常规病理组织处理教学内容
组织病理学实验教学大纲
3.绘图 画出慢性肝瘀血、慢性肺瘀血、混合血栓的病变形态并进行描述； 画出急性蜂窝织性阑尾炎、各种炎细胞的镜下形态结构并加以描述。
《组织病理学实验》教学大纲
适用临床医学及医学技术类等专业
新乡医学院病理教研室 2010 年 8 月
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一、课程简介
本教学大纲适用于临床医学及医学技术类等专业实验教学所用。该课程是我 院教学计划中的必修课程，属考查科目。根据我院 2010 年教学大纲修订计划， 该课程设置 80 学时，修满获 2 学分，于第二学年的第二学期讲授。
1.掌握显微镜的使用方法和实验报告的书写。 2.掌握病理大体标本的观察方法和正确的描述术语；详细观察病理切片的病 变并正确辩认组织的形态特点。 3.熟悉病理大体标本的取材、固定、脱水、浸蜡、包埋、切片及常规染色的 全过程。 4.通过综合实验，基本认识并掌握疾病从正常组织学到病理学改变过程中的 演变规律。 （三）基本素质 1.态度 培养学生立志献身于医学事业，树立良好的职业道德，培养严谨的、 实事求是的科学作风。 2.能力 在教学中对学生进行多种能力的培养，即观察标本能力，形象思维 能力，阅读能力，综合分析能力，描述表达能力，镜下绘图能力，创造思维能力 等。 3.体质 培养学生养成良好卫生习惯，加强体育锻炼，增强体质。
（二） 评价 1.教学质量按教学大纲要求，由教师、学生及教研室主任综合评定。 2.学生学习成绩由平时成绩的口试、小测试、作业、实物考查及期末考查成
绩相结合组成。 编写 崔 静 审校 赵卫星 2010 年 8 月
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最新[基础医学]常规组织病理技术ppt课件
![最新[基础医学]常规组织病理技术ppt课件](https://img.taocdn.com/s3/m/cd96e827ba0d4a7303763a4c.png)
固定的意义
❖ 将组织浸入某些化学试剂，使细胞内的物质能 尽量保持其生活状态时的形态结构和位置。
❖ 作用：（1）保持组织的结构和形态 （2）保持细胞内特殊的成分 （3）便于区别不同组织成分 （4）有利于切片 （5）保存抗原及DNA、RNA
固定剂的不良影响
❖影响常规染色 ❖固定造成物质损失 ❖组织皱缩
固定的注意事项（一）
❖ 根据研究目的选择合适的固定剂 ❖ 固定液的量 ❖ 固定液的穿透性 ❖ 组织块的大小
固定的注意事项（二）
❖ 固定时间 ❖ 固定温度 ❖ 加热 ❖ 特殊固定
单纯固定液
❖ 甲醛（formaldehyde） ❖ 中性甲醛液 ❖ 丙酮 ❖ 酒精
混合固定液
❖ 乙醇-甲醛液（A-F液） ❖ Bouin液 ❖ Zenker液 ❖ Carnoy液 ❖ 4%多聚甲醛-磷酸缓冲液
切片的注意事项
❖ 组织的取材与固定 ❖ 组织的脱水、透明和浸蜡 ❖ 切片 ❖ 切片机和切片刀 ❖ 特殊要求切片的制作
冰冻切片法
❖ 应用广泛 ❖ 对临床手术病人的术中快速诊断具有重
要意义 ❖ 科研应用
恒冷箱切片
❖ 温度的调节 ❖ 包埋机OCT或羧甲基纤维素 ❖ 切片 ❖ 吹干或固定
载玻片的处理方法
三、活检组织取材注意事项
2. 采取标本时切忌挤压，取材刀要锋利，操 作要正确，以免组织过度受挤压，而导致 细胞结构、形态严重变形而影响诊断，甚 至造成不必要的重新取材，给病人造成不 必要的痛苦，并且延长诊断时间。
三、活检组织取材注意事项
3. 手术切除的内脏器官或较大肿瘤，最好将 标本全部送检，并保持原病变的完整性， 如要切开，应根据不同器官病变按一定的 方法切开。
浸蜡
❖组织经透明后，在溶化的石蜡内浸 渍的过程称为浸蜡。
常规病理检查重点PPT课件
Ⅲ类：蛋白变性类：甲醇，乙醇，醋酸等 Ⅳ类：其他：氯化汞，苦味酸等 。
2、按照成分分类：
单一固定液：如甲醛，酒精，醋酸，锇酸，丙酮等 混合固定液：中性甲醛，AF液等
组织固定
常用的固定方法
蒸汽固定法：甲醛或锇酸可产生蒸汽。用于保存可溶性 成分；小而薄的组织，冷冻干燥组织
脱水剂的种类和效果
--非石蜡溶剂的脱水剂：如乙醇和丙酮等，其组
织在脱水后必须再经二甲苯透明才能浸蜡。 --脱水兼石蜡溶剂的脱水剂：如正丁醇等组织在脱 水后即可直接浸蜡，不经过中间溶剂如二甲苯之类 的试剂。
组织处理
2、透明： 用化学试剂，通常为二甲苯将组织内的脱水剂置换出
来的过程称透明。 透明发挥了一个桥梁作用，透明剂可以与包埋剂和脱
片 3-氨丙基三已氧基硅烷（APES） 带电荷玻片或阳玻片
冰冻切片
常用于术中快速病理诊断 组织不经脱水，透明等步骤，对蛋白，脂肪，各种
酶保存好，合适做组织化学，免疫组化等染色，尤 其对不合适石蜡组织的抗体 组织会膨胀，细胞变大，出现与常规切片的一些差 异
常规HE染色
染色的意义和目的： 用染液对组织切片进行处理，使组织中的不
B5固定液
配制：储备液：氯化汞12g+醋酸钠2.5g+蒸馏水 200ml。使用前加2ml甲醛到20ml储备液中 常用于骨髓，淋巴结，脾和其他造血组织的固定。
组织固定注意事项
组织离体后尽早放入固定液中 固定液体的体积应大于标本的4~5倍，甚至20倍 固定的容器口要方便组织固定后取出 组织固定时间不宜太长，一般不超过72小时，固定
Ｚenker氏液固定后，细胞核和细胞浆染色较为 清晰，特别显示骨骼肌的横纹
病理学教学及实验附大量图片学习教案
细胞周期与肿瘤发展
细胞周期调控失常导致细 胞无限增殖，是肿瘤发展 的重要机制。
细胞凋亡与肿瘤关系
细胞凋亡受阻使得异常细 胞得以存活和增殖，从而 促进肿瘤形成。
血管生成与肿瘤转移
新生血管为肿瘤提供营养 并促进肿瘤细胞进入血液 循环，导致肿瘤转移。
实例分析：各类肿瘤特点及治疗方法
上皮性肿瘤
如乳腺癌、肺癌等，多通 过手术切除病灶，辅以放 疗、化疗等综合治疗。
影响因素
修复过程受多种因素影响，如局部血液供应、感染与异物、神经支配、内分泌及全身营养状 况等。
实例分析：炎症和修复过程炎是肺部的炎症疾病，可由细菌、病毒等感染引起，表现为咳 嗽、咳痰、发热等症状。治疗过程中需控制感染，减轻炎症反应，促进 肺部修复。
实例二
胃溃疡。胃溃疡是胃黏膜的炎症性疾病，与胃酸和胃蛋白酶的消化作用 有关。治疗时需抑制胃酸分泌，保护胃黏膜，促进胃黏膜的再生修复。
风湿性心脏病
风湿热累及心脏，引 起心脏瓣膜炎症、粘 连、增厚等改变，导 致瓣膜狭窄或关闭不 全。
心肌病
包括扩张型心肌病、 肥厚型心肌病等，表 现为心肌结构异常、 心功能减退。
06
呼吸系统病理变化解析
慢性阻塞性肺疾病发生发展机制
慢性炎症过程
中性粒细胞、巨噬细胞等炎症细胞浸 润，释放炎症介质，导致气道和肺组
提前阅读实验指导，了解 实验目的、原理、步骤和 注意事项。
检查实验环境
确保实验室环境整洁、安 全，检查实验设备是否完 好、可用。
准备实验用品
根据实验要求，提前准备 好所需的实验器材、试剂 和样本等。
实验操作步骤详解
01
02
03
操作步骤一
样本处理与制片，包括取 材、固定、脱水、透明、 浸蜡、包埋、切片、烤片、 脱蜡等步骤。
病理组织制片技术基本流程
病理组织制片技术基本流程病理组织制片技术是病理学中的一项重要技术，它通过将病理标本切片、染色和覆盖玻片，使得细胞和组织的形态结构能够被显微镜观察和分析。
这项技术在医学诊断、研究和教学中起到了关键作用。
下面将介绍病理组织制片技术的基本流程。
1. 标本采集与固定病理组织制片的第一步是标本采集与固定。
医生根据患者的病情，选择合适的组织或细胞标本进行采集。
常见的标本包括切除标本、活检标本等。
采集后，标本需要立即进行固定，以保持组织的形态结构和化学成分的稳定。
最常用的固定剂是10%的中性缓冲福尔马林溶液。
2. 组织处理与包埋固定后的标本需要进行组织处理与包埋。
首先，将固定的标本进行去除固定剂的处理，然后用乙醇逐渐脱水，最后用苯麻油进行透明处理。
透明处理后，标本需要被包埋在石蜡中，以便后续的切片操作。
3. 切片与染色石蜡包埋的标本需要进行切片与染色。
首先，使用组织切片机将石蜡块切割成薄片，通常厚度为4-6微米。
切片后，将切片浸泡在水中，使其展开。
然后，将切片依次浸泡在染色剂中，进行组织染色。
不同的染色剂可以突显不同的细胞和组织结构，例如血液常规染色、免疫组化染色等。
4. 脱脂与覆盖玻片染色后的切片需要进行脱脂与覆盖玻片。
首先，将染色后的切片依次浸泡在醇中，去除多余的染色剂。
然后，使用透明剂将切片与玻片粘结在一起，使其固定。
最后，将覆盖玻片放在切片上，使用压力将其压平，使切片与玻片紧密结合。
5. 干燥与封装覆盖玻片后的切片需要进行干燥与封装。
将覆盖玻片的切片放置在干燥箱中，通过温度和时间控制，将其彻底干燥。
干燥后，将切片放置在干燥剂中，以防止切片吸湿。
最后，将切片放入切片盒中，进行封装，以便长期保存和使用。
病理组织制片技术的基本流程包括标本采集与固定、组织处理与包埋、切片与染色、脱脂与覆盖玻片以及干燥与封装。
这一流程确保了病理标本的形态结构得以保留，并使其能够被显微镜观察和分析。
病理组织制片技术的应用广泛，对于疾病的诊断和治疗具有重要意义，同时也为病理学研究和教学提供了有力支撑。
《病理检验技术》课件——病理组织的处理
病理组织的接收、取材
4．将病人姓名、性别、年龄、病历 号、科别、临床诊断、部位、标本 来源、标本例数等逐项录入电脑保 存。 5．作为病理资料除做好计算机录入 工作，还应进行文字登记，以便病 理档案长期保存。
病理组织的接收、取材
病理标本的接收
取材
是将送检标本进行客观描 述并将病变部位组织切成 厚薄适度的小片装入小盒 (进入组织脱水程序)。
适宜的化学试剂,而这种化学试剂能使组织或
细胞内的蛋白质凝固、沉淀成不溶性。
并使组织和细胞尽可能保持原有的形态结 构和所含的各种物质成分。
病理组织的固定
一、病理组织固定的目的
破坏细胞内的 溶酶体酶：防 止细胞自溶
01
杀死外来细菌： 防止组织腐败
02
尽可能保持细胞 活体时的原状
凝固、沉淀细胞内 原有产物：如蛋白 质、糖、脂类、各种
病理检验技术
病理组织的脱水
病理组织的脱水
二、目的：
有利于下一步组织的浸蜡。水与石蜡不 可混溶，组织内只要存留少量水分,就 会阻碍石蜡的浸透。
一、概念：
利用某些能与水相混合的化学试剂浸泡 组织，通过置换作用，使组织内的水分 逐步被置换出来，最后使组织内的水分 被完全脱除，称为组织脱水。
病理组织的脱水
职业教育医学检验技术专业教学资源库
病理检验技术
病理病检理验组技织术的接收、取材 病理组织的包埋
病理组织的接收、取材
病理组织的接收、取材
病理组织的接收、取材
病理标本的接收
病理标本的接收是临床与病理科交 接的一个重要环节，它为开展病理 学检查、病理档案的保存奠定了基 础。
病理组织的接收、取材
病理标本接收程序
（2）病理医师在肉眼观察和取材时，记录人员根据 申请单向医师报告病人基本情况、术中所见、送检医 师特殊要求等，并如实清楚地将病理医师口头描述记 录于记录单上，必要时绘制简图显示大体所见及标本 取材部位。 （3）病理医师取材完毕后，与其共同核实取材内容， 确保组织块及其编号标签准确置人脱水盒内，并在记 录单和取材工作单签上姓名和日期。
病理学教学大纲：教学组织与方法
病理学教学大纲：教学组织与方法
1、实施机构:由医学院病理学教研室执行。
2、组织内容:教案讲义审核、集体教学备课、教学方法研究、教学手段应用。
3、教学方法:
(1)理论教学：采用启发式课堂教学方式为主，自学为辅，使用多媒体课件和传统教学手段相结合。
核心内容以讲授为主，重点内容以介绍为主，一般内容以自学为主。
(2)实验教学:实验类型以自我观察为主，实验提供大体标本、切片标本和病理学网络实习课件；教师作适当的引导和小结。
(3)辅导形式:辅导讲义、课堂答疑、网络查询等。
4、考核办法:
(1)考试目的
病理学是联系基础医学与临床医学的桥梁课，起到承前启后的重要作用。
因此本课程的考试主要目的是检查学生对本课程基本内容掌握情况；同时通过考试督促学生进行系统复习，对课程内容进一步消化掌握，为进入临床医学课学习打下良好的基础。
(2)考试要求
要求学生通过复习考试对病理学的基础理论及常见的重要疾病的名词概念、病变特点及临床病理联系等知识要点均能较清楚地掌握。
(3)考试内容与范围
考题内容以教学大纲重点内容为主，一般内容为辅，不超出病理学课程内容范围。
(4)考核分理论和实习考试两部分。
总分100分
考试采用理论闭卷笔试（期末占80%）；实验标本考试（占10%）；平时成绩（占10%）。
常规病理技术PPT课件
病理科在医院中的作用和地位
病理科的诊断水平对评价一个医院处理疑
难病症的能力具有代表性和决定性。
病理技术
常规病理技术；
特殊染色技术； 免疫组化技术； 超微病理技术； 流式细胞技术； 原位杂交、PCR等其它分子生物学技术。
常规病理技术
通过观察大体标本，取材，制作石蜡包埋HE 染色切片，并对切片进行光学显微镜观察，对 疾病作出诊断的技术，叫常规病理技术。 是病理技术的基础、核心，具有重要的临床
还有极少数病例（约2％），即使使用乐所 有手段或请资深专家会诊，也不能作出诊断。
病理报告的内容
部位：不能明确者打括号，如“右侧”乳腺。
病理诊断：恶性肿瘤病变应包括大体类型、组 织学类型、分化程度、浸润深度、上下切缘、淋 巴结转移情况等。 伴发病变； 瘤旁正常组织情况。
病理报告几个术语的把握
仅从病理资料（肉眼和镜下）能明确诊断者（100％把握）， 直接报告疾病的中文全称。 从病理资料基本能诊断（80％把握），但需结合临床资料才 能达到100％把握时，报告：符合… … 病理资料与临床结合，仍只能有倾向性意见（60％以上把 握），考虑为… … 所有努力只能有个提示意见（40％把握），疑为… …
含骨组织的标本，应脱钙后再取材。 取材的各个环节都应避免将标本号码搞错， 张冠李戴。
标本取材的原则及注意事项（二）
必须取病变与正常组织的交界，有包膜者一定 要取包膜； 病变中每种不同的颜色都要取； 毫米级的组织全部取材； 厘米级的多一厘米多取一块； 肿瘤标本墨汁标切缘。
病理资料原则上不反对（20%以上把握），临床认为有可能， 不除外… …
无论怎样努力，也不足以作出诊断的病例，则描述或说明， 不可做推测性报告。
《病理学》教学大纲2024
引言：概述：《病理学》教学大纲（二）是病理学课程的进阶部分，侧重于探索更深入的疾病机制和相关的实验室技术。
通过学习该课程，学生将进一步理解疾病的病因学、发病机制以及不同病理类型的诊断和治疗方法。
正文：一、病理学原理与方法1.细胞和组织学细胞的基本结构和功能组织学的基本概念和分类组织学染色技术及其应用2.病理学与免疫学免疫学的基本原理和免疫系统的功能免疫病理学的基本概念和分类免疫病理学在疾病诊断和治疗中的应用3.分子病理学分子生物学基础知识分子病理学技术和应用分子病理学在疾病预后评估中的作用4.病理生理学病理生理学的基本概念和原理病理生理学在常见疾病中的应用病理生理学与药物治疗的关系5.实验室病理学技术组织切片制备和染色技术免疫组化和原位杂交技术分子诊断技术在实验室病理学中的应用二、常见疾病的病理学特征1.感染性疾病细菌感染性疾病的病理学特征病毒感染性疾病的病理学特征真菌和寄生虫感染性疾病的病理学特征2.免疫性疾病自身免疫性疾病的病理学特征过敏性疾病的病理学特征移植排斥反应的病理学特征3.代谢疾病代谢紊乱引起的病理学变化遗传代谢疾病的病理学特征肿瘤相关代谢疾病的病理学特征4.其他系统性疾病心血管系统疾病的病理学特征呼吸系统疾病的病理学特征神经系统疾病的病理学特征5.肿瘤病理学肿瘤发生、发展和转移的病理学特征常见肿瘤类型的病理学特征肿瘤病理学在肿瘤诊断和治疗中的应用总结：《病理学》教学大纲（二）涵盖了病理学的原理、方法和常见疾病的病理学特征。
通过深入学习该课程，学生将对疾病的发生和发展机制有更全面的理解，并能够运用相关实验室技术进行疾病的诊断和治疗。
该课程的学习将为学生的医学职业发展奠定坚实的基础。
《常规组织病理技术》课件
它通过对病变组织进行观察、分 析和诊断，为疾病的诊断、治疗 和预防提供重要依据。
组织病理学的重要性
组织病理学是医学诊断中的重要手段 ，能够准确判断病变的性质、程度和 预后，为制定治疗方案提供依据。
它对于癌症等重大疾病的早期发现和 治疗具有重要意义，能够提高治愈率 和生存率。
组织病理学的发展历程
毒物检测
通过病理学技术检测生物 样本中的毒物残留，为司 法鉴定提供证据。
04
常规组织病理技术的 操作流程
取材与固定
取材
选择适当的组织块，确保其具有代表 性，并能够满足病理诊断的需求。
固定
将取下的组织块立即放入适当的固定 液中，以保持组织细胞的形态和结构 ，防止组织自溶。
脱水与透明
脱水
去除组织中的多余水分，使组织变硬，以便进行后续处理。
03
用于其他非肿瘤性疾病的诊断和鉴别诊断。
03
常规组织病理技术的 应用
在疾病诊断中的应用
肿瘤诊断
通过观察组织细胞的形态、排列和结构，判断肿瘤的性质、类型 和分化程度，为制定治疗方案提供依据。
感染性疾病诊断
通过对感染部位的组织进行病理学检查，确定病原体类型，如细菌 、病毒、寄生虫等，为临床治疗提供指导。
封片
将染色后的切片封存在盖玻片下，防止染料脱落和组织变形。常用的封片剂有加拿大树胶或明胶-阿拉伯胶混合 物。
05
常规组织病理技术的 注意事项
取材过程中的注意事项
取材大小
组织块的大小应适中，过大或过小都会影响制片效果 。
取材厚度
组织块厚度应适中，过厚或过薄都会影响脱水透明和 浸蜡包埋过程。
取材标记
组织病理学的发展经历了从简单观察 到复杂技术应用的过程。
组织病理学切片技术教学大纲
组织病理学切片技术教学大纲适用基础、临床、预防、口腔医学类专业一、课程简介《组织学与胚胎学》课程，其主要任务是使学生获得和掌握学会观察人体各器官的组织结构并联系相关功能，具体地熟悉胚胎的发生过程，为学习其它基础医学和临床医学课程奠定必要的形态学基础。
实验课是完成本课程教学的重要环节。
其目的是使学生掌握显微镜的使用方法，掌握人体细胞、组织和器官的微细结构，熟悉受精卵发育过程和胚胎各系统器官的发生演化过程，培养学生的理论联系实践的能力和分析处理问题、解决问题的能力。
《病理学》课程是一门极其重要的医学基础课程，也是由基础医学跨入临床医学的桥梁，在整个医学和医学教育中具有承上启下的作用。
它侧重从形态上观察和研究疾病，并联系代谢和机能的改变，探讨疾病的病因、发病机制以及病理变化与临床表现的关系。
它是一门高度实践性的学科，因此实验课是完成本课程教学必不可少的重要环节。
通过实习不仅加深对理论知识的理解和认证，而且掌握基本病理过程的形态表现及主要疾病时的形态改变；在正确理解和掌握病理学基本理论的基础上学习病理学的观察方法，理论联系实际，使病理与临床有机结合，形态和功能密切联系，提高分析问题和解决问题的能力，并培养学生的创新能力和实践能力，为其以后的临床学习打下坚实的基础。
《组织病理学切片技术》是融解剖学、组织胚胎学及技术、病理学及技术和临床于一体的综合性课程。
是一门新兴的学科。
在当今不断发展、变革的社会中，在学科相互融合，知识相互渗透，技术不断发展、概念不断更新的时代，在时代要求综合素质人才辈出的今天，《组织病理学切片技术》的兴起尤为必要和重要。
主要任务是：使学生获得和掌握学会观察人体重要器官的解剖学特征、组织学结构、病理学变化并联系相关功能，从而在形态上观察、机能上分析、综合上判断和科学上研究疾病。
同时联系病变器官的代谢和机能的改变，探讨疾病的病因、发病机制以及病理变化与临床表现的内在联系和相互的关系。
为由基础走向临床打下坚实的基础。
第一篇 病理技术操作常规
第一篇病理技术操作常规1．病理标本接收、固定及登记常规2．病理标本的描写、收费常规3．组织标本脱水常规4．石蜡包埋操作常规5．石蜡切片操作常规6．冰冻切片操作常规7．细胞学操作常规8．苏木素-伊红染色常规9．冷切片染色常规10．细胞学染色常规11．病理报告登记及发送常规12．特殊染色操作常规13．免疫组化操作常规14．心、肺活检组织标本快速石蜡切片操作常规15．病理资料保存归案及借用、借阅常规作常规1．病理标本接收、固定及登记常规1.1．收检标本时必须仔细检查：a. 送检的标本和送检单上所写的是否符合（常规、冷冻、细胞学检查或其他）；b. 送检标本容器上是否贴有病人的姓名（或送检单联号）和病案号及部位的标签；同一患者同时取有数种组织，或同一组织由不同部位取出，是否应分盛容器，分别注明。
是否在病理送检单上注明送检标本的份数及部位。
c. 标本是否已固定，固定液的种类和量（固定液的量一般为标本的5~10倍）是否合适。
d. 送检单是否安要求逐项填写清楚，字迹是否清晰易于辨认。
若发现有错误、疑问或不符合要求时，应立即查询清楚或做适当处理。
e. 合格者即签收，如标本已干涸或腐败，则不应接收。
1.2．固定：普通病理检查标本一般用10%的甲醛固定液固定，细胞学检查标本用95%酒精固定。
冷冻切片的标本一般不固定。
1.3．对当日送检整体脏器或大件新鲜标本由当日值班医师进行适当处理，使标本保持良好的形态和充分固定：a. 食管、胃、肠管：食管沿纵轴，胃沿大湾，肠管沿系膜附着纵行剪开；若该部位有病变时，应从无病变或病变较轻处剪开，按自然状态平辅在木板上固定。
b. 脾：循脾长轴切开数片，每片约为1.5~2cm固定。
c. 肺叶：从支气管灌入适量的10%福马林液，放入标本缸中固定。
d. 子宫：于前壁做“Y”形切开，下达宫颈管口，上端分别达二侧子宫角，放入标本缸中固定。
e. 乳腺：沿乳腺最长径经乳头切开，在分别向两侧每隔1.5~2cm切开数片，放入标本缸中固定。
常规组织病理技术ppt课件
缺点： ●经酒精固定的标本对核的染色不良，也不利于 染色体的固定。 ●要证明细胞含的脂肪和类脂质时，不能用酒精 固定。 ●如要证明组织内的色素时，不宜以酒精作为固 定剂。 ●不适用于固定大块组织。 ● 酒精价格较贵。
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80%-95%的酒精作为固定剂为好 高浓度酒精组织硬化显著,放置过久组织 收缩明显且质脆,不但影响制片, 组织形态也 不好。 很少单独使用
甲醛氧化 --- 蚁酸与血红蛋白结合—福尔马林色素 避免长时间固定， 固定后流水冲洗
●尿酸结晶可被溶解。
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甲醛固定液的配制:
（1）10% formalin
市售甲醛（浓度为37~40%） 1份
水
9份
(2)中性甲醛 以PH7.2-7.4PBS为溶液配制的甲醛固定液
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优点： ● 如要证明尿酸结晶和保存糖类，则须用 100%酒精固定。 ●在已用别种固定液后，可用70%酒精较 久的保存组织。 ● 酒精既有固定作用，又有脱水作用。
染色
常规染色 染色的目的：增加组织在显微镜下的分辨率
HE染色 主要用以显示各种组织、细胞的一般形
态结构以及疾病过程中病变的发生、发展及修 复的过程。
常规染色 特殊染色
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（一）染色原理
1、细胞核染色原理：核酸阴离子+苏木素阳离子→蓝色
2、细胞浆染色原理：蛋白质阳离子+伊红阴离子→伊红色
PH值低于蛋白质等电点
传统病理学技术
常规组织病理技术
（formalin固定 石蜡切片 HE）
现代新技术
7
免疫组化
HE
乳腺导管
8
免疫荧光
HE
9
结肠癌 EB病毒原位分子杂交
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病理技术理论与操作手册
常规病理技术特殊染色技术理论及操作手册组织化学技术免疫组化染色技术2005年3月第一篇常规标本制作程序第一节组织标本收集取材和固定一、标本收集和查验程序二、活检组织取材（一）取材时必须注意以下问题（二）各种器官取材的方法第二节尸体解剖的受理和规则一、中华医学会规定尸检受理规则二、尸体解剖须知三、尸体剖检的一般常识四、一般尸体解剖的主要步骤与要求五、尸体剖检的取材和固定六、科学研究材料的取材第三节组织固定（一）固定的作用（二）固定的目的（三）固定的注意事项（四）固定液的使用第四节病理常规制作程序一、常规石蜡切片制作法（一）组织脱水（二）组织的透明（三）组织浸蜡（四）组织块包埋（五）蜡块的修切（六）石蜡切片（七）裱片（八）烘烤切片（九）切片的普通染色（十）苏木素的种类及其配制法（十一）伊红染液的配制二、超声波快速石蜡制片法三、快速石蜡制片法第五节冰冻切片（一）冷冻切片的种类（二）冷冻切片的目的（三）冷冻切片的制作方法（四）冷冻切片的快速染色法（一）MW固定组织（二）MW快速石蜡制作法（三）MW技术的特殊染色法（四）MW技术的免疫组化染色法各种组织特殊染色法一、胶原纤维染色法1、Van Gieson染色法2、Masson氏三色染色法二、网状纤维染色法1、Gomori’s氨银法2、Godon和Swet氏法3、Wilder氏法4、Foot氏法三、弹性纤维染色法1、Weigert氏雷锁辛品红法2、Gomori醛品红法3、Unna地衣红技术4、Verhoff氏酒精苏木素技术四、横纹肌染色法1、磷钨酸苏木素染色法（PTAH）2、Masson氏法染色法3、Van Gieson氏法五、基底膜的显示1、六氨银显示法2、PAS显示法3、Masson氏三色染色法4、AFOG法5、六氨银——AFOG联合染色法六、纤维素染色法1、MSB的改良法2、PTAH法七、细菌染色法1、Warthin-Satamy氏法显示幽门螺杆菌2、甲苯胺蓝染色法3、Wade-Fite氏抗酸菌染色法4、Grocott-Gomori氏六氨银改良法显示真菌5、六氨银改良法显示组织胞浆菌八、病毒包涵体染色法1、Macchiaello氏改良法显示SARS病毒包涵体2、Giemsa法显示多种病毒涵体3、伊红和甲基蓝显示合胞和巨细胞病毒包涵体九、淀粉样物的染色法1、甲基紫法2、改良的刚果红甲醇法十、神经系统染色技术（一）苏木素VG法染中枢神经（二）神经细胞尼氏体染色（三）改良的Masland、Glees方法（四）改良的Palmgren氏法染神经纤维（五）改良的Eger’s氏法染变性轴索（六）改良的Loyez氏法染神经髓鞘第三篇组织化学及其显示法一、色素显示法1、硫酸亚铁法2、Masson Fontana氨银法二、含铁血黄素显示法1、Perls亚铁氰化钾法三、脂褐素显示法1、PAS法2、Schmorl氏法四、钙盐显示法1、硝酸银法五、脂类染色法1、苏丹III·IV联合法2、油红法3、苏丹黑B法4、Schultz法显示胆固醇与胆固醇酯六、糖类1、PAS显示法2、AB法3、AB——PAS七、核酸1、Feulgen显示DNA法2、核仁组成区和糖多糖复合显示法3、粘多糖和核仁组成区双染法八、酶组织化学1、改良的Gomori氏硝酸铅法2、改良的Gomori氏硝酸铅法3、Gomoris钙钴法4、α-磷酸萘脂法5、磷酸奈酯AS-TR（或AS-BJ）法6、酸、碱性磷酸酶双染色法第四篇免疫组织化学技术一、免疫组织化学的意义二、免疫组织化学技术的发展概况（一）免疫荧光细胞化学技术（二）免疫酶细胞化学技术（三）非标记抗体酶法（四）亲和细胞化学法（五）碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（六）免疫金银法（七）LSAB法（八）EnVision TM Systems法（九）真空负压LSAB法三、常用免疫组织化学染色方法（一）ABC法（二）LSAB法（三）真空负压LSAB法（四）Envision TM Systems法（五）免疫组化双染色法（I）（六）免疫组化双染色法（II）（七）细胞培养片免疫荧光染色法（八）真空负压、免疫荧光染色法染细胞培养片四、抗原修复（一）为什么要进行抗原修复（二）用什么方法进行抗原修复1、真空负压抗原修复法2、微波辐射抗原修复法3、高压抗原修复法4、隔水热抗原修复法5、电炉加热抗原修复法（三）抗原修复必须注意的问题五、作好免疫组化染色必须注意的问题六、免疫组化阳性病例的评判及相关问题七、常用抗体的应用范围及选用（一）常用上皮细胞及肿瘤标记物（二）常用的时间叶源性组织及其肿瘤的检测抗体（三）肌组织及其相关肿瘤的常用抗体（四）淋巴组织及相关肿瘤检测的常用抗体（五）神经和神经内分泌及其相关肿瘤抗体（六）其它八、免疫组织化学在乳腺癌中的应用第一篇常规标本制作程序第一节组织标本收集取材固定一，标本收集和查验程序。
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图1组织脱水不足所制蜡块, 切片镜下观察, 组织挤压、破碎, 核染色不清 图2 补救处理后, 组织平整、无破碎, 核染色清晰
把蜡块放入60度石蜡溶液中,使组织周围石蜡完全 溶解, (1)保持组织块内石蜡成份处于溶融状态。 同时,在75度水浴槽内先后放入盛有30 ml丙酮的A 、B 两组烧杯(50 ml容积),时间差约为5 min,预 热丙酮。(2)待A丙酮完全沸时, 放入组织块, 此 时丙酮内逐渐有白色糊状石蜡沉淀出现, 组织块 有液泡冒出。(3)当B丙酮完全沸时, 迅速将组织 块从A丙酮换入其中, 处理10 min,此时丙酮内石 蜡沉淀明显减少, 组织块仅有少量或无液泡冒出 。(4)取出组织块, 立即投入75度石蜡溶液中, 直 至组织块无气泡冒出, 约15 min。(5)常规包埋、 切片、HE 染色。
2.AAF液：95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml ，冰醋酸5ml。
特点：此液除有固定作用外，兼有脱水作 用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水 。
其他还有很多固定液，不一一介绍，有些 液体混合后使用比单独使用效果更佳，作 用互补，真正达到固定的目的。
二.水洗
1.固定后必须水洗（15-30min),流水冲 洗最佳，特别是固定时间长的组织。
注意：
1.组织离体及时固定（大标本切开固定） 2.组织块大小适宜（1.5×1. 5×0.2厘米为宜） 3.合理选择固定液（免疫组化可以选择多聚甲醛和中性缓
冲甲醛；我病理科大标本一般选择中性缓冲甲醛，它可以 兼顾常规染色和免疫组化。小标本选用AAF液） 4.固定液的量为组织5倍以上（最少也要没过组织） 5.固定时间得当：大标本（6-12H）小标本（3-6H），时 间太短，影响组织固定的效果，对以后一系列的处理都有 影响，切片质量难以保证。组织长时间的固定，福尔马林 会产生一种酸，影响核的染色。另外，长时间的固定往往 会出现福尔马林色素，尤其是造血器官的标本，更应注意 。固定时间过长，可降低抗原的活性，影响组化。
பைடு நூலகம்
浸蜡温度应与石蜡熔点想对应，有条件 的话（第一道石蜡可用48-50度熔点的石蜡 ），第二、三道石蜡用56-58度熔点的石蜡 ，温箱温度不宜高于62度。尽量不要在蜡 里带入二甲苯。
原理：
本法以沸丙酮为介质。其原理为: (1) 丙 酮和石蜡不相溶，此特性保证了彼此单向 置换，即以丙酮为溶液时，石蜡被置出； 以石蜡为溶液时，丙酮被置出。(2)以75度 作为脱蜡与浸蜡的适宜温度，远高于丙酮 沸点(56-57)及石蜡溶点(58-60)，能使丙 酮与石蜡有效而快速地进行单向置换。(3) 丙酮作为一种快速脱水剂，目前主要用于 快速石蜡切片的制备 ，适宜温度亦为75度 。
微小破碎组织，在包埋操作时易于识别操
作，组织处理前可浸泡在1%伊红液中5-10 分钟。伊红的粉红色在组织处理时可以保 留，但是在随后的切片染色中可以洗去不 影响正常的染色。
常用固定液的介绍和配制
1.10％中性缓冲福尔马林 ： 甲醛100ml， 无水磷酸氢二钠（Na2HPO4
）13g 磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）4.0g， 蒸 馏水900ml 特点：渗透力强，收缩小，对抗原保存较 好，此液固定效果比单纯10％福尔马林要好 。
常规病理组织处理
一.固定
病理标本的制作和组织处理都必 须先进行固定。如果固定不佳，制片 的其它程序将非常困难，可以说没有 很好的固定就没有很好的HE染色，就 会造成诊断困难，甚至误诊，这足以 证明固定的重要性
概念：组织离体后，采用某些办法使其 细胞内物质尽可能接近其生活状态时 的形态结构和位置的过程。（应用各 种方法使病理标本尽量保持其离体前 状态的过程）
四. 透明
概念：透明是组织经脱水后，用能与脱水 剂及石蜡混合的试剂，将脱水剂置换出来， 使石蜡均匀渗透进去，有的透明剂可使组 织呈透明状态，故称得。
常用的透明剂为二甲苯，但它易使组织收 缩、变脆，故透明时间不宜长
二甲苯还能溶解脂肪，因此我们看到切片 中的脂肪细胞胞浆是空泡状，是二甲苯脱 脂所致。
脱水剂的种类有很多种，如乙醇、丙酮、 甲醇、异丙基醇等。
丙酮是透明无色易燃液体，易与水、乙醇 和大多数有机溶液相混合。其脱水快，但 渗透差，脱水时间长易引起组织扭曲和变 形。丙酮用于脱水可以去除组织中的脂肪 。另外，坚硬的组织也可以置入甘油乙醇 混合液中浸泡处理。
组织脱水不足的补救
组织脱水不足常影响后继的透明与浸蜡, 表现为含蜡组织块发软，制成蜡块后组织 块与周边石蜡容易发生脱离，此种蜡块往 往难以切出组织薄片或即使强行切出也会 出现组织挤压、破碎，影响病理诊断。
五. 浸蜡
概念：浸蜡是组织经透明后，置入熔化的石 蜡中浸渗，一般为2-4小时。浸蜡时间过短， 蜡没有完全渗入组织中，组织过软，切片困 难；浸蜡时间过长，造成组织硬脆，切片也 困难）
目的：将石蜡均匀浸渗至组织中，使组织的 硬度与石蜡的硬度相似，利于切片。浸蜡后 的组织用包埋框将其包埋。包埋用蜡的熔点 要与最后一次浸的石蜡熔点相一致，这样有 利于切片。
目的：防止组织细胞自溶和腐败，保持 细胞内成分（蛋白质、脂肪、碳水化 合物或酶类）与原有的结构与生活时 相仿。
方法：
1.物理学方法：如低温冷冻，干冰 （ dryice，即固态无水碳酸）冰冻真空脱 水，石蜡渗入法。
2.化学方法：采用各种化学溶液作固定 液，使组织细胞进入固定状态。这是 国内最常用的方法。
2.水洗不彻底后果：福尔马林色素沉着 、脱片、染色不鲜艳、免疫组化标记 中抗原抗体结合力减弱等现象
三.脱水
概念：利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以 利于有机溶剂的渗入。
浓度与时间：脱水用的乙醇浓度一般从70％~75％ 开始，然后依次80％→95％→100％，即由低浓度 逐步到高浓度。脱水的时间与组织大小、厚薄有 很大关系、组织厚大，脱水时间要长些；而小薄 的组织脱水时间相对的可以短些。组织脱水时间 在低浓度乙醇中可以长些（如70％~80％），而在 高浓度乙醇中要短些，这是因为高浓度的乙醇渗 透力不强，延长脱水时间无益，相反高浓度乙醇 易使组织收缩、变脆，致使以后切片和观察困难 。