 有等分50小格或100小格两种, 每5小格间有一长线相隔。
由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同, 目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同, 因此,目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小, 在使用前必须用镜台测微尺进行校正, 以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值, 然后才可用来测量微生物的大小。
三、器材枯草芽孢杆菌染色玻片标本, 目镜测微尺, 镜台测微尺, 显微镜, 擦镜纸, 香柏油等。
四、操作步骤1. 目镜测微尺的标定(1)放置目镜测微尺取出接目镜, 旋开接目镜透镜, 将目镜测微尺的刻度朝下放在接目镜筒内的隔板上（图Ⅳ-4, B）, 然后旋上接目透镜, 最后将此接目镜插入镜筒内（图Ⅳ-4, C）。
(2)放置镜台测微尺将镜台测微尺置于显微镜的载物台上, 使刻度面朝上。
(3)校正目镜测微尺先用低倍镜观察, 对准焦距, 当看清镜台测微尺后, 转动接目镜, 使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行, 移动推动器, 使目镜测微尺和镜台测微尺的某一区间的两对刻度线完全重合, 然后计数出两对重合线之间各自所占的格数（图Ⅳ-6）。
根据计数得到的目镜测微尺和镜台测微尺重合线之间各自所占的格数, 通过如下公式换算出目镜测微尺每小格所代表的实际长度。
目镜测微尺每小格长度（μm）=同法校正在高倍镜和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。
实验课6 ——【医学微生物学精品讲义】
TRUST (toluide red unheated serum regain test)
材料：TRUST试剂盒、病人血清
反应卡
1
2
3
Positive Negative Experimental control control group
（4）复染：稀释复红30sec，水洗，甩干水份。
（四）浅部真菌病标本的检查
1. 实验材料 （1）发癣或足癣患者的毛发或皮屑。 （2）10～20%NaOH溶液。 （3）载玻片、盖玻片等。
奋森螺旋体(革兰染色)
梅毒螺旋体(镀银染色)
钩端螺旋体(镀银染色)
暗视野显微镜下苍白密螺旋体 （暗视野，放大1000倍）
（二）梅毒血清学诊断试验
非螺旋体抗原试验：查反应素，特点是敏感性高, 但 易出现假阳性。 反应素是指非特异性抗类脂质抗体。当苍白螺旋体侵 入人体后,便会诱发人体产生两种相对应的抗体,即具 有种和属特异性的IgM和IgG抗体,另一种是非特异性抗 类脂质抗体称为反应素，它不是由螺旋体所产生而是 在螺旋体破坏人体组织过程中所释放的物质间接产生 的这种具有抗体特性的物质称为反应素。这种抗体主 要是IgE。
操作程序：
1. 将待检血清及TRUST抗原于试验前置（23-29℃）中平衡 片刻。
2. 分别吸取阴性和阳性对照各1滴（50μl）加到反应卡的二 个圆圈内并铺匀。
3. 吸取待检血清或血浆（不需灭活）1滴，分别滴加于卡片 上的另一个圆圈内并铺匀。
4. 轻轻摇匀抗原，用专用滴管针头垂直滴加抗原各1滴于 圈内。
真菌
（一）真菌的形态
真菌（fungi）大多为多细胞，仅少数为单细胞。单细 胞型真菌呈圆形或椭圆形，如酵母菌或类酵母型真菌。
环境工程微生物学实验报告6
实验目的：
1.熟悉玻璃器皿的洗涤及灭菌前的准备工作；
2.了解配制微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法。本实验通过常用培养基的配制，使学生了解常规的配制培养基的方法。
3.学会各类物品的包装、配制和灭菌。
基本原理：
培养基是钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。调整适合的ph，经高温灭菌后以备培养微生物之用。
由于微生物的种类及代谢类型的多样性，因而培养基放入种类也多，他们的配方及配制法也有所差异，但一般的配置过程大致相同。
实验器皿和材料：
高压蒸汽灭菌器、干燥箱、煤气灯、培养皿、试管、刻度移液管、锥形瓶、烧杯、量筒、药物天平、玻棒、玻璃珠、石棉网、药匙、铁架、表面皿、PH
试纸和棉花、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和琼脂。
实验内容:
一.玻璃器皿的准备
1.玻璃器皿的洗涤
2.玻璃器皿的包装
1移液管的包装；
2培养皿的包装；
3棉塞的制作。
二.培养基的配制
1.按照配方要求配制溶液；
2.根据微生物的生长需求调节PH；
3.过滤杂质；
4.将锥形瓶和试管进行分装加棉塞，包装后灭菌；
5.斜面的制作。
三.稀释水的配备
1.锥形瓶稀释水的配备
2.试管稀释水的配备
四.灭菌
1.干热灭菌法
2.加压蒸汽灭菌法
注意事项：
1.在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气要尽可能排除完；
2.易燃易爆物品（如：硝化甘油、硝化纤维、黄磷、红磷、乙醚、汽油及可燃性气体等）不能用高压灭菌法灭菌；
3.当含盐类的液体和含盐的琼脂中大量的盐类泼洒在工作腔体，要立即换水，冲洗腔体，仔细擦干锅盖垫圈上的水滴。否则它们会带来腐蚀和变质。要检查压力表上的指数为“0Mpa”后才能打开锅盖。
厌氧菌检验 微生物学实验
实验六、厌氧菌检验一、厌氧培养1、刨肉基法方法：将破伤风梭菌、产气荚膜梭菌分别接种在庖肉培养基中，35℃48h，观察结果。
2、厌氧罐法方法：将破伤风梭菌接种在高渗芽孢培养基中并放置于厌氧罐中；将破伤风梭菌、产气荚膜梭菌分别接种在血平板中并置于厌氧罐中，放厌氧袋，密闭，置35℃48h观察结果。
二、观察厌氧菌培养结果：1、庖肉基1）破伤风梭菌：肉汤混浊，部分消化，微变黑，有少量气体，有腐败性恶臭味。
2）产气荚膜梭菌：产生气体，肉渣呈粉红色，不被消化。
2、血平板1）破伤风梭菌：呈薄膜状生长，菌落半透明、灰白色、边缘疏松呈羽毛状，伴β溶血。
2）产气荚膜梭菌：多数菌株有双层溶血环，内环完全溶血，外环不完全溶血。
3、梭菌平板破伤风梭菌：形成直径1mm 以上不规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状。
三、涂片、革兰染色镜检：破伤风梭菌产气荚膜梭菌G-，细长，芽胞圆形，比菌体大，G+，粗短大杆菌，两端钝圆，单个或成双排列。
位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状芽胞椭圆形，位于菌体中央或次极端，芽胞直径不大于菌体四、芽孢染色：制片①5%孔雀绿加热3~5min，水洗甩干；②0.5%沙黄水溶液染色0.5~1.0min，水洗甩干干后镜检，如图所示：菌体呈红色，芽孢呈淡绿色。
破伤风梭菌产气荚膜梭菌五、汹涌发酵试验（试教）产气荚膜梭菌：分解乳糖产酸，使酪蛋白变性，同时产生大量气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡土林层向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，为“汹涌发酵”。
六、讨论：1、做生化试验时，有些细菌为致病菌，故实验时要保护好自己，且实验废弃物要妥善处理，以免发生有害菌的感染。
2、所有接种的菌株暴露于有氧环境中不得超过20min3、厌氧菌检验：可据厌氧菌的菌体形态、染色反应、菌落性状以及对某些抗生素的敏感性等作出初步鉴定。
最后鉴定则要进行生化反应及终末代谢产物等项检查。
4、破伤风梭菌微生物检验：根据破伤风的典型临床表现即可作出诊断，故一般不作细菌学检查。
6-霉菌形态的观察
微生物学实验
实验六 霉菌形态的观察
执教 单位
刘刚
生命科学学院
实验目的
学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。
了解四类常见霉菌的基本形态特征。
实验原理
气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖
菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢 子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌 菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约为 3～10μm），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍。
霉菌可产生分枝的菌丝体，分为基内菌丝和气生菌丝，
菌落形态较大，质地较疏松，颜色各异。菌丝体经制
片后可用低倍显微镜或高倍镜观察。
实验原理 霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，且孢 子容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭 酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本 片的特点是：细胞不变形，具有杀菌防腐 作用，且不易干燥，能保持较长时间，溶 液本身呈蓝色，有一定染色效果。
三.实验步骤 直接制片观察法 ：
在载玻片上加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解 剖针从霉菌菌落边缘处挑取少量已产孢子的霉菌 菌丝，先置于50%乙醇中浸一下以洗去脱落的孢 子，再放在载玻片上的染液中，用解剖针小心地 将菌丝分散开。盖上盖玻片，置低倍镜下观察， 必要时换高倍镜观察。 注意：挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自 然生长状态；加盖玻片时勿压入气横隔。分生孢子梗及 其分枝方式、梗基、小梗、分生孢子的形状以及分 生孢子穗，帚状分枝的层次状况。
木霉
分生孢子梗垂直对称分歧，分生孢子单生或簇生， 圆形，绿色。绿色木霉菌落外观深绿或蓝绿色。
发给学生的微生物实验报告
广州大学实验报告学院土木学院专业、班级06给水排水班学号姓名课程名称水处理微生物学实验时间2008.12.1――2008.12.5实验目录实验一显微镜的使用及微生物形态的观察实验----------------------------2 实验二微型动物的计数实验--------------------------------------------5 实验三细菌、霉菌、酵母菌、放线菌形态的观察实验----------------------6 实验四微生物的染色实验----------------------------------------------7 实验五培养基的制备及灭菌实验----------------------------------------9 实验六微生物纯种分离、培养及接种技术-------------------------------12 实验七纯培养菌种的菌体、菌落形态观察实验---------------------------14 实验八微生物的生理生化特征实验-------------------------------------15实验一显微镜的使用及微生物形态的观察一、实验目的(1)学习普通光学显微镜的使用方法。
(2)结合天然污水的观察，认识原生动物、菌胶团等微生物形态，并学习测量微生物大小的方法。
二、实验用具(1)生物滤池滤料、活性污泥法曝气池混合液。
(2)显微镜、目测微尺、物测微尺、载玻片、盖玻片等。
三、实验步骤(一)显微镜的结构和各部分的作用微生物检验常用的显微镜见图3—1—1、3—1—2，其构造分机械和光学两部分1．机械结构熟悉显微镜的镜筒、载物台、调节器的各部分结构，并操作使用。
2．光学部分（1）接目镜。
显微镜具有3个接目镜，其上常刻有“5×”、“10×”或“16×”符号，即使用时可放大5倍、10倍或16倍。
观察微生物时常用16倍的接目镜。
实验六：枯草芽孢杆菌生长曲线测定
管号
生长时间（h）
生长时间段
冷藏时间
1
0
-
14:00
2
2
18:00-20:00
14:00 20:00
3
4
18:00-22:00
14:00 22:00
4
6
14:00-20:00
20:00
5
8
14:00-22:00
22:00
6
16
22:00-次日14：00
14:00 次日14:00
7
18
20:00-次日14:00
3、反复学习无菌操作技术；
4、了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；
5、掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；
6、学习光电比浊法测量细菌数量的方法；
7、学习平板涂布技术。
实验原理
将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解个菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。
实验结果及数据处理
管号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
OD值
0.102
0.
培养时间
0
2
4
6
8
16
微生物学实验六、衣原体、立克次体、真菌、病毒包涵体、单层细胞培养。
2、培养：在无活细胞的培养基中不能生长；
3、抵抗力：
极弱，对青霉素、 红霉素、砷剂敏感。
钩端螺旋体
钩体为圆柱型，长约 6-12µm，直径0.10.2µm。可见螺旋盘绕细 密、规则似细小珍珠排列 的细链，常呈C、S或8字 形。
常用镀银染色法染色，染 成棕褐色.
钩端螺旋体
回归热疏螺旋体
3. 与疾病有关的：
• 疏螺旋体属: 伯氏疏螺旋体 • 密螺旋体属: 梅毒螺旋体 • 钩端螺旋体属: 钩端螺旋体
梅毒螺旋体
1、形态与染色：TP菌 体细长，长约7-8μm,直 径0.10-0.15μm. 有814个致密而规则螺旋， 两端尖直，运动活泼。
用普通染料不易着色， 常用镀银染色法染色， 染成棕褐色
分 类：
对人致病的立克次体包括五个属： 1、立克次体属 斑疹伤寒群 (Rickettsia) 斑点热群 2、柯克斯体属(coxiella) 3、东方体属（Orientia,包括恙虫病群） 4、埃立克体属(Ehrlichia) 5、巴通体属（Bartonella,包括罗沙利马体）
一、生物学性状：
（一）形态与染
病毒感染细胞后，在胞浆或胞核内出现 嗜酸或嗜碱性的圆形、椭圆形、不规则 形斑块结构。
狂犬病病毒包涵体（内基小体）
七、单层细胞培养
1，取出鸡胚，放在无菌培养基中，将鸡胚剪成小块 2，胰酶消化：用胰酶使大量的细胞游离. 3，将细胞悬液放于37℃温箱孵育。 4，培养48h后长成单层，镜下可看到一层活细胞，
培养特性：营养要求高、专性需氧(馋)
生长缓慢,2-4W才见菌落(懒) 呈乳白色或米黄色，不透明，粗糙型颗粒状， 结节状，菜花状菌落(丑)。
微生物学实验报告
微生物学实验报告（格式标准）(生命科学专业)*****目录索引实验一油镜的使用和细菌的简单染色法 3实验二细菌的革氏染色与芽孢染色 5实验三常用培养基的配制7实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别8实验五、微生物大小的测定与显微计数10实验六环境中微生物的检测和分离纯化11实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应12实验八（综合实验）化能异养微生物的分离与纯化13课程名称：微生物学实验班级：化生系生命科学本科实验日期：指导教师：黎勇实验一油镜的使用和细菌的简单染色法〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术；观察细菌的基本形态；学习观察细菌的运动性的基本方法。
〔基本原理〕1. N·A=n·sinα2. D=λ/2N.A3. 目镜可提高放大倍数，但有效放大率取决于镜口率。
已经分辨的物体不放大看不清，未分辨物放得再大也看不清。
4. 用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时，可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。
〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸；细菌、放线菌等固定装片；培养18小时左右的B.subtilis. S.arueus 菌斜面培养物；无菌水、生理盐水。
〔方法步骤〕：（一）油镜的使用镜检装片在中倍（或高倍镜）下找到目的物，并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置，虹彩光圈开到最大，镜头转开成八字形在玻片的镜检部位（光斑处）滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台（缩短镜头与装片距离，镜头浸入油中，至油圈不扩大为止镜头几与装片接触）粗调器徐徐下降载物台（密切注视视野，当捕捉到物像时，立即用细调器校正）仔细观察并绘图取出装片，清洗油镜：擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留（用手指辅助，迅速拭擦一、二次）用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯（2-3次）。
（二）细菌的简单染色法：涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察（三）细菌运动性的观察取洁净盖玻片，四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察〔结果分析〕1、画一圆圈表示视野，选取所观察的微生物绘图，注意特殊结构、形状和排列。
微生物学实验
微生物学实验进度表06微生物实验室实验须知及实验室常用器皿1 实验须知：1）实验前的预习；2）做好实验记录；3）实验过程中保持实验室的干净和安静；4）实验步骤严格按操作规程进行；5）注意实验过程中的安全；6）实验完成后要把所用到的仪器放妥，收拾干净自己的实验桌；7）认真完成实验报告。
2 验室常用器皿1）试管2）吸管3）培养皿4）烧瓶5）接种工具6）超净工作台7）灭菌锅微生物学实验技能训练1 试管及锥形瓶棉塞的制作2 吸管及培养皿的包扎3 玻璃器皿的清洗4 无菌操作技术训练实验一实验室和人体表面微生物的检查一实验目的1 证明实验室环境与体表存在微生物2 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型3 体会无菌操作的重要性二实验原理平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养，1-2d内每一菌体能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。
每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小、表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑等。
因此可通过平板培养基来检查环境中微生物的数量和类型。
三、器材1、培养基牛肉膏蛋白胨琼脂平板2、仪器或其他用具无菌水、灭菌棉签（装在试管内），接种环，试管架，酒精灯，记号笔，废物缸。
四、操作步骤1、写标签任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号（包括班级、姓名、日期、样品来源等），字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。
注：培养皿的记号一般写在皿底上，如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时容易混淆。
2、实验室细菌检查（1）空气将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在实验台上，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中，将另一块肉膏蛋白胨琼脂平板放在洁净工作台内或无人走动的实验室中，移去皿盖，1h后盖上两个皿盖。
（2）实验台①用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线。
微生物学实验
微生物学实验实验一实验室环境和人体表面微生物的检查实验二油镜的使用和细菌的简单染色实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色实验四微生物大小的测定和酵母菌死活细胞的鉴定实验五培养基的配制与消毒灭菌实验六土壤微生物的分离纯化与鉴定实验七食品微生物检验 (一)细菌总数测定实验八食品微生物检验（二）大肠菌群数测定实验九大肠杆菌生长曲线的测定实验十IMViC与硫化氢试验实验一、实验室环境和人体表微生物的检查1.一、目的：1.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量与类型；2.观察不同类型微生物的菌落形态特征；3.体会无菌操作的重要性。
2.二、原理：1.微生物无孔不入，无处不在。
2.微生物→营养琼脂平板→菌落或菌苔。
（37 ℃倒置培养24 h）3.描述：菌落的大小、表面光滑或粗糙、干燥或湿润、隆起或扁平、边缘整齐或锯齿状、菌落透明或不透明、颜色以及质地均匀与否、疏松或紧密等，以便检查环境中细菌的类?秃褪 俊?4.细胞、放线菌、酵母菌和霉菌四大类型都可能存在，本实验重点观察细菌。
3.三、器材：1.培养基：营养琼脂平板（牛肉膏蛋白胨培养基）2.器具：无菌水、灭菌棉签、接种环（针）、酒精灯等。
4.四、步骤：1.标记。
组号/姓名、日期、样品来源。
2.接种。
3.倒置培养，37℃ 24 h4.观察结果。
5.五、结果6.样品来源菌落数菌落类型特征描写本实验室（流动空气30 min）1 大小形态干湿扁/隆透明度颜色边缘23接种室（不流动空气30min）洗手前洗手后头发屑指甲垢实验台门把1.六、思考题：1.人多的实验室与少人走动的实验室比较，平板上的菌落数和菌落类型有区别吗？试解释。
2.通过本实验，在防止培养物的污染和防止细菌的扩散方面，你有何体会？3.4.实验二油镜的使用和细菌的简单染色一、实验目的1、学习和掌握油镜的原理和使用技术。
2、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。
二、实验原理1．油镜使用原理：光镜的几种物镜中以油镜的放大倍数最大，尤其适用于微生物学研究。
微生物学实验目录(PPT)
革兰氏阴性菌其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂 质含量高。
第十五页，共九十三页。
四、实验 步骤 (shíyàn)
1、涂片：将大肠杆菌和八叠球菌 分别涂片、枯燥 、固定
2、染色(rǎnsè)： 〔1〕初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟， 水洗
第二十八页，共九十三页。
实验 四 (shíyàn)
显微镜测微技术(jìshù)
第二十九页，共九十三页。
一、实验 目的 (shíyàn)
1〕学习用测微尺测量微生物细胞大小。 2〕掌握台镜测微尺和目镜测微尺的使用
方法。 (shǐyòng)
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二、材料 与仪器 (cáiliào)
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1、啤酒酵母 2、显微镜、物镜(wùjìng)测微尺、目镜测微尺
第三十一页，共九十三页。
三、根本 原理 (gēnběn)
微生物细胞大小，是其形态特征重要 标志之一。每一种微生物在一定条件下， 有其相对固有的大小形态。它是分类鉴定 的依据之一。其大小测定可用测微尺测量 (cèliáng)。测微尺分为目镜测微尺和物镜测微 尺两局部。
第三页，共九十三页。
二、实验 器 (shíyàn) 材
❖显微镜
❖玻片标本(biāoběn) ❖酵母菌
❖载玻片、盖玻片、擦镜纸 ❖香柏油、二甲苯、
第四页，共九十三页。
三、实验 内容 (shíyàn)
1.光学 显微镜的 (guāngxué) 构造
✓ 机械系统局部
✓ 光学系统局部 ✓ 照明(zhàomíng)系统局部
二、实验器材(qìcái)
酵母菌悬液，血球计数板，显微镜，盖玻片， 无菌毛 细管，吸水纸
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实验六
几种丝状真菌菌落及菌体 形态观察
根霉、毛霉、青霉、曲霉、镰刀菌
实验内容及目的
学习观察并描述真菌菌落特征；
学习并掌握制作水压片观察真菌的方法；
学习区分供试丝状真菌的菌体形态特征， 掌握各类真菌的形态特点。
实验菌株：
接合菌门（Zygomycota）
毛霉（Mucor sp.）：“+”、“-”型菌株
•分生孢子梗直立于菌丝体，扫帚状 分枝（对称与不对称）
•绿色分生孢子（球状、卵状）几轮 小梗
曲霉（Aspergillus sp. ）
（角变）
菌落无色或有明亮的颜色，颗粒状，可有同心圆形的轮状带
• 孢囊梗长在厚壁的足细胞上，不分 枝，顶端膨大成顶囊 •小梗：下层 柱状 初生
上层 瓶状 次生 •球状分生孢子（成链）
小型分生孢子
菌体形态观察——制水压片
•浮载剂：乳酸酚
实验报告要求
菌落特征描述：
名称
毛霉 根霉 青霉 曲霉 镰刀菌
菌丝质地：
(絮状、绒状、茸 状、毡状)
正反面颜色：
绘图：毛霉——无性：孢囊梗 孢子囊 囊轴 囊领 孢囊孢子 ——有性：接合孢子 配囊柄
根霉：假根 匍匐丝 孢囊梗 孢子囊 囊轴 囊托 孢囊孢子
根霉（Rhizopus sp.）
半知菌类（Fungi Imperfecti）
青霉（Penicillium sp.）
曲霉（Aspergillus sp.）
镰刀菌（Fusarium sp.）
接合菌门（Zygomycota）
菌落生长迅速，表面呈棉絮 状，初为白色，后变灰至褐 灰色
菌丝多单细胞无横隔，有分 枝，多核
匍匐丝，假根，孢囊梗与假根对生，囊轴、囊托
半知菌类（Fungi Imperfecti）
只知其生活周期的一半——无性生殖阶 段，而不知其有性生殖阶段
无性生殖阶段均有特征性的分生孢子梗、 分生孢子形态和分生孢子着生方式
青霉（Penicillium sp. ）
菌落正面灰绿色，茸状，成熟后表面呈粉状
真菌（Fungi）
寄生或腐生，异养, 不能进行光合作用（不 含叶绿素），细胞壁含几丁质, 菌丝体发达, 产生孢子进行无性生殖和有性繁殖。
真菌界
壶菌门 接合菌门 子囊菌门 担子菌门
管毛生物界
卵菌门 丝壶菌门 网粘菌门
原生生物
根肿菌门
网柄菌门
集胞菌门
粘菌门
目前真菌界(Fungi)的实际范围
壶菌门 Chytridiomycota 接合菌门 Zygomycota 子囊菌门 Ascomycota 担子菌门 Basidiomycota 半知菌类 Fungi Imperfecti
毛霉 曲霉
根霉 青霉
无性生殖——孢囊孢子 有性生殖——接合孢子，常
为异宗配合， 即由“+”“-” 型菌丝接合形成
+-
接合孢子
接合孢子 配囊柄
孢囊梗
毛霉（Mucor）
菌落表面絮状，无色素
毛霉（Mucor）
孢囊梗直接由菌丝体上长出，孢子囊，囊轴， 囊领
根霉（Rhizopus）
菌落表面絮状，无色素
根霉（Rhizopus）
镰刀菌（Fusarium sp. ）
菌落白色、粉红色或紫红色，绒状 角变（sector mutation）
•菌丝分枝有分隔； •间生或顶生厚垣孢子； •两种分生孢子： 小型：分生孢子梗分枝 或不分枝，分生孢子链 状或假头状着生
大型：分生孢子梗不分 枝，分生孢子镰刀状， 多隔，单生或丛生
厚垣孢子