8种大白菜过氧化物酶同工酶分析
几种植物中的过氧化物酶同工酶分析1)
将胶浸入染 色液 中 ５ ０ 神，取 出置 一１ 分
于 永 中＾ 沈 ， 止染 色。 ｀ ＇ 停
将胶 置于醋酸 缓冲液中沁 ２ 分钟， 。 再浸 入染色液中，２℃ 保佩染色 ２ ６ ０ ５ ０分钟 － 后， 取出 ， 水漂洗。
１ 酷酸联苯 ） 胺炸液：２ 克联茉胺溶于 １ 毫升醋酸中， ７ 毫升水。 ８ 加 ２
电泳在冰箱或低于 １ ℃ 的 室 温 下 进 行。 ５
力水至 １０ ｉ 」 ０ｎ１ １ ． 斗 ％ Ｆ 过硫酸 按（ ． 用前配划 、Ｆ Ｔｒ－ ． ｉ 泞檬酸缓冲 液忿 ｓ
１． 呢 ， ４ Ｉｒｓ ５． ８ ＋ 柠 檬 酸 ｉ １ ５
１０ ； ．ｇ
加水至 １ ０ １Ｐ Ｒ９ ０ ｍ， ． ０ Ｈ
＇ｒｓ ．ｑ ｒ ３ ０ ； ｉ ０
Ｔｒｓ ２ ； ｉ６ ｇ ．
甘氨ｌ １・ ； ， 斗斗 ｎ ： ９
甘氨酸 ２０； ． ｋ
至凝胶下端 ０ －１厘米处停止电泳。 电泳 时 ． ５
间约 ９－ １０分钟。 ０ ０ 过氧化物Ｒ 同工醉 的染色鉴定方 法 很 多，
染 色 方 法 染 色
加水至 １０ｒ ，爪 ｝３ 加水至 １０ｍｌ Ｈ ．； ０ ０ ｌ １ ． ： ｎ ００ ， ｈ７ ｐ 使用时杯释 １ 信－ ０ 随用时稀释 ５倍
个过氧化物酶同工酶相对活性的维生素 Ｃ 一联 苯胺染色法阁。 近些年来又较多地采用了丁子
香酚 （ｕｅ ｌ Ｅｇ ｏ ｎ ）一类夭然物作底物的新染
色法［ ９ １ ｃ 近年来， 由于同工酶测定、 分析技术在遗传
１ ）本工 作曾得到龚葵 同志的指导， 特致谢意 ， ２ 黄寿松：西北植物研究所进修人员。 ）
离心（５０．． １ 分钟， ３０ ：ｐｍ）５ ． 取上清液， 混人等
植物过氧化物酶实验报告
一、实验目的1. 了解过氧化物酶在植物生理过程中的作用。
2. 掌握愈创木酚法测定过氧化物酶活性的原理和方法。
3. 通过实验，提高学生运用实验方法分析植物生理问题的能力。
二、实验原理过氧化物酶（POD）是一种广泛存在于植物体内的酶，催化H2O2分解产生O2和H2O。
愈创木酚法是一种测定POD活性的常用方法，其原理是POD催化H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物，该产物在470 nm处有最大光吸收值。
通过测定该波长下的吸光度变化，可以计算出POD的活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：马铃薯块茎2. 仪器：分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸管3. 试剂：100 mmol/L的磷酸缓冲液（pH 6.0）、愈创木酚溶液、30% H2O2、20 mmol/L KH2PO4四、实验步骤1. 制备酶提取液：取马铃薯块茎约0.5 g，加入5 mL磷酸缓冲液（pH 6.0），研磨均匀，过滤，收集滤液，4℃下保存备用。
2. 测定酶活性：a. 设置酶活性测定体系：取2 mL酶提取液，加入1 mL 30% H2O2和1 mL愈创木酚溶液，混匀，立即放入分光光度计中，于470 nm处测定吸光度。
b. 设置对照体系：取2 mL酶提取液，加入1 mL磷酸缓冲液（pH 6.0）和1 mL愈创木酚溶液，混匀，立即放入分光光度计中，于470 nm处测定吸光度。
3. 计算酶活性：a. 酶活性 = [(A1 - A2) / (t2 - t1)] × 0.01 × (1.977 - 0.874) / 10 × 0.01 × 250.027575b. 其中，A1为酶活性测定体系的吸光度，A2为对照体系的吸光度，t1为酶活性测定体系测定时间，t2为对照体系测定时间。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过实验，得到马铃薯块茎中POD的活性为0.027575 U/g。
2. 结果分析：a. 从实验结果可以看出，马铃薯块茎中含有一定量的POD，且活性较高。
实验9-10 植物过氧化物酶同工酶的测定(凝胶圆盘电泳)
（五）记录并计算： 记录并计算： 观察、记录酶谱， 观察、记录酶谱，并 计算各同工酶的相对 迁移率。 迁移率。
【要点提示】 要点提示】
1. 分离胶聚合时间应控制在 ～60min，聚合过 分离胶聚合时间应控制在30～ ， 快使凝胶太脆易断裂，主要是AP或 快使凝胶太脆易断裂，主要是 或TEMED过 过 量引起；聚合过慢甚至不聚合，可能是AP或 量引起；聚合过慢甚至不聚合，可能是 或 TEMED用量不足或已失效。 用量不足或已失效。 用量不足或已失效 2. 电泳时如果电泳槽盖上有冷凝水，则表示电压 电泳时如果电泳槽盖上有冷凝水， 或电流过大，体系发热，可引起蛋白质变性、 或电流过大，体系发热，可引起蛋白质变性、 凝胶底部断裂等，应注意调整。 凝胶底部断裂等，应注意调整。特别是进入分 离胶后应通过控制电压，调节电流不超过5mA/ 离胶后应通过控制电压，调节电流不超过 管。
（四）染色： 染色： 临用时配制染色液：（ ml ） 临用时配制染色液：（10 ：（ 联苯胺母液 H2O 3% H2O2 0.5 ml 9.3 ml 0.2 ml
将染液倒入盛有凝胶条的试管中（ 将染液倒入盛有凝胶条的试管中（没过 胶条）。约10min后用自来水冲洗。 胶条）。约 后用自来水冲洗。 ）。 后用自来水冲洗
【实验步骤】 实验步骤】
（一）过氧化物酶的提取：取8~12粒发芽 过氧化物酶的提取： 粒发芽 的麦粒，加入1ml H2O 或0.5mol/L Tris的麦粒，加入 HCl缓冲液（pH 6.8），冰浴上研成匀浆。 缓冲液（ ），冰浴上研成匀浆。 缓冲液 ），冰浴上研成匀浆 转入离心管，再用2ml上述溶液冲洗研钵 转入离心管，再用 上述溶液冲洗研钵 壁并全部转入离心管，4000r/min离心 壁并全部转入离心管， 离心10 离心 min，上清液供电泳分析用。 ，上清液供电泳分析用。
生化实验四--果蔬中过氧化物酶分析
五,操作
1,贮液配制(已完成) ,贮液配制(已完成) 2,安装电泳槽(安装,封底) ,安装电泳槽(安装,封底)
3,制胶(分离胶,光聚合,浓缩胶) ,制胶(分离胶,光聚合,浓缩胶) 拔出梳子,倒入电极缓冲液,备用. 拔出梳子,倒入电极缓冲液,备用. 4,过氧化物酶的提取 , 按下列比例称取果蔬: 按下列比例称取果蔬: 冬 枣 , 柚 子 , 梨 : 1:2 ; 萝 卜 , 盘 菜 : 1:10 ( W:V) , 剪碎 , 放入研钵中 , 加适量石英砂及 ) 剪碎, 放入研钵中, 样品提取液于冰浴上研磨成匀浆, 置于离心管中, 样品提取液于冰浴上研磨成匀浆 , 置于离心管中 , 研钵用少量提取液清洗,洗液并入离心管,以 14000r/min的转速离心 / 的转速离心15min,取上清液贮存于低 的转速离心 , 温冰箱备用. 温冰箱备用.
三,实验步骤
1,取上述样品提取液 , 取上述样品提取液2.5mL,定容至 刻度, , 定容至50mL刻度, 备 刻度 用(仅指萝卜与盘菜,冬枣,柚子与梨不稀释). 仅指萝卜与盘菜,冬枣,柚子与梨不稀释) 2, 取光径 , 取光径1cm比色皿 只 , 于 1只中加入反应混合液 比色皿2只 比色皿 只中加入反应混合液 3mL和磷酸缓冲液 和磷酸缓冲液1mL, 作为对照 , 另 1只中加入反 和磷酸缓冲液 , 作为对照, 只中加入反 应混合液3mL和上述酶液 和上述酶液1mL(如酶活性过高可稀释 应混合液 和上述酶液 ( 立即开启秒表记录时间, 之),立即开启秒表记录时间,于分光光度计上测量 波长470nm下吸光度值 , 每隔 下吸光度值, 每隔1min读数一次 ( 连读 读数一次( 波长 下吸光度值 读数一次 5min,取平均值). ,取平均值)
四,试剂与材料
A(分离胶缓冲液) 1mol/L HCL (分离胶缓冲液) / /100mL Tris TEMED B(浓缩胶缓冲液) 1mol/L HCL (浓缩胶缓冲液) / /100mL C(分离胶贮液) (分离胶贮液) 贮液 /100mL D(浓缩胶贮液) (浓缩胶贮液) 贮液 /100mL Tris TEMED 丙烯酰胺 丙烯酰胺 48mL 36g 24L 48mL 5.9g 48L 30g pH 8.9 pH 6.7 pH 8.9
贮藏温度对白菜叶片SOD、POD活性及MDA含量的影响
贮藏温度对白菜叶片SOD、POD活性及MDA含量的影响张杰;孙叶烁;薛一花;陈霖;张鲁刚;方智远【摘要】[目的]研究白菜叶片在不同贮藏温度下超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性及丙二醛(MDA)含量的变化特点.[方法]以白菜品种紫衣、百慕田和947-5s为供试材料,将白菜叶片在不同温度下贮藏不同时间(4℃下贮藏0,3,5,8和10 d;-40,-80℃下贮藏0,12,24,48和72 d),测定SOD、POD活性及MDA含量.[结果]不同品种叶片的SOD活性明显不同.4℃贮藏条件下,紫衣、百慕田和947-5s SOD活性表现相同的变化趋势,即冷藏0～5 d和8～10 d活性变化不大,冷藏5～8 d SOD活性明显增大,8d时SOD活性较5d时分别提高了62.28％,74.83％和61.96％;-40,-80℃两种冻藏温度下,SOD活性均表现为升高-降低-上升的变化趋势.不同品种叶片的POD活性明显不同.4℃贮藏条件下,紫衣、百慕田和947-5s POD活性都表现先下降再上升趋势,在冷藏第3天降到最低值,较0d分别下降了42.64％,18.16％和11.4％,3～10 d POD活性逐渐上升,10d时的POD活性分别为0d的1.10,1.49和2.14倍;在两种冻藏温度下3个品种POD活性都呈现下降-上升-下降趋势,且品种间POD活性变化较大.3个白菜品种鲜叶片的MDA含量明显不同.4℃贮藏条件下,947-5s和百慕田MDA含量呈逐渐升高趋势,紫衣则为逐渐降低趋势.在-40,-80℃条件下,紫衣MDA含量都呈现下降-上升-下降-上升的波浪式趋势;-40℃条件下947-5s和百慕田MDA含量呈现上升-下降-上升相同趋势;-80℃条件下947-5s MDA含量呈现升高-降低-上升-降低趋势,而百慕田MDA含量无明显变化.[结论]3个白菜品种鲜叶片SOD、POD活性和MDA含量各不相同.3个白菜品种叶片只有SOD的活性在4℃冷藏0～5 d时有平稳期,而POD活性及MDA含量在冷、冻藏条件下都会随着时间延长而变化.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(047)010【总页数】7页(P113-119)【关键词】白菜贮藏;超氧化物歧化酶;过氧化物酶;丙二醛【作者】张杰;孙叶烁;薛一花;陈霖;张鲁刚;方智远【作者单位】西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100;中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京100000【正文语种】中文【中图分类】S634.09+3大白菜(Brassica campestris syn.rapa L.ssp.pekinensis)属于十字花科芸薹属蔬菜，原产中国，又称“结球白菜”、“包心白菜”、“黄芽白”、“胶菜”等，栽培历史非常悠久，品种资源十分丰富，是目前我国栽培面积最大的蔬菜作物之一[1-2]。
8种大白菜过氧化物酶同工酶分析
８种大白菜过氧化物酶同工酶分析摘要利用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对8个大白菜品种的过氧化物酶（POD）同工酶进行分析。
结果表明，8个品种的POD同工酶酶谱在酶带数、迁移率、酶量（酶带宽窄）及酶活性（酶带深浅）等方面均存在相似性，但也有一定的差异。
依酶谱带特征初步将8个品种进行分类，并对其亲缘关系进行了分析。
关键词大白菜；过氧化物酶同工酶；谱带；亲缘关系同工酶广泛存在于生物界中，它表现出明显的种属、组织和发育阶段的特异性，既是生理指标，又是可靠的遗传标志[1]。
过氧化物酶同工酶在高等植物中广泛而大量地存在，具有高度多型性、器官组织特异性和相对稳定性，即同一器官的同一发育时期，POD同工酶酶谱和活性强弱是稳定的，能反映植物的遗传特性[2]。
因而同工酶分析技术被广泛地运用于植物的分类鉴定、亲缘关系及矮化砧木的预选、抗寒性和抗病性鉴定等研究领域。
笔者采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，对潍坊地区普遍栽种的8个品种的大白菜过氧化物酶同工酶进行分析研究，以期在测定同工酶谱带的基础上，探讨以同工酶谱带特征作为大白菜品种鉴定的依据，进一步测定大白菜品种间的亲缘关系。
1 材料与方法1.1 试验材料试验材料购于潍坊市农科院蔬菜研究所，共8个品种，分别为：潍白秋冠、潍白-78、潍白-68、潍白ER-60、潍白-45、潍白四号、潍白二号及潍白一号。
1.2 试验方法1.2.1 酶液提取。
取8个品种大白菜的种子放入培养皿中，加水在培养箱中（15～25℃）黑暗条件下培养4d。
分别取叶片（除去叶脉）0.5g，洗净用滤纸吸干水分，剪碎置于预冷的研钵中，加入酶提取液（由蔗糖10mL、电极缓冲液2mL、无离子水8mL组成）1mL，研磨成匀浆，移入离心管中，8 000rpm离心10min，取上清液备用。
1.2.2 电泳。
聚丙烯酰胺凝胶电泳参照张卫国（2006）等的方法[2-6]，略有改进。
染色参照杨太兴（1991）、孟秋峰（2006）方法[7，8]，采用醋酸—联苯胺法，略有改进。
大白菜过氧化物酶的分离及某些性质的研究
大白菜过氧化物酶的分离及某些性质的研究1引言过氧化物酶是一类解剖水解物质的酶,它们也是保护植物防御物质的重要组成部分。
大白菜过氧化物酶是一种植物保护酶,在大白菜中大量存在，具有其独特的生物学性质和功能特征，为大白菜特有的有益物质的生物降解提供了良好的前景。
所以，对大白菜过氧化物酶的分离及某些性质的研究具有重要的理论意义和应用价值。
2研究内容采用技术分析大白菜过氧化物酶的性质，以弄清其特性的原理，为分离及鉴定大白菜过氧化物酶的组成物及活力做准备，搞清各型及酶活力对不同环境和条件的适应性等。
在大白菜中对过氧化物酶的抽提研究主要采用分子筛选方法，用低温反应进行分离，结合抗原的存在，利用免管抗体的特性，有效地从大白菜中分离出java组成的过氧化物酶结合物。
同时，为了更加全面地揭示过氧化物酶的作用机理和功能，对大白菜过氧化物酶的调控特性、底物特性、pH特性等特性进行全面的分析比较，从而进一步深入了解过氧化物酶的生物学特性。
3技术手段研究过氧化物酶的相关性质，主要采用生物化学实验室采用一系列生物化学技术，如电泳，冷冻凝结，回流电泳和凝胶渗透.对大白菜过氧化物酶的特性进行分析，如抗原特性，抗体底物特性，pH特性，温度特性，离子弹性及其底物特性等。
4成果由于大白菜过氧化物酶是一种植物防御酶，所以经过筛选，我们可以找到具有抗性能的大白菜过氧化物酶结合物，这些大白菜过氧化物酶结合物的组成物和酶活使得大白菜有效地抗抑制病原体的生长，即可以降低植物的病害风险。
此外，研究还可以揭示大白菜过氧化物酶的底物特性、抑制特性、pH特性以及酶活的温度和离子弹性，从而为合理利用大白菜中的过氧化物酶，提高植物抗性提供有益的参考依据。
5结论经过对大白菜过氧化物酶的分离及某些性质的研究，成功获取了大白菜中具有一定抗性性能的过氧化物酶结合物。
并且研究还探明了大白菜过氧化物酶的底物特性，抗原特性，pH特性等特性，为提高大白菜抗性提供了有益的参考依据，为保护植物，促进植物的健康发展做出贡献。
8份不结球芸薹属蔬菜种质的POD、SOD和EST同工酶比较分析
ｓｃ ｅ ｅａ ｌｓ ｇ ｒ ｌｓ ｏ ｌ ｅ ｓ ｐａ ａｅ ｅ ｅ ｅ ｉ ｉｔ ｎ ｅ ｗａ ６６， ａ ｈ ｇ ｏ ｐ ｈ ｄ ｏ ｖｏ ｓ ｄｆｅ — ｉａ ｖ ｇ ｔ ｂ ｅ ｅ ｍｐ ａ ｍｓｃ ｕ ｄ ｂ ｅ ｒ ｔ ｄ ｗｈ ｎ ｇ ｎ ｔｃｄ ｓａ ｃ ｓ０． ｅ ｃ ｒ ｕ ａ ｂ ｉｕ ｉ ｒ ｆ ｅ ｔｅ ｚ ｍｅ ｂ ｎ ｓ ｏ ｎ ｎ ｙ ａ ｄ ｆＰＯＤ ， ＯＤ ｎ Ｔ． Ｓ ａ ｄ ＥＳ Ｋｅ ｒ ｎ — ｅ ｄ ｎ ｒ ｓ ｉａ ｖ ｇ ｔｂ ｅ ；ＰＯＤ ｓ ｚ ｍｅ；ＳＯＤ ｓ ｚ ｍｅ；ＥＳ ｉｏ ｙ ｙ ｗｏ ｄｓ： ｏ ｈ ａ ｉ ｇ ｂ ａ ｓｃ ｅ ｅ ａ ｌ ｓ ｉｏ ｙ ｉｏ ｙ Ｔ ｓ ｚ ｍｅ；ｃ ｕ ｔｒａ ａｙ ｉ ｌ ｓｅ ｎ ｌ ｓｓ
摘要 ： 用垂 直平板 聚 丙烯 酰胺凝胶 电泳技术 ， ８份不 结球芸 薹属蔬 菜种质 的过氧 化物 酶（ Ｏ 、 采 对 Ｐ Ｄ） 超氧化 物歧化 酶 （ Ｏ 和 酯酶（ Ｓ ） Ｓ Ｄ） Ｅ Ｔ ３种 同工酶进行 了分析研 究 ， 并利 用聚类分析 的 方法探讨 其亲缘 关 系。结果表 明， ８份 不结球 芸薹 属蔬 菜种 质的 Ｐ Ｄ同工酶 分 离出３条酶带 ， 中 Ｐ３为 ８份种质所共有 酶带， ２为 ２份芥 菜种 质特 有酶带 ；Ｏ 同工酶 Ｏ 其 Ｐ ＳＤ
不同抗寒冬油菜品种过氧化物同工酶比较
不同抗寒冬油菜品种过氧化物同工酶比较次仁白珍【摘要】本文利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了8份白菜型冬油菜的过氧化物酶同工酶的特性。
结果表明：天油类与陇油类在逆境损伤下酶谱含量差异较大，陇油类的酶谱含量均高于天油类；天油类不同种间酶谱特征基本相同，而陇油类相比天油类而言，酶谱间均存有较大的差异。
这说明陇油类的过氧化物同工酶抗逆性生理作用高于天油类。
%Take advantage of the PAGE polyacrylamide gelelectrophoresis of POD for 8 Spe-cies of campestris.The results indicated that:when the Tianyou and Longyou were damaged by low temperature .the difference of zymogram between the Tianyou and Longyou was obvious,the content of the Longyou were all exceed the Tianyou.The electrophoretograms of POD for four species of the Tianyou of the difference was lower,but the Longyou for four species had sharp distinction.The results state that stress tolerance of the the Tianyou was better than the Longy-ou.【期刊名称】《西藏农业科技》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】5页(P35-39)【关键词】油菜;过氧化物同工酶;聚丙烯酰胺凝胶电泳【作者】次仁白珍【作者单位】西藏自治区农牧科学院农业研究所·西藏拉萨·850032【正文语种】中文冬油菜是我国北方地区重要的油料作物之一,对北方地区国民经济和农业生产具有深远意义。
植物过氧化物酶同工酶测
植物过氧化物酶同工酶测定
（园盘式凝胶电泳法）
一、原理
聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺(Acr)和交联 剂甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂作用下聚合而 成，具有三维网状结构，其网孔大小可由凝胶 浓度和交联度加以调节。凝胶电泳兼有电荷效 应和分子筛效应。被分离物质由于所载电荷数 量、分子大小和形状的差异，在电泳时会产生 Desig不ned b同y XK的Wan泳g 动速率而相互分离。
（四）点样 Designed（by X五K W）an电g 泳
5
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
（六）剥胶 电泳完毕，将电泳槽取出，倒去缓冲液，取下凝胶
管，放入培养皿中。用一个带有长针头的注射器，吸满 水，将针头沿管壁插入，同时慢慢地将注射器中的水推 出，并不断转动凝胶管，将凝胶管挤脱出来。 （七）染色
1
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
过氧化物酶是植物体内常见的氧化酶， 植物体内许多生理代谢过程受其同工酶的种 类及活性的调节。同工酶具有不同的迁移速 度。
将电泳后的凝胶置于含有H2O2及联苯胺 的溶液中染色，利用过氧化物酶催化H2O2分 解并把联苯胺氧化成蓝色或棕褐色产物的原 理，出现的蓝色或棕褐色条带即为过氧化物 酶同工酶在凝胶中存在的位置，多条有色带 Designe即d by构XK W成ang过氧化物酶同工酶酶谱。
4.四甲基乙二胺(TEMED)。 5.电极缓冲液：Tris6.0g，Gly（甘氨酸） 28.8g，用水定容至1000mL(pH8.3)，用前稀释 10倍。 6. 3% H2O2。 7. 联苯胺染色母液：联苯胺1g + 冰醋酸 18mL+ H2O 2mL溶解后贮于棕色瓶中。 8.同工酶染色液：配后立即使用。取0.5mL 联苯胺母液 Designed by XK Wang + 9.3mL H2O +0.2mL 3% H2O2。
过氧化物酶同工酶电泳分析(经典有用)
过氧化物酶同工酶电泳分析实验原理（1）凝胶板由上、下两层胶组成，两层凝胶的孔径不同。
上层为大孔径的浓缩胶，下层为小孔径的分离胶。
（2）缓冲液离子组成及各层凝胶的pH不同。
本实验采用碱性系统。
电极缓冲液为pH8.3的Tris-甘氨酸缓冲液，浓缩胶为pH6.7的Tris-HCl缓冲液。
而分离胶为pH8.9的Tris-HCl缓冲液。
（3）在电场中形成不连续的电位梯度。
在这样一个不连续的系统里，存在三种物理效应，即电荷效应、分子筛效应和浓缩效应。
在这三种效应的共同作用下，待测物质被很好地分离开来。
下面以本实验要分离的小麦苗过氧化物酶同工酶为例，分别说明三种效应的作用：（1）电荷效应：各种酶蛋白按其所带电荷的种类及数量，在电场作用下向一定电极，以一定速度泳动。
（2）分子筛效应：分子量小，形状为球形的分子在电泳过程中受到阻力较小，移动较快；反之，分子量大、形状不规则的分子，电泳过程中受到的阻力较大，移动较慢。
这种效应与凝胶过滤过程中的情况不同。
（3）浓缩效应：待分离样品中的各组分在浓缩胶中会被压缩成层，而使原来很稀的样品得到高度浓缩。
其原因如下：①由于两层凝胶孔径不同，酶蛋白向下移动到两层凝胶界面时，阻力突然加大，速度变慢。
使得在该界面处的待分离酶蛋白区带变窄，浓度升高。
②在聚丙烯酰胺凝胶中，虽然浓缩胶和分离胶用的都是Tris-HCl缓冲液，但上层浓缩胶为pH 6.7，下层分离胶为pH 8.9。
HCl是强电解质，不管在哪层胶中，HCl几乎都全部电离，Cl－布满整个胶板。
待分离的酶蛋白样品加在样品槽中，浸在pH8.3和Tris-甘氨酸缓冲液中。
电泳一开始，有效泳动率最大的Cl－迅速跑到最前边，成为快离子（前导离子）。
在pH6.7条件下解离度仅有0.1～1％的甘氨酸（pI = 6.0 ）有效泳动率最低，跑在最后边，成为慢离子（尾随离子）。
这样，快离子和慢离子之间就形成了一个不断移动的界面。
在pH6.7条件下带有负电荷的酶蛋白，其有效泳动率介于快慢离子之间，被夹持分布于界面附近，逐渐形成一个区带。
盐胁迫对两个大白菜品种抗氧化酶活性及离子吸收的影响
要好，浙白９号在土壤盐分２．５ ｇ／ｌ【ｇ之内，盐分
对其生长影响不大，并且在低盐下还会刺激其生
长，而早熟５号在土壤盐分１．５ ｇ／ｋｇ以上就会对
其生长产生抑制作用。
。
２．２盐胁迫对大白菜抗氧化酶系统的影响
２．２．１ 盐胁迫对大白菜ＳｏＤ活性的影响
从图２可以看出，浙白９号ＳｏＤ活性在０—
２．５ ｇ／Ｉ【ｇ内随着盐分的增加而增加，在１．０，１．５， ２．０，２．５ ｇ／Ｉｃｇ盐分处理下，其活性分别比对照增 加了２２．１％，２８．６％，３７．２％，４３．４％，在３ ｇ／ｋｇ 时ＳＯＤ活性明显下降（图２一浙白９号）。这说
＊通讯作者，傅庆林，Ｔｅｌ：８６－５７１－８６４０４０４１，ｇ－ｍａｉｌ：ｆｕｑｌ＠ｚａａｓ．ｏｒｇ
万方数据
丁能飞等：盐胁迫对两个大白菜品种抗氧化酶活性及离子吸收的影响
·３２３·
土壤盐溃化对农业的威胁是一个全球性的 问题。全球可耕地面积中１０％的土壤正处于不 同程度的盐碱化中。我国约有０．６ｌ亿ｈｎｌ２盐碱 地…。由于工业污染加剧、灌溉农业的发展和化 肥使用不当，土壤次生盐渍化不断加剧，给农业 生产造成了重大损失心Ｊ。盐胁迫对植物造成的 危害主要是离子毒害、渗透胁迫和营养失衡，以 及盐胁迫的次级反应如氧化胁迫等旧．４Ｊ。盐胁 迫会使植物体内活性氧大量产生，如单线态分子 氧、羟自由基、超氧阴离子和过氧化氢等。这些 活性氧通过膜脂过氧化或膜脂脱脂作用破坏膜 结构，使膜差别透性消失，从而导致一系列有害 的生理生化变化。超氧化物歧化酶（ｓｏＤ）、过氧 化物酶（ＰＯＤ）和过氧化氢酶（ｃＡＴ）是植物体内重 要的三种抗氧化酶，它们协同作用，防御活性氧 对细胞膜系统的伤害，抑制膜脂过氧化，从而减 轻盐胁迫对植物细胞的伤害。
浙江省人多地少，海涂资源的合理开发与利 用显得尤为重要。近几年来，随着产业结构的调 整，海涂已成为重要的蔬菜产地。因此，研究蔬 菜的耐盐机理，筛选耐盐蔬菜品种已成为发展海 涂蔬菜产业中的一个重要课题。有关盐胁迫对 小麦、马铃薯、苜蓿、甜瓜等作物的抗氧化酶活性 的影响已有报道【５圳，但关于盐胁迫下大白菜抗 氧化酶活性及矿质离子吸收的影响至今未有报 道。本研究以浙白９号与早熟５号两种大白菜 为试验材料，探讨在不同盐浓度处理下对大白菜
生化实验四--果蔬中过氧化物酶分析
电泳槽系列DYCZ-24D
• 产品名称：迷你双垂直电泳槽 • 产品型号：DYCZ-24D • 产品售价: 1200元
产品说明： 高透明度聚碳酸脂注塑成型，品 质与进口产品相同。使用极其方便 可靠，绝不漏胶漏缓冲液。凝胶板 净面积82×82（mm），双板，可作 0.75、1、1.5（mm）胶（任选两 种），试样格10、15齿。 试样格（梳子） 1mm 10齿 2把 1mm 15齿 2把 1.5mm 10齿 2把 1.5mm 15齿 2把
10g
/100mL
亚甲基双丙烯酰胺 2.5g
pH 8.9 pH 6.7 pH 8.9 pH 6.7
E 核黄素/100mL
核黄素 4mg
F 蔗糖/100mL
蔗糖
40g
电极缓冲液/100mL （用时稀释10倍）
Tris 甘氨酸
6g 28.8g
封板胶 （加热煮沸）
琼脂粉 电极液
1g 100mL
样品提取液
电泳开始后，由于快离子的泳动率最大， 在快离子后面就形成一个离子浓度低的区域， 即低电导区。电导与电势梯度是成反比的，低 电导区就产生了较高的电势梯度，这种高电势 梯度使蛋白质和慢离子在快离子后面加速移动， 因而在高电势梯度区和低电势梯度区之间形成 一个迅速移动的界面。由于样品蛋白质的有效 泳动率恰好介于快、慢离子之间，所以也就聚 集在这个移动的界面附近，被浓缩成一狭小的 样品薄层。
样品分子在上层大孔径的浓缩胶中快 速移动到小孔径的下层分离胶时，由于凝 胶孔径突然变小而移动速度大大减慢，使 之在浓缩胶与分离胶的界面处被浓缩成一 狭窄的区带，一齐进入分离胶，然后再进 行与连续凝胶电泳类似的电泳分离。
实验三_植物叶片过氧化物同工酶的PAGE分析
光聚合：使用核黄素作催化剂，聚合反应需光照， 适用于制备
浓缩胶(大孔胶)。 应控制AP和TEMED的用量，使凝胶在40min-1hr之间聚合完全 为宜。
2.2.2 凝胶孔径的可调性及其有关性质
(1)凝胶性能与总浓度及交联度的关系： T%（Acr和Bis总浓度）= (a+b)/m× 100 C% (交联剂百分比) = b/(a+b) × 100 其中，a= Acr克数，b= Bis克数，m=缓冲液体积（ml） 欲制备完全透明而又有弹性的凝胶， 应控制a/b=30左右。 经验公式: C = 6.5 － 0.3 T
(5) Tris-Gly电极缓冲液 pH8.3
注意：Acr和Bis是对中枢神经系统有毒的试剂，操作时应避免直接接触和吸 入它的粉末。
(6)
40% 蔗糖溶液(W/V)。
(7) TEMED(浓度≥98%)
(8) 0.14% 过硫酸胺（AP）： 4℃贮存仅能用一周，最好当天配制。
(9) 0.1%溴酚蓝指示剂
这类酶存在于生物的同一属、种、变种，或同一个体的不同组织、 细胞中，因而，可以通过对它们的分析，并以其多态性作为遗传 标记，研究种质资源的亲缘关系、重要性状的同工酶表现等。例 如，人们用脂酶同工酶酶谱的特异性，鉴定了近缘野生莴苣 （Lactuca serrila）与莴苣栽培种（L. sativa）的亲缘关系，以及 南瓜属三个主要栽培种的亲缘关系。但是，同工酶在同一物种、 同一个体的不同生长发育时期，其表现是不一样的，有一些同工 酶的重现性较差，应用中也应当注意。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
(10) 联苯胺染色母液：联苯胺1g + 冰醋酸18ml + H2O 2ml溶解储于棕色
瓶中。 注意：（1）联苯胺的毒性很强，其固体和蒸气都能通过皮肤迅速进 入体内，引起恶心、呕吐，损害肝和肾脏。联苯胺及它的盐都是致癌 物质。 （2）联苯胺染色液要当天配制。
8个紫花苜蓿品种的过氧化物同工酶分析
8个紫花苜蓿品种的过氧化物同工酶分析赵菲佚;焦成瑾;孔彬彬;康涛涛;安建平【摘要】利用非变性聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳技术,对8个野生紫花苜蓿品种过氧化物同工酶进行了分析,通过对各供试材料酶谱特征和相似系数的分析,探讨紫花苜蓿品种间的亲缘关系.结果表明,过氧化物同工酶在8个紫花苜蓿品种中均有表达,但各品种间的表达谱带及不同的同工酶表达量存有差异.8个品种共获得24条酶带,且存有1条共有表达酶条带,其中陇东野生紫花苜蓿同工酶谱带最多,表达有4条带;阿尔冈金酶谱带数最少,仅出现2条带.酶谱条带聚类分析表明,陇南野生紫花苜蓿与阿尔冈金间亲缘关系最远,亲缘关系呈现不同程度的差异.【期刊名称】《甘肃农业科技》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】4页(P6-9)【关键词】紫花苜蓿;酶聚丙烯凝胶电泳分析;过氧化物酶同工酶;亲缘关系【作者】赵菲佚;焦成瑾;孔彬彬;康涛涛;安建平【作者单位】天水师范学院生物工程与技术学院, 甘肃天水 741000;天水师范学院生物工程与技术学院, 甘肃天水 741000;天水师范学院生物工程与技术学院, 甘肃天水 741000;天水师范学院生物工程与技术学院, 甘肃天水 741000;天水师范学院生物工程与技术学院, 甘肃天水 741000【正文语种】中文【中图分类】Q946.5紫花苜蓿（Medicago sativa L.）为多年生豆科牧草，抗逆性强，适应范围广，能生长在多种类型的气候、土壤环境下，是世界上栽培最早、面积最大、经济价值最高的牧草，有“牧草之王”的美称，因此在我国被广泛种植。
在生产实践中，由于在同一地区需种植不同品种的紫花苜蓿，或从其它地区引种进行种植示范，使得对于紫花苜蓿不同品种的鉴定成为必要。
紫花苜蓿不同品种在形态外观上差异不大，仅从形态很难对不同品种进行准确鉴定。
近年来兴起的分子标记鉴定方法，可从核酸水平上达到此目标［1- 3］。
然而，由于紫花苜蓿栽培种大多数在遗传上属于同源4倍体，且无法通过常规测序方法进行全基因组测序，目前主要使用RAPD法以筛选或建立组合分子标记方法进行不同品种的鉴定。
10个玉米品种间过氧化物同工酶的研究
10个玉米品种间过氧化物同工酶的研究王世华;高双成;郝转芳;施江;付国占【摘要】采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对10个玉米品种进行过氧化物同工酶分析.研究表明:各品种在酶谱上都有表达,且呈现很强的特异性,且在多个位点上出现稳定一致的酶带.供试材料中共出现36条酶带,其数量在品种间差异显著,其中最多者出现6条,最少2条.在亲缘关系方面通过计算各品种的酶谱联合系数发现,台湾超甜38号与洛阳800、沈单16的亲缘关系最远,而滑玉12与张玉9号的亲缘关系比较近,洛阳800与沈单16具有非常近的亲缘关系.【期刊名称】《河南科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(032)002【总页数】3页(P60-62)【关键词】玉米;过氧化物同工酶;迁移率【作者】王世华;高双成;郝转芳;施江;付国占【作者单位】河南科技大学农学院,河南洛阳471003;河南科技大学农学院,河南洛阳471003;中国农业科学院作物科学研究所,北京100081;河南科技大学农学院,河南洛阳471003;河南科技大学农学院,河南洛阳471003【正文语种】中文【中图分类】S5130 前言同工酶的形成是生物体基因结构差异造成的，在进化过程中有一定的保守性［1］。
同工酶是基因和性状的连接物，具有明显的种属、组织和发育阶段的特异性，既是生理指标，又是可靠的遗传标志［2］。
同工酶技术，是通过凝胶电泳的方法，将不同的同工酶酶带分离开，经过染色形成酶带谱，在遗传育种、生长发育、物种起源等领域的成为一种重要的研究工具，也可作为鉴定生物基因型是否有差异的可靠指标［3－5］。
最早将同工酶应用于玉米杂种研究的是Schwartz，他发现了杂交后代中有新的酶带表达(称为杂交酶)，并试图把它和杂种优势联系起来［6］。
中国科技工作者利用非变性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，研究了过氧化物酶、酯酶等同工酶与玉米杂种优势的关系［7－10］，极大地推动了同工酶在玉米杂种优势预测和优良品种选育上的应用。
过氧化物酶同工酶的提取分离课件
过氧化物酶同工酶的提取分离
4
3、电泳：
(1)定义：是指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷
相反的电极方向移动的现象。
(2)影响电泳效果的因素：
①带电颗粒的大小和形状：
颗粒越大，电泳速度越慢，反之越快；
②颗粒的电荷数：
电荷越少，电泳速度越慢，反之越快；
③溶液的粘度：
粘度越大，电泳速度越慢，反之越快；
过氧化物酶同工酶的提取分离
不连续，及三种物理效应。
过氧化物酶同工酶的提取分离
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过氧化物酶同工酶的提取分离
31
过氧化物酶同工酶的提取分离
32
4.2 点样：
轻拔电泳梳子→用微量进样器点样→每孔约30μl。
过氧化物酶同工酶的提取分离
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5、电泳：
接通电源→稳流→调节电流到每孔 1mA左右→当溴酚蓝前沿进入分离胶后， 可适当加大电流→待前沿下行到距胶末
1cm处，停止电泳。
过氧化物酶同工酶的提取分离
过氧化物酶同工酶的提取分离
11
(3)凝胶的质量决定因素：
（1）凝胶度：
是指100mg凝胶溶液中含有单体（Acr）和交联剂 （Bis）的总克数，用T%表示。
（2）交联度：
是指凝胶溶液中，交联剂占单体和交联剂总量的 百分数，用C%表示。 一般浓缩胶的浓度为7.5%，分离胶的浓度为10%。
过氧化物酶同工酶的提取分离
过氧化物酶同工酶的提取分离
6
4、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯胺凝胶作 为载体的一种区带电泳。
过氧化物酶同工酶的提取分离
7
(1)聚丙烯胺凝胶的生成：
聚丙烯胺凝胶由丙烯酰胺单体（Acr）和N，N’甲叉双丙烯酰胺（Bis）在催化剂作用下聚合而成。在 具有自由基时，Acr和Bis就会聚合。
大白菜不同生育期和不同部位的过氧化物酶同工酶分析
大白菜不同生育期和不同部位的过氧化物酶同工酶分析
张成合;刘世雄
【期刊名称】《中国蔬菜》
【年(卷),期】1994(000)001
【摘要】本实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法，对大白菜不同生育阶段和不没组织器官的过氧化物酶同工酶酶谱作了比较分析。
结果表明：不同生育阶段及植株的不同部位的同工酶酶谱有明显差异。
花蕾的酶数最多，多薹的酶带数量少；各生育阶段植株叶片的同工酶谱均较模糊，酶带数也少；植株根部组织的酶活性强，谱带清晰；尤以２片真叶期的根部组织酶恬性最强，谱带多而清晰，是大白菜过氧化物酶同工酶分析的适宜取材部位。
【总页数】3页(P12-14)
【作者】张成合;刘世雄
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S634.101
【相关文献】
1.沼液在大白菜不同生育期喷施试验实施总结 [J], 王再莉
2.5个燕麦品种和品系不同生育期不同部位养分分布格局 [J], 王桃;徐长林;张丽静;周志宇
3.不同瓣型榆叶梅品种不同生育期、不同部位POD同工酶的研究 [J], 王炳举;赵扬
4.不同生育期菊芋叶片过氧化物酶同工酶表达特点的研究 [J], 陈燕珍;胡丽莲;陶毅明;梁杨琳
5.7个饲草谷子品种不同生育期不同部位养分分布格局 [J], ZHANG Wen-jie;XU Neng-xiang;DING Cheng-long;DONG Chen-fei;CHENG Yun-hui
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８种大白菜过氧化物酶同工酶分析
摘要利用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对8个大白菜品种的过氧化物酶（pod）同工酶进行分析。
结果表明，8个品种的pod同工酶酶谱在酶带数、迁移率、酶量（酶带宽窄）及酶活性（酶带深浅）等方面均存在相似性，但也有一定的差异。
依酶谱带特征初步将8个品种进行分类，并对其亲缘关系进行了分析。
关键词大白菜；过氧化物酶同工酶；谱带；亲缘关系
中图分类号 s634.1 文献标识码 a 文章编号 1007-5739（2009）05-0008-02
同工酶广泛存在于生物界中，它表现出明显的种属、组织和发育阶段的特异性，既是生理指标，又是可靠的遗传标志[1]。
过氧化物酶同工酶在高等植物中广泛而大量地存在，具有高度多型性、器官组织特异性和相对稳定性，即同一器官的同一发育时期，pod同工酶酶谱和活性强弱是稳定的，能反映植物的遗传特性[2]。
因而同工酶分析技术被广泛地运用于植物的分类鉴定、亲缘关系及矮化砧木的预选、抗寒性和抗病性鉴定等研究领域。
笔者采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，对潍坊地区普遍栽种的8个品种的大白菜过氧化物酶同工酶进行分析研究，以期在测定同工酶谱带的基础上，探讨以同工酶谱带特征作为大白菜品种鉴定的依据，进一步测定大白菜品种间的亲缘关系。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验材料购于潍坊市农科院蔬菜研究所，共8个品种，分别为：潍白秋冠、潍白-78、潍白-68、潍白er-60、潍白-45、潍白四号、潍白二号及潍白一号。
1.2 试验方法
1.2.1 酶液提取。
取8个品种大白菜的种子放入培养皿中，加水在培养箱中（15～25℃）黑暗条件下培养4d。
分别取叶片（除去叶脉）0.5g，洗净用滤纸吸干水分，剪碎置于预冷的研钵中，加入酶提取液（由蔗糖10ml、电极缓冲液2ml、无离子水8ml组成）1ml，研磨成匀浆，移入离心管中，8 000rpm离心10min，取上清液备用。
1.2.2 电泳。
聚丙烯酰胺凝胶电泳参照张卫国（2006）等的方法[2-6]，略有改进。
染色参照杨太兴（1991）、孟秋峰（2006）方法[7，8]，采用醋酸—联苯胺法，略有改进。
染色液的成分为：联苯胺0.5g，冰醋酸3.75ml，4%氯化铵溶液1g，30%双氧水350μl，5%edta 25ml，加蒸馏水混合定容至100ml。
1.2.3 照相及绘制酶谱模式图。
电泳照片拍照，并根据各酶带的相对迁移率绘制过氧化物酶同工酶酶谱模式图。
酶带的相对迁移率rf = 酶带的迁移距离/溴酚蓝的迁移距离[9]。
2 结果与分析
2.1 不同品种大白菜过氧化物酶同工酶酶谱特征
大白菜叶片过氧化物同工酶经电泳后，显示的酶谱带3~5条不等（见图1），从酶谱表型可以看出，同类品种的酶谱具有较稳定的相似性。
把它们分成a、b、c等3个区，其中a区有1~2条酶带，染
色较深；b区染色浅，酶带数1~2条不等；c区染色最深，活性最高，有1条酶带。
酶带的染色深浅在一定程度上表示了酶活性的强弱不同。
潍白er-60酶带的活性普遍低于其他品种。
2.2 迁移距离
溴酚蓝（即前沿指示剂）的迁移距离为7.1cm；8个大白菜品种的过氧化物酶同工酶谱带的迁移距离见表1。
各个品种的酶带数差别较大，但部分酶带的排列具有一定的规律性。
另外，从表1可以看出，在大白菜谱带的b区有一条特征性谱带，迁移距离是4.45cm。
2.3 过氧化物酶同工酶的相对迁移率
8种大白菜共产生32条酶带，表现出13种不同的迁移率，rf值变动在 0.17~0.88之间，但酶带出现的频率差异不是很大。
酶带的迁移距离与酶带数见表2所示。
综合8个品种的酶带迁移率可以得出，rf =0.63位置的酶带可以说是几个白菜品种的基本谱带，为8个品种所共有。
酶谱模式见图2。
2.4 过氧化物酶同工酶酶谱间相似系数
相似系数采用以下公式计算：c＝2w/（a+b）[5，9]；其中：c为酶谱间相似系数；w为a和b 2个品种相同的酶带数；a为品种a
在酶谱中的酶带数；b为品种b在酶谱中的酶带数。
不同品种大白菜的酶谱间的相似系数见表3。
从表3中可以分析出，相似系数越大，说明品种间的亲源关系越近。
相反，相似系数越小，品种间的亲源关系就越远。
相似系数最大的是潍白一号与潍白二号、潍白四号与潍白-45、潍白二号与潍白-68，相似系数都为0.75；其次为潍白秋冠与潍白-78，相似系数为0.66；潍白er-60与潍白-45、潍白er-60与潍白四号相似系数都为0.57；潍白-68与潍白-78、潍白二号与潍白-78、潍白一号与潍白-78、潍白-68与潍白一号、潍白-45与潍白一号、潍白-45与潍白二号相似系数都为0.50；其余品种之间的相似系数较小。
3 结论与讨论
过氧化物酶同工酶分析法不仅能较为客观地反映物种间的遗传差异和它们的亲缘关系，而且利用其进行物种的辅助鉴定，是一种较为方便、有效的手段[10]。
过氧化物酶同工酶在大白菜中广泛而大量地存在，具有高度多型性、器官组织特异性和相对稳定性。
即同一器官的同一发育时期，pod同工酶酶谱和活性强弱是稳定的，能反映大白菜的遗传特性[11，12]。
要想研究过氧化物酶与不同品种的系谱进化及抗逆性之间的关系，应选具有代表性、一致性的品种，最好是地方品种。
因为品种在迁移过程中可能会出现变异或环境的不适应，同时过氧化物酶受气候环境、温度、生长发育时期等方面的影响也很大[13]。
作为基因的表达产物，酶具有一定的不稳定性，在很多情况下要受到环境条件的影响，而且许多因素也会影响电泳及分析效果，这都使得试验存在一定的误差。
本试验的8个大白菜品种是潍坊地区普遍栽植的品种，经分析在酶带数量、位点及分布格局上有一定的相似性，在酶带的共性方面也表现出一定的相似性，即品种与品种之间、几个品种之间出现相同的1~3条同带。
这说明他们在种间有一定的相似性，8种植物间存在着亲缘关系。
这种亲缘关系还需要通过进行种间相似性聚类分析进一步得出结论。
4 参考文献
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工酶分析[j].安徽农学通报，2006，12（11）：70-71.
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