实验课6 ——【医学微生物学精品讲义】
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5. 摇动卡片片刻，立即用肉眼观察结果。 阴性：可见均匀的抗原颗粒而无凝聚物 阳性：出现粉红色凝集块
TRUST (toluide red unheated serum regain test)
材料：TRUST试剂盒、病人血清
反应卡
1
2
3
Positive Negative Experimental control control group
（4）复染：稀释复红30sec，水洗，甩干水份。
（四）浅部真菌病标本的检查
1. 实验材料 （1）发癣或足癣患者的毛发或皮屑。 （2）10～20%NaOH溶液。 （3）载玻片、盖玻片等。
奋森螺旋体(革兰染色)
梅毒螺旋体(镀银染色)
钩端螺旋体(镀银染色)
暗视野显微镜下苍白密螺旋体 （暗视野，放大1000倍）
（二）梅毒血清学诊断试验
非螺旋体抗原试验：查反应素，特点是敏感性高, 但 易出现假阳性。 反应素是指非特异性抗类脂质抗体。当苍白螺旋体侵 入人体后,便会诱发人体产生两种相对应的抗体,即具 有种和属特异性的IgM和IgG抗体,另一种是非特异性抗 类脂质抗体称为反应素，它不是由螺旋体所产生而是 在螺旋体破坏人体组织过程中所释放的物质间接产生 的这种具有抗体特性的物质称为反应素。这种抗体主 要是IgE。
操作程序：
1. 将待检血清及TRUST抗原于试验前置（23-29℃）中平衡 片刻。
2. 分别吸取阴性和阳性对照各1滴（50μl）加到反应卡的二 个圆圈内并铺匀。
3. 吸取待检血清或血浆（不需灭活）1滴，分别滴加于卡片 上的另一个圆圈内并铺匀。
4. 轻轻摇匀抗原，用专用滴管针头垂直滴加抗原各1滴于 圈内。
真菌
（一）真菌的形态
真菌（fungi）大多为多细胞，仅少数为单细胞。单细 胞型真菌呈圆形或椭圆形，如酵母菌或类酵母型真菌。
白色念珠菌
1.菌体 2.假菌丝 3.厚膜孢子
1 3
2
三属皮肤癣真菌的形态结构特点
多细胞型真菌是由菌丝（hypha）和孢子 （spore）两大基本结构组成，并交织成团，称丝状 菌或霉菌（mold）。
絮 状 表 皮 癣 菌
犬
小
孢
子
石膏样毛癣菌
菌
（二）真菌菌落
1. 酵母型菌落 如：新型隐球菌菌落，圆形、较大、白色、 边缘整齐，表面湿润光滑，与一般细菌菌 落相似。
2. 类酵母型菌落 如：念珠菌属真菌。 在培养基表面形成类 似酵母菌的菌落，但 在深部则因假菌丝有 分支而类似菌丝状菌 落。
3. 丝状菌落 如：絮状表皮癣菌菌落。表面有 不规则隆起和浅沟，并有白色棉 絮样气中菌丝，菌落的基底背面 呈茶褐色。
絮状表皮癣菌菌落
4.双相性菌落
如：皮炎芽生菌。因培养环境不同菌体在 温室则呈丝状型。
组织中生长呈酵母型，
（三）白假丝酵母菌标本片革兰染色
1. 制片：涂片
干燥
固定
2. 革兰染色
（1）初染：结晶紫染色1min，水洗，甩干水份。
（2）媒染：碘液1min，水洗，甩干水份。
（3）脱色：95％乙醇30sec，水洗，甩干水份。
实验六 螺旋体、真菌
目的要求
1.掌握真菌和螺旋体的形态特点。 2.熟悉真菌的菌落特点。 3.了解不同标本来源的真菌的检查方法。
螺 旋 体 Spirochete
（一）形态与染色
1 奋森螺旋体：革兰染色阴性，有3～10个稀疏不规则 的螺旋，呈波状。 2 梅毒螺旋体：镀银染色呈棕褐色，两端尖直，有8~14 个弯曲而规则的螺旋。 3 钩端螺旋体：镀银染色呈棕褐色，螺旋盘绕紧密而规 则，一端或两端弯曲如钩状，常使菌体呈C、S等字母 形。
试验方法
①VDRL试验（性病研究室验室试验 ）心 脂质微颗粒Ag + 患者速血清反应素试验 ）活 性炭为载体吸附心脂质 + 患者血清 （反 应肉眼可见）
③TRUST试验：甲苯胺红不加热血清试 验
④TPPA试验:梅毒特异性抗体检测实验
甲苯胺红不加热血清试验 （TRUST，toluidie red unheated serum regain test ） 采用VDRL抗原（牛心肌心类脂）混悬于含有特 制的甲苯胺红溶液中，与血清中反应素反应， 出现肉眼可见的红色凝集块，即为阳性反应。
TRUST (toluide red unheated serum regain test)
材料：TRUST试剂盒、病人血清
反应卡
1
2
3
Positive Negative Experimental control control group
（4）复染：稀释复红30sec，水洗，甩干水份。
（四）浅部真菌病标本的检查
1. 实验材料 （1）发癣或足癣患者的毛发或皮屑。 （2）10～20%NaOH溶液。 （3）载玻片、盖玻片等。
奋森螺旋体(革兰染色)
梅毒螺旋体(镀银染色)
钩端螺旋体(镀银染色)
暗视野显微镜下苍白密螺旋体 （暗视野，放大1000倍）
（二）梅毒血清学诊断试验
非螺旋体抗原试验：查反应素，特点是敏感性高, 但 易出现假阳性。 反应素是指非特异性抗类脂质抗体。当苍白螺旋体侵 入人体后,便会诱发人体产生两种相对应的抗体,即具 有种和属特异性的IgM和IgG抗体,另一种是非特异性抗 类脂质抗体称为反应素，它不是由螺旋体所产生而是 在螺旋体破坏人体组织过程中所释放的物质间接产生 的这种具有抗体特性的物质称为反应素。这种抗体主 要是IgE。
操作程序：
1. 将待检血清及TRUST抗原于试验前置（23-29℃）中平衡 片刻。
2. 分别吸取阴性和阳性对照各1滴（50μl）加到反应卡的二 个圆圈内并铺匀。
3. 吸取待检血清或血浆（不需灭活）1滴，分别滴加于卡片 上的另一个圆圈内并铺匀。
4. 轻轻摇匀抗原，用专用滴管针头垂直滴加抗原各1滴于 圈内。
真菌
（一）真菌的形态
真菌（fungi）大多为多细胞，仅少数为单细胞。单细 胞型真菌呈圆形或椭圆形，如酵母菌或类酵母型真菌。
白色念珠菌
1.菌体 2.假菌丝 3.厚膜孢子
1 3
2
三属皮肤癣真菌的形态结构特点
多细胞型真菌是由菌丝（hypha）和孢子 （spore）两大基本结构组成，并交织成团，称丝状 菌或霉菌（mold）。
絮 状 表 皮 癣 菌
犬
小
孢
子
石膏样毛癣菌
菌
（二）真菌菌落
1. 酵母型菌落 如：新型隐球菌菌落，圆形、较大、白色、 边缘整齐，表面湿润光滑，与一般细菌菌 落相似。
2. 类酵母型菌落 如：念珠菌属真菌。 在培养基表面形成类 似酵母菌的菌落，但 在深部则因假菌丝有 分支而类似菌丝状菌 落。
3. 丝状菌落 如：絮状表皮癣菌菌落。表面有 不规则隆起和浅沟，并有白色棉 絮样气中菌丝，菌落的基底背面 呈茶褐色。
絮状表皮癣菌菌落
4.双相性菌落
如：皮炎芽生菌。因培养环境不同菌体在 温室则呈丝状型。
组织中生长呈酵母型，
（三）白假丝酵母菌标本片革兰染色
1. 制片：涂片
干燥
固定
2. 革兰染色
（1）初染：结晶紫染色1min，水洗，甩干水份。
（2）媒染：碘液1min，水洗，甩干水份。
（3）脱色：95％乙醇30sec，水洗，甩干水份。
实验六 螺旋体、真菌
目的要求
1.掌握真菌和螺旋体的形态特点。 2.熟悉真菌的菌落特点。 3.了解不同标本来源的真菌的检查方法。
螺 旋 体 Spirochete
（一）形态与染色
1 奋森螺旋体：革兰染色阴性，有3～10个稀疏不规则 的螺旋，呈波状。 2 梅毒螺旋体：镀银染色呈棕褐色，两端尖直，有8~14 个弯曲而规则的螺旋。 3 钩端螺旋体：镀银染色呈棕褐色，螺旋盘绕紧密而规 则，一端或两端弯曲如钩状，常使菌体呈C、S等字母 形。
试验方法
①VDRL试验（性病研究室验室试验 ）心 脂质微颗粒Ag + 患者速血清反应素试验 ）活 性炭为载体吸附心脂质 + 患者血清 （反 应肉眼可见）
③TRUST试验：甲苯胺红不加热血清试 验
④TPPA试验:梅毒特异性抗体检测实验
甲苯胺红不加热血清试验 （TRUST，toluidie red unheated serum regain test ） 采用VDRL抗原（牛心肌心类脂）混悬于含有特 制的甲苯胺红溶液中，与血清中反应素反应， 出现肉眼可见的红色凝集块，即为阳性反应。