实验四 细菌

实验四细菌、放线菌、霉菌和酵母菌的细胞形态与菌落形态观察
实验四细菌、放线菌、霉菌和酵母菌的细胞形态与菌落形态观察
一、实验目的
1．观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的代表种类的菌落形态特征。

2．放线菌、酵母菌和霉菌的细胞形态观察。

二、实验原理
菌落形态是指某种微生物在一定的培养基上由单个菌体形成的群体形态。

细菌、放线菌、酵母菌和霉菌，每一类微生物在一定培养条件下形成的菌落各具有某些相对的特征，利用观察这些特征，来区分各大类微生物及初步识别、鉴定微生物，方法简便快速，在科研和生产实践中常被采用。

三、实验材料和用具
圆褐固氮菌，枯草芽孢杆菌，灰色链霉菌，酿酒酵母，青霉的单个菌落平板，白色葡萄球菌（Staphyloccus albus）；Bouin氏固定液，
0．01％结晶紫溶液，酒精等。

显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接种环。

四、操作步骤
（一）四大菌落的形态观察
观察圆褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、灰色链霉菌、酿酒酵母、青霉的单个菌落特征，并按实验菌落特征描述的方法记录结果。

（二）放线菌的形态观察
用镊子小心取出用插片法培养的放线菌培养皿中的一张盖玻片，将其背面附着的菌丝体擦净。

然后将长有菌的一面向上放在洁净的载玻片上，用低倍镜、高倍镜观察。

找出3类菌丝及其分生孢子，并绘图。

注意放线菌的基内菌丝、气生菌丝的粗细和色泽差异。

（三）霉菌的形态观察
1．粘片观察：
取一滴棉蓝染色液置于载玻片中央，取一段透明胶带，打开霉菌平板培养物，粘取菌体，粘面朝下，放在染液上。

镜检。

2．假根观察：
将培养根霉假根的平皿打开，取出皿盖内的载玻片标本，在附着菌丝体的一面盖上盖玻片，置显微镜下观察。

只要用低倍镜就能观察到假根及从根节上分化出的孢子囊梗、孢子囊、孢囊孢子和两个假根间的匍匐菌丝，观察时注意调节焦距以看清各种构造。

（四）酵母菌的形态观察
酵母菌的话体染色观察及死亡率的测定
1．以无菌水洗下PDA斜面培养的酿酒酵母菌苔，制成菌悬液。

2.取
0.05%美蓝染色液1滴，置载玻片中央，并用接种环取酵母菌悬液与染色液混匀，染色2～3min，加盖玻片，在高倍镜下观察酵母菌个体形态，区分其母细胞与芽体，区分死细胞(蓝色)与活细胞(不着色)。

3.在一个视野里计数死细胞和活细胞，共计数5～6个视野。

酵母菌死亡率一般用百分数来表示，以下式来计算：
死亡率=死细胞总数／死活细胞总数×100%
五、注意事项
1．用于活化酵母菌的麦芽汁培养基要新鲜、表面湿润；在产孢培养基上加大移种量，可提高子囊形成率；通过微加热增加酵母的死亡率，易于观察死亡细胞。

2．培养放线菌中要注意，放线菌的生长速度较慢，培养期较长，在操作中应特别注意无菌操作，严防杂菌污染。

3．玻璃纸法培养接种时注意玻璃纸与平板琼脂培养基间不宜有气泡，以免影响其表面放线菌的生长，
六、实验报告
1.将观察到的微生物菌落特征填入下表中。

2.计算酵母菌的死亡率
3．根霉和青霉形态图，示各部。

七、问题和思考
1.试比较细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的菌落形态的差异？
2．酵母菌的假菌丝是怎样形成的?与霉菌的真菌丝有何区别?
3．在高倍镜或油镜下如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝?
一、实验目的
1．观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的代表种类的菌落形态特征。

2．放线菌、酵母菌和霉菌的细胞形态观察。

二、实验原理
菌落形态是指某种微生物在一定的培养基上由单个菌体形成的群体形态。

细菌、放线菌、酵母菌和霉菌，每一类微生物在一定培养条件下形成的菌落各具有某些相对的特征，利用观察这些特征，来区分各大类微生物及初步识别、鉴定微生物，方法简便快速，在科研和生产实践中常被采用。

三、实验材料和用具
圆褐固氮菌，枯草芽孢杆菌，灰色链霉菌，酿酒酵母，青霉的单个菌落平板，白色葡萄球菌（Staphyloccus albus）；Bouin氏固定液，
0．01％结晶紫溶液，酒精等。

显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接种环。

四、操作步骤
（一）四大菌落的形态观察
观察圆褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、灰色链霉菌、酿酒酵母、青霉的单个菌落特征，并按实验菌落特征描述的方法记录结果。

（二）放线菌的形态观察
用镊子小心取出用插片法培养的放线菌培养皿中的一张盖玻片，将其背面附着的菌丝体擦净。

然后将长有菌的一面向上放在洁净的载玻片上，用低倍镜、高倍镜观察。

找出3类菌丝及其分生孢子，并绘图。

注意放线菌的基内菌丝、气生菌丝的粗细和色泽差异。

（三）霉菌的形态观察
1．粘片观察：
取一滴棉蓝染色液置于载玻片中央，取一段透明胶带，打开霉菌平板培养物，粘取菌体，粘面朝下，放在染液上。

镜检。

2．假根观察：
将培养根霉假根的平皿打开，取出皿盖内的载玻片标本，在附着菌丝体的一面盖上盖玻片，置显微镜下观察。

只要用低倍镜就能观察到假根及从根节上分化出的孢子囊梗、孢子囊、孢囊孢子和两个假根间的匍匐菌丝，观察时注意调节焦距以看清各种构造。

（四）酵母菌的形态观察
酵母菌的话体染色观察及死亡率的测定
1．以无菌水洗下PDA斜面培养的酿酒酵母菌苔，制成菌悬液。

2.取
0.05%美蓝染色液1滴，置载玻片中央，并用接种环取酵母菌悬液与染色液混匀，染色2～3min，加盖玻片，在高倍镜下观察酵母菌个体形态，区分其母细胞与芽体，区分死细胞(蓝色)与活细胞(不着色)。

3.在一个视野里计数死细胞和活细胞，共计数5～6个视野。

酵母菌死亡率一般用百分数来表示，以下式来计算：
死亡率=死细胞总数／死活细胞总数×100%
五、注意事项
1．用于活化酵母菌的麦芽汁培养基要新鲜、表面湿润；在产孢培养基上加大移种量，可提高子囊形成率；通过微加热增加酵母的死亡率，易于观察死亡细胞。

2．培养放线菌中要注意，放线菌的生长速度较慢，培养期较长，在操作中应特别注意无菌操作，严防杂菌污染。

3．玻璃纸法培养接种时注意玻璃纸与平板琼脂培养基间不宜有气泡，以免影响其表面放线菌的生长，
六、实验报告
1.将观察到的微生物菌落特征填入下表中。

2.计算酵母菌的死亡率
3．根霉和青霉形态图，示各部。

七、问题和思考
1.试比较细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的菌落形态的差异？2．酵母菌的假菌丝是怎样形成的?与霉菌的真菌丝有何区别? 3．在高倍镜或油镜下如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝?。