T细胞性淋巴瘤诊断中TCR基因重排检测的应用

T细胞性淋巴瘤诊断中TCR基因重排检测的应用

潘鑫艳;杨长绍;黎贵芸;杨举伦;王丽

【摘要】目的：探讨T细胞受体( T cell receptors, TCR)基因重排检测对T细胞性淋巴瘤诊断的价值。方法收集T细胞性淋巴瘤30例和淋巴反应性增生组织30例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统中的56条引物进行PCR扩增,核酸分子异源双链凝胶电泳分析结果。结果30例T细胞性淋巴瘤标本中TCRβ、TCRγ、TCRδ的检出率分别为83．3%(25/30)、93．3%(28/30)、13．3%(4/30),三者联合检测的检出率为96．7%(29/30),30例淋巴反应性增生组织中均未检测出TCR 基因重排。结论利用BIOMED-2引物系统检测TCR 基因重排可作为T细胞性淋巴瘤的辅助诊断工具。%Purpose To discuss the TCR gene rearrangements in the diagnosis of T-cell lymphomas. Methods Formalin-fixed and paraffin-embedded samples including 30 cases of T-cell lymphomas and 30 cases of reactive lymphoid hyperplasia were chosen for ex-tracting genomic DNA and PCR amplification using 56 BIOMED-2 primers. PCR products were analyzed by heteroduplex and polyacryl-amide gel electrophoresis. Results In all 30 cases of T-cell lymphomas, 25 cases (83. 3%) showed TCRβ gene monoclonal rear-ran gements, 28 cases (93. 3%) of TCRγ gene monoclonal rearrangements, 4 cases (13. 3%) of TCRδ gene monoclonal rearrange-ments. 29 cases (96. 7%) with TCRβ+TCRγ+TCRδ gene monoclonal rearrangements were detected. but no clonal TCR gene rear-rangements were found in 30 cases of reactive lymphoid hyperplasia. Conclusions The detection of TCR gene rearrangements using BIOMED-2 primers is a useful assistant method for the diagnosis of T-cell lymphomas.

【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》

【年(卷),期】2015(000)004

【总页数】4页(P400-403)

【关键词】T细胞性淋巴瘤;基因重排;BIOMED-2;TCR基因

【作者】潘鑫艳;杨长绍;黎贵芸;杨举伦;王丽

【作者单位】成都军区昆明总医院病理科，昆明 650032;成都军区昆明总医院病

理科，昆明 650032;成都军区昆明总医院病理科，昆明 650032;成都军区昆明总

医院病理科，昆明 650032;成都军区昆明总医院病理科，昆明 650032

【正文语种】中文

【中图分类】R733.4

非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma，NHL)包括B细胞性淋巴瘤(B-cell lymphoma)和T细胞性淋巴瘤(T-cell lymphoma)，因T细胞性淋巴瘤种类繁多，分类复杂，病理诊断较难。某些T细胞性淋巴瘤的诊断单凭HE和免疫组化染色很难明确性质，给临床病理工作者带来了一定困难。自1985年Mullis首创PCR扩增技术以来，由于PCR技术具有简便、经济、省时、敏感、高效、易自动化等优

点[1]，很快被应用于B、T细胞性淋巴瘤的Ig和T细胞受体(T cell receptors，TCR)基因的诊断。本实验运用BIOMED-2引物系统[2]分析T细胞性淋巴瘤的TCR基因重排，探讨TCR基因重排在T细胞性淋巴瘤分型分类和鉴别诊断中的临床应用价值。

1.1 材料收集2011～2013年解放军成都军区昆明总医院病理科存档的T细胞性淋巴瘤标本30例，另收集淋巴反应性增生组织30例作为对照组。所有标本均

经两位病理医师分析确诊，采用WHO(2008)造血和淋巴组织肿瘤分类标准对上述30例T细胞性淋巴瘤进行分类[3]，包括外周T细胞淋巴瘤－非特殊类型13例;间变性大细胞淋巴瘤4例;血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤4例; EB病毒(epstein-barr virus，EBV)阳性的NK/T细胞淋巴瘤2 例; T淋巴母细胞性淋巴瘤2例;皮下

脂膜样T细胞淋巴瘤2例;肠病型T细胞淋巴瘤2例;皮肤T细胞淋巴瘤1例。

1.2 主要试剂BIOMED-2引物序列(深圳华大基因公司);50 bp Marker

6×Loading buffer、2. 5 mmol/L dNTP Mixture(天根生化公司); DNA提取试剂盒QIAamp DNA FFPE Tissue Kit(德国QIAGEN公司); rTaq DNA聚合酶、

10×PCR buffer(Takara公司)。

1.3 石蜡样本基因组DNA提取为保证无交叉污染需采用新刀片或酒精擦拭消

毒刀片，石蜡组织8 μm厚切片8～10张，并放于1. 5 ml灭菌EP管中，经脱蜡、脱二甲苯后置于56℃恒温器中干燥。DNA提取试剂盒(Cat. 56404)提取石蜡标本的基因组DNA，并通过NanoDrop2000紫外分光光度计测定所有样品DNA纯

度和浓度。

1.4 引物设计TCR基因克隆性重排分析的56条引物全部从BIOMED-2引物系统中选取(表1)[2]，该引物组合后用于检测TCRβ、TCRγ、TCRδ链，其中TCRβ

分成TCRB-A、B、C 3组，用于检测Vβ-Jβ 和Dβ-Jβ; TCRγ检测Vγ-Jγ，包括TCRG-A、B两组; TCRδ检测Vδ-Dδ-Jδ。同时还包含了5条内对照S引物，用于检测样本质量。

1.5 PCR扩增采用25 μl扩增体系:引物浓度0. 1 μmol/L，dNTP混合物浓度0. 2 mmol/L，10× PCR buffer，2个单位的rTaq DNA聚合酶。PCR扩增条件:94℃预变性10 min; 94℃变性45 s，60℃退火45 s，72℃延伸90 s，循环40次;最后72℃延伸10 min，4℃保存。

1.6 异源双链核酸分析及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR产物于95℃加热5 min，