【CN109929876A】Vps28基因敲除小鼠动物模型的构建方法和应用【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910196543.8

(22)申请日 2019.03.15

(71)申请人 中国农业大学

地址 100193 北京市海淀区圆明园西路2号

(72)发明人 姜力　丁亚群　东琬婷　张勤　

(74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限

公司 11245

代理人 魏少伟

(51)Int.Cl.

C12N 15/85(2006.01)

C12N 15/90(2006.01)

A01K 67/027(2006.01)

(54)发明名称

Vps28基因敲除小鼠动物模型的构建方法和

应用

(57)摘要

本发明公开了Vps28基因敲除小鼠动物模型

的构建方法和应用。

本发明公开的Vps28基因敲除小鼠动物模型的构建方法包括向受体细胞中

导入sgRNA和Cas9蛋白质，实现VPS28基因的突

变，sgRNA为sgRNA1或/和sgRNA2，sgRNA1的靶序

列为序列表中序列1的第1313-1332位，sgRNA2的

靶序列为序列表中序列1的第3118-3137位。本发

明的Vps28基因突变的方法和动物模型，为研究

Vsp28基因在乳腺组织发育、泌乳以及其它生理

生化代谢过程中的作用提供了便捷、可靠、经济

的动物模型。

权利要求书2页 说明书8页序列表9页 附图3页CN 109929876 A 2019.06.25

C N 109929876

A

权　利　要　求　书1/2页CN 109929876 A

1.细胞中VPS28基因的定点突变方法，其特征在于：所述方法采用CRISPR/Cas9系统进行，所述CRISPR/Cas9系统包括靶向VPS28基因的sgRNA，所述sgRNA为sgRNA1或/和sgRNA2；

所述sgRNA1的靶序列为如下A1)、A2)或A3)：

A1)序列表中序列1的第1313-1332位；

A2)与A1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由A1)衍生的DNA序列；

A3)在严格条件下与A1)限定的DNA序列杂交的由A1)衍生的DNA序列；

所述sgRNA2的靶序列为如下B1)、B2)或B3)：

B1)序列表中序列1的第3118-3137位；

B2)与B1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由B1)衍生的DNA序列；

B3)在严格条件下与B1)限定的DNA序列杂交的由B1)衍生的DNA序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法包括向受体细胞中导入所述sgRNA和Cas9蛋白质，实现VPS28基因的突变。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述Cas9蛋白质为如下E1)、E2)或E3)：

E1)氨基酸序列是序列2的蛋白质；

E2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；

E3)在E1)或E2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述受体细胞为受精卵。

5.利用权利要求1-4中任一所述的方法制备得到的VPS28基因发生突变的细胞。

6.制备VPS28基因突变动物的方法，包括：利用权利要求1-4中任一所述的方法制备VPS28基因突变的动物细胞，利用所述VPS28基因突变的动物细胞制备VPS28基因突变动物。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于：所述动物为r1)或r2)：

r1)哺乳动物；

r2)小鼠。

8.权利要求1-3中任一所述sgRNA。

9.成套试剂，为成套试剂1、成套试剂2、成套试剂3或成套试剂4；

所述成套试剂1由权利要求1-3中任一所述sgRNA与所述Cas9蛋白质组成；

所述成套试剂2由与权利要求1-3中任一所述sgRNA相关的生物材料和与所述Cas9蛋白质相关的生物材料组成；

所述与权利要求1-3中任一所述sgRNA相关的生物材料为下述F1)至F7)中的任一种：F1)编码所述sgRNA的核酸分子；

F2)含有F1)所述核酸分子的表达盒；

F3)含有F1)所述核酸分子的重组载体、或含有F2)所述表达盒的重组载体；

F4)含有F1)所述核酸分子的重组微生物、或含有F2)所述表达盒的重组微生物、或含有F3)所述重组载体的重组微生物；

F5)含有F1)所述核酸分子的转基因动物细胞系、或含有F2)所述表达盒的转基因动物细胞系；

F6)含有F1)所述核酸分子的转基因动物组织、或含有F2)所述表达盒的转基因动物组织；

2