最新版安捷伦液相基本操作.pdf
Agilent1100series安捷伦高效液相色谱仪操作规程
Agilent1100series安捷伦⾼效液相⾊谱仪操作规程Agilent1100⾼效液相⾊谱仪操作规程1.仪器组成及开机1.1仪器组成：Agilent1100⾼效液相⾊谱系统主要由⼯作站、在线脱⽓机、柱温箱、输液泵、⾃动进样器、检测器等部件组成。
1.2开机：1.2.1接通电源，打开计算机及⼯作站其它各部件开关，约30秒钟后，各部件进⼊待机状态，指⽰灯为黄⾊或⽆⾊。
1.2.2打开HP ChemStations,进⼊Instrument 1 online状态，约30秒钟后，计算机进⼊⼯作站的操作页⾯。
该页⾯主要由以下⼏部分组成：最上⽅为命令栏，依次为File,Run Control,Instrument等；命令栏下⽅为快捷操作图标，由多个样品连续进⾏分析、单个样品进样分析、调⽤⽂件、保存⽂件等；左边为样品信息栏；中部为⼯作站各部件的⼯作流程⽰意图，依次为进样器→输液泵→柱温箱→检测器→数据处理→报告；中下部为动态监测信号；右下部为⾊谱⼯作参数：进样体积、流速、分析停⽌时间、流动相⽐例、柱温、检测波长等。
2.⾊谱条件的设定(⾊谱条件的设定可以通过下列⼏种⽅法实现2.1直接设定在操作页⾯的右下部⼀⾊谱⼯作参数中设定。
将⿏标移移⾄要设定的参数如进样体积、流速、分析停⽌时间、流动相⽐例、柱温、检测波长等，单击⼀下，即可显⽰该参数的设置页⾯，键⼊设定值后，单击“OK”，即完成。
2.2 调⽤已设置好的⽂件在命令栏“Method”下，选择“Load Method”,或直接单击快捷键操作的“Load Method”图标，选定⽂件名，单击“OK”，此时，⼯作站即调⽤所选⽤⽂件中设定的参数。
如欲进⾏修改，则可同2.1项下，在⾊谱⼯作参数中作修改；亦可在命令栏“Method”下，选择“Edit Entire Method”，在每个页⾯中键⼊设定值，单击“OK”。
即完成。
2.3 编辑新⽂件先在命令栏“Method”下，选择“New Method”, 之后再在命令栏“Method”下，选择“Edit Entire Method”，在每个页⾯中键⼊设定值，完成后，Save Method”, 先在命令栏“Method”下选择“Save Method”，给新⽂件命名，单击“OK”。
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程资料
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、开机（1）打开计算机，登陆windows操作系统。
（2）打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标，进入化学工作站，从视图菜单中选择“方法和运行控制”画面。
（3）进行仪器配置，点仪器-仪器配置-选择所需模块-自动配置-输入IP地址：192.168.254.11。
把各流动相放入相应的溶剂瓶中。
（4）编辑方法。
方法-新建方法-方法-编辑完整方法-编辑各项（四元泵、TCC、VWD、仪器曲线参数设定，仪器参数默认），完成后，文件→方法另存为→编辑名称，保存方法。
（5）排气。
旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”设置泵流速，排气可设置1.2ml/min，l流量梯度100，也可5ml/min，流量梯度10。
一般冲洗3-5min，注意倾斜储液瓶使过滤头处的气体进入管道才可使气体排出，观察管路中气体位置，以其排净为目的。
关泵，关闭排气阀（顺时针）。
（注意：先开排气阀，再开泵，先关泵，后关排气阀）。
（6）在让液体进入柱子之前应将甁填充设置为实际值，谨防空进。
将泵流速设置1ml/min,用过渡液即缓冲液冲洗色谱柱20—30分钟。
（7）换流动相，待柱前压力基本稳定后，打开检测器，视图，在线信号，选择信号，观察基线情况。
二、数据采集信息编辑及进样（1）编辑样品信息：点“单次样品”小瓶，或点击运行信息-单次进样，设定操作者姓名，样品数据文件名，进样量等。
（2）编辑好样品信息后方可进样。
三、数据处理（1）打开桌面“仪器1脱机”，单击“数据分析”进入数据分析画面。
（2）从“文件”菜单中选择调用信号，选择您的数据文件名，单击确定。
（3）谱图优化。
从“图形”菜单中选择“信号选项”从范围中选择“自动量程”及合适的显示时间，或选择“自定义量程”调整，反复进行，直到图比例合适为止。
（4）积分。
从“积分”中选择“自动积分”，若积分结果不理想，从菜单中选“积分事件”，更改数据为合适的“斜率灵敏度、峰宽、最小峰面积、最小峰高”，从“积分”中选择积分选项，则数据被积分，如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止。
安捷伦高效液相色谱仪的规范操作
安捷伦高效液相色谱仪的规范操作安捷伦高效液相色谱仪 (Agilent High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC) 是一种常用的色谱分析仪器，广泛应用于化学、生物、药学等领域中的分析和研究工作。
为了确保正确、可靠地操作 HPLC 仪器，以下是一些规范操作的步骤和注意事项。
1.仪器准备-开启仪器电源，并等待仪器自检完成。
-检查仪器的梯度系统、进样系统、柱温控制系统、检测系统等是否正常。
-检查注射器、柱、检测器等是否清洁干净，并按需更换柱筒。
2.试剂准备-准备所需的溶剂、标准品和样品，并确保其纯度和浓度符合实验要求。
-制备规范的稀释液或内标溶液，以便进行质量控制和校准。
3.方法设置-设置流速、梯度、柱温、检测器波长等实验参数。
-设定样品进样量、进样方式和柱温控制方式。
-根据实验要求选择合适的检测器（如紫外检测器、荧光检测器等）。
4.柱的装置和平衡-根据实验需求选取合适的柱，并将柱安装在柱底座上。
-将导线连接到柱温控制系统，并设置柱温。
-选择适当的流动相溶剂，用它们预平衡柱，以确保柱达到稳定状态。
5.校正与质控-使用标准品进行系统灵敏度和线性范围的校正。
-定期进行质控分析，以检验仪器的准确性和精确性。
-根据需要，进行合适的质量控制和校正操作。
6.样品进样-根据实验要求选择合适的进样方式（如自动进样器、手动进样器等）。
-通过进样器吸取样品，并确保进样量准确无误。
-进行一定的进样准备，如过滤、稀释等。
7.开始分析-确保所有仪器参数正确设置，样品进样准备完毕，并进行柱的平衡。
-点击“开始”按钮，启动分析程序。
-监测分离曲线或结果，确保分析结果的准确性与可靠性。
8.数据分析与存储-持续监测和记录实时分析结果。
-对结果进行后处理和数据分析，如绘制色谱图、峰面积计算等。
-存储数据，以备后续分析和查阅。
9.仪器维护与清洁-使用完毕后，关闭仪器并断开电源。
-清洗注射器和柱等关键部位，以防止残留的样品引起交叉污染。
Agilent 1100series安捷伦高效液相色谱仪操作规程
Agilent1100高效液相色谱仪操作规程1.仪器组成及开机1.1仪器组成：Agilent1100高效液相色谱系统主要由工作站、在线脱气机、柱温箱、输液泵、自动进样器、检测器等部件组成。
1.2开机：1.2.1接通电源，打开计算机及工作站其它各部件开关，约30秒钟后，各部件进入待机状态，指示灯为黄色或无色。
1.2.2打开HP ChemStations,进入Instrument 1 online状态，约30秒钟后，计算机进入工作站的操作页面。
该页面主要由以下几部分组成：最上方为命令栏，依次为File,Run Control,Instrument等；命令栏下方为快捷操作图标，由多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件、保存文件等；左边为样品信息栏；中部为工作站各部件的工作流程示意图，依次为进样器→输液泵→柱温箱→检测器→数据处理→报告；中下部为动态监测信号；右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。
2.色谱条件的设定(色谱条件的设定可以通过下列几种方法实现2.1直接设定在操作页面的右下部一色谱工作参数中设定。
将鼠标移移至要设定的参数如进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等，单击一下，即可显示该参数的设置页面，键入设定值后，单击“OK”，即完成。
2.2 调用已设置好的文件在命令栏“Method”下，选择“Load Method”,或直接单击快捷键操作的“Load Method”图标，选定文件名，单击“OK”，此时，工作站即调用所选用文件中设定的参数。
如欲进行修改，则可同2.1项下，在色谱工作参数中作修改；亦可在命令栏“Method”下，选择“Edit Entire Method”，在每个页面中键入设定值，单击“OK”。
即完成。
2.3 编辑新文件先在命令栏“Method”下，选择“New Method”, 之后再在命令栏“Method”下，选择“Edit Entire Method”，在每个页面中键入设定值，完成后，Save Method”, 先在命令栏“Method”下选择“Save Method”，给新文件命名，单击“OK”。
安捷伦1200标准操作规程
Agilent 1200液相色谱仪操作规程设备组成：G1311A（四元泵）、G1329A（标准型自动进样器）、G1316A（柱温箱）、 G1314B（VWD检测器）、G1315D（DAD检测器）。
基本操作步骤:(一)、开机：1、打开计算机，进入Windows XP画面。
（IP 地址由Bootp Service 程序写入）2、打开1200 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击“仪器 1 联机”图标，或者（点击屏幕左下角的“开始”，选择“程序”，选择“Agilent Chemstation”，选择“仪器 1 联机”）化学工作站自动与1200LC通讯，进入的工作站画面如下所示。
4、从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面, 点击“系统视图”，“样品视图”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、手动旋开冲洗阀。
7、点击“泵”图标，点击“设置泵”选项，进入泵编辑画面。
8、设流速：3-5ml/min，点击“确定”。
9、点击“泵” 图标，点击“控制”选项，选中“启动”，点击“确定” ，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
若使用缓冲盐，要加入泵头冲洗（seal-wash），点击“泵” 图标，点击“控制”选项，选择“用于泵密封垫清洗的泵”，开启清洗泵前要配制90%水+10%异丙醇，溶剂不能干涸。
10、点击“泵” 图标，点击“控制”选项，选中“关闭”，点击“确定”关泵，手动旋紧冲洗阀。
11、点击“泵”图标，点击“设置泵选项”，设流速：1.0ml/min。
12、点击泵下面的瓶图标，选择“溶剂瓶添充量”如下图所示（以四元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。
也可输入停泵的体积，点击“确定”。
（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法” 项，如下图所示选中除“数据分析 ”外的三项，点击“确定”，进入下一画面。
安捷伦液相操作规程
安捷伦液相操作规程安捷伦液相操作规程液相操作是化学实验室中常见的一种实验操作，适用于溶液的制备、分离和纯化等实验需求。
为了确保操作的安全性和实验结果的准确性，制定液相操作规程十分重要。
以下是针对安捷伦液相操作的规程，以保证实验操作的标准化和规范化。
1. 实验前准备：1.1. 准备所需试剂和试验仪器，确保实验所需材料的完整性和干净度。
1.2. 检查实验室仪器及设备的运行状态，确保其正常工作。
1.3. 根据实验需求，准备所需的溶剂和溶液，确保其质量和浓度的准确度。
2. 个人防护：2.1. 戴上实验室必备的个人防护装备，如实验手套、实验眼镜等。
2.2. 当液相操作涉及有毒或腐蚀性试剂时，应穿戴全身防护服，并配备呼吸器具。
3. 操作条件：3.1. 确保实验操作区域的整洁和干净，防止交叉污染。
3.2. 控制实验室的温度、湿度和通风等环境条件，以满足实验操作的要求。
4. 操作步骤：4.1. 按照实验步骤依次进行液相操作。
4.2. 操作前进行必要的实验器材和试剂的标定和校准，确保实验参数的准确性。
4.3. 使用专用的操作工具和仪器，避免手工直接接触试剂。
4.4. 操作过程中遵循安捷伦仪器的使用说明书，合理设置操作参数，确保实验结果的准确性。
4.5. 在液相操作过程中，注意保持实验器材和试剂的干净和无污染，防止交叉污染的发生。
5. 废物处理：5.1. 涉及有毒或腐蚀性试剂的实验废物应妥善处理，按照相关规定进行分类和处置。
5.2. 已使用的实验器材和试剂应及时清洗和归还到指定位置。
6. 实验记录：6.1. 在液相操作过程中，准确记录实验操作的必要参数和结果。
6.2. 对于实验中的异常情况或问题，及时记录并进行分析。
6.3. 实验结束后整理实验记录，确保其完整性和准确性。
7. 维护与校准：7.1. 定期对实验所需仪器和设备进行维护和校准，保证其正常运行。
7.2. 对实验操作过程中的操作工具和试剂进行定期检查和替换，确保其正常使用。
安捷伦1260液相操作规程
安捷伦1260高效液相操作规程及注意事项一开机1)打开主机各模块电源(从下至上),待各模块完成自检后,再双击桌面“仪器2联机”图标,进入化学工作站,2)把过滤白头放入流动相溶剂瓶中。
3)旋开排气阀(逆时针),右单击“四元泵”图标出现快捷键,点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量从1mL/min梯度上升至5mL/min,排出管路中的气体2—3分钟,直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力(若大于10bar,则应更换排气阀内过滤白头),关闭排气阀。
4)重复上述步骤,依此切换到B、C、D溶剂分别排气。
5)将泵的流量设到实验用流速,按照色谱柱使用说明用相应溶液冲洗色谱柱20—30分钟。
6)点击四元泵下面的瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积,点击“确定”。
7)把缓冲液换成流动相,待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯,观察基线情况,进入平衡系统。
二数据采集方法编辑若已创建方法,可在“方法”菜单选择“调用方法”,选择相应的方法。
若无,需按下面步骤建立:(1)从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”,钩选“方法信息”、“仪器/采集”、“运行时选项表”三项,点击确定;(2)出现“方法信息”对话框,如有需要可将方法的描述信息输入,也可选择不输入任何信息,点击确定;(3)泵参数设定:在“流量”处输入流量,如1ml/min,在“溶剂B”处输入80.0,(A=100-B-C-D) ,也可“插入”一行“时间表”,编辑梯度。
在“压力限”处输入柱子的最大耐高压,如300bar,以保护柱子。
点击“确定”进入下一参数设定。
(4)柱温箱参数设定:手动输入规定的温度即可。
(5)紫外检测器(VWD)参数设定:在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式箭头,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)。
在“时间表”中可以“插入”一行,输入随时间切换的波长,如1min,波长=300nm。
安捷伦1260高效液相操作规程
安捷伦液相 1260 高效液相色谱操作规程1.前期工作查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。
如果还不清晰样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。
流动相选择注意事项：① 避免使用高粘度的溶剂作为流动相；② 所选用的流动相一定要与样品相溶；③ 各流动相之间可以很好的相溶；固定相选择注意事项：a. 正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或者其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对照固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
b. 反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
2.准备工作① 用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过0.15µm 过滤器过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态；② 流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4µm 过滤器过滤，再用超声波清洗仪脱气处理20-30min；③ 在连接柱子和色谱仪之前，阀件或者管路一定要清洗干净，（一般用异丙醇将管路清洗）3.仪器操作（一）将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应A 泵，该瓶中只能加双蒸水或者娃哈哈纯净水；B、C、D 泵根据需要添加。
安捷伦液相操作规程
安捷伦液相操作规程一开机1)打开计算机，登陆windows操作系统。
2)打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标,进入化学工作站，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。
3)把各流动相放入溶剂瓶中。
4)旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量设到5ml/min，溶剂A设到100%，打开泵，排出管线中的气体2—3分钟，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力（若大于10bar，则应更换排气阀内过滤白头）。
5)依此切换到B、C、D溶剂分别排气。
6)将泵的流量设到0.5ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）。
7)再将泵的流量设到0.8ml/min，2分钟后将泵的流量设到1ml/min，冲洗色谱柱20—30分钟。
8)把缓冲液换成流动相，待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯，观察基线情况。
二数据采集方法编辑1)编辑样品信息：由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据文件名等。
2)编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项.选中项单击“确定”入下一画面“方法注释”，编辑好单击“确定”进入下一画面“选择进样源”，选中Als单击“确定”入下一画面“设置方法”进行参数设定。
3)四元泵参数设定：在“流速”处输入流量,如1ml/min,在“溶剂”处选中B输入80%(A=100-B-C-D)，在右面注释栏中标明各溶剂的名称；设置“停止时间”和“后运行时间”，在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子如：250bar，在“时间表”添加编辑梯度。
4)进样器参数设定：在进样模式中输入进样量xxul。
“标准进针”——只能输入进样体积此方式无洗针功能。
“针清洗后进样”——可以输入进样体积和洗瓶位置为xx，此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。
5)进样器进样程序参数设定：选中使用进样程序，在“函数”中添加相应函数即可按程序进样。
Agilent 1260 Infinity 高效液相仪基本操作课件
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15
（四）、进样器
（1）标准自动进样器G1319B
（2）高性能自动进样器G1367E
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16
自动进样器进样过程（1）
进样前，六通阀切换到旁路位置，来自泵的溶剂进入端口1、6直接
流到色谱柱。
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自动进样器进样过程（2）
进样开始后，取样针抬起，把样品瓶抓至针座上，取样针扎入样品瓶，
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7
（三）、泵
常用的分析泵有单元泵、 二元泵和四元泵。其中， B型：600bar C型：400bar
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8
四元泵前视图
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9
四元泵的工作原理示意图
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10
二元泵前视图
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11
二元泵工作原理示意图
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泵头维护注意事项
1、泵头密封垫需要成对更换，反相体系和正相体系 所使 用的密封垫不同。
Agilent1260高效液相色谱仪 硬件简介
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1
目录
一、组成部分 二、工作原理 三、安装与维护
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2
一、组成部分
（一）、溶剂柜 （二）、脱气机 （三）、泵 （四）、进样器 （五）、柱温箱 （六）、检测器
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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3
仪器的安装
连接线： ①电源线 ②LAN线 ③CAN线 ④遥控线
３、示差折光检测器（RID）
４、荧光检测器（FLD）
５、蒸发光散射检测器（ELSD）
其中，选择性检测器：VWD、 DAD和 RID；
通用型检测器： FLD学、习交E流LPSPTD。
Agilent 1260 Infinity 高效液相仪基本操作
4、氘是一种衰变的元素，不建议提前购买氘灯作为储备消
耗品。
参考资料
官网：安捷伦科技大学-关于Agilent-售后服务在中国-产 品技术支持。
/article/2/1524.html
（一）、溶剂柜
问题：液相储液瓶中滤头的作用？注意事项？
①作用：过滤流动相中的颗粒物、微生物等杂质。 ②注意事项： a、玻璃滤头不能超声；不锈钢滤头可用异丙醇超声。 b、滤头应定期（每三个月）更换或清洗。
（二）、脱气机
１、分类：有内置和外置两种类型。 ２、工作原理：见下图。
（三）、泵
常用的分析泵有单元泵、 二元泵和四元泵。其中， B型：600bar
C型：400bar
四元泵前视图
四元泵的工作原理示意图
二元泵前视图
二元泵工作原理示意图
泵头维护注意事项
1、泵头密封垫需要成对更换，反相体系和正相体系
用的密封垫不同。 实验室中应至少备有一对泵头密封垫。 2、泵头密封垫可用10%异丙醇水溶液定期清洗，防止无机盐 溶液析出的盐过多，造成过早过快磨损。 3 、活塞杆采用人造单晶蓝宝石材料，不能超声清洗,用乙 醇或温水或牙膏洗，软布擦。
所使
冲洗中的过滤芯
1、打开冲洗阀，以水为溶剂，流速5ml/min,系统压力大于
10bar应该更换冲洗阀中的过滤芯。
2、冲洗阀中PTFE（聚四氟乙烯）过滤芯的作用：过滤流动 相中密封垫落下的杂质以及密封垫磨损下来的碎屑。
（四）、进样器
1、分类：有手动和自动进样器两种。其中，自动进样器 又包括： （1）标准自动进样器
（2）高性能自动进样器
（3）双通道自动进样器 （4）微量多孔板自动进样器 （5）制备型自动进样器 2、工作原理：
安捷伦1260液相色谱仪操作流程
安捷伦1260液相色谱仪操作流程及注意事项1、配制流动相，水相置于棕色玻璃瓶中，有机相置于相应无色玻璃瓶中。
水相和有机相必须过滤，滤膜选用0.45有机系滤膜（尼龙）。
注意：过夜的流动相必须重新过滤。
2、流动相过滤后，置超声仪中超声20min。
3、将已超声的流动相轻轻换上，动作不要太剧烈，会产生气泡，注意不要把有机相和水相换反了（A是有机相，B是水相）。
4、将色谱柱接上，注意：流动相的流动方向必须和色谱柱上的箭头方向一致。
5、打开计算机电源、显示器开关，并输入密码。
6、依次从上往下打开液相色谱仪上的所有开关。
7、打开液相色谱在线工作站（online），输入密码。
8、打开的液相工作站上分为四个小部分，依次为进样器、泵、柱温箱及检测器。
在第二个部分设置流动相的体积及溶剂瓶的总体积。
9、脱气：旋开purge阀开关，右击泵部分，选择“method”，选择B相100%，流速1ml/min，选择确定；右击泵部分，选择“control”，选择pump “on”，10秒后，调节流速为3ml/min，10秒后，调节流速5ml/min，开始水相脱气3min，水相脱气结束后，将流速按照5ml/min-3ml/min-1ml/min的流程往下调。
然后开始有机相脱气，步骤同上，注意流速不可一下子从1ml/min调到5ml/min，需慢慢调节。
流动相脱气结束后，旋紧purge阀开关。
10、建立样品的色谱方法：设置进样体积，选择洗针进样，注明洗针位置；设置流动相比例、流速及梯度洗脱条件，序列进样时设置样品运行时间和后运行时间；打开柱温箱，设置柱温；打开紫外检测灯，设置检测波长。
全部设置好后，保存方法，不要覆盖别人的方法。
11、谱图保存路径的设置：View—preferences—data path（第二个选项）—remove旧的文件夹，add自己的文件夹。
再打开Sequence—Sequence parameter—选择Data path为自己的文件夹即可。
安捷伦操作
安捷伦操作1 开机1.1 打开电脑1.2 打开液相色谱各个模块的电源1.3 双击桌面“LC1260(Online)”，进入联机界面1.4 排气：1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈）1.4.2 右键单击“Pump”图标区域，选择“Method”选项，进入泵编辑画面，设流速：5ml/min，点击“确定”；1.4.3 右键单击“Pump” 图标区域，点击“Control”选项，选中“ON”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止（一般为5分钟），切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止；1.4.4 右键单击“Pump” 图标，点击“Method”选项，设流速：0ml/min，手动旋紧冲洗阀；1.4.5 右键单击“Pump”图标，点击“Method”选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，设流速：1.0ml/min；（不一定是1）1.4.6 同理右键单击“Column Comp”，“DAD”图标，点击“Method”选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制” 选项，“ON”打开柱温箱和检测器。
2 编辑方法2.1 点击“Method”——“Edit EntireMethod”开始编辑完整方法；2.2 选中除“Data Analysis ”外的三项，进入下一选项卡，选择“Als”（自动进样），点击“OK”，进入下一选项；2.3 选择“Method”菜单下“Method Information”选项，在“Method Comments”中加入方法的信息（如：This is for test!），选择“OK”，进入下一选项；2.4 泵参数设定：右键单击“Pump”图标，点击“Method…”选项，设置“Flow”：如1.0ml/min；“Stop Time”：如10 min （该停止时间仅为做一个样品需要的时间），按照要求选择合适比例的流动相配比，选择“OK”，进入下一选项；2.5 自动进样器参数设定：右键单击“Sampler”图标，点击“Method”选项，选择“Injection volume”，输入进样体积，选择“OK”，进入下一选项；2.6 柱温箱参数设定：右键单击“Column Comp”，点击“Method”选项，设置“Left”温度（可设置温度范围：低于室温10℃-80℃），一般“Left”和“Right”温度一致，选择“Combined”绑定即可，“Stop Time”选择“As Pump /Injector”，选择“OK”，进入下一选项；2.7 UV检测器参数设定: 右击“DAD” ，点击“Method…”选项，下方的空白处输入所需的检测波长（可根据需要选择多个波长，最多可选8个波长）；“Stop Time”选择“As Pump /Injector”；“Spectrum”——“Store”选项下，根据需要选择“None”或“All（全波长扫描）”等选项，选择“OK”，进入下一选项；2.8 编辑方法完毕，从“Method”菜单中，选中“Save Method As”，输入一方法名，选择“OK”，保存方法成功。
安捷伦液相色谱Agilent-HPLC操作规程
型号：Agilent 1200 使用日期：产地：美国责任人：Agilent 1200 高效液相色谱仪操作步骤：1.开机开机前需更换已过膜并超声脱气好的流动相，依次打开电脑及高效液相色谱仪各电源开关（从上往下），待仪器自检完毕后，打开purge阀，开泵，排空管路气泡，关闭purge阀，双击online图标，进入色谱工作站。
2.方法编辑从命令栏“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，或者从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，设置方法信息、仪器参数（包括泵、检测器）、数据采集参数等（详见《高效液相色谱仪（Agile 1200型）操作规程》），保存方法。
3.样品运行调用已编辑好的方法，等待仪器稳定。
选择样品运行模式“single”或“sequence”，编辑样品信息，如：存贮路径（path-Subdirectory）、样品名（Sample Name）、进样瓶号（Vial）、进样体积等，待online界面左上角红色的“not ready”变为绿色“ready”，且压力平稳后，即可进行样品分析。
单击START按钮，运行样品。
进样结束后，关闭检测器并按要求冲洗色谱柱。
4.数据分析数据分析在offline工作站中进行（详见《高效液相色谱仪（Agile 1200型）操作规程》）。
5.关机色谱柱冲洗结束后，在online界面关闭泵及柱温箱。
退出化学工作站及其它窗口，关闭计算机，关闭HPLC系统各电源开关（从下往上）。
按有关规定填写仪器使用记录。
注意事项：1.流动相使用前必须过滤膜，有机相必须为色谱纯，过0.45微米的有机滤膜；水相必须用Milli-Q水，过0.22微米的水相滤膜，且不能使用超过2天，以防止长菌或者藻类。
2.更换流动相时，若发现管路中有气泡，应彻底排除气泡。
3.在使用过程中，经常记录压力情况，若发现压力异常，应及时排查问题所在。
4.检测完毕后，要及时关闭DAD的灯，以保持灯的寿命。
Agilent1200液相基本操作步骤
Agilent 1200液相基本操作步骤1. 目的：明确安捷伦高效液相色谱仪的规范操作，确保数据的准确性。
2. 范围：适用于Agilent 1200高效液相色谱仪。
3. 职责：检验人员对此负责。
4.操作规程：4.1 系统组成本系统由1个溶剂四元输送泵（分A、B、C、D泵）、自动进样阀、柱温箱、检测器、化学工作站和电脑等组成。
4.2 准备4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气10-20min。
4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）。
4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。
4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常4.1 将待测样品按要求前处理，准备HPLC 所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等。
4.3开机：4.3.1 打开计算机,进入中文Windows XP画面。
4.3.2 打开1200 LC 各模块电源。
4.3.3 待各模块自检完成后，双击[联机]图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入的工作站画面如下所示。
4.3.4 从[视图]菜单中选择[方法和运行控制]画面, 点击[视图]菜单中的[显示顶部工具栏]，[ 显示状态工具栏]，[系统视图],[样品视图]，使其命令前有[√]标志，来调用所需的界面。
4.3.5 把流动相放入溶剂瓶中。
4.3.6 打开冲洗阀。
4.3.7 点击[泵]图标，点击[设置泵…]选项，进入泵编辑画面。
4.3.8 设流速：5ml/min，点击[确定]。
4.3.9 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[启动]，点击[确定] ，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
4.3.10 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[关闭]，点击[确定]关泵，关闭冲洗阀。
安捷伦高效液相操作规程
安捷伦1260高效液相操作规程一开机1)打开计算机，登陆windows操作系统。
2)打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器2联机”图标,进入化学工作站，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。
3)把各流动相放入溶剂瓶中。
4)旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量设到3ml/min，溶剂A设到100%，打开泵，排出管线中的气体2—3分钟，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力（若大于10bar，则应更换排气阀内过滤白头）5)依此切换到B、C、D溶剂分别排气。
6)将泵的流量设到0.8ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）7)再将泵的流量设到0.8ml/min，2分钟后将泵的流量设到1.0ml/min，冲洗色谱柱20—30分钟。
8)把缓冲液换成流动相，待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯，观察基线情况。
二数据采集方法编辑1)编辑样品信息：由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据文件名等。
2)编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项.选中项单击“确定”入下一画面“方法注释”，编辑好单击“确定”进入下一画面“选择进样源”，选中Als单击“确定”入下一画面“设置方法”进行参数设定。
3)四元泵参数设定：在“流速”处输入流量，如1ml/min，在“溶剂”处选中B 输入18%（A=100-B-C-D），在右面注释栏中标明和溶剂的名称;设置“停止时间”和“后运行时间”，在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子如：400bar,在”时间表“添加编辑梯度。
4)进样器参数设定：在进样模式中输入进样量xxul。
“标准进针”——只能输入进样体积此方式无洗针功能。
“针清洗后进样”——可以输入进样体积和洗瓶位置为XX，此方式针从样品瓶抽完样品后在洗瓶中洗针。
安捷伦高效液相色谱仪操作说明
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载安捷伦高效液相色谱仪操作说明地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容安捷伦高效液相色谱仪操作说明一、校枪及样品处理1. 校枪仪器：两个小烧杯、分析天平、移液枪1000μL、100μL步骤：打开分析天平预热，一只烧杯放到称量盘上调零，一只装入纯水。
将移液枪1000μL、100μL调至950μL、50μL，分别吸取纯水称质量，如偏大或偏小，调节移液枪直至准确到0.001g。
（如枪使用过久或气密性不好，可以准备一个小烧杯装入纯水，每次先轻轻沾湿枪口，甩掉水或在用卫生纸吸取口上的水，再插上枪头使用。
）注意慢吸慢放，不要挂珠。
2. 样品处理：用1.5mL离心管取0.5mL发酵液，取出样品后，首现在离心机上离心（13000rap/min 3min）。
然后将样品稀释20倍，取950μL纯水、50μL发酵液于离心管中。
混匀后在离心机上离心（13000rap/min 3min）。
准备自动进样瓶（瓶中放上内衬管），取200μL待测液盖紧盖子。
按顺序放到自动进样盘中。
二、开机1、仪器各组件将在线脱气器、泵：四元、进样器：自动进样器（六通阀）、柱温箱、检测器：示差折光检测器开关打开。
打开计算机,进入Windows XP 画面,并运行CAC Server程序，打开色谱仪各组件电源，待显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online ，图标打开工作站。
化学工作站自动与1200LC通讯。
流动相:将流动相（一般不主张使用偏酸、偏碱的流动相）放入溶剂瓶中，打开冲洗阀，设流速为2ml/min，单击确定，再依次单击泵→控制，选中启动，单击确定，则系统开始冲洗，至管路无气泡为止，切换管路反复操作至所需管路均无气泡。
安捷伦液相冷启动步骤
安捷伦液相冷启动步骤：
安捷伦液相色谱冷启动步骤如下：
1.打开电脑，进入操作系统。
2.打开液相色谱仪的电源，等待仪器自检完成。
3.打开相应的色谱工作站软件，建立新实验方法，输入实验参数，如流速、波长等。
4.在线清洗色谱柱，以排除柱内的残留物和气泡。
可以使用有机相或水相清洗，具体根据需要选择。
5.打开泵，设定合适的流速，开始泵液。
6.等待基线稳定后，开始进样。
7.在色谱图上观察样品分离情况，对谱图进行相应的处理和解析。
8.实验结束后，先停止泵液，然后在线清洗色谱柱。
9.关闭液相色谱仪电源，退出色谱工作站软件。
10.清理实验台面，整理实验器材和试剂。