常规病理组织处理教学内容

图1组织脱水不足所制蜡块, 切片镜下观察, 组织挤压、破碎, 核染色不清 图2 补救处理后, 组织平整、无破碎, 核染色清晰
把蜡块放入60度石蜡溶液中,使组织周围石蜡完全 溶解, (1)保持组织块内石蜡成份处于溶融状态。 同时,在75度水浴槽内先后放入盛有30 ml丙酮的A 、B 两组烧杯(50 ml容积),时间差约为5 min,预 热丙酮。(2)待A丙酮完全沸时, 放入组织块, 此 时丙酮内逐渐有白色糊状石蜡沉淀出现, 组织块 有液泡冒出。(3)当B丙酮完全沸时, 迅速将组织 块从A丙酮换入其中, 处理10 min,此时丙酮内石 蜡沉淀明显减少, 组织块仅有少量或无液泡冒出 。(4)取出组织块, 立即投入75度石蜡溶液中, 直 至组织块无气泡冒出, 约15 min。(5)常规包埋、 切片、HE 染色。
微小破碎组织，在包埋操作时易于识别操
作，组织处理前可浸泡在1%伊红液中5-10 分钟。伊红的粉红色在组织处理时可以保 留，但是在随后的切片染色中可以洗去不 影响正常的染色。
常用固定液的介绍和配制
1.10％中性缓冲福尔马林 ： 甲醛100ml， 无水磷酸氢二钠（Na2HPO4
）13g 磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）4.0g， 蒸 馏水900ml 特点：渗透力强，收缩小，对抗原保存较 好，此液固定效果比单纯10％福尔马林要好 。
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五. 浸蜡
概念：浸蜡是组织经透明后，置入熔化的石 蜡中浸渗，一般为2-4小时。浸蜡时间过短， 蜡没有完全渗入组织中，组织过软，切片困 难；浸蜡时间过长，造成组织硬脆，切片也 困难）
目的：将石蜡均匀浸渗至组织中，使组织的 硬度与石蜡的硬度相似，利于切片。浸蜡后 的组织用包埋框将其包埋。包埋用蜡的熔点 要与最后一次浸的石蜡熔点相一致，这样有 利于切片。
脱水剂的种类有很多种，如乙醇、丙酮、 甲醇、异丙基醇等。
丙酮是透明无色易燃液体，易与水、乙醇 和大多数有机溶液相混合。其脱水快，但 渗透差，脱水时间长易引起组织扭曲和变 形。丙酮用于脱水可以去除组织中的脂肪 。另外，坚硬的组织也可以置入甘油乙醇 混合液中浸泡处理。
组织脱水不足的补救
组织脱水不足常影响后继的透明与浸蜡, 表现为含蜡组织块发软，制成蜡块后组织 块与周边石蜡容易发生脱离，此种蜡块往 往难以切出组织薄片或即使强行切出也会 出现组织挤压、破碎，影响病理诊断。
目的：防止组织细胞自溶和腐败，保持 细胞内成分（蛋白质、脂肪、碳水化 合物或酶类）与原有的结构与生活时 相仿。
方法：
1.物理学方法：如低温冷冻，干冰 （ dryice，即固态无水碳酸）冰冻真空脱 水，石蜡渗入法。
2.化学方法：采用各种化学溶液作固定 液，使组织细胞进入固定状态。这是 国内最常用的方法。
常规病理组织处理
一.固定
病理标本的制作和组织处理都必 须先进行固定。如果固定不佳，制片 的其它程序将非常困难，可以说没有 很好的固定就没有很好的HE染色，就 会造成诊断困难，甚至误诊，这足以 证明固定的重要性
概念：组织离体后，采用某些办法使其 细胞内物质尽可能接近其生活状态时 的形态结构和位置的过程。（应用各 种方法使病理标本尽量保持其离体前 状态的过程）
浸蜡温度应与石蜡熔点想对应，有条件 的话（第一道石蜡可用48-50度熔点的石蜡 ），第二、三道石蜡用56-58度熔点的石蜡 ，温箱温度不宜高于62度。尽量不要在蜡 里带入二甲苯。
注意：
1.组织离体及时固定（大标本切开固定） 2.组织块大小适宜（1.5×1. 5×0.2厘米为宜） 3.合理选择固定液（免疫组化可以选择多聚甲醛和中性缓
冲甲醛；我病理科大标本一般选择中性缓冲甲醛，它可以 兼顾常规染色和免疫组化。小标本选用AAF液） 4.固定液的量为组织5倍以上（最少也要没过组织） 5.固定时间得当：大标本（6-12H）小标本（3-6H），时 间太短，影响组织固定的效果，对以后一系列的处理都有 影响，切片质量难以保证。组织长时间的固定，福尔马林 会产生一种酸，影响核的染色。另外，长时间的固定往往 会出现福尔马林色素，尤其是造血器官的标本，更应注意 。固定时间过长，可降低抗原的活性，影响组化。
2.AAF液：95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml ，冰醋酸5ml。
特点：此液除有固定作用外，兼有脱水作 用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水 。
其他还有很多固定液，不一一介绍，有些 液体混合后使用比单独使用效果更佳，作 用互补，真正达到固定的目的。
二.水洗
1.固定后必须水洗（15-30min),流水冲 洗最佳，特别是固定时间长的组织。
四. 透明
概念：透明是组织经脱水后，用能与脱水 剂及石蜡混合的试剂，将脱水剂置换出来， 使石蜡均匀渗透进去，有的透明剂可使组 织呈透明状态，故称得。
常用的透明剂为二甲苯，但它易使组织收 缩、变脆，故透明时间不宜长
二甲苯还能溶解脂肪，因此我们看到切片 中的脂肪细胞胞浆是空泡状，是二甲苯脱 脂所致。
2.水洗不彻底后果：福尔马林色素沉着 、脱片、染色不鲜艳、免疫组化标记 中抗原抗体结合力减弱等现象
三.脱水
概念：利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以 利于有机溶剂的渗入。
浓度与时间：脱水用的乙醇浓度一般从70％~75％ 开始，然后依次80％→95％→100％，即由低浓度 逐步到高浓度。脱水的时间与组织大小、厚薄有 很大关系、组织厚大，脱水时间要长些；而小薄 的组织脱水时间相对的可以短些。组织脱水时间 在低浓度乙醇中可以长些（如70％~80％），而在 高浓度乙醇中要短些，这是因为高浓度的乙醇渗 透力不强，延长脱水时间无益，相反高浓度乙醇 易使组织收缩、变脆，致使以后切片和观察困难 。
原理：
本法以沸丙酮为介质。其原理为: (1) 丙 酮和石蜡不相溶，此特性保证了彼此单向 置换，即以丙酮为溶液时，石蜡被置出； 以石蜡为溶液时，丙酮被置出。(2)以75度 作为脱蜡与浸蜡的适宜温度，远高于丙酮 沸点(56-57)及石蜡溶点(58-60)，能使丙 酮与石蜡有效而快速地进行单向置换。(3) 丙酮作为一种快速脱水剂，目前主要用于 快速石蜡切片的制备 ，适宜温度亦为75度 。