皮肤T细胞淋巴瘤皮损与外周血中TCRγ基因重排的检测

淋巴瘤基因克隆性重排检测

专注分子诊断精|选引领精准医学
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基于不同方法的产品系列-Invivoscribe公司
基于PCR检测技术，简便、快速、成本较低，所需DNA量少，对DNA质量要求不高。灵敏度高于10%，需配制胶，安全清洁性较差。
基于PCR-毛细管电泳检测技术，敏感性高，检测周期较长，结果更加直观可靠
目前市场最被接受的检测方法。灵敏度无法满足MRD要求，难以定量和得到序列。
恶性淋巴瘤发生的过程
单克隆性
突出单一形式的基因重排
IGH, TRB & TRD: V, D, and J IGK, IGL, and TRG: V and J regions
专注分子诊断精|选引领精准医学
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淋巴细胞克隆性基因重排检测的临床意义
5%～15%的病例表现复杂，即使做了大量的免疫标志也可能难以鉴别其良恶性，需要进一步的手段区分。利用分子生物学手段分析Ig和TCR基因的克隆性重排被WHO公认为该疾病诊断手段的重要补充。
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Biomed-2研究项目（IGH为例）
专注分子诊断精|选引领精准医学
van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257.
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Biomed-2研究项目（IGH为例）
专注分子诊断精|选引领精准医学
van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257.
IdentiCloneTM系列产品具有精心优化的标准化试剂组成，具有最丰富的阳性对照，涵盖各种T\B细胞重排类型，经过了超过400例的临床样本验证，按照临床产品的标准进行质检和质控，反应体系稳定，结果可靠。

t细胞淋巴瘤tcrγ基因重排特征的分析及检测方法优化

Ｔ细胞淋巴瘤ＴＣＲＴ基Ｎ重排特征分析及检测方法的优化摘要研究背景与目的淋巴瘤在组织和细胞形态学方面与高度反应增生性淋巴组织的鉴别诊断十分困难，容易造成误诊。

淋巴瘤病理诊断是临床病理工作的难题之一。

目前国内主要依靠以形态学为主、免疫组化为辅的诊断手段。

随着分子生物学的发展，从基因水平研究和分析诊断疾病的技术不断出现并且日趋成熟，为淋巴瘤诊断提供了有效工具。

淋巴瘤是由单克隆淋巴细胞增生所致，而反应增生性淋巴组织则来自于多克隆淋巴细胞，这是二者的重要区别。

编码免疫球蛋白（Ｉｇ）或Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）的基因经过重排以后，不同克隆之间的重排基因互不相同，因此，基因重排对淋巴瘤的诊断具有特异性价值。

以ＰＣＲ技术为基础的方法以其简便、高效、廉价及适用面广而在淋巴瘤基因重排研究方面越来越受重视。

但不同研究文献中所采用的引物、ＰＣＲ条件、ＰＣＲ产物检测方法等都不尽相同，结果也有差异。

因此，难以找到适于常规临床病理诊断之用的标准程序。

Ｊｕｒｋａｔ细胞是Ｔ细胞淋巴瘤基因重排研究中常用的阳性对照细胞，但有关Ｊｕｒｋａｔ细胞基因重排的详细情况也未见报道。

假基因是Ｉｇ和ＴＣＲ胚系ＤＮＡ中常见的基因，有关假基因参与重排的情况以及在设计引物方面是否应将假基因包括在内也未见有关研究报道。

本实验以ＴＣＲ基因重排为研究对象，通过优化引物选择、ＰＣＲ条件及ＰＣＲ产物的检测方法等，分析Ｔ细胞淋巴瘤基因重排检测的最佳方法。

同时，分析ＴＣＲ基因重排的特点，为进一步研究ＴＣＲ基因重排提供理论和技术支持。

方法１以ＴＣＲｙ基因重排为研究对象，选用通用引物ＴＶＧ、ＶｖＩ及ＴＣＲ７家族特异性引物为工具。

用正交设计实验优化ⅥＩ引物的ＰＣＲ条件。

另选一对ＴＣＲ［ｊ通用引物作为ＴＣＲｙ引物的补充和比较。

２利用ＰＣＲ和测序研究Ｊｕｒｋａｔ细胞基因重排情况，分析ＴＣＲ基因重排的基本特点。

３ＰＣＲ产物检测方法①利用ＴＣＲ通用引物检测淋巴瘤克隆性基因重排阳性率，分别用琼脂糖电泳和ＳＳＣＰ分析ＰＣＲ产物；②将ＰＣＲ产物分别进行直接测序和克隆后测序，分析ＴＣＲ基因重排的特点及探索测序方法在基因重排检测中的应用；⑧分析ＰＣＲ产物中ＤＮＡ的克隆数与ＳＳＣＰ中条带数目的关系。

TCR基因重排检测在T细胞淋巴瘤病理诊断中的作用

TCR Gene Rearrangement in the Pathologic Diagnosisof T-cell LymphomaDissertation Submitted toNorth China University of Science and Technology in partial fulfillment of the requirementfor the degree ofMaster of MedicinebyJia Wen(Pathology and Pathophysiology)Supervisor:Ph.D Ma XiaobingJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。

与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。

论文作者签名：日期：2015年6月10日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。

作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。

作者签名：导师签名：签字日期：2015年6月10日签字日期：2015年6月10日√摘要摘要目的探讨T细胞抗原受体（T cell receptor，TCR）基因重排在T细胞淋巴瘤中的特异性及其在病理诊断中的价值。

由于淋巴瘤在临床病理诊断中难度较大，仅凭HE和免疫组织化学特点得出的结论易造成误诊和漏诊。

在恶性淋巴瘤的分类中，T细胞淋巴瘤是一种临床上相对少见且异质性较高的肿瘤，准确做出诊断给病人的治疗和预后带来不可或缺的价值。

外周T细胞淋巴瘤诊疗规范

外周T细胞淋巴瘤（非特指型）诊疗规范（征求意见稿）苏州大学附属第一医院血液科1. 概述外周T细胞淋巴瘤（Peripheral T-cell lymphoma, PTCL）是一组起源于胸腺后成熟T淋巴细胞的淋巴系统恶性肿瘤。

NCCN2014版明确指出PTCL包括4类亚型：外周T细胞淋巴瘤-非特指型（Peripheral T-cell lymphoma, not otherwise specified, PTCL-NOS），血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤（angioimmunoblastic T-cell lymphoma, AITL），间变大细胞淋巴瘤（anaplastic large cell lymphoma, ALCL）和肠病相关T细胞淋巴瘤（Enteropathy associated T-cell lymphoma, EATL）。

外周T细胞淋巴瘤，非特指型（PTCL-NOS）是PTCL中最常见的亚型。

所谓“非特指型”，是强调这一亚型与已明确的各种独立的成熟T细胞淋巴瘤均不符合，即PTCL-NOS其实是一大组不属于已明确的任何一类独特亚型的成熟T细胞淋巴瘤。

PTCL-NOS是一类异质性疾病，在细胞形态学、遗传学、分子生物学和临床表现等方面均无特异性。

本病属于排除性诊断，即只有在排除其它独立分型的T细胞淋巴瘤后，方能做出PTCL-NOS 的诊断。

本病临床表现为侵袭性病程，对化疗不敏感，易复发，5年生存率仅为25～45%。

2. 流行病学PTCL-NOS是最常见的T细胞淋巴瘤亚型。

在西方国家，PTCL-NOS占所有NHL的7%～10%，占PTCL发病的30%。

而亚洲国家发病率更明显高于欧美，占所有NHL的15%～22%，占PTCL发病的50%。

发病常见于中老年人，中位年龄55岁，儿童少见。

男性多见，男女比例约为2:1。

3. 病因及发病机制本病病因尚未明确，可能与EBV感染有一定关系，也可能与自身免疫功能降低或周围环境影响有关。

淋巴瘤基因克隆性重排检测

淋巴瘤应用基因重排检测进行辅助/鉴别诊断的方案
注意事项
▪ 检测到克隆性重排未必一定发生恶性病变某些良性增生也可呈克隆性重排，如CD8+T细胞淋巴增生性病变、良性单克隆性丙种球蛋白病、皮肤淋巴瘤样丘疹病、免疫缺陷患者严重的EB病毒感染等；
▪ 检测不到克隆性重排也不能排除恶性病变某些明确恶性病变的免疫缺陷患者中偶尔检测不到克隆性重排，NK/T细胞淋巴瘤中IG和TCR基因呈胚系结构，即也无克隆性重排。
▪ 辅助诊断：少见类型淋巴瘤，如肝脾T细胞淋巴瘤 ▪ 亚类分析：明确是B淋巴恶性增殖还是T细胞恶性增殖 ▪ 区分同一患者两种淋巴细胞恶性肿瘤，包括复发与继发淋巴瘤 ▪ 微小残留病灶监测，评估治疗效果或复发风险（NGS方法） ▪ 细胞免疫治疗监测，监测回输T细胞增殖状况和淋巴组织来源肿
瘤细胞清除效果（NGS）
淋巴瘤基因克隆性重排和 IGHV体细胞超突变检测
血液肿瘤（常规肿瘤）检测方案-
MICM综合分子检测(旌准方案)
形态学
（Morphology）
分子生物学
（Molecular） • 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) • 毛细管凝胶电泳(CE) • 荧光实时定量 PCR(RTQT-PCR) • 一代测序(Sanger) • 二代测序(NGS)
胞
B-Cell Receptors (BCR) /Immunoglobulins (Ig) T-Cell Receptor (TCR)
蛋白
Ig重链 Ig轻链 Ig轻链
基因
IGH IGK IGL
染色体定位
14q32 2p12 22q11
蛋白
TCRα TCRβ TCRγ TCRδ
基因染色体定位
TRA 14q11

皮肤假性淋巴瘤组织病理与基因重排特点

ＡＣ一３；Ｒ —ｔｅ： ’ ＡＣＡＣＧＧ ’ ＴＣ？ｖ５一ＧＣＴＧＡＣＲＣｒＧＣｒＧＴＣ一３。预期ＤＮ片段为６ —７ｂ。Ｇ ’ ¨，Ａ００ｐ
合临床、织病理、组免疫组化和（）因重排与长期或基随访，以鉴别本课题旨在应用聚合酶链式反Ｊ加立
瘤转化的可能，判断预后和临床随访提供依据。为
ＣＴＴＧＣＣＣＣＧＣＡＧ一３，期Ｄ ’ 预ＮＡ片段为８０一１０ｐ内参照用Ｉ一肌动蛋白。反应条件见参２ｂ。３
考文献＿ｊ电泳分析：上述ＰＲ产物１，１。取Ｃ０ｌ加
据处理，用ＳＳ１．统软件分析，采ＰＳ３０系Ｐ＜００．５表示有统计学意义。
２结果
公司）３例皮肤假性淋巴瘤标本为１９。１９９—２００７
（Ｃ方法，究ＣＩ患者石蜡标本组织Ｔ细胞受ＰＲ）研Ｐ
ＩＨ基因引物序列为ＦＲ５’ ｇ３Ａ：一ＡＣ（ＣＡＣ；ＣＧＧＦ７ＡＣｑ＿３，Ｊ５～ＩＡＧＧＣＧ ’ ＴＴＡＴＧ、 ’ＩＨ： ’ ＇ＡＧＡＧ
具有重要价值。
关键词皮肤假性淋巴瘤；织病理学；疫组化；因重排；合酶链式反应组免基聚皮肤假性淋巴瘤是一组由多种因素刺激引起的ＤＮＡ。ＰＲ扩增：ＣＣＴＲ一口基因引物序列为ＴＲ一Ｃ

T细胞性淋巴瘤诊断中TCR基因重排检测的应用

T细胞性淋巴瘤诊断中TCR基因重排检测的应用潘鑫艳;杨长绍;黎贵芸;杨举伦;王丽【摘要】目的：探讨T细胞受体( T cell receptors, TCR)基因重排检测对T细胞性淋巴瘤诊断的价值。

方法收集T细胞性淋巴瘤30例和淋巴反应性增生组织30例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统中的56条引物进行PCR扩增,核酸分子异源双链凝胶电泳分析结果。

结果30例T细胞性淋巴瘤标本中TCRβ、TCRγ、TCRδ的检出率分别为83．3%(25/30)、93．3%(28/30)、13．3%(4/30),三者联合检测的检出率为96．7%(29/30),30例淋巴反应性增生组织中均未检测出TCR 基因重排。

结论利用BIOMED-2引物系统检测TCR 基因重排可作为T细胞性淋巴瘤的辅助诊断工具。

%Purpose To discuss the TCR gene rearrangements in the diagnosis of T-cell lymphomas. Methods Formalin-fixed and paraffin-embedded samples including 30 cases of T-cell lymphomas and 30 cases of reactive lymphoid hyperplasia were chosen for ex-tracting genomic DNA and PCR amplification using 56 BIOMED-2 primers. PCR products were analyzed by heteroduplex and polyacryl-amide gel electrophoresis. Results In all 30 cases of T-cell lymphomas, 25 cases (83. 3%) showed TCRβ gene monoclonal rear-ran gements, 28 cases (93. 3%) of TCRγ gene monoclonal rearrangements, 4 cases (13. 3%) of TCRδ gene monoclonal rearrange-ments. 29 cases (96. 7%) with TCRβ+TCRγ+TCRδ gene monoclonal rearrangements were detected. but no clonal TCR gene rear-rangements were found in 30 cases of reactive lymphoid hyperplasia. Conclusions The detection of TCR gene rearrangements using BIOMED-2 primers is a useful assistant method for the diagnosis of T-cell lymphomas.【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】4页(P400-403)【关键词】T细胞性淋巴瘤;基因重排;BIOMED-2;TCR基因【作者】潘鑫艳;杨长绍;黎贵芸;杨举伦;王丽【作者单位】成都军区昆明总医院病理科，昆明 650032;成都军区昆明总医院病理科，昆明 650032;成都军区昆明总医院病理科，昆明 650032;成都军区昆明总医院病理科，昆明 650032;成都军区昆明总医院病理科，昆明 650032【正文语种】中文【中图分类】R733.4非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma，NHL)包括B细胞性淋巴瘤(B-cell lymphoma)和T细胞性淋巴瘤(T-cell lymphoma)，因T细胞性淋巴瘤种类繁多，分类复杂，病理诊断较难。

淋巴瘤的分子生物学诊断知识点

淋巴瘤的分子生物学诊断知识点淋巴瘤是一种以淋巴细胞增生异常为特征的恶性肿瘤，包括多种亚型，具有不同的生物学特征和临床表现。

分子生物学诊断技术在淋巴瘤的分类、预后评估和治疗选择等方面起到了重要的作用。

本文将介绍淋巴瘤分子生物学诊断的一些重要知识点。

一、免疫组织化学检测（IHC）免疫组织化学检测通过检测肿瘤细胞表面或细胞内的特定分子标志物，帮助确定淋巴瘤的亚型和对应的治疗策略。

例如，CD20和CD79a是B细胞标志物，CD3是T细胞标志物，CD30是霍奇金淋巴瘤的标志物等。

免疫组织化学检测可以通过染色的强度和分布情况来判断特定标志物的阳性率，并结合其他临床和病理学特征进行综合分析。

二、基因重排检测淋巴瘤的发生和发展与基因重排异常密切相关。

通过检测重排的免疫球蛋白（Ig）和T细胞受体（TCR）基因，可以帮助确定淋巴瘤的亚型和起源。

例如，典型的霍奇金淋巴瘤患者常存在免疫球蛋白基因的重排。

PCR和Southern blot是常用的基因重排检测方法，可以通过扩增和分析特定基因区域的DNA序列来判断重排情况。

三、染色体异常检测淋巴瘤中常伴随着染色体异常，如染色体重排、整倍体性改变和部分染色体缺失等。

通过检测染色体异常，可以帮助确定淋巴瘤的亚型、预后风险和治疗选择。

常用的染色体异常检测方法包括常规染色体核型分析、荧光原位杂交（FISH）和比较基因组杂交（CGH）等。

FISH 可以通过探针标记的染色体特定区域来检测染色体重排和缺失。

而CGH则可以全基因组范围内分析基因拷贝数变异。

四、新一代测序技术随着新一代测序技术的发展，淋巴瘤分子生物学诊断也得到了进一步的提升。

新一代测序技术可以高效地获得淋巴瘤患者的全基因组、外显子组、转录组和甲基化组等信息。

这些信息可以帮助识别新的突变驱动基因和疾病相关的生物学过程，为个体化治疗提供重要依据。

总结：以上介绍了淋巴瘤分子生物学诊断的一些重要知识点，包括免疫组织化学检测、基因重排检测、染色体异常检测和新一代测序技术。

tcr基因重排

tcr基因重排
近几年，基因重排技术在免疫学领域取得了重大进展。

作为免疫基因重构技术家族的一员，TCR（T细胞受体）基因重排技术具有革命性的价值，从而为治疗各种恶性肿瘤和慢性非恶性疾病带来了新的可能性。

TCR（T细胞受体）是一种免疫细胞，它能够识别外源抗原，从而建立免疫应答。

其中，αβ型TCR是囊括多种免疫细胞中最重要的一种，它可以在T细胞激活和增殖过程中产生免疫应答。

但是，由于TCRβ具有高度多样性，以致于其结构及结合性能受到很大的限制，使得其传统克隆技术的效率非常低。

因此，TCR基因重排技术的出现，为利用T细胞发挥免疫治疗效果带来了新的希望。

TCR基因重排技术是利用获取的T细胞的原始TCR基因，然后通过特定的基因重排技术来改造它们，最终实现合成的表达载体，以实现T细胞媒介的杀伤抗原特异性原核表达。

该技术具有高效率、快速正确、精确相容等优点，能极大提高T细胞受体αβ的结构多样性，具有强大的应用价值。

首先，重构的T细胞受体αβ能够增强其识别抗原的敏感性，从而增强免疫应答的功效，并具有更强的治疗潜力。

其次，TCR基因重排技术可以使T细胞受体αβ能够更有效地结合抗原，具有更强的杀伤能力，而且更能有效地抑制宿主免疫应答，具有抑制疾病发展的效果。

此外，利用TCR基因重排技术配合抗原特异性疫苗，可以更加精准地引导宿主免疫细胞，激活宿主免疫，并以最佳的免疫应答进行抗病理的治疗，以达到精准医疗的目的。

总之，TCR基因重排技术是一种具有巨大治疗潜力和精准医疗价值的免疫技术，它可以提升T细胞免疫反应的效率，有助于克服传统基因克隆中效率低、抗原特异性缺乏等问题，有望在慢性非恶性疾病和恶性肿瘤的治疗中发挥重要作用。

淋巴瘤基因克隆性重排检测

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IGH, IGK, TRB , TRG IGHV
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IGHV SHM的检测
结合 Leader 和 FR1 区域的引物在 5’端连接有通用的测序片段，这种设计，配合 JH 反向测序引物，能够实现 PCR 扩增产物的双向测序。目前，欧洲慢性淋巴细胞性白血病研究机构（European Research Initiative on CLL，ERIC）的指南即使用双向测序判断 IGH V区体细胞超突变（Somatic Hypermutation， SHM）状态。
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基于不同方法的产品系列-Invivoscribe公司
基于PCR检测技术，简便、快速、成本较低，所需DNA量少，对DNA质量要求不高。灵敏度高于10%，需配制胶，安全清洁性较差。
基于PCR-毛细管电泳检测技术，敏感性高，检测周期较长，结果更加直观可靠
目前市场最被接受的检测方法。灵敏度无法满足MRD要求，难以定量和得到序列。
目前市场最被接受的检测方法。灵敏度无法满足MRD要求，难以定量和得到序列。
IGH, IGK, IGL, TRB ,TRD, TRG（BIOMED-2方案，唯一授权） IGHV（依据ERIC指南）
新兴技术，更高灵敏度（10-6），更高分辨率，更高的通量，更广泛的应用。但成本高，仪器贵，操作复杂，时间长。
1-5年
9.2-18.9年
OS
3.2-10年
17.9-25.8年
预后
不良
良好
PFS：无进展生存期（Progression free survival） OS：总生存期（Overall survival）

外周T细胞淋巴瘤诊疗规范

外周T细胞淋巴瘤（非特指型）诊疗规范（征求意见稿）苏州大学附属第一医院血液科1. 概述外周T细胞淋巴瘤（Peripheral T-cell lymphoma, PTCL）是一组起源于胸腺后成熟T 淋巴细胞的淋巴系统恶性肿瘤。

NCCN2014版明确指出PTCL包括4类亚型：外周T细胞淋巴瘤-非特指型（Peripheral T-cell lymphoma, not otherwise specified, PTCL-NOS），血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤（angioimmunoblastic T-cell lymphoma, AITL），间变大细胞淋巴瘤（anaplastic large cell lymphoma, ALCL）和肠病相关T 细胞淋巴瘤（Enteropathy associated T-cell lymphoma, EATL）。

外周T细胞淋巴瘤，非特指型（PTCL-NOS）是PTCL中最常见的亚型。

所谓“非特指型”，是强调这一亚型与已明确的各种独立的成熟T细胞淋巴瘤均不符合，即PTCL-NOS其实是一大组不属于已明确的任何一类独特亚型的成熟T细胞淋巴瘤。

PTCL-NOS是一类异质性疾病，在细胞形态学、遗传学、分子生物学和临床表现等方面均无特异性。

本病属于排除性诊断，即只有在排除其它独立分型的T细胞淋巴瘤后，方能做出PTCL-NOS的诊断。

本病临床表现为侵袭性病程，对化疗不敏感，易复发，5年生存率仅为25～45%。

2. 流行病学PTCL-NOS是最常见的T细胞淋巴瘤亚型。

在西方国家，PTCL-NOS占所有NHL的7%～10%，占PTCL发病的30%。

而亚洲国家发病率更明显高于欧美，占所有NHL的15%～22%，占PTCL发病的50%。

发病常见于中老年人，中位年龄55岁，儿童少见。

男性多见，男女比例约为2:1。

3. 病因及发病机制本病病因尚未明确，可能与EBV感染有一定关系，也可能与自身免疫功能降低或周围环境影响有关。

Hela细胞诱导下TCR Vβ基因的选择性表达与重排研究

Hela细胞诱导下TCR Vβ基因的选择性表达与重排研究胡丽莉;余雪松;王丁丁;张凤兰;张国锋;黄树林【摘要】目的研究Hela细胞诱导下T细胞受体(Tcell receptor,TCR)Vβ亚家族基因的优势表达规律,并探讨其是否与重排激活基因（RAGs）介导的TCR重排相关.方法将Hela细胞与健康人外周血单个核细胞(PBMC)混合培养,利用反转录聚合酶链式反应（reverse transcription-PCR,RT-PCR）检测共培养前后TCR Vβ各亚家族基因、重排激活酶RAGs、非同源末端连接（non-homogousend joining,NHEJ）途径中的核心蛋白Ku70/Ku80及末端脱氧核苷酸转移酶（terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT）等的表达特点.结果随着混合培养时间的推移,TCR Vβ各亚家族基因由最初的全部表达逐渐转变为选择性的部分表达,其中,TCR Vβ7在各时间段都有明显的表达；Ku70随着培养时间的推移表达量逐渐减少直至没有表达；而RAGs、kuS0和TdT基因在各个时间段均未检测到其表达.结论在Hela细胞诱导下,TCRVβ各亚家族基因的表达有一定的选择性但无明显的特异性,该选择性表达可能与RAGs介导的二次重排无关.%Objective To study the expression pattern of TCR Vf! Gene induced by Hela cells,and explore the correlation between the expression pattern and the rearrangement in T cell receptor ( TCR) mediated by recombination activating genes (RAGs). Methods The peripheral blood mononuclear cells ( PBMC) and Hela cells were co-cultured. The expression of TCRVJ3,RAGs,Ku70/Ku8O in non-homologous end joining (NHEJ) pathway and the terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) genes were analyzed by reverse transcription polymerase chain reaction ( RT-PCR). Results All of TCR K/3 subfamily genes expressed equally before two cells co-cultured.When extend the culture time,the expression of TCR ^3 subfamily genes changed in different ways. TCR VβH gene was highly expressed at all time, but the expression of KiflO was gradually decreased until to no detection. Meanwhile, RAGs, kuSO and TdT genes were not detected. Conclusion The expression of TCR Vβ subfa mily genes is only selective,no specific,when induced by Hela cells. The selective expression may be independent onA4Gs-mediated secondary rearrangement.【期刊名称】《广东药学院学报》【年(卷),期】2011(027)004【总页数】6页(P417-422)【关键词】Hela细胞;TCR Vβ基因;重排【作者】胡丽莉;余雪松;王丁丁;张凤兰;张国锋;黄树林【作者单位】广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006;广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006;广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006;广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006;广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006;广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】Q78宫颈癌已成为威胁妇女健康的常见疾病，位居全球女性癌症发病率之首。

T—NHL TCRγ多重引物基因重排PCR参数优化

总体而言，研究结果表明，微增加引物浓度可以改善轻ＦＰＦＥ组织的ＴＲＣ克隆性ＰＲ检测。实验性的调整ＰＲ参ＣＣ
注：据没有对应关系，为变量数都
数对ＦＰＦＥ组织的克隆分析，可能会有很大的价值，通过ＰＲＣ
ｓａｄｒｉａｉｎｏＣＲｆｍｎｒｔｃｌｏｅｅｔｎｏｌｎｌｔｎａｄｚｔｆＰｏｐｍｅａｄｐｏｏｏｓｆｒｄｔｃｉｆｃｏａｉｏ
１２２ＰＲ（）物由上海生物工程公司合成。引物序．．Ｃ１引
列参照文献［］分为ＴＲ，管：＇ｆ１。Ｃ＇／ＡＶ，＋ＶｙＯ＋Ｊｌ２＋／１＇ｌｐ／
Ｊ１２和ＴＲ，－／，／Ｃ．ＩＢ管：＋Ｖ，１＋ｐ／Ｖ＇／Ｉｊｌ２＋Ｊ１２共２个多重￣／／
ＩｍｙｂｆｒａｖｌｅｔａｊｓＰＲｐｒｍｆｒｂｘｅｉｅｔｆｅＣｏｉｇａａｓｆＦＥｔｓｅｔａｅｏｅｔａｄｕｔＣａａｅｅｓｙｅｐｒｎｏｔｌｎｎｌｉｏＰｉｕ．ｇｕｏｍｒｈｎｙｓＦｓ
到满意的扩增效果，ＴＲ，而Ｃ＇／Ｂ管则需在５．０医学创新
２１０１年１月第８鲞筮
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表１ＴＲＣ多重引物ＰＲ扩增中不同变量Ｃ

TCR重排

TCR重排一、临床意义：近年来小儿急性淋巴细胞白血病的发生日趋增多, 并且在成年人的发病率也呈增长的趋势, 虽然部分患者经过化疗或干细胞移植, 能够达到临床或血液学的完全缓解( Complete Remission, CR) , 但白血病微小残留病(Minimal Residual Disease, MRD) 导致白血病复发的问题一直困扰着医务人员。

目前检测MRD 的手段很多, 如流式细胞仪检测白血病细胞、RT-PCR 检测白血病基因等方法, 其中白血病基因检测具有灵敏度高的特点具有很高的参考价值。

然而淋巴细胞白血病因为不具有高特异性的白血病基因, 所以在MRD 的监测上比较困难。

1、TCR基因重排技术是检测淋巴细胞克隆性增生的金标准，应用于恶性淋巴瘤的早期诊断和鉴别诊断有重大意义，特别是对于经常规HE、免疫组化检测仍不能确诊的病例有较好的用途和前景。

非霍奇金淋巴瘤是发生于单一亲本细胞的单克隆恶性增殖，瘤细胞的基因重排高度一致。

而正常淋巴组织和良性淋巴组织增生性疾病呈多克隆性，因此可作为非霍奇金淋巴瘤的基因标志。

TCRγ或TCRβ基因重排常作为T 细胞淋巴瘤的基因标志，阳性率可达70%～80%。

为非霍奇金淋巴瘤的诊断、分型及评估预后提供参考依据。

由此可见TCR 基因重排是淋巴细胞恶性增生的特异性标志。

2、我们通过对T 细胞受体(Tcell receptor , TCR) 检测以及它们在监测MRD 中的临床意义的研究, 观察到这种TCR基因重排的检测持续阳性的患者, 更容易导致白血病的早期复发。

因而在ALL 病程中对TCR基因重排进行动态监测, 极大的提高MRD 检出的特异性和敏感性,对ALL患儿的预后、复发的判断及制定相应的个体化治疗方案有重要的指导意义,可以使患儿最大程度的长期无病生存,减少化疗所致的远期不良反应。

二、检测方法：1、S outhern杂交技术（印迹杂交）优点是稳定、可靠, 被称为基因重排的金标准,缺点是成本较高, 需要较多新鲜组织、操作复杂和费时, 且国内收费标准较低, 无法广泛应用于淋巴瘤的鉴别诊断。

TCR测序，怎么哪哪都有你？

TCR测序，怎么哪哪都有你？T细胞受体，即T细胞抗原受体(T cell receptor，TCR): 是T细胞特异性识别和结合抗原肽-MHC分⼦的分⼦结构，通常与CD3分⼦呈复合物形式存在于T细胞表⾯。

⼤多数T细胞的TCR由α和β肽链组成，少数T细胞的TCR由γ和δ肽链组成。

β链的CDR3区的多样性使得T细胞能识别各种各样的抗原。

CDR3多样性主要是T细胞在重组酶RAG1和RAG2催化作⽤下，通过体细胞V(D)J基因重排产⽣。

TCRα链通过VJ重组产⽣，⽽β链通过VDJ重组产⽣。

V、D、J基因⽚段本⾝具有多样性，此外在重排的过程中，在V-D及D-J的连接区经常有⾮模板的核苷酸随机插⼊或删除，进⼀步增加了CDR3区的多样性，以识别不同的抗原。

TCR的复杂度和多样性不仅影响肿瘤细胞的识别、与免疫治疗相关，异常的TCR多样性还影响⾃⾝免疫疾病、免疫缺陷疾病、过敏反应、器官移植排斥等多种疾病的发⽣、发展。

今天我们就来说⼀说TCR测序的应⽤。

对治疗的反应监控、评估· 监控联合使⽤免疫检查点抑制剂（PD-1和CTLA-4）对治疗爆发性⼼肌炎、⿊⾊素瘤（Fulminant Myocarditis）效果。

Fulminant Myocarditis with Combination Immune Checkpoint Blockade.November, 2016TCR beta sequencing to determine clonal T-cell populations in melanoma patients undergoing immunotherapy. ICI 2016 | August, 2016· 监测免疫检查点抑制剂CTLA-4治疗前列腺病（ prostate cancer）、早期乳腺癌（breast cancer）的效果。

Clonal expansion of CD8 T cells in the systemic circulation precedes development of ipilimumab-induced toxicities. PNAS | October, 2016 Deep Sequencing of T-Cell Receptor DNA as a biomarker of clonally expanded TILs in breast cancer after immunotherapy. Cancer ImmunologyResearch | September, 2016· 评估PD-1抑制剂对免疫系统副作⽤反应。

原发性皮肤γδT细胞淋巴瘤2例临床病理分析

原发性皮肤γδT细胞淋巴瘤2例临床病理分析李芹芹;袁菲;金晓龙;董磊【摘要】目的探讨原发性皮肤γδT细胞淋巴瘤(primary cutaneous gamma-delta T-cell lymphoma,PCGDTCL)的临床病理特征,以提高对该病的认识及诊断水平.方法分析2例PCGDTCL的临床表现、病理学形态特征、免疫表型及基因检测结果,并结合文献复习.结果 2例患者均以皮肤病变起病,肿瘤细胞表达T细胞标记和细胞毒性标记,不表达髓系、B细胞特异性标记;EBV原位杂交EBER阴性;基因克隆性重排结果为TCRγ阳性.结论 PCGDTCL是一种少见的皮肤恶性肿瘤,临床表现缺乏特异性,明确诊断依赖于病理活检及TCR基因重排结果.【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2018(034)012【总页数】4页(P1380-1382,1385)【关键词】皮肤肿瘤;γδT细胞淋巴瘤;免疫组织化学【作者】李芹芹;袁菲;金晓龙;董磊【作者单位】上海交通大学医学院附属瑞金医院北院病理科,上海201800;上海交通大学医学院附属瑞金医院北院病理科,上海201800;上海交通大学医学院附属瑞金医院病理科,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院北院病理科,上海201800;上海交通大学医学院附属瑞金医院病理科,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院病理科,上海200025【正文语种】中文【中图分类】R739.5γδT细胞淋巴瘤是较为罕见的外周T细胞淋巴瘤(peripheral T-cell lymphoma, PTCL)，WHO(2008)将其分为肝脾γδT细胞淋巴瘤和原发性皮肤γδT细胞淋巴瘤(primary cutaneous gamma-delta T-cell lymphoma, PCGDTCL)。

PCGDTCL起源于γδT细胞，是一类EB病毒阴性的皮肤T细胞淋巴瘤，较为罕见。

本文现报道2例PCGDTCL，分析其临床表现、病理组织形态学特征、免疫表型及T细胞抗原受体(T cell receptor, TCR)基因重排情况并结合文献复习，以提高对该病的认识及诊断水平。

外周T细胞淋巴瘤临床路径

外周 T 细胞淋巴瘤临床路径
一、外周 T 细胞淋巴瘤（初治）临床路径标准住院流程（一）适用对象。第一诊断为外周 T 细胞淋巴瘤（ICD-10:C84.400）。（二）诊断及分期依据。根据《NCCN 非霍奇金淋巴瘤指南（2016）》，《血液病诊断和疗效标准》（张之南、沈悌主编，科学出版社，2008 年，第三版），《World Health Organization Classification of Tumors.Pathology and Genetic of Tumors of Haematopoietic and Lymphoid Tissue》(2008 年版)。诊断标准 1.临床表现：无痛性淋巴结肿大是主要临床表现之一，常常伴有脾脏累及和骨髓侵犯。瘤块浸润、压迫周围组织而有相应临床表现。可有发热、乏力、盗汗、消瘦等症候。 2.实验室检查：血清乳酸脱氢酶（LDH）可升高。侵犯骨髓可造成贫血、血小板减少，中性粒细胞可减低、正常或升高；涂片或可见到淋巴瘤细胞。 3.病理组织学检查：系确诊本病必需的依据。外周 T 细胞淋巴瘤，非特指型肿瘤细胞表达 CD45、全 T 细胞标记物（CD2、CD3、CD5、
表 1. Ann Arbor-Cotswolds 分期
I期
单一淋巴结或淋巴组织器官区(I)；单一结外器官或部位(IE)
II 期膈上或膈下同侧受累淋巴结区≥2 个；或病变局限侵犯结外器
官或部位，并膈肌同侧一个以上淋巴结区(IIE)
III 期膈上下两侧均有淋巴结受累(III)；伴结外器官或组织局部侵犯
□患者家属签署输血同意书、骨穿同意书、静脉插管 □完成必要的相关科室会诊
同意书
□完成上级医师查房记录等病历书写
□确定化疗方案和日期

外周血T细胞受体删除环(TRECs)定量测定在评估骨髓移植术后免疫重建中的应用概况及进展

外周血T细胞受体删除环(TRECs)定量测定在评估骨髓移植术后免疫重建中的应用概况及进展武小亮;韩娟;王靖;卢林纲【摘要】骨髓移植成功的关键在于移植后免疫系统的重建状况,特别是T细胞数量及功能的重建.T细胞受体删除环(TRECs)作为胸腺近期输出naive T细胞含量的标志,在细胞中十分稳定,可作为评价胸腺近期的输出功能及T细胞免疫重建状况的指标.鉴于TRECs对评价骨髓移植术后免疫重建状况具有重要现实意义,该文就TRECs的定量检测及其在评价骨髓移植后免疫重建状况中的应用概况及进展进行综述.【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2019(034)004【总页数】6页(P1-5,27)【关键词】T细胞受体删除环(TRECs);骨髓移植;免疫重建【作者】武小亮;韩娟;王靖;卢林纲【作者单位】农业农村部食物与营养发展研究所评价研究室,北京 100081;农业农村部食物与营养发展研究所评价研究室,北京 100081;农业农村部食物与营养发展研究所评价研究室,北京 100081;农业农村部食物与营养发展研究所评价研究室,北京 100081【正文语种】中文【中图分类】R457.7;R392.4胸腺是人体重要的中枢免疫器官，是T淋巴细胞生长、发育和成熟的重要场所[1]。

来自骨髓中的前T细胞在胸腺中发育形成naive T细胞，随血流运输至外周血发挥免疫作用。

胸腺naive T细胞的输出能力，一定程度上反映了机体的免疫水平。

研究表明，胸腺输出功能与年龄呈现明显的相关性，随着年龄的增长胸腺逐渐萎缩，胸腺输出功能逐渐降低，但还是能够维持最基本的输出naive T细胞的能力并对机体发挥免疫作用[2-3]。

除年龄增长所引起胸腺萎缩及输出功能下降外，HIV，CHB，AIDs，白血病等病毒和疾病，临床中的化疗、放疗、骨髓移植、实体器官移植、免疫治疗，或长期接触有害化学物质如苯等，均会引起胸腺输出功能降低[4-6]。