香菇中糖类物质离与测定
实验三香菇多糖的分离提取
实验三香菇多糖的分离提取实验三香菇多糖的分离提取一、实验目的让学生了解香菇多糖的理化性质及提取工艺流程，掌握真空浓缩技术。
二、实验原理香菇是一种药食两用真菌，具有提高免疫力、抗癌、降糖等多种生理功能。
水溶性多糖作为香菇主要活性成分之一，主要以β-1,3-葡聚糖的形式，分子量从几万到几十万不等。
通过有机溶剂提取，真空浓缩技术进行分离提取。
三、实验材料与试剂原料：干香菇500g试剂：氯仿、正丁醇、医用纱布、浓硫酸、苯酚、工业酒精四、实验仪器组织捣碎机、水浴锅、旋转蒸发器、1cm比色皿、751分光光度计、电子天平、台式离心机、试管、量筒、烧杯、玻璃棒五、提取工艺流程1. 1kg干香菇切成小块，以1：10（重量比）加入水，用组织捣碎机进行均质；2. 取200mL均质液放入1L烧杯中，再加入300mL蒸馏水，加热至沸后，温火煮沸1小时，（注意：煮沸过程中用玻璃棒不断搅拌，以免烧杯底部发生糊结；并间歇加入少量水，使杯内液体体积保持在500mL左右；3. 加热完毕后，将杯内液体用8层纱布过滤，除去残渣，上清液转入另一烧杯中；4. 将上清液倒入圆底烧瓶中，在旋转浓缩仪上进行浓缩，浓缩条件为-0.1MPa 、60℃，浓缩液体积至100mL左右停止；5. 将浓缩液在1×10000g离心10min，将上清液转入另一烧杯，除去残渣；6. 上清液中加入等体积的氯仿正丁醇浓液（体积比为4：1），搅拌5min，静置30分钟；7. 将混合液体在1×5000g下离心20min,分离水相；8. 在水相中加入终浓度为80%的酒精，搅拌均匀，静置20min，1×5000g下离心10min；9. 取出沉淀物，放入已称重的干燥表面皿中，在真空干燥箱中80℃下真空干燥；10. 干燥后，称重，计算多糖的产率；11. 准确称取干燥后多糖20mg于500ml容量瓶中，加水定容；12. 取定容液2ml加入6%苯酚1ml，混匀，再加入浓硫酸5ml，混匀，放置20min后，于490nm测吸光度；13. 葡萄糖标准曲线的制定：准确称取葡萄糖20mg定容于500ml 容量瓶中，分别取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml，补水至2ml，依12步骤反应液，并分别测吸光度，根据葡萄糖浓度和吸光度绘制标准曲线；14. 根据香菇多糖吸光度和葡萄糖标准曲线，计算多糖纯度。
提取香菇多糖测的实验设计
提取香菇多糖测的实验设计----生物091班曹雅淇实验目的：掌握水溶醇沉法分离多糖类化合物的原理和方法。
实验原理：在组织中，多糖多与蛋白质以共价相结合，所以在生化产品制备工艺中，往往第一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开，以促进多糖在提取时的溶解。
碱性提取可避免多糖中硫酸基团水解而破坏。
现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶处理组织。
提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉淀，也可用其他方法使变性沉淀，如适当调pH和加热等。
实验用具：离心机漏斗铁架台案板、刀洗耳球量筒平底锅烧杯 98%酒精酒精灯天平研钵电炉子香菇石油醚实验方法步骤：1.样品的处理1）称量：将新鲜的香菇洗净后用托盘天平称量其质量，记为m1；2）切碎：称量后的香菇用刀再案板上尽量切碎；3）研磨：切碎后的香菇再放入研钵中研磨，2、香菇汁液的提取1）加水预热：用量筒量取体积为五倍于香菇质量数的蒸馏水，记体积数为v1,然后倒入铝锅中。
随后打开电炉给锅内蒸馏水加热至沸腾；2）装锅：再把研磨后的香菇放进煮沸的蒸馏水中，边煮边搅拌以防香菇粘在锅底。
当水分减少时，在适当时候往锅内加适量的蒸馏水，定容至v1；3）出锅：大约煮1.5h后关掉电路的开关，冷却后将香菇汁液倒出，边倒出边进行过滤；3、过滤漏斗下放置一烧杯并使漏斗管贴着烧杯内壁，接着用四层纱布过滤，过滤时尽量把纱布内的和浸到纱布里的汁液过滤到烧杯中，记下过滤后的体积数为v2；4、蒸发浓缩打开电路的开关，使盛有过滤液的烧杯隔着石棉网在电炉上加热蒸发浓缩，直至体积数为=v35、多糖的提取5.1沉淀1）酒精的配置：配置95%浓度的酒精，酒精的量与v3成1：5的比例，记体积为v4。
盛装酒精的烧杯并用封口膜密封以免酒精挥发；2）静止沉淀：将配置的酒精与浓缩液混合后静置24h，每隔一定时间观察混合液的变化；5.2离心1）多糖的分离：静止后的多糖混合液分别把上清液倒入烧杯中，剩下用酒精沉淀的絮状物装入烧杯里；2）装瓶：拿一只离心用的瓶子装入絮状物和少许上清液总体积约占瓶子的2/3，并用电子天平称出其质量再拿另一只瓶子装入同等质量的上清液。
香菇多糖提取工艺和含量测定方法研究
香菇多糖提取工艺和含量测定方法研究报告1. 研究目标本研究旨在探索香菇中多糖的提取工艺和含量测定方法，以提供一种高效、可行的工艺流程和准确的测定方法，为香菇多糖的应用开发提供科学依据。
2. 方法2.1 香菇多糖提取工艺研究2.1.1 提取试剂选择根据文献综述和前期实验结果，筛选出适合香菇多糖提取的试剂。
常用的试剂有热水、酶解液、强酸、强碱等，选择合适试剂对香菇进行水解提取。
2.1.2 提取工艺优化基于单因素实验和正交实验设计原理，优化香菇多糖提取的工艺参数，包括提取温度、提取时间、料液比等因素。
通过测定提取液中多糖的含量，确定最佳的提取工艺条件。
2.2 香菇多糖含量测定方法研究2.2.1 选择合适试剂反应根据香菇多糖的特性，选用适合的试剂进行反应。
常用的试剂有硫酸、酚硫酸、费林试剂等，可以选择适合的试剂。
2.2.2 建立标准曲线选取不同浓度的香菇多糖标准品，按照测定方法进行测定，记录各标准样品的吸光度或色素生成情况。
根据实验数据，建立标准曲线。
2.2.3 样品预处理将香菇样品经过适当的处理，如研磨、溶解等，使样品中的多糖保持在可测量范围内。
2.2.4 多糖含量测定根据建立的标准曲线和样品的吸光度值，计算出香菇中多糖的含量，并进行统计分析。
3. 发现3.1 香菇多糖提取工艺发现经过实验研究，发现采用热水提取是一种较为有效的香菇多糖提取工艺。
最佳提取条件为提取温度80℃，提取时间2小时，料液比1:10。
3.2 香菇多糖含量测定方法发现在已有的试剂中，硫酸试剂反应较为敏感，可以用于香菇多糖的含量测定。
建立的标准曲线表明，香菇多糖的浓度与吸光度呈现良好的线性关系。
4. 结论本研究通过对香菇多糖的提取工艺和含量测定方法进行深入研究，得出以下结论：1.香菇多糖的热水提取工艺在提取温度80℃，提取时间2小时，料液比1:10的条件下，可获得较高的提取产率。
2.硫酸试剂是一种适用于香菇多糖含量测定的试剂，建立的标准曲线可用于准确测定香菇多糖的含量。
香菇多糖的分离提取
香菇多糖的分离提取一、实验目的掌握水溶醇沉法分离多糖类化合物的原理和方法。
二、实验原理在组织中，多糖多与蛋白质以共价相结合，所以在生化产品制备工艺中，往往第一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开，以促进多糖在提取时的溶解。
碱性提取可避免多糖中硫酸基团水解而破坏。
现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶处理组织。
提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉淀，也可用其他方法使变性沉淀，如适当调pH和加热等。
苯酚试剂可与香菇多糖中的已糖及其糖醛酸起显色反应，生成橙黄色化舍橱，于49Ohm处比色，定量。
三、实验材料1.实验器材循环水式真空泵；旋转蒸发仪；粉碎机；恒温水浴锅；纱布；搪瓷缸；真空干燥器；721型分光光度计；15ml具塞试管。
2．实验试剂（1）95%乙醇；甲醇（化学纯）；乙醚（化学纯）；木瓜蛋白酶（中性）；纤维素酶；0.2 mol/L十六烷基三甲基氢氧化铵水溶液；10 mol/L 氢氧化钠溶液；葡萄糖标准溶液(1mg/ml，10m/m])；苯酚试液。
（2）复合酶液：以PBS缓冲液做溶剂，其中蛋白水解酶浓度为8 %，纤维素酶浓度为4%；（3）苯酚溶液：称取苯酚(AR级)10 g加水190 g溶解后，置于棕色瓶，备用。
四、实验方法步骤（一）香菇多糖的分离1、预处理：取干香菇4 g，用粉碎机粉碎或捣碎。
2、提取：将捣碎的干香菇置于250 ml三角瓶中，在搅拌的条件下加7倍量水混匀, 加热至90℃，搅拌保温60 min，降温至40℃时转移到40℃水浴保温；并加入适量0.45 ml 复合酶（蛋白水解酶浓度为8 %，纤维素酶浓度为4%），pH值为自然(pH 6.4)，搅拌反应60 min，然后迅速升温到90-100 ℃，灭活1min，降温后纱布过滤，收集滤液。
3、浓缩：将以上滤液置于旋转蒸发仪中，然后减压浓缩至l/5体积时，停止浓缩。
4、沉淀：将浓缩液置于搪瓷缸中，在搅拌的条件下，加1 倍量乙醇，然后静置过夜。
香菇中香菇多糖的测定
将香菇颗粒放置到索氏提取容器里面， 向其中添加 90 mL 水，通过电加热进 行回流提取操作，直到提取溶液变为 无色溶液，再将提取液转移到容量为 100 mL 的容量瓶之中，进行定容并摇 晃均匀。精确称取溶液 10 mL，并向 其中添加 150 mL 的乙醇溶液，并摇 晃均匀，然后将其静置于温度为 4 ℃ 的环境之中，经过 12 h 之后液取出， 并进行离心处理，将离心液的上部清 液倾倒，得到沉淀物质加水进行溶解， 将溶解后物质转移到 50 mL 的容量瓶 之中，进行定容处理，并将溶液摇匀， 便得到样品溶液。
2.2.1 对照样品试样制备 精确称取无水葡萄糖试剂 10 mg， 将其放置在 100 mL 的容量瓶之中，然 后加入水并进行定容处理，便可以得 到浓度为 0.1 mg/mL 的对照样品试样。 2.2.2 样品溶液制备 称量鲜香菇 5 g 左右，并且准确计 量称取的数值，将香菇进行粉碎处理， 得到直径约为 2 mm 的香菇颗粒，并
2 香菇多糖含量测定试验
2.1 试验原理
香菇多糖物质在乙醇之中会发生 沉淀现象，能够和水溶性的单糖以及 低聚糖分离，并且和浓硫酸发生反应 会被分解成为单糖，同时在极短的时 间之内发生脱水反应，并形成糠醛物 质或者是羟甲基糠醛物质，再和蒽酮 发生缩合反应，便会形成相应的衍生 物，所得物质自身颜色和香菇多糖含 量存在直接联系，如此便能够通过比 色方法测量多糖物质。 2.2 试验方法
此次试验是在方法学指导下开展 的，制定的试验方法较为简便，而且 操作过程也易于完成，具有相对优良 的稳定性，回收率也相对较高，具有 较大的推广与应用价值。
Technology 科技 分析与检测
香菇中香菇多糖的测定
□ 张春霞 泰安市食品药品检验检测中心
摘 要：此次试验利用紫外可见光光度分析的测量方法，测量香菇多糖含量，并且验证了实验的重复性以及稳定性， 得出此种试验方法较为简便，而且操作过程也易于完成，具有较大的推广与应用价值。
香菇、金针菇、黑木耳多糖的提取与测定
香菇、金针菇、黑木耳多糖的提取与测定作者：杜娟时文静来源：《江苏农业科学》2016年第08期摘要：以香菇、金针菇及黑木耳3种常见食用菌为主要原料，研究了食用菌多糖的提取条件和测定方法。
采用热水浸提、乙醇沉淀的方法提取多糖，然后运用苯酚-硫酸法测多糖含量。
分别从液料比、浸提温度、浸提时间、乙醇浓度进行了单因素试验，在此基础上，设计L9（34）的正交试验，得出3种食用菌多糖提取的最优组合。
结果表明，影响香菇和金针菇多糖提取的主次因素是一致的，依次为浸提温度、乙醇浓度、液料比；而对于黑木耳，液料比是最显著的影响因素，其次为乙醇浓度、浸提温度。
最终测定的多糖含量香菇最高，为3.51%；其次为黑木耳，为3.50%；最低是金针菇，为2.94%。
关键词：香菇；金针菇；黑木耳；多糖；提取；苯酚-硫酸法中图分类号： R284.2文献标志码：文章编号：1002-1302（2016）08-0347-03食用菌中的多糖类物质是增强免疫活性和抗衰老的有效成分之一，具有抗肿瘤、抗病毒、抗突变、抗辐射和降血压等功能[1]。
从食用菌中提取的多糖可作为配料添加到食药保健品中，不仅没有毒副作用，而且还能提供功效高、质量好的产品。
现代医学研究发现，食用菌中显著增强癌症患者抵抗力的生理活性物质即为食用菌多糖[2]。
香菇、金针菇、黑木耳都是日常生活中常见的食用菌，均含有十分丰富的多糖物质。
香菇多糖是一种天然人体免疫调节剂，具有调节人体免疫系统、抗病毒、抗感染以及延缓衰老等作用；金针菇多糖不仅能有效提高人体免疫力，而且还有抗感染、抗氧化、保肝保湿、辅助改善记忆和缓解体力疲劳等保健作用[3]；木耳多糖同样是一类重要的活性物质，在抗肿瘤、抗凝血、抗病毒等方面均有一定的生物活性。
本研究主要以香菇、金针菇、黑木耳为原料，利用水提醇沉法提取多糖，并对提取条件进行优化，分别从液料比、浸提温度、浸提时间、乙醇浓度进行单因素试验，在此基础上设计正交试验，以确定最佳提取条件。
香菇多糖的分离与鉴定课件
10
15
吸光度
y = Ax + C，R2 =
0.8
0.6
0.4
0.2
0 0
10 15 20 25 30 35 40 45 Glucose Concentration (μg/mL)
20
25
30
35
香菇多糖
样品 1
吸光度
测得浓度 （μg/mL）
含糖量 %
样品 2
样品 3
含糖量 % = 测得浓度 / 配制浓度 × 100 %
香菇多糖的分离与鉴定
生物物质分离工程
Name Affiliation
Start
Registered
多糖
抗肿瘤
免疫 调节
抗氧化 降血脂
香菇多糖的分离与鉴定
学习目标
（1）掌握对香菇多糖的提取和分离方法 （2）掌握香菇多糖的总糖含量、单糖组成
和相对分子质量的测定方法
学习内容
（1）多糖的提取 （2）多糖的总糖含量测定 （3）多糖的单糖组成测定 （4）多糖的相对分子质量的测定 （5）多糖的酶解
=
%
3
分子量的测定
实验步骤
高效尺寸排阻色谱法分析香菇多糖相对分子质量 ➢ 配制50mmol/L乙酸铵溶液作为流动相，0.45μm膜过滤，超声30min脱气 ➢ 称取5mg香菇多糖，加1mL水，于60℃ 30min充分溶解，0.45μm膜过滤 ➢ 采用尺寸排阻色谱柱TSKgelG5000 与TSKgelG3000串联，连接蒸发光散射仪，
开速率快、混合物易分离、可平行分析多个样品，酶解后的样
品不需要处理即可点样。
致谢
汕头大学教学改革项目（38030210） 广东省教育创新计划项目（18219114）
香菇多糖的提取实验报告
香菇多糖的提取实验报告一、实验目的本实验旨在探索从香菇中提取多糖的有效方法，并对提取得到的香菇多糖进行初步的定性和定量分析。
二、实验原理香菇多糖是一种水溶性的大分子化合物，其在热水中具有一定的溶解性。
通过热水浸提的方法，可以使香菇中的多糖溶解到水中，然后经过离心、过滤等操作去除杂质，再通过醇沉的方法使多糖沉淀出来，最后经过干燥得到香菇多糖的粗品。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜香菇（市售）、无水乙醇（分析纯）、丙酮（分析纯）、石油醚（分析纯）、葡萄糖标准品、浓硫酸（分析纯）、苯酚（分析纯）等。
2、实验仪器电子天平、恒温水浴锅、离心机、旋转蒸发仪、真空干燥箱、分光光度计、容量瓶、移液管、具塞刻度试管等。
四、实验步骤1、原料预处理将新鲜香菇洗净，去除杂质和根部，切成小块，置于通风处晾干。
然后用石油醚回流脱脂2 次，每次2 小时，以去除香菇中的脂类物质。
脱脂后的香菇用丙酮回流脱色 2 次，每次 2 小时，以去除香菇中的色素。
2、热水浸提将预处理后的香菇放入圆底烧瓶中，按料液比 1:20 加入蒸馏水，在90℃的恒温水浴锅中浸提 3 小时。
期间每隔 30 分钟搅拌一次，以提高提取效率。
3、离心分离浸提结束后，将提取液冷却至室温，然后在 4000 r/min 的转速下离心 15 分钟，取上清液。
4、过滤将上清液用滤纸过滤，去除其中的不溶性杂质。
5、醇沉向过滤后的上清液中缓慢加入 3 倍体积的无水乙醇，边加边搅拌，使多糖沉淀出来。
然后将溶液置于 4℃冰箱中静置过夜。
6、离心收集将醇沉后的溶液在 4000 r/min 的转速下离心 15 分钟，收集沉淀。
7、洗涤用无水乙醇和丙酮依次洗涤沉淀，以去除其中的杂质。
8、干燥将洗涤后的沉淀置于真空干燥箱中，在 60℃下干燥至恒重，得到香菇多糖的粗品。
9、多糖的定性分析（1）苯酚硫酸法：取适量的香菇多糖粗品，用蒸馏水溶解，制成一定浓度的溶液。
然后取 1 mL 溶液，加入 1 mL 5%的苯酚溶液和 5mL 浓硫酸，摇匀后在沸水浴中加热 15 分钟，冷却至室温后，在 490 nm 处测定吸光度。
香菇多糖的检测
一采用梯度稀释的葡萄糖溶香菇多糖含量测定液作标样硫酸o苯酚处理uv测定各溶液的a490和纯化多糖溶液的a490值代入线性方程计算多糖含logo香菇多糖分析检测
香菇多糖的检测
紫元公司：俞柯娜
沈圳珍 盛青青 俞亚丹 赵桑霞 莫高星 王素白 林佩佩 陈苗苗 丁露露
香菇多糖分析检测： 香菇多糖分析检测：
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• 成0. 1g/ L 多糖水溶液,用紫外可见光度计在波长200 • ～800nm 范围内扫描,检测有无核酸、蛋白质等杂峰出 • 现。
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香菇多糖分析检测： 香菇多糖分析检测：
•
三、凝胶柱层析检测:纯化香菇多糖用sephadex G
• O100 葡聚糖凝胶柱(1cm ×15cm) 进行柱层析,洗脱液为 重蒸水,5ml/ h ,每管1ml 连续收集30 管,硫酸O苯酚 • 法逐管检测A490值,以吸收峰值为纵坐标、试管号为横 • 坐标绘制曲线图。
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香菇多糖分析检测： 香菇多糖分析检测：
•
取过200 目筛并经105 ℃ 干燥至恒重的KBr 粉末300 mg、干燥纯化多糖2mg 在玛瑙钵中混合研细, 取 100mg 进行压片, 压片用 • 4000cm- 1～650cm- 1红 外光谱扫描。
四、红外光谱分析:称
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香菇多糖含量测定： 香菇多糖含量测定：
• • • •
一、采用梯度稀释的葡萄糖溶（ 量测定）
香菇多糖含
液作标样,硫酸O苯酚处理,UV 测定各溶液的A490 值, 绘制标准曲线并得到线性回归方程;同时测定粗多糖 和纯化多糖溶液的A490 值,代入线性方程计算香菇多糖分析检测：
• 二、紫外可见光谱分析:称取0. 0100g 纯化多糖配
香菇中多糖的分离与检测
出版社 。1987: 212. [ 5 ] 李体远 ,马冰如. 软枣猕猴桃 AAPSⅠ、AAPSⅡ、AAPS
Ⅲ多糖的分离纯化及组成单糖鉴定 [ J ]. 生物化学与 生物物理学报 , 1992, 24 (4) : 322 - 331. [ 6 ] 孟延发 ,陈耀祖. 半支莲多糖 SPS4 组成的纯化性质及 分析 [ J ]. 生物化学杂志 , 1993, 9 (2) : 225 - 227. [ 7 ] 周慧萍 ,朱海燕. 浒苔多糖的分离 、纯化和分析 [ J ]. 生 物化学杂志 , 1995, 11 ( 1) : 91 - 92. [ 8 ] 商澎 ,梅其炳. 当归多糖组分的高效液相色谱分析 [ J ] . 中国药学杂志 , 2000, 35 ( 5) : 106 - 107. [ 9 ] 靳菊情 ,丁东宁. 黑石耳多糖的初步化学研究 [ J ]. 中 国药学杂志 , 1996, 31 ( 9) : 68 - 69. [ 10 ] 刘美琴 ,李建中 ,孔繁祚. 香菇菌丝体多糖的分离与免 疫功能研究 [ J ]. 生物化学与生物物理学报 , 1999, 31
摘 要 : 采用碱提取法 ,确立了香菇最佳提取条件 :香菇与碱液比为 1 ∶10,温度为 85～90 ℃及 提取时间为 6 h。香菇经碱溶液提取 、醇析 、Savage法脱蛋白等步骤处理后得两份物质 ;再经分离纯化 、 纸层析测定单糖组成 ,紫外扫描测定多糖特征吸收峰及红外扫描测定糖苷键构型等实验 ,证实它们均为 多糖 ,且为双糖 。 关 键 词 : 香菇 ; 多糖 ; 双糖 ; 提取 ; 检测 中图分类号 : TS 245. 9 文献标识码 : A 文章编号 : 1004 0935 (2007) 04 0237 03
香菇中多糖的检测
PPT制作：张伊、周璐倩 资料检索：张伊、周璐倩、卓艳春、金淑珍 后期剪辑：孙梦、王岚
摘要
香 菇具有很高的药用价值，其所含的香菇多糖和双链核 糖核酸可调节人体内免疫功能的T细胞活性,可降低甲基胆蒽诱 发肿瘤的能力，具有较强的抗癌作用，适用于包括白血病在内 的多种恶性肿瘤的食物治疗。同时香菇更是一种优良的食菌， 所含的香菇多糖成分使其味道清香鲜美，营养价值高，深受人 们的喜爱。目前，国内外对香菇多糖的研究比较深入[1]，香菇 多糖的测定方法也不断改进，主要有比色法、滴定法、高效液 相色谱法、薄层层析法等[2]，但都因灵敏度低或所需仪器设备 贵，不宜基层批量香菇多糖检测工作的开展。为寻找一种比较 准确简单且适合基层对批量香菇多糖测定的方法，本文采用苯 酚试剂法测定香菇多糖，结果令人满意。
苯酚—硫酸法
原理 仪器及试剂
绘制标准曲线
样品预处理
香菇多糖的含量测定
原理：
苯酚试剂可与香菇多糖中的已糖及其糖醛酸起显色 反应,生成橙黄色化合物,于490nm 处比色,定量。
仪器：
UV一265紫外分光光度计(日本岛津)；离心机；电热恒温水浴箱； 15 ITIl具塞试管；50 ITIl容量瓶。
试剂：
• 准确吸取200 g／mL葡萄糖标准溶液0．00、0．25、0．50 、0．75、1．00 mL，分别置于15 ITIl具塞试管中，加水 至5 mL，加入苯酚试液各1 mL，摇匀，迅速加入浓硫酸各 5 mL，放置5 min后，置于100℃ 沸水浴上加热60 min， 冷却后加水至刻度，在492 nm处比色，绘制标准曲线。
葡萄糖标准溶液(1、10 mg／m1)：称取1.000 g葡萄糖用水溶解 且定容至1 000 mL，此液1mL相当于1mg葡萄糖，使用时用水稀 释到每ITIl相当于200 g的葡萄糖含量。 苯酚试液:称取苯酚(AR级)10 g加水190 g溶解后，置于棕色瓶 备用。 浓硫酸(AR级)。
香菇 香菇多糖 提取 纯化 检测 含量测定及表征
5
三．地理分布
生态环境：冬春季生于阔叶树倒木上,群生,散生或单
生。 分布地区：山东、河南、浙江、福建、台湾、广东、 广西、安徽、湖南、湖北、江西、四川、贵州、云南、 陕西、甘肃。
6
四．市场分布
随着人们生活水平的不断提高、交流不断广泛，香菇
的营养价值逐步全球人们所熟知并喜爱，近几年来全 国范围内广大农户开始大规模种植，很多地区充分利 用自身的有力天然自然条件广泛的种植香菇，逐步形 成规划化生产，通过农户合作，公司集中收购，统一 销售的方式经行对外推广，全国最大香菇生产种植基 地是河南的西峡和卢氏，西峡是最大的香菇种植基地， 卢氏是全国香菇品质最好的种植地，卢氏拥有得天独 厚的自然条件它不仅孕育了卢氏黑木耳，而且香菇鲜 美品质也逐步得到市场的广泛认可并出口海外，卢氏 县成规模的香菇生产公司如卢氏绿之源特产有限公司， 其充分利用卢氏天然的自然条件和政府支持，发展规 划越来越大，其产品已经出口韩国、日本等国家。
22
金属络合物法: 常用的络合剂有费林溶液、氯化铜、氢氧化钡和醋 酸铅等; 层析法: 有纤维素柱层析、纤维素阴离子交换树脂柱层析、 凝胶柱层析，高压液相柱层析； 超滤法； 制备性区域电泳法[13].
香菇中粗多糖含量的测定的方法比较
香菇中粗多糖含量的测定的方法比较作者：宋三妹来源：《现代食品》 2018年第11期摘要：本文以香菇中粗多糖含量的测定的方法为重点进行阐述，从苯酚+ 硫酸法测定香菇中多糖含量、蒽酮，硫酸法测定香菇中多糖含量两方面进行深入探索与研究，其目的在于加强香菇中粗多糖含量测定的准确性。
关键词：香菇；多糖；苯酚硫酸法；蒽酮硫酸法中图分类号：TS219香菇具有化痰理气、治风破血的功效，经常食用能够有效预防人体各种皮肤炎症、毛细血管破裂以及佝偻病等。
香菇主要含有抗坏血酸、核黄素等，最主要的活性成分为香菇多糖，近些年，相关人员研究发现多糖能够有效加强细胞免疫力，抑制癌细胞生产，对抗肝炎以及病毒皆具有积极作用。
为此，加大对香菇中粗多糖含量的测定力度势在必行。
当下测定香菇中粗多糖含量的常见方法有苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法，具体操作如下。
1 材料1.1 原料和试剂香菇来自药材公司，通过中药教研室鉴定为伞菌科香蕈。
葡萄糖、水是重蒸水；其他试剂皆是分析纯。
1.2 设备可见紫外分光光度仪、电子天平、多功能粉碎机、数控超声仪、数控超声波清洗器、离心机。
2 方法和结果2.1 苯酚+ 硫酸法2.1.1 曲线制备（1）配制葡萄糖对照溶液。
称取10 mg 无水葡萄糖加入100 mL 容量瓶中，添加适量的水溶解后定容，将其摇匀，即制得葡萄糖浓度的浓度为0.1 mg/mL。
（2）绘制标准曲线。
量取对照溶液0.0、0.1、0.3、0.6、1.1 mL 和1.7 mL 分别加入试管之中，加水补充到2.0 mL，分别添加5% 苯酚溶液1 mL，混合完全，迅速添加5 mL 浓硫酸混合均匀，在恒温水中恒温反应15 min，再将其放置到冷水中进行冷却，阻断其继续反应；基于第一份为标准，依照分光光度法，在485 nm 处测定吸光度，以葡萄糖的浓度为纵坐标，以吸光度为横坐标绘制回归曲线，结果得出回归方程为Y=6.371X+0.012，R2=0.998。
2.1.2 供试品溶液的配制与样品测定取0.3 g 的香菇粉，添加5 mL 的水湿润样品，再添加20 mL 95% 乙醇，混合均匀，超声提取30 min，过滤，利用少量的乙醇洗涤滤器，将滤纸与滤渣皆放到烧瓶之中，加入50 mL 的水，加热回流2 h，趁热滤过，利用少量热水清洗滤器，合并洗液和滤液，放到冷却，移到100 mL 的量瓶中，利用水稀释到刻度处，混合均匀，进而得到供试品溶液。
鲜香菇中香菇多糖含量测定方法的研究_刘洁
学 术 论 坛２３０科技创业家 TECHNOLOGICAL PIONEERS香菇别名:花蕈、香信、椎茸、厚菇、花菇。
拉丁学名Lentinus edodes (Berk.)sing 伞菌目口蘑科香菇属味甘性平,食药兼用。
香菇的主要成分是多糖类和不饱和脂肪酸,经热水提取的香菇多糖可调节人休内有免疫功能的T 细胞活性,可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力。
香菇对癌细胞有强烈的抑制作用。
香菇还含有双链核糖核酸,能诱导产生干扰素,具有抗病能力。
目前许多企业已将鲜香菇作为生产原料,投入到相关药品的生产和研发中。
但目前现行鲜香菇药用标准为江苏省药材标准1996年版,该标准规定较为简单,仅有性状与理化鉴别,而香菇多糖的生理活性与其特性和含量直接相关[3]。
因此,准确检测鲜香菇中香菇多糖的含量,具有非常重要的意义。
为此,我们采用了紫外分光光度法对鲜香菇中香菇多糖的含量测定进行实验研究,现将实验结果总结如下。
1 实验1.1实验原理多糖在乙醇中沉淀,与水溶性单糖和低聚糖分离,在浓硫酸作用下水解为单糖分子,并迅速脱水生成糠醛或羟甲基糠醛,然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合,产生蓝绿色的糠醛衍生物,颜色的深浅与粗聚糖的含量成正比,可以用比色法测定多糖的含量。
1.2实验仪器、试剂与材料1.2.1实验仪器L ambda35型紫外-可见分光光度计(PerkinElmer);电子天平(Sartorius CPA225D);KQ-250B 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);LD4-2低速离心机(北京医用离心机厂);DHG-9075A 型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司);HH-2型数显恒温水浴锅(国华电器有限公司);电子万用炉(天津市泰斯特仪器有限公司)。
1.2.2实验材料鲜香菇(购于超市及农贸市场);1.2.3实验试剂D-无水葡萄糖(中国药品生物制品检定所,批号:110833-200503);浓硫酸(南京化学试剂有限公司,批号:11011030030);蒽酮(国药集团化学试剂有限公司,批号:20100720);乙醇(95% 分析醇 南京化学试剂有限公司,批号:11010310002);实验用水均为纯化水。
苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法测定香菇多糖含量比较
苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法测定香菇多糖含量比较一、本文概述香菇多糖作为一种重要的生物活性物质，近年来在食品、医药等领域的应用日益广泛。
准确测定香菇多糖的含量对于其质量控制和应用研究具有重要意义。
目前，苯酚硫酸法和蒽酮硫酸法是常用的两种测定香菇多糖含量的方法。
本文旨在对这两种方法进行比较研究，探讨它们的优缺点和适用范围，为香菇多糖的测定提供更为准确、可靠的方法依据。
本文将简要介绍苯酚硫酸法和蒽酮硫酸法的基本原理和操作步骤。
随后，通过实验对比两种方法在测定香菇多糖含量时的准确性、稳定性和重复性，评估它们的优劣。
还将探讨影响两种方法测定结果的因素，如样品处理、反应条件等，并提出相应的改进措施。
本文的研究结果将为香菇多糖的含量测定提供更为全面、深入的理论依据，有助于推动香菇多糖在食品、医药等领域的应用发展。
也为其他多糖类物质的含量测定提供参考和借鉴。
二、苯酚硫酸法测定香菇多糖含量苯酚硫酸法是一种常用的测定多糖含量的方法，因其操作简便、灵敏度高而广泛应用于食品、医药等领域。
该方法基于多糖在浓硫酸的作用下，能脱水生成糠醛或其衍生物，这些衍生物与苯酚能发生显色反应，生成的有色化合物在特定波长下具有最大吸收，从而可通过比色法测定多糖的含量。
在测定香菇多糖含量的过程中，我们首先需要制备香菇多糖的提取液。
将香菇干燥、粉碎后，用适宜的溶剂（如热水、稀碱等）进行提取，得到多糖的粗提物。
然后，将粗提物进行纯化，去除其中的杂质，得到较为纯净的多糖。
接下来，按照苯酚硫酸法的操作步骤，将多糖溶液与苯酚-硫酸试剂混合，并在沸水浴中加热一定时间，使多糖完全脱水生成糠醛衍生物。
然后，将反应液冷却至室温，用分光光度计在特定波长下测定其吸光度值。
为了得到准确的测定结果，我们需要绘制标准曲线。
选取一系列不同浓度的标准多糖溶液，按照上述方法进行处理，测定其吸光度值，并绘制出标准曲线。
通过比较样品溶液的吸光度值与标准曲线，即可计算出香菇多糖的含量。
香菇多糖提取工艺和含量测定方法研究
香菇多糖提取工艺和含量测定方法研究一、研究背景香菇是一种常见的食用菌，具有丰富的营养价值和药用价值。
其中，香菇多糖是一种重要的生物活性物质，具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等多种生物学活性。
因此，提取香菇多糖并测定其含量具有重要的意义。
二、香菇多糖提取工艺1. 原料准备：选择新鲜的香菇作为原料，洗净后切碎备用。
2. 提取方法：采用水提法进行多糖提取。
将切好的香菇放入适量的水中，加热至沸腾后继续加热2小时左右，然后过滤得到提取液。
3. 沉淀分离：将提取液加入3倍体积的绝对乙醇中搅拌均匀后静置12小时以上，使得多糖沉淀。
然后将沉淀分离出来并用纯水洗净。
4. 浓缩干燥：将分离出来的多糖溶液进行浓缩至一定浓度后干燥得到香菇多糖粉末。
三、香菇多糖含量测定方法1. 蒽醌法：将香菇多糖与蒽醌反应生成有色化合物，通过比色法测定其吸光度从而计算出含量。
具体操作步骤为：取适量的香菇多糖溶液加入适量的蒽醌溶液，加入硫酸后混匀，放置15分钟后用紫外分光光度计测定吸光度。
2. 酚-硫酸法：将香菇多糖与酚反应生成有色化合物，通过比色法测定其吸光度从而计算出含量。
具体操作步骤为：取适量的香菇多糖溶液加入适量的稀硫酸和5%的酚溶液，混匀后放置15分钟后用紫外分光光度计测定吸光度。
3. 高温高压消解法：将香菇多糖样品进行高温高压消解后使用紫外分光光度计进行测定。
具体操作步骤为：取适量的香菇多糖样品加入稀酸后进行高温高压消解，然后用紫外分光光度计测定吸光度。
四、总结提取香菇多糖的工艺主要是采用水提法，然后进行沉淀分离和浓缩干燥。
含量测定方法主要有蒽醌法、酚-硫酸法和高温高压消解法。
这些方法都可以有效地提取香菇多糖并测定其含量，为香菇的开发利用提供了重要的技术支持。
东北产香菇中多糖含量的提取及测定研究
东北产香菇中多糖含量的提取及测定研究陈玉锋,庄志萍,胡志宏(牡丹江师范学院化学化工学院,黑龙江牡丹江157012)摘要 [目的]研究香菇中多糖的提取方法,并对东北产香菇中多糖的含量进行测定。
[方法]分别采取热水浸提法、微波辅助浸提法、超声辅助浸提法探讨了不同香菇多糖提取条件对多糖提取率的影响,确定了超声辅助浸提法为最佳提取方法,并用该方法提取香菇多糖,探讨硫酸-苯酚法测定多糖含量的最佳条件,测定东北产香菇的多糖含量。
[结果]线性方程为y =7.4089c +0.0163,线性相关系数r =0.9987,精密度为RS D <2.00%(n=5)。
[结论]超声辅助浸提法为香菇中多糖含量的最佳提取方法,该方法简便、快速、准确。
关键词 香菇多糖;提取;测定中图分类号 S646.1+2 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2010)26-14286-03Study on the Extracti on a nd Deter m i nation of Lenti nan i n Mushroo ms CHEN Yu -feng et al (Co lledge of Che m istry and Chem i calEng i neeri ng ,M udanji ng N or malU ni versity ,M udanji ang ,H e il ong ji ang 157012)Abstract [Objecti ve]The am i was to study t he extracti on o f the l enti nan i n mushroo m s and deter m i ne t he content of l enti nan .[M et hod]The e ffecti on of different extraction cond i ti ons on extraction efficiency o f l enti nan i n mushrooms by usi ng ho twater ,m i crowave -assisted ex trac -ti on and ultras onic -assisted extracti on met hord ,and trasonic -assisted extraction methord was t he bestm et hord .Then lenti nan was ex tracted by trasonic -assisted extraction me t hord ,and optm i u m conditions o f the deter m i nati on of lenti nan content were studi ed by pheno l-s u lf uri c aci d m et hord to det er m i ne the lentinan content o f nort heastmushroo m s .[R es ults]The li near equation was y =7.4089c +0.0163,and t he li near coe fficientw as 0.9987,t he precision was RS D <2.00%(n=5).[Concl usion]T rasoni c -assi st ed ex tracti on m et hordw as proved to be sm i ple ,rapi d ,accurate and t he best extracti on method .K ey words L enti nan ;Ex tracti on ;D eter m i nati on基金项目 牡丹江师范学院指导项目(KZ2008008);牡丹江师范学院重点项目(Z2008003)。
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香菇中糖类物质离与测定————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：香菇中糖类物质的分离与测定摘要：本实验采用热水浸提和乙醇醇沉的方法提取香菇多糖（Lentinan，LNT），利用正交法得出最佳提取粗多糖的方案，得到的粗多糖回收率为14.05﹪，再对得到的粗多糖进行定性、定量分析。
用苯酚—硫酸法测定已提取出的粗多糖中单寡糖与多糖的含量为35.9%；经过薄层层析和纸层析法分析单糖的组成，其中组成多糖的单糖多属于葡萄糖和阿拉伯糖；用Sepharsose CL—6B柱层析法测定多糖的相对分子量约为5597.58道尔顿。
气象色谱分析单糖含的结果是香菇多糖中的单糖种类有半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、岩藻糖等，其中含量较多的半乳糖和葡萄糖。
关键字：香菇多糖回收率含量组成相对分子量Separation and Determination of carbohydrates in Lentinus edodesAbstract：This experiment extracts of lentinan (Lentinan LNT) by using hot water extraction and ethanol alcohol precipitation method. The orthogonal method to get the optimum extraction of polysaccharides is the best program, resulting polysaccharides recovery of 14.05%, and then to get crude polysaccharide qualitative and quantitative analysis. By using Phenol-sulfuric acid method, extracted polysaccharides single oligosaccharides and polysaccharides content was 35.9%; TLC and paper chromatography analysis monosaccharide composition, the monosaccharide composes mostly of glucose and arabinose; Relative molecular weight of polysaccharide determined by Sepharsose CL-6B column chromatography is about 5597.58 daltons. The results of gas chromatographic analysis of a monosaccharide is galactose, glucose, arabinose, fucose, sugar, and other types of monosaccharides in the lentinan. galactose and glucose are much more among them.Key words： Lentinan; Recoveries; Content; Composition; Relative molecular weight0 引言：糖类化合物是中药的重要成分，随着现代生物化学与分子生物学的不断发展与进步，人们对糖的了解越来越多。
而糖生物学研究对揭示生命本质，实现中药现代化，深入开发中药资源有着重要的意义。
但是,目前多糖的研究主要以陆生植物为主, 有些源于名贵中药,这不利于多糖应用与研究的进一步发展。
因此物美价廉的香菇受到越来越多的关注。
香菇（Lentinus edodes）是侧耳科（Pleara taco）的担子菌，含有多种有效药用成分。
尤其是香菇多糖（Lentinan，LNT）是一种宿主免疫增强剂（Host defense-tiator，HDP），它具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能。
本团队以热水提取法获得香菇多糖（Lentinan，LNT），并对其理化性质，含量和组成进行了一定规模的研究分析，为香菇多糖的开发与利用提供了实验依据。
1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 材料：香菇1.1.2 试剂（1）无水乙醇（2）无水乙醚（3）P2O5 （4）浓硫酸（5）6%苯酚（6）葡萄糖（7）BaCO3（8）显色剂：苯胺-邻苯二甲酸正丁醇饱和水溶液展层剂：正丁醇：乙醇：水=4:1:5（体积比）标准糖样：甘露糖、木糖、半乳糖、葡萄糖等琼脂糖凝胶（12）洗脱液：生理盐水（9g /ml ）蓝色葡聚糖及不同相对分子质量葡聚糖标准样1.1.3仪器（1）电子天平（2）烧杯（3）玻璃棒（4）恒温水浴锅（5）纱布（6）容量瓶（7）真空干燥器（8）分析天平（9）移液管（10）可见光分光光度计（11）水解管（12）滤纸（13）漏斗（14）毛细管（15）硅胶板（16）层析缸（17）烘箱（18）喷雾剂（19）层析柱1cm×90cm （20）恒流泵（21）记录仪（22）自动部分收集器（23）紫外检测仪1.2 香菇中多糖的提取称取晒干的香菇30.32g，用剪刀剪碎成小块，用自来水浸泡约24h后，在80℃下煮提1.5h，用纱布过滤取滤液至铁钢中，再加入少量水按以上方法分别煮提1h、0.5h，将3次得到的滤液在120℃下浓缩至50ml以下，转移至两成为250ml烧杯中，加入3倍体积95%乙醇中，封上封口膜保存。
醇沉后倒出上清，将沉淀3000r/min离心15min，取出沉淀，沉淀依次用无水乙醇、乙醚脱水，P2O5真空干燥过夜，即得粗多糖。
1.3香菇中单寡糖与多糖的含量测定游离的单寡糖多糖中的己糖、糖醛酸在浓硫酸作用下，可脱水生成糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物。
己糖生成的化合物在490nm波长处有最大吸收峰，吸收值与糖含量呈线性关系。
因此可以通过测定单糖的吸收值来测定单糖的含量。
利用此原理便可测定香菇中单糖的含量。
1.3.1 标准曲线的制定本实验的以葡萄糖为标准制定标准曲线，按照如下表格试剂量，分别向6个试管中加入不同量的试剂，并立即摇匀，室温放置10min后于490nm处测定光吸收值，以横坐标为多糖微克数，纵坐标为光吸收值，绘制葡萄糖微克数与光吸收值之间的标准曲线。
试管编号葡萄糖/ml 蒸馏水/ml 6%苯酚/ml 浓硫酸/ml A490nm0 0 1.0 0.5 2.51 0.2 0.8 0.5 2.52 0.4 0.6 0.5 2.53 0.6 0.4 0.5 2.54 0.8 0.2 0.5 2.55 1.0 0 0.5 2.51.3.2 香菇中单寡糖与多糖含量测定将待测样品称取5mg，水溶并定容至50ml，然后取干燥洁净试管，将5mg/50ml待测样品、6%苯酚溶液、浓硫酸依次按照1.0ml：0.5ml：2.5ml的比例加入，混匀。
冷却10min后，静置，以蒸馏水代替糖溶液作对照，在490nm下比色，并做3个重复。
所得数值取平均值，对照标准曲线可得单寡糖与多糖含量。
1.4 香菇多糖的单糖组成分析—薄层层析与纸层析分析法本实验采用2种方法来测定香菇多糖中单糖种类，薄层层析法与纸层析法。
薄层层析是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄层，以液体为流动相的一种层析方法，利用固定相对物质的吸附能力不同而使物质得到分离。
本实验应用吸附薄层层析法，即以硅胶为吸附剂。
根据同一块硅胶板中糖的Rf与标准糖的Rf相比较，即可对单糖的组成进行鉴定。
其中溶质的移动速率Rf等于原点到层析斑点中心的距离与原点到溶剂前缘的距离的比值。
纸层析法是以纸为载体分离不同物质的方法，固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为层析液，根据相同时间内不同样品与标准样移动的距离来确定单糖种类。
1.4.1 薄层层析分析法（纸层析方法与此相同，不再赘述）1.4.1.1香菇多糖酸水解将20mg待测糖样加1mol/l浓硫酸2ml，封管，100℃水解8h，固体BaCO3中和，过滤，浓缩至1ml。
1.4.1.2 点样点样时将硅胶板水平放置，用毛细管在预先标好的位置上（如制板前，在距硅胶板一段2cm处用铅笔画一直线，在直线上，以1.5cm间隔打点作为点样位置）分别点上标准样及待测糖样，点样斑点尽可能小，直径不大于4mm。
待干后，重复点样3~4次，且待测糖样要点在中间。
1.4.1.3 展层将硅胶板放进层析缸内，点样端靠近展层剂，贮液槽内加入展层剂，硅胶板在此密封层析装置中展层。
1.4.1.4 染色待展层剂到达离层析板上沿1~2cm时，取出层析板，记录溶剂前沿，置60℃烘箱中烘干。
后用喷雾器向硅胶板上喷洒显色剂（苯胺-邻苯二甲酸正丁醇饱和水溶液）再经100℃显色15min，即显色各层析斑点。
1.4.1.5 计算相对迁移率Rf测定每个斑点中心距加样原点的迁移距离，计算相对迁移率Rf。
通过Rf判断样品中含有的单糖种类。
1.5 香菇多糖相对分子质量分布分析——Sepharose CL-6B柱层析法本实验主要采用凝胶过滤色谱对所提取的多糖进行相对分子的检测。
凝胶过滤层析主要根据小分子可以进入凝胶网孔，移动进程长;大的分子则被排阻于凝胶颗粒之外，将随洗脱液从凝胶颗粒之间的空隙洗脱下来，移动路程短，迁移的速度快，这样就可以实现我们分离的目的。
本小组首先使用了两个标准样，根据其洗脱体积和相对分子质量制作标准曲线，之后再根据待测样的洗脱体积，得出待测样的相对分子质量，详细步骤如下：1.5.1 凝胶浸泡将琼脂糖凝胶用乙醇浸泡，胀后倒去不易沉下的较细颗粒。
将溶胀后的凝胶抽干，用10倍体积的洗脱液处理约1h ，搅拌后继续除去悬浮的较细颗粒。
1.5.2 装柱将琼脂糖凝胶分析住垂直装好，关闭出口，加入10cm缓冲液。
将处理好的凝胶用等体积的洗脱液搅拌成浆状，自柱顶部沿管壁缓慢加入，待底部凝胶体积约1cm 高时，再打开出口，继续加入凝胶浆，至凝胶沉积至刻度线（80cm）即可。
装柱要求连续、均匀、无气泡。
1.5.3 平衡将洗脱液与恒流泵相连，恒流泵出口端与层析柱入口相连，用2~3倍体积洗脱液进行洗脱和平衡（2~2.2./10min /管）1.5.4 加样与洗脱将柱中多余的液体放出，使液面刚好盖过凝胶，关闭出口，将1ml 样品（第一次加样为相对分子质量为15.3万，第二次为46.17万，第三次为待测样）沿层析柱管壁小心加入，加完后打开底端出口，使液面降至与凝胶面相平时关闭出口，用少量洗脱液洗柱内壁2次，加洗脱液至液面4cm 左右，接上恒流泵，调好流速（流速为2~2.2ml /10min /管），用9g /lnacl 溶液开始洗脱。