食品中细菌总数的检验实验步骤及注意事项
实验三--食品中微生物菌落总数的测定
5、及时将已冷却到46℃的培养基倾入到平皿中，并转动
平皿使其混合均匀
6、37℃倒置培养2天
7、按照计数Biblioteka 则计数五、菌落计数方法 选取菌落数在30~300cfu之间，无蔓延生长的平板 计数 低于30的记录具体菌落数，大于300的可记录为多 不可计，每个稀释度采用2个平行的均数 有较大片状菌落生长者不宜采用， 若片状小于平板一半时且余部均 匀分布，则以半个平板菌落数2 倍报告 无明显界限链状菌落每条单链视 为一个菌落
1、计数结果的表述
若只有一个稀释度平板在30~300CFU，则计算两平行平 板的均数，再乘以稀释倍数报告之 若有连续两个稀释度符合计数要求则按下公式：
所有符合计数要求 的平板菌落数之和
菌落总数
例：10-2=232，244 10-3=33，35 N= (232+244+33+35) (2+2×0.1)×10-2 = 24727
灭菌生理盐水当中，充分振荡，混合均匀，制成
10-1稀释度样品
2、梯度稀释法依次稀释样品到10-4
菌落总数操作流程图
3、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液，用无菌 移液管分别吸取1mL到无菌平皿中，每个稀释度做2个 平皿；同时，吸取1mL无菌生理盐水到1个平皿中作为
空白对照
4、熔化培养基
标准平皿活菌计数法（SPC法）是最常用的活菌计
数法
将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分
散的细胞通过混菌法或涂布法使其均匀分布在平皿
培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落
都由原液中单个细胞发育而来。
反映食品被细菌污染的程度
由于倾注平板法的局限，会有一部分细菌在该实验
简述菌落总数检测程序
菌落总数检测程序是一项常见的微生物检测方法，其目的是确定样品中存在的微生物数量，以评估食品、饮料、制药和环境等领域的卫生状况。
本文将介绍菌落总数检测程序的步骤、工具和注意事项。
1. 样品采集首先需要从待测样品中采集适量的样品，并保证样品的代表性和均匀性。
在采样过程中需要使用无菌器具，并避免手部接触样品，以避免污染。
2. 样品预处理为了减少菌落总数检测时的误差，需要对样品进行预处理。
不同样品的预处理方式不同，但通常包括以下步骤：（1）对固体样品进行破碎和混合，确保样品的均匀性；（2）对液态样品进行搅拌或振荡，使样品中的微生物均匀分布；（3）对含有大量背景杂质的样品，如土壤和食品等，需要进行稀释处理，以便于后续操作。
3. 制备培养基制备培养基是菌落总数检测中至关重要的一步。
各种微生物需要不同的培养基进行培养，但是通常使用通用培养基，如营养琼脂培养基、普通琼脂培养基等。
在制备培养基时需要注意以下几点：（1）使用高质量的培养基原料和纯水；（2）遵循制备指南，按照正确的比例和顺序添加各种原料；（3）将培养基加热至沸腾，以杀死其中的细菌和孢子。
4. 分装和接种将经过预处理的样品分装到无菌平板上，并将平板放置在无菌工作台上。
然后使用无菌技术将培养基倒在平板上，并将培养基均匀涂抹。
最后使用无菌的匙子或移液器接种样品，或者将样品滴入培养基中，并确保接种均匀。
5. 培养和计数将接种好的平板在恒温培养箱中培养，通常是在30-37℃下进行。
培养时间因不同的微生物而异，但通常是24-72小时。
在培养过程中需要注意以下几点：（1）确保培养箱内的温度和湿度稳定；（2）避免平板受到震动或移动；（3）遵守无菌技术，以避免污染。
在培养结束后，使用计数器对菌落进行计数。
菌落是指可见的单个微生物群体，通常呈圆形或不规则形状，并具有明显的色彩和质地。
每个菌落代表一个微生物单元，因此可以根据菌落数量来评估样品中的微生物总数。
6. 结果分析根据菌落总数检测结果，可以评估样品的微生物质量。
菌落总数操作手册
菌落总数操作手册
一、概述
菌落总数是指在一定条件下生长的细菌菌落数，用于评估食品或环境的卫生质量。
本操作手册将详细介绍如何进行菌落总数检测，以确保实验结果的准确性和可靠性。
二、实验材料
1. 培养基：平板计数琼脂（PCA）
2. 试剂：无菌生理盐水
3. 器具：无菌棉签、无菌培养皿、无菌移液管（1mL）、天平、pH计、恒温培养箱、计时器、灭菌锅
三、实验步骤
1. 样品采集：使用无菌棉签采集适量样品，并放入无菌容器中。
对于液体样品，直接使用无菌移液管取样；对于固体或半固体样品，需将样品研磨或搅拌均匀后取样。
2. 样品稀释：将采集的样品进行稀释，使细菌能更好地在培养基上生长。
根据样品性质和预计菌落数，选择适当的稀释倍数。
一般采用10倍稀释法。
3. 制备平板：将PCA培养基加热融化后，冷却至45℃左右，倒入无菌培养皿中，每皿约15mL。
4. 接种样品：将稀释后的样品取1mL加入已制备好的平板中，用无菌玻璃棒均匀涂布在培养基上。
5. 培养：将培养皿倒置放入恒温培养箱中，在37℃下培养24-48小时。
6. 计数：计数平板上的菌落数，并记录结果。
根据实验要求，计算出样品中的菌落总数。
7. 结果报告：根据实验数据，撰写实验报告并向上级汇报检测结果。
四、注意事项
1. 实验前应保证所有器具和试剂的无菌状态，避免交叉污染。
2. 实验过程中要保持清洁卫生，避免人为误差。
实验报告细菌总数检查(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细菌总数检查的基本原理和方法。
2. 了解细菌总数在食品、水质等领域的应用。
3. 培养实验操作技能，提高对微生物检测工作的认识。
二、实验原理细菌总数是指在一定条件下，每克（或每毫升）样品中所含有的细菌总数。
细菌总数是衡量样品微生物污染程度的重要指标。
本实验采用平板计数法测定细菌总数。
三、实验材料与仪器1. 材料：牛奶、自来水、土壤等样品。
2. 仪器：恒温培养箱、天平、无菌试管、无菌棉签、无菌操作台、无菌水、营养琼脂平板、计数器等。
四、实验方法1. 样品处理：将样品按照一定比例加入无菌水中，充分振荡，制成均匀的样品悬液。
2. 制备菌悬液：取适量样品悬液，用无菌吸管加入无菌试管中，依次稀释10倍、100倍、1000倍，备用。
3. 制备平板：将营养琼脂平板在恒温培养箱中培养至凝固。
4. 接种：用无菌棉签蘸取适量菌悬液，均匀涂布于平板表面。
5. 培养与计数：将接种好的平板放入恒温培养箱中，培养24小时后，观察菌落生长情况。
按照菌落数在30～300之间的平板进行计数。
6. 计算细菌总数：根据菌悬液稀释倍数，计算每克（或每毫升）样品中的细菌总数。
五、实验结果与分析1. 实验结果：样品A（牛奶）细菌总数：3.2×10^7 CFU/g样品B（自来水）细菌总数：2.1×10^5 CFU/mL样品C（土壤）细菌总数：5.8×10^7 CFU/g2. 结果分析：样品A（牛奶）的细菌总数较高，可能是因为牛奶在储存、运输过程中受到污染。
样品B（自来水）的细菌总数较低，符合我国饮用水标准。
样品C（土壤）的细菌总数较高，可能与土壤环境有关。
六、实验结论1. 本实验成功掌握了细菌总数检查的基本原理和方法。
2. 通过对样品的细菌总数检测，可以了解样品的微生物污染程度，为食品、水质等领域的质量控制提供依据。
3. 在实验过程中，需要注意无菌操作，避免污染样品。
七、实验反思1. 实验过程中，操作要规范，避免人为因素对实验结果的影响。
探究食品微生物检验中菌落总数测定的注意事项
探究食品微生物检验中菌落总数测定的注意事项食品微生物检验是食品安全监管的重要环节之一，而菌落总数测定则是其中的关键检测项目之一。
菌落总数测定是通过培养菌落来统计食品中的微生物总数，从而判断食品的卫生质量。
菌落总数测定需要严格的操作和注意事项，以确保检测结果的准确性和可靠性。
本文将探讨在食品微生物检验中菌落总数测定的注意事项，希望为相关从业人员提供有益的参考。
一、实验室环境的准备菌落总数测定需要在洁净的实验室环境下进行，因此需要提前准备好实验室环境。
实验室内要保持清洁，定期进行彻底清洁和消毒，并保持通风良好。
要准备好所有实验所需的器皿、培养基、试剂、仪器等，确保实验过程中不会出现因为缺少物品而中断实验的情况。
二、菌落总数测定的样品处理在进行菌落总数测定时，样品的处理至关重要。
从原料采样到检验前的处理都要符合卫生规范，避免外部细菌的污染。
在制备样品时要保持样品的完整性和均匀性，避免在培养过程中造成误差。
要确定好样品的稀释倍数，以确保可以统计出菌落的数量，并且要在操作过程中注意避免造成交叉污染。
三、培养基的选择和制备在菌落总数测定中，培养基的选择和制备直接影响到试验结果的准确性。
要根据样品的特性选择适合的培养基，例如普通营养琼脂培养基适用于大多数食品样品的菌落总数测定。
在制备培养基时要掌握好培养基的温度和时间，确保培养基的质量。
要做好培养基的贮存和保存，避免因为培养基变质而影响试验结果。
四、试验操作的严谨性在进行菌落总数测定时，操作的严谨性至关重要。
要做好个人卫生，佩戴好实验室服装和防护用具，避免人为因素对试验结果产生影响。
要严格控制好培养基的温度、湿度和通风情况，以确保菌落能够正常生长。
在取样、接种、培养和统计菌落数量的过程中，要保持操作的一致性和标准化，避免因为操作不慎而影响试验结果的准确性。
五、结果的解释和比较在获得菌落总数测定的结果后，应当对结果进行仔细的解释和比较。
要对菌落进行分类和计数，以得出最终的菌落数量。
探究食品微生物检验中菌落总数测定的注意事项
探究食品微生物检验中菌落总数测定的注意事项1.样品密闭保存在取样过程中，要尽量避免空气等外界因素的影响，样品必须密闭保存。
一般样品应当在到达实验室后尽快进行检验，以免样品受外界影响导致结果不准确。
如果无法及时检验，则可以将样品冷藏或者冷冻，但是也需要注意将样品密封好，以避免外界细菌的污染。
2.采样量的重视采样量对于总菌落数的测定是非常重要的。
一般情况下，菌落总数的测定一般要求采样量在1-5g之间，但是如果样品比较稀疏，则需要增加采样量，以确保菌落总数的准确性。
另外，在进行样品采集的时候，需要使用无菌工具，并且避免手部与样品接触，以免造成样品的污染。
3.温度和时间的掌控细菌的生长繁殖受到温度和时间的影响，针对食品微生物检验中菌落总数测定，也需要掌控恰当的温度和时间，以获得准确可靠的结果。
通常情况下，菌落总数的测定需要在30°C ± 1°C的温度下进行，持续48个小时，如果菌落总数比较高，则可以适当延长测定时间，但是通常测定时间不应当超过48小时。
4.选择合适的培养基依据不同的食品种类和样品的特性，需要选择合适的培养基，以保证菌落总数的测定准确可靠。
在选择培养基的时候，需要考虑菌落总数测定的灵敏度和特异性，并且需要注意培养基的配制和保存条件，以避免培养基失效。
5.样品的处理和消毒在进行食品微生物检验中，样品的处理和消毒是非常重要的，以避免外界因素的干扰。
通常情况下，需要用适当的方法对样品进行消毒和处理，并确保采样和样品处理的全过程无菌操作。
如样品含有硬壳，应先将其表面用肥皂水清洗干净，并用70%的酒精或经消毒的火柴棒或火烤器在表面进行消毒。
如果样品是炊后食品，可用蒸汽或高压杀菌，使其达到消毒的效果。
如果样品含有高浓度的盐、糖或醋等食品添加剂，需要在消毒前进行浓度调整，以确保检验的准确性。
总之，食品微生物检验中菌落总数的测定需要全过程无菌操作，以确保样品不受外界因素的影响，并且需要在采样、培养基选择、样品处理和等方面注意细节，以保证检验结果的准确、可靠、科学和客观。
食品中菌落总数的测定实验报告
食品中菌落总数的测定实验报告一、实验目的1、学习并掌握食品中菌落总数测定的基本原理和方法。
2、熟练使用无菌操作技术和相关仪器设备。
3、了解食品卫生质量的重要性，以及菌落总数在评价食品卫生状况中的意义。
二、实验原理菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、pH 值、需氧性质等），所得 1g 或 1ml 检样中所含细菌菌落的总数。
菌落总数主要作为判定食品被细菌污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
三、实验材料和设备1、实验材料各种待检食品样品（如牛奶、面包、水果等）营养琼脂培养基无菌生理盐水2、实验设备恒温培养箱高压蒸汽灭菌锅超净工作台无菌吸管（1ml、10ml）无菌培养皿电子天平均质器四、实验步骤1、样品的采集和处理以无菌操作采集具有代表性的食品样品，放入无菌容器中。
对于固体食品，使用均质器将其均质成匀浆；液体食品则直接吸取进行稀释。
2、稀释样品用 1ml 无菌吸管吸取 1ml 样品匀浆或液体样品，注入盛有 9ml 无菌生理盐水的试管中，制成 1:10 的样品稀释液。
用 1ml 无菌吸管吸取 1:10 稀释液 1ml，沿管壁缓慢注入盛有 9ml 无菌生理盐水的试管中，振摇试管混合均匀，制成 1:100 的稀释液。
以此类推，进行适当的梯度稀释。
3、接种选择 2-3 个适宜稀释度的样品稀释液，每个稀释度分别吸取 1ml 注入无菌培养皿中。
及时将 15-20ml 冷却至 46℃左右的营养琼脂培养基倾注于培养皿中，并转动培养皿使其混合均匀。
4、培养待琼脂凝固后，将培养皿翻转，放入 36±1℃的恒温培养箱中培养48±2h。
5、菌落计数培养结束后，取出培养皿，计数每个平板上的菌落数。
菌落计数时，应选取菌落数在 30-300 之间的平板进行计数。
若有两个稀释度的平板菌落数在 30-300 之间，应按两者菌落总数之比值来决定。
实验二-食品中细菌总数的测定
实验二-食品中细菌总数的测定实验目的：1. 学习测定食品中细菌总数的方法及原理。
2. 掌握样品制备、培养基配置、培养条件和结果判定等技术操作步骤。
3. 了解食品中细菌数量的重要性及危害。
4. 提高操作技能和实验室安全意识。
实验原理：细菌总数包括空气中的细菌、物体表面的细菌、食品中的细菌等。
细菌总数的高低能够判断食品是否受到污染，同时也能为保健品、药品的质量控制提供参考依据。
在实验中，利用营养琼脂培养基对食品中的细菌进行恰当的培养，根据菌落数测定样品中细菌的数量。
细菌总数检测的实验步骤如下：实验材料：1. 细菌培养基（营养琼脂）2. 生物安全柜3. 试管、移液管、枪头4. 稀释液5. 干燥消毒容器6. 计时器7. 烧杯、锅钳、电热板8. 抽气泵、乙醇灯9. 干净的接种环、透明胶带实验步骤：1. 样品的制备样品的种类很多，可以是食品、环境污染物、医疗器械、淤泥、药品等。
为保证实验精度，样品采集要在清洁、无菌的生物安全柜下进行。
2. 取样在样品制备前，首先要准备好玻璃管、移液管、枪头等实验用具。
从样品中取1g，用称量仪器称取固态样品或用移液管取液态样品。
根据要求的稀释倍数，将稀释液(通常使用生理盐水或蒸馏水)与样品混合，摇匀制备样品稀释液。
取少量的稀释液进行翻倒，覆盖在盖子里面，盖上后轻轻摇晃，将悬浮液均匀混合。
5. 涂布培养基将制备好的样品稀释液倒入无菌洗涤的烧杯中,加入相应的营养琼脂，用稀释液逐步稀释，按要求的量逐层涂覆在培养基板上。
培养后，将培养基盘盖上胶带，放置在恰当的温度和湿度下进行培养。
通常在符合条件下，一般需要36-48小时的培养时间。
7. 结果判定观察培养出来的菌落，根据菌落形态，确定细菌的种类，可通过颜色、形状、大小、质地、表面等参数对细菌进行分类。
8. 分析对于食品来说，每克细菌总数尽量控制在1000CFU以下，大于此数量就有可能造成人身体健康的危害。
实验注意事项：1. 实验中禁止口舌操作，禁止带手套和大腰围操作。
食品菌落总数检测标准
食品菌落总数检测标准食品安全一直是人们关注的焦点，而食品中的菌落总数是评价食品卫生质量的重要指标之一。
菌落总数是指在一定条件下，菌落在寄主（通常是琼脂培养基）上生长并形成可见菌落的数量。
食品中的菌落总数一般反映了食品是否受到了污染，以及食品是否在生产、加工、储存和运输过程中得到了适当的处理和保护。
根据《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数的测定 GB 4789.2-2010》，食品中的菌落总数检测应该遵循以下步骤和标准：1. 样品的准备。
在进行菌落总数检测之前，首先需要准备好样品。
样品的准备应该符合相应的标准，避免样品受到二次污染或者样品本身就存在菌落过多的情况。
2. 菌落总数的测定方法。
菌落总数的测定方法一般采用平板计数法。
具体操作包括在琼脂培养基上平铺待测样品，然后在适当的温度下培养一定时间，再进行菌落的计数。
在进行菌落总数检测时，需要注意培养基的选择、温度的控制、培养时间等因素，以保证检测结果的准确性。
3. 结果的判定。
根据国家标准，食品中的菌落总数应该符合相应的标准要求。
一般来说，菌落总数超过一定的标准值就属于不合格。
对于不同类型的食品，其菌落总数的标准值也有所不同。
因此，在进行菌落总数检测时，需要参照相应的标准进行判定。
4. 结果的记录和报告。
检测结果应该及时记录并形成检测报告。
检测报告应包括样品的信息、检测方法、检测结果以及判定结果等内容。
检测报告应该保存一定的时间，并且在需要时能够提供给相关部门或者客户查阅。
总之，食品中的菌落总数检测是保障食品安全的重要环节，严格按照国家标准进行检测是确保食品质量的关键。
只有加强对食品菌落总数的检测，才能更好地保障人们的饮食安全，促进食品行业的健康发展。
食品微生物检验中菌落总数测定的注意事项
Apr. 2020 CHINA FOOD SAFETY 121分析与检测1 检验前的准备事项1.1 器皿灭菌处理为了保证测定结果的精确性，应当对检验所用的各类器皿、设备（如吸管、移液器等）做严格的消毒处理，避免这些器皿、设备携带细菌、微生物而影响检验结果。
另外，检验人员进入实验室前，应当换上经过严格消毒的防护服，戴上无菌口罩等，排除外界干扰因素[1]。
1.2 材料准备待检测的食品种类多样，有的是固体，还有的是液体；在固体中有的是溶于水的，还有的是不溶于水的。
为了方便检验，需要对这些样品材料提前做好准备。
例如将固体食品研磨成粉，提高其溶解性，避免菌落堆积，使菌落总数测定结果更加精确。
对于一些液体样品，还要检验其pH 值，如果pH 值明显偏酸性或偏碱性，也有可能会导致菌落难以在培养基上存活。
针对这种情况，检验人员应提前调节样品溶液的pH 值，使其尽量保持中性，为下一步的菌落培养与微生物检验提供良好的条件[2]。
2 制备稀释液的注意事项在制备稀释液之前，首先要准备好25 mL 的样品以及225 mL 经过灭菌处理的稀释液，将这两者进行混合并且搅拌均匀。
而后结合样品受污染程度以及食品卫生标准，来判断选择何种稀释度，并且围绕这一稀释度进行连续的递增稀释，其递增的幅度为10倍，在稀释时，为了保证稀释倍数的准确性，使用1 mL 的灭菌吸管进行稀释。
3 平板接种与培养的注意事项3.1 注入稀释液选取一个带盖的平底器皿，将制备好的稀释液注入到器皿中。
注意不要将器皿的盖子完全打开，而是打开一个小口。
先使用量筒，量取2 mL 稀释液，然后使用吸管吸取量筒内的稀释液，将吸管的一端从缺口处插入，约1 cm，让稀释液从缺口位置沿着器皿侧壁流下[3]。
3.2 加热琼脂块琼脂块是制作培养基的主要材料，需要将固体琼脂块加热融化。
高温会破坏琼脂块的营养，因此加热时应当选择50 ℃的水浴，保证温度适宜。
升温过程要缓慢，温度升高的过快会造成水汽凝结，这些冷凝水滴入培养基上，会加速细菌的繁殖。
细菌菌落总数的测定注意事项
细菌菌落总数的测定注意事项检测过程中的注意事项：1、在GB 4789.2的培养条件下所得结果，只包括一群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。
2、根据食品卫生标准要求和对样品污染情况的估计，选择2~3个稀释度。
加入样品时要注意外来的污染。
3、为防止细菌增殖及产生片状菌落，在加入样液后，应在15min 内倾注培养基。
检样与培养基混匀时，可先向一个方向旋转，然后再向相反方向旋转。
旋转中应防止混合物溅到皿边的上方。
4、培养基倾注的温度与厚度是实验正确与否的关键。
（倾注的温度：一般水浴和倾注温度在46±1℃，温度过高会造成已受损伤的菌细胞死亡，过低会导致琼脂发生轻微凝固。
厚度：直径9cm的平皿一般要求15~20mL培养基，若培养基太薄，在培养过程中可能因水分蒸发而影响细菌的生长）。
培养基凝固后，应在尽快将平皿翻转培养，保持琼脂表面干燥，尽量避免菌落蔓延生长，影响计数。
5、检验过程中还应该用稀释液做空白对照，用以判定稀释液、培养基、平皿或吸管可能存在的污染。
同时，检验过程中应在工作台上打开一块空白的平板计数琼脂，其暴露时间应与检验时间相当，以了解检样在检验过程中有无受到来自空气的污染。
6、每种不同样品中的细菌都有一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及生理条件可能得出不同的结果，因而应根据检测标准的要求选择适当的培养温度和培养时间。
食品：36±１℃，48±2h 。
饮用水：36±１℃，48±2h 。
水产品（指原生态、未加工的水产品）：30±１℃，72±3h。
(36℃培养和30℃培养结果差别较大，同样水产品48h结果和72h也有差别。
7、有时检样的稀释液中往往带有食品颗粒（如奶粉、坚果），在这种情况下，为避免与细菌菌落混淆，可作一检样对照将稀释液与PCA混合，不经培养，置4℃环境放置，在计数时用于对照。
另外也可以在已熔化而保温在46±1℃水浴内的平板计数琼脂中，按100ml加1ml0.5%氯化三苯四氮唑（TTC）水溶液，培养后食品颗粒不变色，细菌为红色。
食品中细菌菌落总数及大肠菌群的检测实验报告
实验九食品中细菌菌落总数及大肠菌群的检测[实验目的]1、了解国家规定的食品质量与细菌菌落总数和大肠菌群数量的重要关系。
2、掌握食品细中细菌菌落总数及大肠菌群的检测方法。
[实验原理]菌落总数根据稀释平板技术法检测每mL/g检样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上,经37℃、24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
它所反映的是检样中的活菌数，细菌数越多，说明污染程度越大，这项指标可作为判定待测样品被污染的程度。
大肠菌群数是在100mL(g)食品中（或1000 mL水中）大肠菌群最近似值。
它是指肠杆菌科中的４个属，即埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
这一菌群致病力不强，具有共同特点：好氧和兼性厌氧、革兰氏染色阴性反应、无芽孢杆菌、37℃培养24-48h能发酵乳糖产酸产气。
大肠菌群在人畜肠道内含量最多，可随排泄物进入水源或污染食品。
国际公认以大肠菌群的存在作为粪便污染指标。
这项指标可判定待测样品有无被粪便污染及污染的程度。
[实验材料]1、检样牛乳（饮料、酱油）2、培养基普通营养琼脂平板、单料乳糖胆盐发酵培养基、乳糖发酵培养基、EMB平板3、仪器和其他物品恒温箱、水浴锅、无菌培养皿、无菌吸管、无菌盐水瓶（内装225 mL无菌生理盐水）、无菌试管（内装9 mL无菌生理盐水）、灭菌剪刀、镊子等[实验内容]1、细菌菌落总数的测定(1)制备样品及样品稀释取待测样品（牛乳、酱油）一瓶，用点燃的酒精棉球烧灼瓶口，若是塑料瓶则用75%的酒精棉球擦拭灭菌。
在无菌条件下取样25 mL放入内装225 mL生理盐水的瓶中，充分混匀，制成10-1的稀释液。
用1 mL无菌吸管吸取10-1稀释液1mL，沿管壁徐徐注入装有9mL无菌生理盐水的试管中（注意，吸管尖端不要触及管内稀释液），振荡试管，混合均匀，制成10-2的稀释液。
另取1mL无菌吸管，按上述操作方法做成10-3稀释液。
每次稀释，换用一支无菌吸管，共做10-1、10-2、10-3三个稀释度，分别含样品0.1mL，0.01mL，0.001mL。
食品中细菌总数的检验实验步骤及注意事项
食品中细菌总数的检验实验步骤及注意事项食品中细菌总数的检验实验步骤及注意事项一、实验目的要求1、了解细菌总数检验的意义。
2、掌握样品稀释处理的方法和菌落总数计数的方法3、掌握国标法测定菌落总数的方法和技能4、熟练无菌操作技术。
二、原理菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。
菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
三、试剂和仪器（一）最先准备的器材（清洗、烘干、包扎、灭菌）规格名称1、500ml广口瓶2、500ml三角瓶3、250ml三角瓶4、18×180mm试管数量1个1个2个3支用途:稀释样品配制:生理盐水配制:营养琼脂稀释样品倒营养平板5、1ml移液管5支6、直径为90mm平皿10套7、250ml量筒1支8、玻璃珠：直径约5mm（二）应灭菌、消毒的器材剪刀1把不锈钢药匙1把称量纸：适量酒精消毒的器材：吸耳球1个，滴管胶头4只，开瓶器（三）应制备的培养基培养基总量所用容器1、0.85%NaCl生理盐水1瓶300ml/瓶500ml三角瓶2、平板计数琼脂（PCA）培养基：2瓶100ml/瓶250ml三角瓶四、实验内容（一）、基本操作过程：样品称量→→样品稀释→→倾注平皿→→培养48小时→→计数报告。
（二）、样品的稀释（样品的处理）样品：袋装乳粉外包装消毒→→无菌称样品25g→→加无菌生理盐水→→加盖振荡摇均匀1、用75%酒精棉球擦拭消毒袋口，用无菌剪刀开封取样。
称取检样25g，放入装有适量玻璃珠的灭菌广口瓶子中，然后用225mL温热的灭菌生理盐水徐徐加入（先加入少量生理盐水将乳粉调成糊状，再全部加入，以免奶粉结团），采用振摇法（用力快速振摇50次,振幅不小于40cm）振摇均匀，即为1:10的稀释液。
菌落总数测定注意事项
菌落总数测定注意事项菌落总数测定是一种常用的微生物检测方法，用于评估食品、水源、环境等样品中的微生物污染程度。
在进行菌落总数测定时，需要注意以下几个方面。
1. 实验室准备在进行菌落总数测定之前，需要进行实验室的准备工作。
确保实验室环境干净整洁，并且有足够的空间来进行操作。
实验室应该配备必要的设备和试剂，如培养基、平板计数器、恒温培养箱等。
2. 样品处理样品处理是菌落总数测定的关键步骤之一。
选择合适的样品容器，并确保其干净无菌。
根据不同样品的特性选择合适的处理方法，如稀释、过滤、均匀搅拌等。
在处理样品时要注意避免污染和交叉感染。
3. 培养基选择选择合适的培养基对于菌落总数测定至关重要。
常用的培养基有营养琼脂、大肠杆菌培养基等。
根据不同的样品特性和检测目的，选择适宜的培养基。
要确保培养基质量良好，无菌且保存期限未过。
4. 接种方法接种方法是影响菌落总数测定结果准确性的重要因素之一。
常用的接种方法有涂布法、均匀涂布法和滴定法等。
在进行接种时，要注意避免气泡的产生和交叉感染，保证每个接种点数量均匀、分散。
5. 培养条件培养条件对于菌落总数测定结果的准确性和可重复性至关重要。
应根据不同微生物的生长特性和培养基要求，设置合适的温度、pH值、湿度等条件，并严格控制培养时间。
要注意防止外界污染和细菌交叉感染。
6. 菌落计数菌落计数是菌落总数测定的最后一步，也是最关键的一步。
在进行菌落计数时，应使用合适的平板计数器或显微镜，并按照指定规则进行计数。
为了提高准确性，建议对每个样品进行多次计数，并取平均值作为最终结果。
7. 数据分析在菌落总数测定完成后，需要对数据进行分析和解释。
应根据实验目的和样品特性，选择合适的统计方法和图表展示方式。
要注意对结果的合理解释，并与相关标准进行比较，评估样品的微生物污染程度。
8. 实验记录和报告在进行菌落总数测定时，要做好实验记录和报告。
记录实验过程中的操作步骤、观察结果、数据等信息，并及时整理归档。
菌落的总数实验报告
一、实验目的1. 掌握菌落总数的测定原理和方法。
2. 了解菌落总数在食品卫生学评价中的意义。
3. 通过实验，学会正确操作实验仪器和试剂，提高实验技能。
二、实验原理菌落总数是指在一定条件下，单位体积（或重量）样品中生长的细菌菌落数量。
本实验采用平板计数法，通过将样品进行稀释，涂布在琼脂平板上，在一定条件下培养，统计菌落数量，从而估算样品中的菌落总数。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 食品样品（如蛋糕、饮料等）- 稀释剂（如无菌生理盐水）- 营养琼脂平板- 铅笔- 灭菌棉签- 灭菌镊子- 培养箱- 移液器- 移液管- 计数器2. 实验仪器：- 电子天平- 高压蒸汽灭菌锅- 恒温水浴锅- 超净工作台四、实验步骤1. 样品准备：- 称取适量样品，用无菌生理盐水进行10倍稀释。
- 将稀释后的样品涂布在营养琼脂平板上。
2. 培养与观察：- 将涂布好的平板放入培养箱中，在适宜的温度下培养24小时。
- 观察平板上的菌落生长情况。
3. 菌落计数：- 选择菌落数量适中的平板，用铅笔在平板背面标记菌落位置。
- 用计数器对菌落进行计数。
- 根据稀释倍数，计算样品中的菌落总数。
五、实验结果与分析1. 实验结果：- 蛋糕样品的菌落总数为5.0×10^6 CFU/g。
- 饮料样品的菌落总数为1.2×10^5 CFU/mL。
2. 分析：- 蛋糕样品的菌落总数较高，可能是由于生产过程中受到污染或保存不当。
- 饮料样品的菌落总数相对较低，可能是由于生产过程中严格把关，保证了产品的卫生质量。
六、实验讨论1. 影响菌落总数测定的因素：- 样品处理方法：样品处理不当会导致菌落总数测定结果不准确。
- 稀释倍数：稀释倍数过大或过小都会影响菌落总数的测定。
- 培养条件：培养温度、湿度等条件会影响菌落的生长。
2. 提高菌落总数测定准确性的方法：- 严格遵循实验操作规程，确保样品处理、稀释、涂布等步骤的正确性。
- 选择合适的稀释倍数，保证菌落数量适中。
食品中菌落总数的测定方法
食品中菌落总数的测定一、实验目的（1）学习与掌握测定食品中菌落总数的基本方法（2）学会菌落总数的报告方式二、实验材料1、仪器与设备:恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。
2、培养基与试剂:75%乙醇、0、85%生理盐水、琼脂培养基:胰蛋白胨5、0g、酵母浸膏2、5g、葡萄糖1、0g、琼脂15、0g、蒸馏水1000mL、pH 7、0±0、23、检样:利乐包装鲜牛奶250ml三、实验方法与步骤1、检验程序菌落总数检验程序:检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养(48±2)h取出→菌落数→报告2、检样稀释及培养(1)以无菌操作,将检样包装打开,用吸管取25ml鲜牛奶,放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠),经充分振摇做成1:10的均匀稀释液。
(2)用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液,下同),振摇试管混合均匀,做成1:100的稀释液。
(3)另取1ml的灭菌吸管,按上项操作顺序作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1ml灭菌吸管。
(4)根据食品卫生检验标准要求与检样的菌落数量,选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。
(5)稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL,并转动平皿使与稀释检样混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。
(6)等琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃恒温箱内培养(48±2)h取出,计算平板内菌落数目乘以倍数,即得1mL样品所含菌落总数。
细菌总数测定注意事项
细菌总数测定注意事项细菌总数测定是微生物学研究中常用的一项实验。
通过测定细菌总数，可以了解到细菌在生物体内的分布情况、生长繁殖的速度以及环境中的微生物负荷等重要信息。
然而，在进行细菌总数测定实验时，我们需要注意以下几个方面的问题，以确保实验的准确性和可靠性。
一、实验前的准备工作在进行细菌总数测定实验前，我们需要做好充分的准备工作。
首先，要准备好所需的培养基、试剂和仪器设备等。
培养基的选择应根据所要测定的细菌种类而定，确保其能够提供足够的营养物质和适宜的生长条件。
同时，还需准备好显微镜、计数器等实验所需的仪器设备。
二、细菌样品的处理在进行细菌总数测定实验时，我们需要对细菌样品进行适当的处理。
首先，要进行细菌的分离和纯化，以确保所得到的菌落是单一的细菌种类。
其次，需要将细菌样品进行适当的稀释，以使细菌的数量在可计数的范围内。
稀释液的选择应与细菌种类和培养基相适应，以保证细菌的生长和计数的准确性。
三、细菌总数的测定方法目前常用的细菌总数测定方法有直接计数法和间接计数法两种。
直接计数法是将稀释液中的细菌直接在显微镜下进行观察和计数，得出细菌的总数。
间接计数法则是通过测定细菌在培养基上形成的菌落数量或测定细菌产生的代谢产物来间接推断细菌的总数。
在选择测定方法时，需要根据实验的目的和条件进行合理的选择，并注意方法的准确性和可重复性。
四、实验操作的注意事项在进行细菌总数测定实验时，需要注意以下几个操作细节。
首先，要保持实验环境的洁净和无菌，以防止细菌的外源性污染。
实验器具和培养基的消毒和灭菌工作要做到位。
其次，要严格按照实验步骤进行操作，避免出现误差。
特别是在进行直接计数法时，观察和计数细菌时要细心和耐心，避免漏计或重复计数。
最后，要做好实验记录和数据分析，及时整理和统计实验结果，以得出准确的细菌总数。
细菌总数测定是一项重要的微生物实验，但在进行实验时需要注意许多细节问题。
实验前的准备工作、细菌样品的处理、测定方法的选择以及实验操作的注意事项都是影响实验结果准确性的重要因素。
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食品中细菌总数的检验实验步骤及注
意事项
一、实验目的要求
1、了解细菌总数检验的意义。
2、掌握样品稀释处理的方法和菌落总数计数的方法
3、掌握国标法测定菌落总数的方法和技能
4、熟练无菌操作技术。
二、原理
菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。
菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
三、试剂和仪器
（一）最先准备的器材（清洗、烘干、包扎、灭菌）
规格名称
1、500ml广口瓶
2、500ml三角瓶
3、250ml三角瓶
4、18×180mm试管数量1个1个2个3支
用途:稀释样品
配制:生理盐水
配制:营养琼脂稀释样品倒营养平板
5、1ml移液管5支
6、直径为90mm平皿10套
7、250ml量筒1支
8、玻璃珠：直径约5mm
（二）应灭菌、消毒的器材
剪刀1把不锈钢药匙1把称量纸：适量酒精消毒的器材：吸耳球1个，滴管胶头4只，开瓶器
（三）应制备的培养基
培养基总量所用容器
1、0.85%NaCl生理盐水1瓶300ml/瓶500ml三角瓶
2、平板计数琼脂（PCA）培养基：2瓶100ml/瓶250ml三角瓶四、实验内容
（一）、基本操作过程：
样品称量→→样品稀释→→倾注平皿→→培养48小时→→计数报告。
（二）、样品的稀释（样品的处理）
样品：袋装乳粉
外包装消毒→→无菌称样品25g→→加无菌生理盐水→→加盖振荡摇均匀
1、用75%酒精棉球擦拭消毒袋口，用无菌剪刀开封取样。
称取检样25g，放入装有适量玻璃珠的灭菌广口瓶子中，然后用225mL温热的灭菌生理盐水徐徐加入（先加入少量生理盐水将乳粉调成糊状，再全部加入，以免奶粉结团），采用振摇法（用力快速振摇50次,振幅不小于40cm）振摇均匀，即为1:10的稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理
1min，制成1：10的均匀稀释液。
2、用1ml灭菌吸管，吸取1∶10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混合均匀，制成1∶100稀释液。
3、另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用另一支1ml灭菌吸管。
4、根据对检样污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的稀释液1ml于灭菌平皿内，每个稀释度做2个平皿。
5、用1ml生理盐水作空白对照试验，做2个平皿。
?注意：
①吸管尖端不要触及瓶口或试管口外部，也不得触及管内稀释液。
②吸管插入检样液内取样稀释时，插入深度要达2.5cm以上,调整时应使管尖与容器内壁紧贴。
③进行稀释时，应使吸管内的液体沿管壁小心流加入，以免增加检液。
④每递增稀释一次，即换用一支1ml灭菌吸管。
（三）、倒平板
稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃的营养琼脂培养基（放置于46℃水浴保温）倾注入平皿约15ml，并转动平皿使混合均匀。
注意：
①培养基不能触及平皿口边沿，加入培养基后可正反两个方向旋转，但不可用力过度，以免溅起触及上盖。
②检样从开始稀释到倾注最后一个平皿，所用时间不宜超过20min。
（四）、培养
待琼胶凝固后，翻转平皿，置36±1℃温箱内培养48h后取出，立即计算平皿内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。
注意：
（1）琼脂凝固后，就立即将平板放入培养箱内进行培养，以免细菌蔓延生长。
（2）
如果把不能立即计数，要将平板放入0～4℃冰箱中，但不能超过24h。
不同产品菌落总数测定的培养时间：
肉、乳、蛋及制品：37℃培养48h水产品：30℃培养48h：清凉饮料、调味品、糕点、果脯、酒类等：37℃培养24h五、结果报告
1、平皿菌落数的选择
（1）选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。
每一个稀释度应采用两个平皿，大于300的可记为多不可计。
（2）其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可以计算半个平板后乘以2，以代表一个平板的菌落数。
（3）当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。
2、菌落总数的计算
（1）若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）中菌落总数结果。
（2）若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按如下公式计算：N=∑C/（n1+0.1n2）d…………（1)式中：N�D样品中菌落数；∑C�D平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；nl�D第一个适宜稀释度平板数；
n2�D第二个适宜稀释度平板数；d�D稀释因子（第一稀释度）。
（3）若所有稀释度的平板菌落数均>300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
（4）若所有稀释度平板菌落数均<30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数计算。
（5）若所有稀释度平板均无菌落生长，则应按<1乘以最低稀释倍数计算。
（6）若所有稀释度均不在30～300之间，有的>300，有的又<30，则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
3、报告方法
（1）菌落数在1～100时，按四舍五入报告两位有效数字。
（2）菌落数≥100时，第三位数字按四舍五入计算，取前面两位有效数字，为了缩短数字后面的零数，也可以10的.指数表示。
（3）若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。
（4）若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
（5）称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。
四、实验内容
（一）、基本操作过程：
样品称量→→样品的稀释→→倾注平皿→→培养5天→→计数报告。
（二）、样品的稀释（样品的处理）
样品：糖果
用灭菌镊子夹取包装纸,称取数块共25g，加入预温至45℃的灭菌水
225mL，待溶化后检验。
1、用75%酒精棉球擦拭消毒袋口，以无菌操作开封取样。
称取检样25g，放入装有适量玻璃珠的灭菌广口瓶子中。
然后加入225mL的灭菌水，采用振摇法（用力快速振摇50次,振幅不小于40cm）振摇30min，振摇均匀，即为1:10的稀释液。
2、用10ml灭菌吸管，吸取1∶10稀释液10ml，注入无菌试管内，另用带橡皮乳头的1ml灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。
3、用1ml灭菌吸管，吸取上述1∶10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌水的试管内，换一支1ml灭菌吸管反复吹吸5次，制成1∶100稀释液。
4、另取1ml灭菌吸管，吸取上述1∶100稀释液1ml，注入含有9ml灭水的试管内，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用另一支1ml灭菌吸管。
5、根据对检样污染的情况估计，选择3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同
时，即以吸取该稀释度的1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做2个平皿。
6、用1ml无菌水作空白对照试验，做2个平皿。
?注意：
①加入检样液时，吸管尖端不要触及瓶口或试管口外部，也不得触及管内稀释液，并将吸管内的液体沿管壁小心流加入，以免增加检液。
②吸管插入检样液内取样稀释时，插入深度要达2.5cm以上,调整时应使管尖与容器内紧贴。
③每递增稀释一次，即换用另一支1ml灭菌吸管。
（三）、倒平板
稀释液移入平皿后，及时将凉至46℃的培养基（可放置于46℃水浴保温）倾注入平皿约15ml，并正反转动平皿使混合均匀。
?注意：
①培养基不能触及平皿口边沿，加入培养基后可正反两个方向旋转，但不可用力过度，以免溅起触及上盖。
②检样从开始稀释到倾注最后一个平皿，所用时间不宜过长。
（四）、培养：
待琼脂凝固后，翻转平皿，置25～28℃温箱内培养5天，从第3天开始观察后取出，共观察培养5天。
五、菌落计数及报告：
选取菌落数在10CFU～150CFU的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。
霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。
菌落数应采用两个平板的平均数。
1）计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。
2）若所有平板上菌落数均大于150CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
3）若所有平板上菌落数均小于10CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
4）若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于1计数。
五、结果报告。