琼脂糖凝胶CL-2B使用说明
苯基琼脂糖凝胶安全操作及保养规程
苯基琼脂糖凝胶安全操作及保养规程苯基琼脂糖凝胶（Phenyl Sepharose®）是一种常用的离子交换吸附树脂，广泛应用于生物分离和纯化中。
然而，在使用中如果不注意安全操作和规范保养，可能会对人体健康和实验结果造成影响。
因此，本文旨在介绍苯基琼脂糖凝胶的安全操作和保养规程，以保障实验的顺利进行和实验人员的身体健康。
安全操作1. 穿戴个人防护装备在处理苯基琼脂糖凝胶时，应穿戴好个人防护装备，包括实验室外套、手套、面罩和安全鞋等。
手套应选择化学品手套，以防止苯基琼脂糖凝胶对皮肤的刺激和腐蚀。
同时，使用手套前应检查手套的完整性，以确保手套没有破损。
面罩则用于保护呼吸系统，在制备和使用苯基琼脂糖凝胶时产生的气体、粉尘和蒸气等有害物质。
2. 操作前的准备工作在进行苯基琼脂糖凝胶的操作前，应做好以下准备工作：•保持操作区域的清洁和整洁，并确保周围没有易燃物和易爆物等危险物品。
•检查苯基琼脂糖凝胶的包装是否完好，若有损坏或过期等情况不能使用。
•按照操作手册的要求，按照配制溶液或研磨样品。
•根据实验要求，选择适当的酸碱度和洗涤条件等处理方法。
3. 操作过程中的注意事项在操作苯基琼脂糖凝胶时，需要注意以下事项：•不应将苯基琼脂糖凝胶倒入排水管道中，以免堵塞管道和污染环境。
•操作过程中应避免破损容器，以免溶液泄漏。
•如果苯基琼脂糖凝胶接触到皮肤或废气被吸入呼吸系统时，应立即用大量清水冲洗，并及时就医处理。
•操作完成后，要及时清洗实验仪器和容器，处理垃圾，并将苯基琼脂糖凝胶归置于其原包装中，保存在避光干燥通风处。
保养规程1. 包装及保存在使用苯基琼脂糖凝胶时，应注意其包装及保存条件。
苯基琼脂糖凝胶一般包装在聚丙烯或玻璃容器中，存放在常温下（15℃至25℃）。
2. 不要施加机械性质压力为了保护苯基琼脂糖凝胶的完整性，不应施加机械性质压力，因为使用太大的压力会压缩它的外观，并破坏其具有的孔隙结构。
3. 避免不必要的暴露若干活性试剂对苯基琼脂糖凝胶的动力学变化产生较大的影响，而且往往不能逆转。
琼脂糖凝胶
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琼脂糖 Agarose，缩写为AG，是琼脂中不带电荷的中性组成成份，也译为琼胶素或琼胶糖。琼脂糖化学结构 由β-D-吡喃半乳糖(1-4)连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基单位构成.
制作方法
把琼脂糖，即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂，溶于热水，冷却制成的凝胶。
作用
制成的小颗粒用于凝胶过滤。适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤，若使用5%以下浓度的凝胶， 也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点，有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降 反应的支持物。
琼脂糖凝胶
以琼脂糖为支持介质制备的凝胶
01 商品名称
03 制作方法
目录
02 基本结构 04 作用
琼脂糖凝胶是以琼脂糖为支持介质制备的凝胶。琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼 脂糖，琼脂糖的熔点在62〜65°C之间，融化后在37°C下可维持液态数小时，30°C时凝固成胶。多用于对染色 体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。
商品名称
琼脂糖凝胶agarose gel 储藏温度:常温 商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）链如氢键来维持状结构，状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下， 它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化， 也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。
CM-琼脂糖凝胶CL-6B使用说明
CM-琼脂糖凝胶CL-6B使用说明货号：S9230规格：100mL一、简介CM-琼脂糖凝胶CL-6B是将羧甲基键合在高流速琼脂糖凝胶上形成的一种弱阳离子交换介质。
广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
本品呈白色球状凝胶，无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
二、亲和填料特性项目指标离子交换基团-O-CH2COO-离子交换类型弱阳离子，可交换离子Na+基质6%交联琼脂糖蛋白质吸附容量Ribonuclease(MW13700)120mg/ml总离子交换量0.10-0.14mmol/ml介质形状球形粒径45~165μm最高流速200cm/h工作温度4~40℃耐压0.3MPapH值稳定性2~14(短时间，在位清洗)4~13(长时间)pH工作范围6~12化学稳定性在以下液体中稳定：所有常用的水相缓冲液；1mol/L氢氧化钠；8mol/L尿素；6mol/L盐酸胍；70%乙醇*检测条件：层析柱10mm×300mm*柱床高15cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。
三、适用范围本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在pH工作范围内可形成正离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
四、注意事项产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。
不能冷冻。
用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。
本产品避免与氧化剂接触；避免在pH值<4时长时间暴露(一周，20℃)。
保质期：5年。
五、操作步骤：1、装柱（1）让所有的材料和试剂达到室温。
配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。
（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
ProteinG琼脂糖凝胶说明书
Version 11302010ProteinG-Sepharose Protein G 琼脂糖凝胶Cat. No. CW0012保存：2-8 ℃组分说明CW0012 CW0012A Cat.No.Volume 1 ml 5 mlose 本产品具有广谱IgG 结合、高Fc 段结合活性、高抗体吸附量和性，可重复多次使用。
左右），以利于维持抗体的生物活性，避免抗脱5-10个柱床体积，可洗脱脂类和疏水性较强的蛋白质，避免使亲和介质的载量下降、干扰亲和介质的应用效果。
产品简介本产品为Protein G 与Sephar 偶联后产物，可从血清，腹水，细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc 片段的基因工程重组蛋白。
Protein G 是链球菌(group C 和G)细胞表面蛋白。
它与Protein A 类似，通过与免疫球蛋白的Fc 区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG。
但两者结合特异性有所不同。
Protein G 对人IgG3，小鼠IgG1，大鼠IgG2a 等具有高亲和力。
天然Protein G 具有白蛋白和细胞表面结合域。
重组Protein G 去除了白蛋白和细胞表面结合域，以减少非特异性结合。
能稳定等特点注意事项1. 凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温， 装柱， 避免产生气泡影响柱效。
2. 装柱时尽可能维持凝胶长径比为5：3-2：1，长径比过大将导致洗脱峰拖尾，洗脱体积增大；长径比过小将导致样品与填料接触时间短，吸附不充分，填料吸附蛋白量小。
3. 若上样液中抗体浓度过高，应使用平衡缓冲液稀释至1-2mg/ml，以免上样浓度过高影响柱效。
4. 可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5. 凝胶用低 pH 缓冲液洗脱时间应尽可能短，洗脱后用中性缓冲液尽快中和至 pH 中性，以延长亲和介质的使用寿命。
6. 洗脱后，应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性（pH7.4体失活。
葡聚糖凝胶操作方法
【实验目的】1.掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。
2．学习葡聚糖凝胶层析的基本操作技术。
【实验原理】凝胶层析又称分子排阻层析或凝胶过滤，是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析分离技术，这一技术为纯化蛋白质等生物大分子提供了一种非常温和的分离方法。
层析的固定相载体是凝胶颗粒，目前应用较广的是：具有各种孔径范围的葡聚糖凝胶（Sephadex）和琼脂糖凝胶（Sepharose）。
葡聚糖凝胶是由直链的葡聚糖分子和交联剂3—氯1，2—环氧丙烷交联而成的具有多孔网状结构的高分子化合物。
凝胶颗粒中网孔的大小可通过调节葡聚糖和交联剂的比例来控制，交联度越大，网孔结构越紧密；交联度越小，网孔结构就越疏松，网孔的大小决定了被分离物质能够自由出入凝胶内部的分子量范围。
可分离的分子量范围从几百到几十万不等。
葡聚糖凝胶层析，是使待分离物质通过葡聚糖凝胶层析柱，各个组分由于分子量不相同，在凝胶柱上受到的阻滞作用不同，而在层析柱中以不同的速度移动。
分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质完全被凝胶排阻，不能进入凝胶颗粒内部，阻滞作用小，随着溶剂在凝胶颗粒之间流动，因此流程短，而先流出层析柱；分子量小的物质可完全进入凝胶颗粒的网孔内，阻滞作用大，流程延长，而最后从层析柱中流出。
若被分离物的分子量介于完全排阻和完全进入网孔物质的分子量之间，则在两者之间从柱中流出，由此就可以达到分离目的。
本实验以葡聚糖凝胶G—25作为固定相载体，来分离蓝色葡聚糖—2000和溴酚蓝。
蓝色葡聚糖—2000分子量接近2×106，而溴酚蓝分子量为670，二者分子量相差较大，前者完全排阻，而后者则可完全进入凝胶颗粒网孔内，二者通过层析柱的时间不同而分开。
【实验材料】1.实验器材层析柱(1×20cm)附有一小段乳胶管及螺旋夹；洗脱液瓶(带下口的三角瓶，250m1)；试管及试管架；量筒10m1；721型分光光度计2.实验试剂(1) Tris—醋酸缓冲液(pH7.0):取0.0lmol/L Tris溶液(含0.1mol/L KCl)900ml，用浓醋酸调pH至7.0，加蒸馏水至1000m1。
凝胶的正确使用流程解
凝胶的正确使用流程解1. 凝胶的概述凝胶是一种在实验室中广泛使用的材料，常用于电泳和蛋白质分离等实验。
正确使用凝胶可以确保实验结果的准确性和可重复性。
本文将介绍凝胶的正确使用流程，包括准备凝胶、制备样品、装载样品和进行电泳分离等步骤。
2. 准备凝胶准备凝胶是使用凝胶的第一步，可根据实验需求选择不同种类的凝胶，如聚丙烯酰胺凝胶（Polyacrylamide gel）或琼脂糖凝胶（Agarose gel）。
以下是准备凝胶的步骤：•准备所需试剂和设备，包括凝胶模具、凝胶缓冲液和凝胶聚合物等。
•根据实验需要，按照要求配置凝胶缓冲液，并溶解凝胶聚合物。
•将凝胶模具放在水平的工作台上，并将模具中装有凝胶缓冲液的试管或烧杯放在模具内。
•缓慢地将凝胶聚合物溶液倒入模具内，确保液面平整，然后等待凝胶聚合。
3. 制备样品准备样品是使用凝胶进行分离的关键步骤，以下是制备样品的步骤：•收集所需的样品，并将样品转移到离心管或试管中。
•如有必要，对样品进行预处理，例如离心、加热或添加荧光染料等。
•根据实验需要，添加适量的样品缓冲液或加载缓冲液，以确保样品在电泳过程中保持稳定。
4. 装载样品装载样品是将样品置于凝胶上的步骤，以下是装载样品的步骤：•将凝胶从模具中取出，并放在凝胶室或电泳槽中。
•使用微量移液器或吸管将样品缓冲液和样品分别加载到凝胶孔中。
•根据实验需要，可以在凝胶孔中加载分子量标记物，以便确定目标DNA或蛋白质的大小。
5. 进行电泳分离进行电泳分离是使用凝胶的最后一步，以下是进行电泳分离的步骤：•将装有样品的凝胶室或电泳槽连接到电源以及电泳缓冲液槽。
•设置所需的电压和时间参数，并启动电泳操作。
•在电泳过程中，观察凝胶中样品的迁移情况，并确保凝胶在适当的时间范围内完成分离。
•分离完成后，关闭电源并移除凝胶室或电泳槽。
6. 结果分析完成电泳分离后，可以根据实验需求选择适当的方式对分离结果进行分析，如用紫外线照射凝胶来可视化DNA条带或用染色剂染色来可视化蛋白条带。
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤琼脂糖凝胶电泳的操作步骤如下:1. 制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液.2. 胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65?左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止 .3. 加样:在点样板或parafilm上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于1X.用10 ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).4. 电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.(5)电泳完毕后,取出凝胶,用含有0.5 ug/ml的溴化乙锭1×TAE溶液染色约20 min,再用清水漂洗10 min.(6)观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存实验原理闭合环状质粒、线性质粒和开环质粒DNA由于构形不同，在加溴化乙锭的琼脂糖凝胶电泳上呈现不同的迁移率，因而在紫外灯下观察，能区别闭合环状质粒DNA(cccDNA)、线性质粒DNA(L-DNA)和开环质粒DNA(ocDNA)。
实验材料和试剂(一)实验样品质粒pUC118(二)试剂1(l DNA/HindIII分子量标准2(溴酚蓝指示剂点样缓冲液0.2% 溴酚蓝50% 蔗糖3(1mg/ml溴化乙锭溶液4(电泳缓冲液(TAE)40 mmol/L Tris-乙酸1 mol/L EDTA(配制方法:24.2克Tris碱，5.71ml冰乙酸，10ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)，定容至5000ml)5(0.7% 琼脂糖凝胶(配制方法:称取琼脂糖0.35克，加入50ml TAE电泳缓冲液)(三)仪器微量移液器电泳仪水平电泳槽透射紫外观察仪实验步骤1(选择合适的水平式电泳槽，调节电泳槽平面至水平。
琼脂糖凝胶电泳操作标准流程
琼脂糖凝胶电泳操作标准流程一、实验目得:琼脂糖凝胶电泳就是常用得检测核酸得方法,具有操作方便、经济快速等优点。
DNA琼脂糖凝胶电泳得使用技术仅代表具备操作琼脂糖电泳得能力。
二、实验原理:琼脂糖凝胶电泳就是常用得用于分离、鉴定DNＡ、ＲＮA分子混合物得方法,这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物,利用DNA分子在泳动时得电荷效应与分子筛效应,达到分离混合物得目得。
DＮＡ分子在高于其等电点得溶液中带负电,在电场中向阳极移动。
在一定得电场强度下,DNA分子得迁移速度取决于分子筛效应,即分子本身得大小与构型就是主要得影响因素。
DＮA分子得迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型得ＤＮＡ分子得迁移速度不同。
如环形ＤNA 分子样品,其中有三种构型得分子:共价闭合环状得超螺旋分子(cccDNA)、开环分子(ocDＮA)、与线形DＮA分子(IDNA)。
这三种不同构型分子进行电泳时得迁移速度大小顺序为:cccDNA〉ＩDN Ａ>ocＤNA、影响核酸分子泳动率得因素主要还就是:1、DＮＡ分子大小;2、琼脂糖浓度;３、DＮＡ构想;4、所用得电压;５、琼脂糖种类;6、电泳缓冲液。
核酸电泳中常用得染色剂就是溴化乙锭(ethidｉum bromiｄe EB)。
溴化乙锭就是一种扁平分子,可以嵌入核酸双链得配对碱基之间、在紫外线照射ＢＥ-DNA复合物时,出现不同得效应、2５4ｎm得紫外线照射时,灵敏度最高,但对ＤNA损伤严重;360ｎm紫外线照射时,虽然灵敏度较低,但对ＤNＡ损伤小,所以适合对ＤＮA样品得观察与回收等操作。
3００nm紫外线照射得灵敏度较高,且对ＤNA损伤不就是很大,所以也比较适用。
三、材料、试剂及器具1、材料:不同大小得基因组片段2、试剂:Hｉnd III diｇｅｓｔDNA Marker(分子量标准)(TaKaRa);D2000(TianGeｎ);琼脂糖;加样缓冲液(6x):溴酚蓝;电泳缓冲液(1×TAE);溴化乙锭(EB);3、仪器及器具:(1)移液器、吸头、锥形瓶(2)电泳系统:电泳仪、水平电泳槽、托盘、胶托、梳子等。
凝胶电泳操作步骤
琼脂糖凝胶电泳操作步骤
一、仪器
二、试剂
三、操作步骤：
1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架
好梳子；实验室有几种不同厂家的模具和梳子，请注意配套使用；
2.根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称
量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液（一般20~30 ml）；
3.放入到微波炉内加热熔化（30ml体积需1-2min左右）。
冷却片刻，按照
5ul/100ml的比例加入EB荧光染料(EB有毒，操作时带手套、口罩，防止交叉污染)，轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，注意不能产生气泡，若有气泡则用枪尖排除，静置，待其凝固；
4.室温下30~45分钟后凝胶完全凝结，小心拔出梳子，将凝胶同模具一同安放
在电泳槽内；
5.向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面1mm为宜，如样品孔内有气
泡，应设法除去；
6.在DNA样品中加入10×体积的载样缓冲液（loading buffer），混匀后，用枪将
样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内；同时取一孔加入DNA marker 6ul，以测定核酸大小。
7.接通电源，红色为正极，黑色为负极，切记DNA样品由负极往正极泳动(靠
近加样孔的一端为负)。
100V恒压电泳40min即可（根据指示剂泳动的位置，判断是否终止电泳，一般前端染料到2/3处即可）
8.电泳完毕，关上电源，在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子
量标准Marker比较核酸的大小。
琼脂糖凝胶电泳实验操作流程
琼脂糖凝胶电泳实验操作流程如下：
1.按所分离的DNA分子的大小范围，称取适量的琼脂糖粉末，
放到一锥形瓶中，加入适量的0.5×TBE电泳缓冲液。
稍摇匀，得胶液。
2.取有机玻璃制胶板槽，有透明胶带沿胶槽四周封严，并滴加少
量的胶液封好胶带与胶槽之间的缝隙。
3.水平放置胶槽，在一端插好梳子，在槽内缓慢倒入已冷至60℃
左右的胶液，使之形成均匀水平的胶面。
4.待胶凝固后，小心拔起梳子，撕下透明胶带，使加样孔端置阴
极段放进电泳槽内。
5.在槽内加入0.5×TBE电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面。
6.把待检测的样品，按量在洁净载玻片上小心混匀，用移液枪加
至凝胶的加样孔中。
7.接通电泳仪和电泳槽，并接通电源，调节稳压输出，电压最高
不超过5V/cm，开始电泳。
琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书
琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书如下：琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒是用于从混合物中纯化和回收琼脂糖凝胶的试剂盒。
下面是具体的操作方法及步骤说明：1. 准备工作：a. 将琼脂糖凝胶样品放置于冷室中，在4℃下保存。
b. 准备所需的琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒及其附件。
2. 细胞破碎：a. 将琼脂糖凝胶样品加入细胞破碎试剂，并将细胞破碎试剂与样品混合均匀。
b. 在室温下，将样品放置于振荡器中，并在高速摇床上以600 rpm摇动60分钟。
3. 退火：a. 将样品加热至70℃，并在水浴保温器中保温5分钟。
b. 然后快速将样品冷却至室温。
4. 离心：a. 将样品离心15分钟，以去除细胞碎片和残留杂质。
b. 将上清转移到干净的离心管中，并避免沉淀。
5. 琼脂糖凝胶回收：a. 向离心管中加入等体积的琼脂糖凝胶凝胶缓冲液，并将样品与凝胶缓冲液混合均匀。
b. 将混合物加热至65℃，并保温10分钟。
c. 快速冷却混合物至室温，并离心10分钟，从而使琼脂糖凝胶沉淀。
d. 将上清倒掉，并保留沉淀。
6. 洗涤：a. 向琼脂糖凝胶沉淀中加入1 mL 75%乙醇，然后轻轻颠倒离心管，使乙醇与琼脂糖凝胶充分混合。
b. 离心琼脂糖凝胶沉淀和乙醇混合物10分钟，并将上清倒掉。
c. 重复上述步骤一次。
7. 干燥：a. 向琼脂糖凝胶沉淀中加入1 mL无水乙醇，然后快速颠倒离心管，使无水乙醇与琼脂糖凝胶充分混合。
b. 离心琼脂糖凝胶沉淀和无水乙醇混合物10分钟，并将上清倒掉。
c. 重复上述步骤一次。
8. 最终回收：a. 将琼脂糖凝胶沉淀放置在干燥器中，将温度设置为50℃，并将它们完全干燥。
b. 最后，将琼脂糖凝胶沉淀转移到干净的容器中，并储存于冷室中。
请注意，以上操作步骤仅供参考。
在使用试剂盒之前，务必阅读和按照试剂盒的详细说明书执行实验。
琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程
琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程琼脂糖凝胶电泳操作注意事项及流程在进行凝胶电泳操作时，需要注意以下事项：1.缓冲液的使用：缓冲液的离子强度会影响DNA的迁移速度，因此应选择合适的缓冲液，并定期更换或循环使用，避免电泳过程中出现DNA变性的情况。
2.琼脂糖的选择：不同品牌和批次的琼脂糖杂质含量不同，会影响DNA的迁移和荧光背景的强度，因此应有选择地使用。
3.凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，避免出现凝固结块和气泡等影响电泳结果的情况。
4.样品加入量：加样量的多少应根据加样孔的大小和DNA中片段的数量和大小而定，过多的量会导致超载，从而影响电泳结果。
5.DNA标准参照物的使用：电泳系统的变化会影响DNA的迁移，因此需要加入DNA标准参照物进行判定。
6.盐浓度的影响：DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，因此应使用同样的缓冲条件进行平行对照样品以消除这种影响。
7.凝胶浓度的选择：不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA分子，应根据DNA分子的范围来选择凝胶的浓度。
小片段的DNA电泳应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳以提高分辨率。
在加样时，需要注意以下事项：1.使用移液抢将样品加至点样孔，每孔点样的体积一般少于25ul，操作要稳当且细心。
2.加入适量的蔗糖来增加样品的浓度，以使每个样品停留在各自的点样孔中。
3.加入水溶性的阴离子追踪染料，用以观察样品移动的距离。
4.加入标准分子质量样品进行标准曲线的制作。
5.在追踪染料泳动到胶的80%部位时停止电泳，注意电泳期间要安全盖好电泳槽盖，以防止液体蒸发和电击的可能性。
6、在电泳结束后，将凝胶浸泡在浓度为1mg/L的溴化乙锭（EB）中，经过5分钟后，可以看到DNA带的出现。
这是因为EB分子能够插入到DNA的双链核苷酸之间，从而与DNA结合。
另外一种方法是在电泳时向凝胶中加入EB。
7、通过在紫外灯下观察，由于EB分子会发出强烈的橘红色荧光，因此可以很明显地观察到DNA带的存在。
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤试剂准备：5xTBE缓冲液：450mmol/L三硼酸，10mmol/LEDTA，pH8.0。
使用时，将上述存储溶液稀释至0.5倍TBE缓冲溶液10倍，可同时用作电泳和凝胶制备的缓冲溶液。
制胶：①根据凝胶量和凝胶浓度，向琼脂糖瓶中加入一定量的电泳缓冲液（琼脂糖粉的总液体量不得超过锥形瓶容量的50％）。
②用保鲜膜或牛皮纸盖住锥形瓶的嘴，在膜或纸上打一些小孔，然后在微波中加热并溶解琼脂糖。
加热时，当溶液沸腾时，戴上耐热手套并小心地摇动锥形瓶，以充分均匀地溶解琼脂糖。
重复该操作几次，直到琼脂糖完全溶解。
③让溶液冷却至约50°C-60°C。
如有必要，添加溴化乙锭溶液（终浓度为0.5μg/ml）或以1μL/30mL的比例添加DNAgreen染料，并充分混合。
④将琼脂糖溶液倒入橡胶模具中，然后将梳子插入适当的位置。
凝胶的厚度通常在3至5mm之间。
上胶模具如下图所示。
对于小胶水，倒入约25-30mL的琼脂糖溶液，对于大胶水，倒入约60-70mL。
如果需要切割和回收凝胶，可以适当地增稠凝胶。
⑤让胶水在室温下凝固约30分钟至1小时。
上样：①将适量的样品与6x上样缓冲液混合（例如：1μl样品和5μl6x— 1 —上样缓冲液），然后用微量移液器小心地将其添加到样品孔中。
②可根据样品浓度调节样品量。
如果DNA含量低，则可以按照上述比例增加样品量，但总体积不得超过样品罐的容量（小孔通常为40μl，大孔通常为200μl上限取决于粘合膜的规格。
③添加每个样品后，请更换移液器吸头，以防止相互污染。
装入样品时要小心，以免损坏凝胶或刺穿样品罐底部的凝胶。
电泳：①添加样品后，关闭电泳槽盖并立即打开电源。
控制电压保持在110V，电流大于40mA。
②当条带移离凝胶前端约2cm（约40分钟）时，停止电泳。
③拍照并在紫外线下观察。
— 2 —。
蓝色琼脂糖凝胶安全操作及保养规程
蓝色琼脂糖凝胶安全操作及保养规程蓝色琼脂糖凝胶是一种用于蛋白质分离和纯化的常见凝胶。
由于其具有高分辨率和可视化优势，成为实验室中广泛应用的常见试剂。
但是，在使用该试剂时需要注意一些问题，以充分发挥其优势，同时确保实验室人员和环境的安全。
本文将介绍蓝色琼脂糖凝胶的安全操作及保养规程。
1. 实验室人员的安全蓝色琼脂糖凝胶可能对实验室人员的健康造成损害。
在操作过程中，需要注意以下几点：1.佩戴防护手套：蓝色琼脂糖凝胶可能对皮肤造成刺激和敏感，因此在操作过程中需要佩戴防护手套，以避免皮肤接触。
2.使用防护眼镜：在染色过程中，染料可能会溅到面部和眼睛，因此需要佩戴防护眼镜，以避免染料进入眼睛。
3.空气质量：染色过程中会产生烟雾和气味，因此需要确保实验室的空气流通，以避免呼吸不畅。
2. 操作步骤在使用蓝色琼脂糖凝胶时，需要遵循以下步骤：1.为琼脂糖凝胶增加透明度：将琼脂糖凝胶浸泡在去离子水中，以增加透明度，避免背景过度暗淡。
2.加载样品：将样品沿凝胶电泳槽中的负极端点迅速地加载到凝胶中，以避免样品分散或漏出。
3.电泳：设置恰当的电场大小、电压和电泳时间，以确保样品充分分离。
4.去染色：将蓝色琼脂糖凝胶浸泡在去离子水中，以去除多余染料。
最好去除达到期望染色的阶段。
5.水浸泡：将染色后的凝胶浸泡在去离子水中，以消除液体中的过量盐分和缓冲剂。
3. 保养方法正确的保养可以延长琼脂糖的使用寿命，并确保其稳定性。
1.存储条件：将凝胶存储在4°C左右的冰箱中，确保凝胶始终处于潮湿状态。
2.包装：在每次使用完成后，将凝胶置于原始包装中，并确保包装完整。
3.清洗：使用去离子水清洗电泳槽和相关器材，并确保彻底干燥。
4.保养：定期（至少每半年）进行系统性的检查，以确保器材和相关设备的正常运行和完整性。
4. 总结在实验室中操作蓝色琼脂糖凝胶时，需要注意实验室人员的安全，遵循操作步骤，以及正确的保养方法。
正确的操作和保养将有助于确保实验结果的精确和准确，同时确保实验室人员和环境的安全。
琼脂糖凝胶电泳注意事项和常见问题
琼脂糖凝胶电泳注意事项和常见问题(2009-12-13 18:17:23)核酸分子是两性解离分子，在高于其等电点的电泳缓冲液中，其碱基不解离，而磷酸基团全部解离，核酸分子因而带负电荷，电泳时向正极迁移。
琼脂糖主要从海洋植物琼脂中提取而来并经糖基化修饰，为一种聚合链线性分子，使用琼脂糖凝胶作为电泳支持介质，发挥分子筛功能，使得大小和构象不同的核酸分子的迁移率出现较大差异，从而达到分离的目的。
琼脂糖凝胶电泳操作简单、快速，通过调整其使用浓度，使得分辨率达到大多数实验的要求，因此成为分离、鉴定、纯化核酸分子的常用方法。
但操作过程中仍有不少要注意的问题。
1 凝胶制作1．1 凝胶浓度配制凝胶的浓度据实验需要而变，一般在0．8％～2．0％之间，如果一次配制凝胶100 ml，没用完的凝胶可以再次融化，但随着融化次数的增加，水分丢失也越多，凝胶浓度则会越来越高，导致实验结果不稳定，补水办法：一是在容器上标记煮胶前的刻度，煮胶后补充相应的水分至原刻度；二是在煮胶前称重，煮胶后补充水至原重量。
粗略一点的方法是通过多次较恒定的煮胶条件得出一个经验补水值。
以保证凝胶浓度基本维持在原浓度。
核酸染色剂溴化乙锭(ethidium bromide)可加在融化的琼脂糖中，终浓度为0．5 t*g／ml；也可在电泳结束后染色。
1、2 梳板的选用一般每个制胶模具均配有多个齿型不同的梳板，梳齿宽厚，形成的点样孑L容积较大，用于DNA 片段回收实验等；相反，梳齿窄而薄，形成的点样孑L容积就较小，用于PCR产物、酶切产物鉴定等。
梳板的选择主要是看上样量的多少而定，一般来说，上样量小时尽量选择薄的梳板制胶，此时电泳条带致密清晰，便于结果分析。
另外，每次制胶时都要注意梳齿与底板的距离至少要1 mm，否则，拔梳板时易损坏凝胶孑L底层，导致点样后样品渗漏。
当然，点样孑L的破坏还与拔梳板的时间和方法有关，一般凝胶需冷却30min以上方可拔梳板，应急的情况下可以将成型的凝胶块放4℃ 冰箱中冷却15 min 左右，拔梳板的方法是将制胶槽放置在电泳槽中的电泳缓冲液中，然后垂直向上慢慢用力，因为有液体的润滑作用，梳板易拔出且不易损坏点样孑L。
琼脂糖凝胶CL-2B使用说明
琼脂糖凝胶CL-2B使用说明货号：S8731规格：10ml/100ml一、简介琼脂糖凝胶CL-2B是在琼脂糖凝胶2B的基础上通过交联使微球的刚性增强，理化性能提高，有利用于工业生产。
该介质用于生物大分子的凝胶层析。
本品呈白色球状凝胶，无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
二、亲和填料特性项目指标基质2%交联琼脂糖排阻极限70000~40×106(球蛋白)形状球形粒径60~200μm最高流速100cm/h*耐热pH7水中120℃20min耐压0.025MPapH稳定性3~13(长时间)，2~14(短时间，在位清洗)化学稳定性可耐8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍；可耐有机溶剂，如乙醇、DMF、THF、DMS、CH3Cl、丙酮、二甲基甲酰胺、二氯乙烷、吡啶、乙腈*检测条件：层析柱10mm×300mm*柱床高15cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。
三、适用范围本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，可用有机溶剂及1~2mol/L的NaOH在位清洗，适用于工业规模生产，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。
四、注意事项产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。
不能冷冻。
用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。
本产品避免与氧化剂接触；避免长时间暴露在空气中。
保质期：5年。
五、操作步骤：1、装柱凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。
凝胶柱床一般高于60cm。
装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。
以下过程为通用介质装填过程。
若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。
（1）让所有的材料和试剂达到室温。
配制缓冲液。
凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。
2%琼脂糖凝胶电泳
2%琼脂糖凝胶电泳
2%琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和检测DNA分子的方法。
琼脂糖凝胶是一种由琼脂糖（agarose）制成的凝胶，可以形
成一个微孔网络结构，可以通过电泳的方式将DNA分子按大
小分离。
2%琼脂糖凝胶是指在制备琼脂糖凝胶时，琼脂糖的最终浓度
为2%。
通常，在制备琼脂糖凝胶时，将适量的琼脂糖溶解在
缓冲液中，加热溶解并冷却后形成凝胶。
在电泳过程中，将DNA样品混合溶于凝胶溶液中，再倒入凝
胶模具中进行凝胶固化。
然后在电泳缓冲液中通过直流电场，将DNA样品在凝胶中迁移。
由于琼脂糖凝胶的微孔结构，较
小的DNA片段会迁移得更快，而较大的DNA片段则迁移得
较慢。
最终，通过染色等方法可将DNA片段可视化，进而进
行分析和鉴定。
2%琼脂糖凝胶电泳在分离和检测DNA样品方面具有广泛的应用，例如DNA分析、基因测序、PCR产物分析等。
其操作简单、成本较低，因此被广泛应用于分子生物学研究、基因工程和医学诊断等领域。
琼脂糖凝胶电泳标准操作流程
琼脂糖凝胶电泳标准操作流程琼脂糖凝胶电泳操作标准流程一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，具有操作方便、经济快速等优点。
本铜人阵学习DNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术，此关为能力考核，通关成功后，代表具备操作琼脂糖电泳的能力。
二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
如环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形DNA分子(IDNA)。
这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA＞IDNA＞ocDNA影响核酸分子泳动率的因素主要还是：1、DNA分子大小；2、琼脂糖浓度；3、DNA构想；4、所用的电压；5、琼脂糖种类；6、电泳缓冲液核酸电泳中常用的染色剂是溴化乙锭（ethidium bromide EB）。
溴化乙锭是一种扁平分子，可以嵌入核酸双链的配对碱基之间。
在紫外线照射BE-DNA 复合物时，出现不同的效应。
254nm的紫外线照射时，灵敏度最高，但对DNA损伤严重；360nm紫外线照射时，虽然灵敏度较低，但对DNA 损伤小，所以适合对DNA样品的观察和回收等操作。
300nm紫外线照射的灵敏度较高，且对DNA损伤不是很大，所以也比较适用。
三、材料、试剂及器具1、材料不同大小的基因组片段；2、试剂Hind III digest DNA Marker（分子量标准）(TaKaRa)；D2000(TianGen)；BIOWESTAGAROSE（西班牙琼脂糖）；加样缓冲液（6x）：溴酚黄；电泳缓冲液（1×TAE）；溴化乙锭（EB）；3、仪器及器具（1）移液器、吸头、锥形瓶（2）电泳系统：电泳仪、水平电泳槽、托盘、胶托、梳子等。
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琼脂糖凝胶CL-2B使用说明
货号：S8731
规格：10ml/100ml
一、简介
琼脂糖凝胶CL-2B是在琼脂糖凝胶2B的基础上通过交联使微球的刚性增强，理化性能提高，有利用于工业生产。
该介质用于生物大分子的凝胶层析。
本品呈白色球状凝胶，无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
二、亲和填料特性
项目指标
基质2%交联琼脂糖
排阻极限70000~40×106(球蛋白)
形状球形
粒径60~200μm
最高流速100cm/h*
耐热pH7水中120℃20min
耐压0.025MPa
pH稳定性3~13(长时间)，2~14(短时间，在位清洗)
化学稳定性可耐8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍；可耐有机溶剂，如乙醇、DMF、THF、DMS、CH
3
Cl、丙酮、二甲基甲酰胺、二氯乙烷、吡啶、乙腈
*检测条件：层析柱10mm×300mm*柱床高15cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。
三、适用范围
本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点，非特异
性吸附低，回收率高，可用有机溶剂及1~2mol/L的NaOH在位清洗，适用于工业规模生产，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。
四、注意事项
产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。
不能冷冻。
用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。
本产品避免与氧化剂接触；避免长时间暴露在空气中。
保质期：5年。
五、操作步骤：
1、装柱
凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。
凝胶柱床一般高于60cm。
装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。
以下过程为通用介质装填过程。
若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。
（1）让所有的材料和试剂达到室温。
配制缓冲液。
凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。
（2）选择一根一定直径的柱子，长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶（约为柱床体积的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。
（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。
打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。
用缓冲液平
衡柱子，到柱床稳定。
（6）最好用一个装柱器辅助装柱。
装完后柱床上端轻轻刮平，上好柱头。
2、平衡
让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。
3、上样
（1）样品用缓冲液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。
含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理，再上样。
（2）介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。
（3）上样体积约为柱体积的1~2%，越小分离越好。
4、洗脱
用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
5、再生
一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。
6、在位清洗
（1）对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。
（2）对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH去除。
（3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。
清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。
7、注意
在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。
8、去热源
用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。
或用以下方法步骤去
除：
（1）2倍柱体积的70%乙醇；
（2）2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5；
（3）1倍柱体积4M尿素；
（4）3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl；
以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
9、消毒
用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。