实验课6 ——【医学微生物学精品讲义】

试验方法
①VDRL试验（性病研究室验室试验 ）心 脂质微颗粒Ag + 患者血清（显微镜 观 察）
②RPR试验（快速血清反应素试验 ）活 性炭为载体吸附心脂质 + 患者血清 （反 应肉眼可见）
③TRUST试验：甲苯胺红不加热血清试 验
④TPPA试验:梅毒特异性抗体检测实验
甲苯胺红不加热血清试验 （TRUST，toluidie red unheated serum regain test ） 采用VDRL抗原（牛心肌心类脂）混悬于含有特 制的甲苯胺红溶液中，与血清中反应素反应， 出现肉眼可见的红色凝集块，即为阳性反应。
真菌
（一）真菌的形态
真菌（fungi）大多为多细胞，仅少数为单细胞。单细 胞型真菌呈圆形或椭圆形，如酵母菌或类酵母型真菌。
白色念珠菌
1.菌体 2.假菌丝 3.厚膜孢子
1 3
2
三属皮肤癣真菌的形态结构特点
多细胞型真菌是由菌丝（hypha）和孢子 （spore）两大基本结构组成，并交织成团，称丝状 菌或霉菌（mold）。
奋森螺旋体(革兰染色)
梅毒螺旋体(镀银染色)
钩端螺旋体(镀银染色)
暗视野显微镜下苍白密螺旋体 （暗视野，放大1000倍）
（二）梅毒血清学诊断试验
非螺旋体抗原试验：查反应素，特点是敏感性高, 但 易出现假阳性。 反应素是指非特异性抗类脂质抗体。当苍白螺旋体侵 入人体后,便会诱发人体产生两种相对应的抗体,即具 有种和属特异性的IgM和IgG抗体,另一种是非特异性抗 类脂质抗体称为反应素，它不是由螺旋体所产生而是 在螺旋体破坏人体组织过程中所释放的物质间接产生 的这种具有抗体特性的物质称为反应素。这种抗体主 要是IgE。
絮状表皮癣菌菌落
4.双相性菌落
如：皮炎芽生菌。因培养环境不同菌体在 温室则呈丝状型。
组织中生长呈酵母型，
（三）白假丝酵母菌标本片革兰染色
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1. 制片：涂片
干燥
固定
2. 革兰染色
（1）初染：结晶紫染色1min，水洗，甩干水份。
（2）媒染：碘液1min，水洗，甩干水份。
（3）脱色：95％乙醇30sec，水洗，甩干水份。
絮 状 表 皮 癣 菌
犬
小
孢
子
石膏样毛癣菌
菌
（二）真菌菌落
1. 酵母型菌落 如：新型隐球菌菌落，圆形、较大、白色、 边缘整齐，表面湿润光滑，与一般细菌菌 落相似。
2. 类酵母型菌落 如：念珠菌属真菌。 在培养基表面形成类 似酵母菌的菌落，但 在深部则因假菌丝有 分支而类似菌丝状菌 落。
3. 丝状菌落 如：絮状表皮癣菌菌落。表面有 不规则隆起和浅沟，并有白色棉 絮样气中菌丝，菌落的基底背面 呈茶褐色。
实验六 螺旋体、真菌
目的要求
1.掌握真菌和螺旋体的形态特点。 2.熟悉真菌的菌落特点。 3.了解不同标本来源的真菌的检查方法。
螺 旋 体 Spirochete
（一）形态与染色
1 奋森螺旋体：革兰染色阴性，有3～10个稀疏不规则 的螺旋，呈波状。 2 梅毒螺旋体：镀银染色呈棕褐色，两端尖直，有8~14 个弯曲而规则的螺旋。 3 钩端螺旋体：镀银染色呈棕褐色，螺旋盘绕紧密而规 则，一端或两端弯曲如钩状，常使菌体呈C、S等字母 形。
（4）复染：稀释复红30sec，水洗，甩干水份。
（四）浅部真菌病标本的检查
1. 实验材料 （1）发癣或足癣患者的毛发或皮屑。 （2）10～20%NaOH溶液。 （3）载玻片、盖玻片等。
操作程序：
1. 将待检血清及TRUST抗原于试验前置（23-29℃）中平衡 片刻。
2. 分别吸取阴性和阳性对照各1滴（50μl）加到反应卡的二 个圆圈内并铺匀。
3. 吸取待检血清或血浆（不需灭活）1滴，分别滴加于卡片 上的另一个圆圈内并铺匀。
4. 轻轻摇匀抗原，用专用滴管针头垂直滴加抗原各1滴于 圈内。
5. 摇动卡片片刻，立即用肉眼观察结果。 阴性：可见均匀的抗原颗粒而无凝聚物 阳性：出现粉红色凝集块
TRUST (toluide red unheated serum regain test)
材料：TRUST试剂盒、病人血清
反应卡
1
2
3
Positive Negative Experimental control control group