培养基模拟生产验证方案

培养基模拟生产验证

1 概述：对无菌灌装过程进行胰酪胨大豆肉汤培养基模拟灌装试验，通过对其污染率的测试，来确认预充式无菌灌装过程和各种规程防止微生物污染的水平能达到可接受的合格标准。2目的与范围：

2.1无菌生产环境、人员消毒卫生状况与产品无菌保证的验证。

2.2用棉球擦拭的方法验证设备设施清洁消毒效果。

2.3验证的试验过程中监测底塞、卡式瓶的无菌性，使之始终符合卡式瓶生产工艺要求。2.4验证除菌过滤的可靠性，保证生产出合格的中间体半成品。

2.5验证物料转移过程中物料的无菌性，使之满足卡式瓶生产工艺需要。

2.6模拟无菌灌装试验来考察灌装操作过程微生物的污染率不大于0.1%，进而证明灌装工艺条件符合无菌灌装的工艺要求。

2.7通过轧盖密封后瓶内抽真空进行气密性测试，证明与轧盖相关的工艺条件符合卡式瓶生产工艺要求。

3 职责：

3.1相关生产人员必须依照本规程进行生产操作。

3.2生产部门负责人及QA负责指导与监查本文件的执行。

3.3文件的修定和定期审核应由生产部门负责人员和QA负责。

3.4所有参与本验证过程的生产人员都必须依照本方案进行生产操作。

3.5验证过程应严格按照规定的内容进行，若因特殊原因确实需要变更时，应填写验证方案变更申请及批准书（附表1），报验证委员会批准。

4 参考文献：

4.1Validation of aseptic filling for solution drug product

4.2药品生产验证指南（2003 版）5设备及仪器：

6物料

7验证内容

7.1判断标准

产品无菌性的可信限：95%

产品允许污染的概率：警戒限为＜0.05%，可信限为＞0.1%

7.2培养基配制、灭菌和过滤：

7.2.1按30g胰酪胨大豆培养基溶于1L 蒸馏水的比例配制适量的培养基溶液，搅拌并加热溶解或直接量取70℃以上的蒸馏水，搅拌溶解后，，将盛放培养基的桶在蒸汽灭菌柜内121℃

灭菌15 分钟，待灭菌后自然冷却

7.2.2配制用于验证分装生产线的无菌性的培养基溶液体积应满足灌装3000支以上的量（一

般灌装5000 支左右）。

7.2.3冷却后用已灭菌的0.22um 的套筒过滤器过滤于已灭菌的相应容量的不锈钢桶中。注：过滤过程应遵守无菌操作。

7.3培养基无菌性试验：

将用于模拟灌装的胰酪大豆培养基另外用50ml 试管配制4 管（20ml/管），在121℃灭菌15 分钟，盖塞、封口后将其中2管在20～25℃培养7天，另外2管在30～35℃培养7天。7天内若各试管中应无任何微生物生长，则判断合格。结果填于附表2

7.4培养基微生物生长性能试验：

将配制好的灭菌培养基分装于10 支50ml 试管中（20ml/ 管），在其中４支管内接种＜１００ＣＦＵ的枯草杆菌，和1 支不接种枯草杆菌的TSB试管（空白对照）同时在30～35℃下培养7 天，在另４支试管内接种＜１００ＣＦＵ的白色念珠菌，和1 支不接种白色念珠菌的ＴＳＢ试管（空白对照）同时在20～25℃培养７天，培养过程中每天观察微生物生长情况，七天内若50%以上接种的各试管的培养基应出现明显的所接种的微生物的生长，空白试验无菌生长，则判断合格。结果填于附表3。

7.5无菌灌装试验：

7.5.1无菌灌装所用的瓶和塞塞经灭菌处理后，进行模拟灌装、轧盖。每瓶和托盘都需标

号，每盘上记录起始时间和结束时间。整个过程应严格遵守相应的无菌灌装生产的标准操作规程。模拟灌装生产的全部样品先在20～25℃培养７天，再在30～35℃下培养7 天，一半倒置培养，一半正立培养。培养过程中应每天观察微生物生长情况，若发现污染应明确记录瓶号、瓶数。

7.5.2阴性对照：

灌装过程中随机抽取2 瓶不进行设备灌装直接手动加底塞、灌装培养基、封口，与试验样品同条件培养作为阴性对照。。

7.5.3随意地取出8 支灌有培养基的灌装瓶，向挑选出来的4 支瓶内逐个注入0.1ml 的枯草杆菌混悬液（每0.1ml 中CFU少于100个），在30～35℃下培养7天，向挑选出来的另4 支瓶内注入白色念珠菌混悬液（每0.1ml 中CFU少于100 个），在20～25℃培养７天。如果在7 天内，50%以上接种卡式瓶的培养基里都出现繁殖现象，则判为合格。对瓶内的繁殖情况要进行目检，对污染的卡式瓶要点清数量（如有污染菌的话）。污染了的卡式瓶必须仔细检查是否有瓶、塞、盖的损坏情况。

7.5.4试验结果评价评价无菌模拟灌装试验结果的主要指标之一是微生物污染率，其计算方法如下：污染率水平=[微生物生长的瓶数/ （总分装瓶数-破损瓶数）] ×100% 如果在14 天的培养期内，其污染率大于0.1%，则应立即停止生产，调查污染产生的原因应检查铝盖、底塞的密封情况，若有破损应记录并检查其破损原因。原因找到后立即重复进行

无菌灌装模拟试验。重复模拟灌装试验连续进行3 次，2 次均符合要求才可以认为此灌装工艺过程符合无菌灌装要求。

7.5.5灌装原始纪录作为附件，试验结果如附表4 填写

7.6 内包材的无菌试验

a）卡式瓶无菌试验：试验前取灭菌后灌装前2支作无菌检查，试验过程中每灌大约1000瓶时在振料器上取2 支作无菌检查，试验结束后在振料器上取2 支作无菌检查。

b）底塞无菌试验：底塞灭菌卸料时取2 支作无菌检查，试验过程中每灌大约1000瓶时理塞盘上取2 支作无菌检查，试验结束后在理塞盘上取2 支作无菌检查。

c）复合铝盖无菌试验：灭菌卸料时取2 支作无菌检查，试验过程中每灌大约1000 瓶时在理复合盖盘上取2 支作无菌检查，试验结束后在理复合盖盘上取2 支作无菌检查。

d）判断标准：阴性

e）按附表5 填写结果。

7.7人员：

7.7.1参加人员：

7.7.2人员培训：查阅操作人员个人培训档案，确认上岗操作人员已按培训计划进行基本生产技术培训, 并进行人员净化消毒效果的检查。

c）判断标准：①上岗操作人员已经接受了生产技术培训，②能按规程进行人员物料净化对设备设施正确清洗消毒③能规范操作，减少人员对环境造成污染。

d

人员无菌监测：人员更衣完毕用棉球擦拭法在手、前胸处取样作无菌性试验。取样时间分别在试验前、试验过程中、试验结束用棉球擦拭法各取样1 次检查操作人员上述部位细