T细胞性淋巴瘤诊断中TCR基因重排检测的应用
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T细胞性淋巴瘤诊断中TCR基因重排检测的应用
潘鑫艳;杨长绍;黎贵芸;杨举伦;王丽
【摘要】目的:探讨T细胞受体( T cell receptors, TCR)基因重排检测对T细胞性淋巴瘤诊断的价值。方法收集T细胞性淋巴瘤30例和淋巴反应性增生组织30例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统中的56条引物进行PCR扩增,核酸分子异源双链凝胶电泳分析结果。结果30例T细胞性淋巴瘤标本中TCRβ、TCRγ、TCRδ的检出率分别为83.3%(25/30)、93.3%(28/30)、13.3%(4/30),三者联合检测的检出率为96.7%(29/30),30例淋巴反应性增生组织中均未检测出TCR 基因重排。结论利用BIOMED-2引物系统检测TCR 基因重排可作为T细胞性淋巴瘤的辅助诊断工具。%Purpose To discuss the TCR gene rearrangements in the diagnosis of T-cell lymphomas. Methods Formalin-fixed and paraffin-embedded samples including 30 cases of T-cell lymphomas and 30 cases of reactive lymphoid hyperplasia were chosen for ex-tracting genomic DNA and PCR amplification using 56 BIOMED-2 primers. PCR products were analyzed by heteroduplex and polyacryl-amide gel electrophoresis. Results In all 30 cases of T-cell lymphomas, 25 cases (83. 3%) showed TCRβ gene monoclonal rear-ran gements, 28 cases (93. 3%) of TCRγ gene monoclonal rearrangements, 4 cases (13. 3%) of TCRδ gene monoclonal rearrange-ments. 29 cases (96. 7%) with TCRβ+TCRγ+TCRδ gene monoclonal rearrangements were detected. but no clonal TCR gene rear-rangements were found in 30 cases of reactive lymphoid hyperplasia. Conclusions The detection of TCR gene rearrangements using BIOMED-2 primers is a useful assistant method for the diagnosis of T-cell lymphomas.
【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》
【年(卷),期】2015(000)004
【总页数】4页(P400-403)
【关键词】T细胞性淋巴瘤;基因重排;BIOMED-2;TCR基因
【作者】潘鑫艳;杨长绍;黎贵芸;杨举伦;王丽
【作者单位】成都军区昆明总医院病理科,昆明 650032;成都军区昆明总医院病
理科,昆明 650032;成都军区昆明总医院病理科,昆明 650032;成都军区昆明总
医院病理科,昆明 650032;成都军区昆明总医院病理科,昆明 650032
【正文语种】中文
【中图分类】R733.4
非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma,NHL)包括B细胞性淋巴瘤(B-cell lymphoma)和T细胞性淋巴瘤(T-cell lymphoma),因T细胞性淋巴瘤种类繁多,分类复杂,病理诊断较难。某些T细胞性淋巴瘤的诊断单凭HE和免疫组化染色很难明确性质,给临床病理工作者带来了一定困难。自1985年Mullis首创PCR扩增技术以来,由于PCR技术具有简便、经济、省时、敏感、高效、易自动化等优
点[1],很快被应用于B、T细胞性淋巴瘤的Ig和T细胞受体(T cell receptors,TCR)基因的诊断。本实验运用BIOMED-2引物系统[2]分析T细胞性淋巴瘤的TCR基因重排,探讨TCR基因重排在T细胞性淋巴瘤分型分类和鉴别诊断中的临床应用价值。
1.1 材料收集2011~2013年解放军成都军区昆明总医院病理科存档的T细胞性淋巴瘤标本30例,另收集淋巴反应性增生组织30例作为对照组。所有标本均
经两位病理医师分析确诊,采用WHO(2008)造血和淋巴组织肿瘤分类标准对上述30例T细胞性淋巴瘤进行分类[3],包括外周T细胞淋巴瘤-非特殊类型13例;间变性大细胞淋巴瘤4例;血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤4例; EB病毒(epstein-barr virus,EBV)阳性的NK/T细胞淋巴瘤2 例; T淋巴母细胞性淋巴瘤2例;皮下
脂膜样T细胞淋巴瘤2例;肠病型T细胞淋巴瘤2例;皮肤T细胞淋巴瘤1例。
1.2 主要试剂BIOMED-2引物序列(深圳华大基因公司);50 bp Marker
6×Loading buffer、2. 5 mmol/L dNTP Mixture(天根生化公司); DNA提取试剂盒QIAamp DNA FFPE Tissue Kit(德国QIAGEN公司); rTaq DNA聚合酶、
10×PCR buffer(Takara公司)。
1.3 石蜡样本基因组DNA提取为保证无交叉污染需采用新刀片或酒精擦拭消
毒刀片,石蜡组织8 μm厚切片8~10张,并放于1. 5 ml灭菌EP管中,经脱蜡、脱二甲苯后置于56℃恒温器中干燥。DNA提取试剂盒(Cat. 56404)提取石蜡标本的基因组DNA,并通过NanoDrop2000紫外分光光度计测定所有样品DNA纯
度和浓度。
1.4 引物设计TCR基因克隆性重排分析的56条引物全部从BIOMED-2引物系统中选取(表1)[2],该引物组合后用于检测TCRβ、TCRγ、TCRδ链,其中TCRβ
分成TCRB-A、B、C 3组,用于检测Vβ-Jβ 和Dβ-Jβ; TCRγ检测Vγ-Jγ,包括TCRG-A、B两组; TCRδ检测Vδ-Dδ-Jδ。同时还包含了5条内对照S引物,用于检测样本质量。
1.5 PCR扩增采用25 μl扩增体系:引物浓度0. 1 μmol/L,dNTP混合物浓度0. 2 mmol/L,10× PCR buffer,2个单位的rTaq DNA聚合酶。PCR扩增条件:94℃预变性10 min; 94℃变性45 s,60℃退火45 s,72℃延伸90 s,循环40次;最后72℃延伸10 min,4℃保存。
1.6 异源双链核酸分析及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR产物于95℃加热5 min,