大鼠灌注固定取脑解剖取材
大鼠灌注取脑之欧阳音创编
大鼠灌注取脑用途：1.用于常规HE染色，免疫组化分析。
2.冰冻切片可以不做脑组织固定。
3.不可用于western blot和PCR。
4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。
原理：心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。
多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。
必要性：1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。
3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响。
大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP)：流程：1)麻醉2)开胸3)心脏左心室穿针,剪开右心耳4)生理盐水冲水5)4%多基甲醛固定6)取脑7)保存或切片.具体过程：大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时。
Tips：1.多聚甲醛的配置：一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。
用1.0mol/L的NaOH值至7.4，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。
简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。
若是很急，55℃水浴一天，期间不时震荡。
注意，4%的多聚甲醛需临用前配制,配制后需过滤去除小的杂质,避免心脏灌流时造成栓塞影响灌流效果。
大鼠灌注取脑培训资料
大鼠灌注取脑1.用于常规HE 染色，免疫组化分析。
2.冰冻切片可以不做脑组织固定。
3.不可用于western blot 和PCR 。
4.如果观察脑组织的缺血、损伤或者其它病变时，不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。
心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。
多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。
1.脑组织较软，且细胞成份不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。
3.脑内血液都在，HE 染色后，可去除红细胞背景影响。
1) 麻醉2)开胸3)心脏左心室穿针,剪开右心耳4)生理盐水冲水5)4%多基甲醛固定6)取脑7)保存或者切片.大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4% 多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24 小时。
1.多聚甲醛的配置：普通方法为：4％多聚甲醛PBS 缓冲液配法：称取40g PFA 溶于装有500mlDEPC 水的玻璃容器(烧杯或者烧瓶)中，持续加热磁力搅拌至60 ~ 65℃，使成乳白色悬液。
用1.0mol/L 的NaOH 值至7.4，使呈清澈状(滴加)，再加入约500ml PBS，充分混匀(在冰浴或者冷水浴中)，可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或者4℃保存备用。
简便方法：先配好PBS ，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或者温箱密封放置2 天，就能全溶。
若是很急，55℃水浴一天，期间不时震荡。
注意，4%的多聚甲醛需临用前配制,配制后需过滤去除小的杂质,避免心脏灌流时造成栓塞影响灌流效果。
大鼠灌注固定取脑
大鼠灌注固定取脑大鼠灌注固定取脑准备物品：37℃的温生理盐水500ml、10%的中性甲醛或4%的多聚甲醛固定液500 ml、500 ml的输液瓶2个、输液管2副、三通1个,镊子、剪刀、止血钳各2把、灌注针(将12号注射用针头的针尖掐断磨钝圆、光滑即可)1个、麻醉剂、步骤1)将两个输液瓶中分别装满生理盐水和固定液并将输液管安装在生理盐水瓶上并调整好,使管内没有气泡。
2)将动物麻醉,数分钟后,待动物前后肢放松,即可准备灌注。
3)将已麻醉的动物仰卧在解剖台上,固定四肢,用左手持镊子夹起腹部皮肤,右手持剪刀自腹部剪一小口,由此沿腹中线和胸骨剑突中线向上将皮肤剪至下颌,分离皮下组织,将皮肤翻向两侧,再沿腹中线和胸骨中线向上剪开胸骨,沿膈肌向两侧剪开,并用止血钳将胸骨和胸部的皮肤钳紧,将止血钳翻向外侧以充分暴露心脏。
小心用镊子将心包打开,滴一些生理盐水保持湿润。
4)分离出主动脉,穿一根丝线,准备结扎灌针。
5)将左心室尖用眼科剪刀剪开一小口,将灌注针插入心室并送至主动脉内,用丝线结扎牢固,使之不能退出,打调节阀,灌注生理盐水,灌注时的灌流量约20 ml/分钟。
时,剪开右心耳,使血液排出。
观察肝脏逐渐变为白色为止6)旋转三通使之对准灌注液,开始灌注固定液。
固定液进大鼠血管后,逐渐出现四肢抽动,表明灌注液进入大鼠大脑,待抽动完全停止,全身组织器官变硬后即可取材。
7)取脑：枕骨大孔处用剪刀横断，小心地于枕骨大孔斜插入剪刀剪开顶骨，用止血钳掰断两边地顶骨，注意嗅球上地顶骨也要仔细去掉，用剪刀于一侧剪断视神经并探到颅底，就可以将整块的脑组织翘起。
取出的脑在同样固定液中4℃再固定4-6小时。
8)保存或切片注意事项：1、将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键,也是难点。
首先准确找到主动脉,这是此步骤的要点。
可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净,用眼科镊子轻轻夹住心外膜(夹的越少越好,以免影响取材)将心脏向左上方提起,即可看清主动脉,又可使灌注针很容易地插入主动脉内。
灌流取脑
大鼠灌注固定取脑准备物品：37℃的温生理盐水500ml、10%的中性甲醛或4%的多聚甲醛固定液500 ml、500 ml的输液瓶2个、输液管2副、三通1个,镊子、剪刀、止血钳各2把、灌注针(将12号注射用针头的针尖掐断磨钝圆、光滑即可)1个、麻醉剂、步骤1)将两个输液瓶中分别装满生理盐水和固定液并将输液管安装在生理盐水瓶上并调整好,使管内没有气泡。
2)将动物麻醉,数分钟后,待动物前后肢放松,即可准备灌注。
3)将已麻醉的动物仰卧在解剖台上,固定四肢,用左手持镊子夹起腹部皮肤,右手持剪刀自腹部剪一小口,由此沿腹中线和胸骨剑突中线向上将皮肤剪至下颌,分离皮下组织,将皮肤翻向两侧,再沿腹中线和胸骨中线向上剪开胸骨,沿膈肌向两侧剪开,并用止血钳将胸骨和胸部的皮肤钳紧,将止血钳翻向外侧以充分暴露心脏。
小心用镊子将心包打开,滴一些生理盐水保持湿润。
4)分离出主动脉,穿一根丝线,准备结扎灌针。
5)将左心室尖用眼科剪刀剪开一小口,将灌注针插入心室并送至主动脉内,用丝线结扎牢固,使之不能退出,打调节阀,灌注生理盐水,灌注时的灌流量约20 ml/分钟。
时,剪开右心耳,使血液排出。
观察肝脏逐渐变为白色为止6)旋转三通使之对准灌注液,开始灌注固定液。
固定液进大鼠血管后,逐渐出现四肢抽动,表明灌注液进入大鼠大脑,待抽动完全停止,全身组织器官变硬后即可取材。
7)取脑：枕骨大孔处用剪刀横断，小心地于枕骨大孔斜插入剪刀剪开顶骨，用止血钳掰断两边地顶骨，注意嗅球上地顶骨也要仔细去掉，用剪刀于一侧剪断视神经并探到颅底，就可以将整块的脑组织翘起。
取出的脑在同样固定液中4℃再固定4-6小时。
8)保存或切片注意事项： 1、将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键,也是难点。
首先准确找到主动脉,这是此步骤的要点。
可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净,用眼科镊子轻轻夹住心外膜(夹的越少越好,以免影响取材)将心脏向左上方提起,即可看清主动脉,又可使灌注针很容易地插入主动脉内。
大鼠灌注固定取脑
优点：可用单人用注射器直接完成，不用输液管架，而且平均每只仅需5～10ml固定液，时间也仅为5～10min。
注意事项:1)开胸时不要伤到心脏 2)心脏穿刺最好用留置针,软,不宜穿通室间隔,见血即退针芯.插针部位是心尖部,方向向中线.3)生理盐水冲血管,到右心耳流出无色液体.4)多基甲醛固定成功的表现是SD鼠四肢抽搐.5)先断头再一步一步取脑6)根据你实验设计,需要切片的部位,有重点的取,常见的体表标志是前囟和外耳道.7)去颅骨后脑表面有一层硬脑膜,要去掉.
5 灌流：缓慢灌注PBS 10ml，见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛，多聚甲醛的灌流也同PBS。
6 灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠剧烈抽动；成功后老鼠后肢绷直，尾部竖起成一直线；所灌注的脑组织白而硬。
7 取脑：分离除去后颈部肌肉 ，用弯镊小心取出脑组织。
8 后固定：灌流后的脑组织置于4％PFA置4度冰箱内进行后固定，时间>2h，过夜最好。
3.制作灌注装置，用两瓶塑料包装的生理盐水，一瓶底部开口，倒出盐水，倒置灌入多聚甲醛，悬挂，输液器链接，远端结一个三通后到一个输液器粗针头端
2. 经心脏行灌注固定：麻醉，剪开胸廓，见到搏动的心脏，心尖插入灌注针头，止血钳固定，剪开右心耳，开放静脉血，首先快速滴入生理盐水100－200ml，再注入4%多聚甲醛300-350ml固定液
大鼠灌注固定取脑科研实验
具体方法：
1. 配好4％多聚甲醛PBS缓冲液，配法：称取40g PFA溶于装有500ml DEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH直至7.0，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。
大鼠垂体带下丘脑标本的取材及垂体形态观察
ｂ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｐ ｉ ｔ ｕ ｉ ｔ ａ ｙ ｒ ｇ ｌ ａ ｎ ｄ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｉ ｒ ｈ ｙ ｐ ｏ ｔ ｈ ａ ｌ ａ ｍｕ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｔ ａ ｋ ｅ ｎ ｏ ｕ ｔ ．Ｂａ ｓ ｅ ｄ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｅ ｉｅ ｒ ｎ ｃ ｅ， ｔ ｈｅ Ｓ ｕｃ ｃ ｅ ｓ ｓ ｒ ａ ｔ ｅ ｗａ ｓ ４ ０ ％ ｏ ｒ ｍｏ ｒ ｅ ．Ｒｏ ｕ ｔ ｉ ｎｅ ｐａ ｒ ａ ｆ ｉｎ ｆ ｅ ｓ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｔ ｈａ ｔ：ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｍｅ ｄ ｉ ａ ｐａ ｒ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ａ ｄｅ ｎ ｏ ｈ ｙ —
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大鼠灌注取脑之欧阳学创编
大鼠灌注取脑用途：1.用于常规HE染色，免疫组化分析。
2.冰冻切片可以不做脑组织固定。
3.不可用于western blot和PCR。
4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。
原理：心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。
多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。
必要性：1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。
3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响。
大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP)：流程：1)麻醉2)开胸3)心脏左心室穿针,剪开右心耳4)生理盐水冲水5)4%多基甲醛固定6)取脑7)保存或切片.具体过程：大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时。
Tips：1.多聚甲醛的配置：一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA 溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。
用1.0mol/L 的NaOH值至7.4，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。
简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。
若是很急，55℃水浴一天，期间不时震荡。
注意，4%的多聚甲醛需临用前配制,配制后需过滤去除小的杂质,避免心脏灌流时造成栓塞影响灌流效果。
灌注取脑
大鼠灌注取脑流程一、麻醉10%水合氯醛（0.4ml/100g）腹腔注射二、开胸1、沿两侧肋弓剪开皮肤，打开腹腔，用一血管钳夹持剑突并向上提拉。
2、用弯剪在膈肌与胸骨柄相连处剪一小口，造成人工气胸，然后向两侧顺延，剪断膈肌及肋骨，夹持剑突的血管钳将剑突连带胸廓上翻固定，充分暴露心脏。
三、穿刺将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键，也是难点。
1、首先准确找到主动脉，这是此步骤的要点。
可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净，用眼科镊子轻轻夹住心外膜（夹的越少越好，以免影响取材）将心脏向左上方提起（剪开心包壁层的前壁，暴露升主动脉和肺动脉干的根部）。
2、穿刺之前要用适当大小的血管钳夹住心室以固定心脏，但不要夹得过紧，要让心腔内留有一定的间隙。
用小剪刀在心尖处先剪开一个小口，再插入穿刺针。
3、插入时动作要慢，针尖方向不要偏向右侧，以免刺入右心房，如果感到有阻力，则将针退后、调整方向重新进针，直到进入主动脉，灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置，灌注针进入主动脉的长度最好为3~5毫米，然后用丝线扎紧。
4、灌注针插入成功后，用小剪刀剪开右心耳。
四、灌注1、用量（夹闭腹主动脉）4℃生理盐水（50-100ml/只），4℃的4%多聚甲醛（50-100ml/只）2、速度先快后慢，共用30分钟左右3、成功标志生理盐水：右心耳流出液体血色较浅基本澄清，肺脏、眼珠、爪子迅速变白是排出血液的有效观察指标。
多聚甲醛：刚开始灌注时老鼠前肢剧烈抽动（下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全）；前肢及颈部僵硬；所灌注的脑组织白而硬。
五、取脑1、枕骨大孔处用剪刀横断，小心地于枕骨大孔斜插入剪刀剪开顶骨。
2、用止血钳掰断两边地顶骨，注意嗅球上地顶骨也要仔细去掉。
3、用剪刀于一侧剪断视神经并探到颅底，就可以将整块的脑组织翘起。
六、保存取出的整个脑组织块再置于4%多聚甲醛4℃保存。
大鼠灌注取脑培训资料
大鼠灌注取脑大鼠灌注取脑用途：1.用于常规HE染色，免疫组化分析。
2.冰冻切片可以不做脑组织固定。
3.不可用于western blot和PCR。
4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。
原理：心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。
多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。
必要性：1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。
3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响。
大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP)：流程：1)麻醉 2)开胸 3)心脏左心室穿针,剪开右心耳 4)生理盐水冲水 5)4%多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片.具体过程：大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时。
Tips：1.多聚甲醛的配置：一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。
用1.0mol/L的NaOH值至7.4，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。
简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。
若是很急，55℃水浴一天，期间不时震荡。
大鼠灌注取脑之欧阳道创编
大鼠灌注取脑用途：1.用于常规HE染色，免疫组化分析。
2.冰冻切片可以不做脑组织固定。
3.不可用于western blot和PCR。
4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。
原理：心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。
多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。
必要性：1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。
3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响。
大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP)：流程：1)麻醉2)开胸3)心脏左心室穿针,剪开右心耳4)生理盐水冲水5)4%多基甲醛固定6)取脑7)保存或切片.具体过程：大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时。
Tips：1.多聚甲醛的配置：一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA 溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。
用1.0mol/L的NaOH值至7.4，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。
简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。
若是很急，55℃水浴一天，期间不时震荡。
注意，4%的多聚甲醛需临用前配制,配制后需过滤去除小的杂质,避免心脏灌流时造成栓塞影响灌流效果。
大鼠垂体带下丘脑标本的取材及垂体形态观察
大鼠垂体带下丘脑标本的取材及垂体形态观察张喜平;王彦霞;赵长义;曹雷;靳玉川;刘锋【摘要】垂体的漏斗部是连接垂体和下丘脑的重要部分.大鼠垂体的漏斗柄纤细,在取材中极易断裂,因此国内外有关这一研究少见报道.为探索大鼠垂体带下丘脑标本的取材方法,同时提供大鼠垂体的完整形态学资料,选取成年雄性SD大鼠,经多聚甲醛液灌注固定后取材.对取材手法进行了探索,总结出了确保取材成功率达40％以上的取材经验.观察其石蜡切片发现,腺垂体的中间部和神经垂体是紧密融合的;腺垂体远侧部和中间部之间有多处结合,提示拉司克囊可能是由多个大小不等的潜在间隙组成.【期刊名称】《实验室科学》【年(卷),期】2015(018)006【总页数】4页(P26-28,32)【关键词】垂体;拉司克囊;下丘脑;大鼠【作者】张喜平;王彦霞;赵长义;曹雷;靳玉川;刘锋【作者单位】河北医科大学解剖教研室,河北石家庄050017;河北医科大学第四医院外三科,河北石家庄050011;河北医科大学解剖教研室,河北石家庄050017;河北医科大学解剖教研室,河北石家庄050017;河北医科大学解剖教研室,河北石家庄050017;河北医科大学解剖教研室,河北石家庄050017【正文语种】中文【中图分类】Q13垂体的漏斗部是惟一连接垂体和下丘脑的结构，对研究垂体与下丘脑的解剖关系有重要意义。
大鼠的漏斗柄纤细在取材中极易断裂，因此国内外关于这方面的研究鲜有报道，国内文献中未见大鼠垂体与下丘脑连接的形态学资料，文献中对二者的解剖关系只限于文字描述［1-2］，为此我们选取成年大鼠，探索大鼠下丘脑与垂体连于一体的标本取材方法，并对垂体的大体和微观形态进行观察，旨在为同业者提供取材技术支持的同时，也为填补这方面的形态学空缺。
1 材料与方法1.1 实验动物和取材前准备成年雄性SD 大鼠20 只，体重250 ～300g，乌拉坦腹腔麻醉，主动脉插管，常规4℃预冷的4%多聚甲醛缓冲溶液300mL 灌注(先快后慢)1.5 h。
两种采集SD大鼠脑脊液方法的比较_cropped
疡的发生10 。
胃缺血- 再灌注引起急性胃黏膜损伤的机制, 主要与细胞内钙超载、氧自由基过量生成、白细胞浸润等因素有关。
已有研究报道SS 对胃黏膜损伤具有保护作用,可能与对抗自由基引起的损伤有关2 。
胃缺血- 再灌注后胃窦黏膜内D 细胞通过分泌SS ,一方面抑制胃酸的分泌, 减轻溃疡的程度;另一方面, SS 可通过增强细胞对抗自由基引起的损伤而对胃黏膜起保护作用。
SS 的增多,可能是机体自然抗病的一种局部反应。
综上所述, 本实验结果提示: 胃窦黏膜D 细胞通过分泌SS 参与了大鼠GI - RI 的过程。
duced by ischemia - re perf usion in the rat : r ole of leukocytes on ulcer2 ation in rat stomachJ . Lif e Sci ,1996 ,59 (19) :295 - 301 .周吕主编. 胃肠生理学基础与临床M. 北京:科学出版社, 1998 . 73 - 97 .詹静海,石爱荣. 大鼠实验性肠系膜上动脉闭塞性休克时胃窦粘膜D 和G 细胞免疫组织化学研究J . 解剖学报, 1990 , 21(2) :200 - 204 .Park SM , Park H S. G -and D -cell populations , serum and tissu ec oncentrations of gastrin and somatostatin in patients w ith pe ptic ulcerdiseasesJ . K orean J I ntern Med ,1993 ,8 (1) :1 - 7 .K armeli F , Eliakim R , Okon E , et al . S omatastatin e f fectivly prevents ethanol - and NSAI D - induced gastric muc osal damage in rats J .D ig D is Sci ,1994 ,39 (3) :617 - 625 .卢十一,石爱荣. 大鼠实验性胃溃疡自愈期间胃窦黏膜G、D 细胞变化的免疫组织化学研究J . 解剖学报,1990 ,21 ( 3) : 302 -306 .Low M J . Clinical endocrinology and metabolism. The somatostatin neu2r oendocrine system :physiology and clinical relevance in gastr oint esti2nal and pancreatic disorders J . Best Pract Res Clin EndocrinolMetab ,2004 ,18 (4) :607 - 622 .收稿日期:2005 - 06 - 26 修回日期:2005 - 07 - 10 56789参考文献:1 Mythen MG ,Webb AR. I ntra - operative gut muc osal hypoperfusion isassociated w ith increased post - operative c omplications and c ost J .I ntensive Care Med ,1994 ,20 (2) :99 - 104 .李铁,张席锦. 生长抑素对胃黏膜的保护作用可能与清除自由基有关J . 生理学报,1994 ,46 (4) :369 - 374 .M orris JB , G uerrer o NH , F urth EE ,et al . S omatostatin attenuates isch2 emic intestinal injuryJ . A m J Surg ,1993 ,165 (6) :676 - 680 . Wada K , K amisaki Y , K itano M , e t al . A ne w gastric ulcer m odel in2 1023本文编辑:吴进4两种采集SD 大鼠脑脊液方法的比较Ξ曹远东1 ,章龙珍1 ,王梅申2 ,唐天友1 ,苏卫红1(1. 徐州医学院肿瘤防治研究所放射治疗科,江苏徐州221006 ;2. 徐州医学院解剖学实验室,江苏徐州221002)摘要:目的比较实验S D 大鼠脑脊液采集的两种方法。
大鼠灌注取脑之欧阳索引创编
大鼠灌注取脑欧阳家百（2021.03.07）用途：1.用于常规HE染色，免疫组化分析。
2.冰冻切片可以不做脑组织固定。
3.不可用于western blot和PCR。
4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。
原理：心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。
多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。
必要性：1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。
3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响。
大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP)：流程：1)麻醉2)开胸3)心脏左心室穿针,剪开右心耳4)生理盐水冲水5)4%多基甲醛固定6)取脑7)保存或切片.具体过程：大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时。
Tips：1.多聚甲醛的配置：一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。
用1.0mol/L的NaOH值至7.4，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。
简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。
若是很急，55℃水浴一天，期间不时震荡。
大鼠灌注取脑
大鼠灌注取脑用途：1.用于常规HE染色，免疫组化分析。
2.冰冻切片可以不做脑组织固定。
3.不可用于western blot和PCR。
4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。
原理：心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。
多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。
必要性：1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。
3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响。
大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP)：流程：1)麻醉 2)开胸 3)心脏左心室穿针,剪开右心耳 4)生理盐水冲水 5)4%多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片.具体过程：大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时。
Tips：1.多聚甲醛的配置：一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。
用1.0mol/L的NaOH 值至7.4，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。
简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。
若是很急，55℃水浴一天，期间不时震荡。
04.陆姮磊--大鼠脑组织规范性取材
rostral to the midpoint of the cerebellum (level G), 小脑绒球
through the caudal portion of the cerebellum (level H).
CP
SP
SN
HY
At the level of optic chiasm including the basal ganglia, septum, cortex, anterior hypothalamus（ including the cerebrum at the frontal cortical level ）
Reference: Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice.
Section 1, cerebrum
Ac: anterior commissure （前联合） Cc: cerebral cortex 大脑皮质 Cca: corpus callosum（胼胝体） O: optic chiasm（视神经交叉） Sr: striatum（纹状体） CP – Caudate Putamen（尾状核） (basal ganglia) SN – Septal Nuclei（隔核） (limbic system) SP- septum隔膜 HY- hypothalamus下丘脑
For each level, anatomical structures of interest are shown: aca =anterior commissure; Acb =accumbens nucleus; Amy =amygdala; Arc =arcuate nuclei; Au =auditory cortex; B =basal nucleus; CA1, CA2, CA3 =cornu ammonis 1, 2 and 3; cc =corpus callosum; Cer =cerebellum; Cg =cingulate cortex; cg =cingulum; cic =inferior colliculi commissure; cp =cerebral peduncles; Cpu =caudate putamen; csc =superior colliculi commissure; DG=dentate gyrus; DR =dorsal raphe nucleus; Ect =ectorhinal cortex; Ent =entorhinal cortex; Fl =flocculus; fmi =forceps minor of the corpus callosum; f =fornix; fi =fimbria; GP =globus pallidus; Hb =habenular nuclei; Hyp =hypothalamus; ic =internal capsule; IC =inferior colliculi; ICj =Calleja islands; icp =inferior cerebral peduncles; Lc =limbic cortex;
大鼠灌注取脑培训资料
大鼠灌注取脑大鼠灌注取脑用途：1.用于常规HE染色，免疫组化分析。
2.冰冻切片可以不做脑组织固定。
3.不可用于western blot和PCR。
4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。
原理：心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。
多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。
必要性：1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。
3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响。
大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP)：流程：1)麻醉 2)开胸 3)心脏左心室穿针,剪开右心耳 4)生理盐水冲水 5)4%多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片.具体过程：大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时。
Tips：1.多聚甲醛的配置：一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。
用1.0mol/L的NaOH值至7.4，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。
简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。
若是很急，55℃水浴一天，期间不时震荡。
灌注取脑实验报告
一、实验目的1. 掌握动物解剖技术，熟悉小鼠心脏灌流及取脑的方法。
2. 了解脑组织在生理学、病理学等研究中的重要性。
3. 提高实验操作技能，培养严谨的科学态度。
二、实验原理灌注取脑实验是研究脑组织生理、生化及病理变化的重要方法。
通过心脏灌流，将生理盐水或特定试剂注入动物体内，达到清除脑组织中的血液、细胞等杂质，便于后续实验研究。
本实验采用小鼠作为实验动物，通过心脏灌流及取脑，获取脑组织样本。
三、实验材料1. 实验动物：成年小鼠2. 仪器：解剖显微镜、手术器械、灌流装置、剪刀、镊子、注射器、注射针、泡沫板、生理盐水、固定液等3. 药品：戊巴比妥钠、肾上腺素、生理盐水、固定液等四、实验步骤1. 麻醉：将小鼠放入戊巴比妥钠溶液中，待小鼠失去意识后，立即用针头固定在泡沫板上。
2. 解剖：扯起小鼠胸部皮肤，用剪刀剪开胸部肌肉，暴露心脏。
3. 心脏灌流：用注射针连接灌流装置，将生理盐水注入小鼠心脏，使血液流向脑部。
4. 取脑：待生理盐水灌流完成后，将小鼠头部朝下，用剪刀剪开颅骨，暴露脑组织。
5. 固定：将脑组织取出，放入固定液中固定，以便后续实验研究。
6. 清洗：将固定好的脑组织用生理盐水清洗，去除杂质。
7. 标本保存：将清洗后的脑组织放入装有固定液的容器中，密封保存。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过心脏灌流及取脑，成功获取了小鼠脑组织样本。
2. 结果分析：本次实验操作规范，脑组织样本质量良好，为后续实验研究提供了有力支持。
六、实验讨论1. 实验过程中，应注意操作规范，避免损伤脑组织。
2. 灌流速度不宜过快，以免损伤脑组织。
3. 固定液的选择对脑组织样本质量有重要影响，应选用合适的固定液。
4. 实验过程中，应注意动物福利，尽量避免动物痛苦。
七、实验总结本次实验成功进行了小鼠心脏灌流及取脑操作，掌握了动物解剖技术，为后续实验研究奠定了基础。
在实验过程中，我们应注重操作规范，确保实验结果的准确性。
同时，本次实验也使我们认识到动物福利的重要性，为今后实验研究提供了有益经验。
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必要性
1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供 也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。 3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响
麻醉
流程
开胸
心尖向左心室穿针
剪开右心耳
• 3.经心脏灌注，有时穿刺针会误进右心室，那样灌注主要在肺 循环起作用，体循环的血液影响不大。所以观察将穿刺针插入 到主动脉内可以确保起到体循环灌注冲洗血液的效果，脑组织 的血液冲干净后，才不会影响免疫组化的效果，不然到处都是 红细胞造成的背景染色。
• 4.灌注时注意排空输液管中的气泡，不然容易气栓，影响灌注 效果。一定要看到大鼠较剧烈抽搐，不然证明灌注不好。
• 简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱 • 密封放置2天，就能全溶。若是很急，55去除小
的杂质,避免心脏灌流时造成栓塞影响灌流效果。
• 也可用10%福尔马林溶液，甲醛1：10稀释 甲醛100ml 磷酸二氢钠4g 磷酸氢二钠6.5g 蒸馏水900ml 或甲醛100ml加900mlPBS缓冲液。
大鼠脑组织取材步骤
1.剪开皮肤
• 2.用钩镊再眼眶处固定大鼠颅骨，用组织剪 再颅骨和颈椎连接处剪断
• 3.组织剪头部伸入枕骨大孔，尽量贴着骨头（不能插太深伤到脑组织）。
• 4.组织剪从枕骨大孔处伸入，朝向同侧眼眶 方向，贴着骨头剪，剪到眼眶
5.从大鼠眼眶之间剪断
6.左手持钩镊插入大鼠的眼眶固定颅 骨，用弯钳直接夹住枕骨大孔处的骨 头直接就掀起来了
• 5.快速滴注生理盐水(室温)，同时剪开右心耳。约注入100~150mL，至流出液 • 体血色较浅基本澄清，停止灌注。肝脏、眼珠、爪子迅速变白是排出血液的 • 有效观察指标。
• 6.继续用4%多聚甲醛灌流250ml固定。
• 7.后固定：灌流后的脑组织置于4％PFA置4度冰箱内进行后固定，时间>2h， • 过夜最好
• 2.制作灌注装置，用两瓶塑料包装的输液瓶装灌注液。同时配好输液器备用。
• 3.10％水合氯醛按4mL/100g的剂量腹腔注射麻醉动物。
• 4.沿两侧肋弓剪开皮肤，打开腹腔，用止血管钳夹持剑突并向上提拉，用弯 • 剪在膈肌与胸骨柄相连处剪一小口，造成人工气胸，然后向两侧顺延，剪断 • 膈肌及肋骨，夹持剑突的血管钳将剑突连带胸廓上翻固定，充分暴露心脏， • 直视下穿刺针左心室心尖处，用血管钳固定。
• 1.多聚甲醛的配置： • 一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装 • 有500mlDEPC水的玻璃容器烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅 • 拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH值至7.4， • 使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴 • 或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温 • 或4℃保存备用。
从小脑处将脑组织向上推起，用小 剪刀剪断脑神经
注意事项 • 1.多聚甲醛气味刺激，配置时做好自我保护。 • 2.暴露心脏这一步骤，容易损伤肺、心脏或者肝脏，“夹持剑
突并向上提拉，用弯剪在膈肌与胸骨柄相连处剪一小口，造成 人工气胸”，人工气胸后，肺萎缩，胸腔里的空间增大，提拉 剑突后，不容易损伤肺、心及肝脏，出血少。
常见问题
1.灌注取脑不可用于Western blot及PCR的原因
• 多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表 面结构不变，从而能使其对应的抗体，准确检测其表达 的位置和量。
• Western中，要用去污剂使各种蛋白发生变性、解聚， 并变成统一的线性肽链，从而能够用凝胶电泳进行分子 量的梯度分离。多聚甲醛会影响蛋白的解聚，从而使其 无法用凝胶分离。 另外，WB和免疫组化所使用抗体的 抗原表位也不同，WB的抗体一般识别蛋白的一级结构， 所以可能也无法识别甲醛处理的蛋白。
大鼠灌注固定取脑
主讲：陈爽 2017.9.12
用途
1.用于常规HE染色，免疫组化分析。 2.冰冻切片可以不做脑组织固定。 3.不可用于western blot和PCR。 4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作灌注
固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。
原理
心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物 死 亡前进行组织的前固定,避免了组织的自 溶 现象,是脑组织切片观察的常用方法。多 聚 甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白 的 原位和表面结构不变，从而能使其对应
• PCR要提RNA，RNA非常容易降解，必须新鲜取组织，然 后尽快超低温冷藏或者马上抽提，否则非常容易降解。 灌注固定的组织，原则上是能够提得出DNA和RNA的， 但是肯定会有较多的降解，一般不会这样做。
2.没有灌注固定的大鼠脑组织,能不 能做切片和免疫组化？
生理盐水冲洗
4%多基甲醛固定
取脑
保存或切片.
具体过程
大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木
板置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经 左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌 注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺 脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注 冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲 醛浸泡固定24小时。
省时省剂的方法
夹闭腹主动脉：只灌注上肢及头脑，固定 的好又快，又省试剂。先灌注生理盐水 约100ml，见到老鼠两前肢及两肺变白即可 改灌注多聚甲醛。多聚甲醛用100ml以下即 可。
灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠前肢剧 烈抽动（下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完 全）；前肢及颈部僵硬；所灌注的脑组 织白而硬
• 5.关于生理盐水的温度的选择，有人认为因 为是快速冲刷血管里的血液，低温造成血 管收缩，灌注的效果反而没有室温的好。 但是用低温的认为，低温有利于组织完整。
• 6.灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠剧烈 抽动；成功后老鼠后肢绷直，尾部竖起成 一直线；所灌注的脑组织白而硬。
• 7.去颅骨后脑表面有一层硬脑膜,要去掉。