组培复习题答案

组织培养复习题

一、名词解释

1、克隆

单讲克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖，以及由无性繁殖形成的基因型完

全相同的后代个体组成的种群;细胞克隆则是从细胞群体中分离出一个细胞并使其

在体外繁殖成新的细胞群体，又称单个细胞分离培养技术。

2、细胞系

原代细胞传代生长以后，所繁殖的细胞群体便称为细胞系；也指可长期连续传代的

培养细胞。

3、骨间充质干细胞

成体骨髓中的一类多能干细胞，具有分化成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和其他几

种结缔组织细胞的潜能，也称骨髓基质干细胞。

4、原代培养

取自动物并置于体外培养中生长的细胞在其传代之前称为原代培养，或原代细胞。

5、细胞株

通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的

培养物称为细胞株

6、有限细胞系

一般正常细胞的细胞系寿命只能维持一定的时间期限，仅能分裂有限次数，称为有

限细胞系。

7、细胞传代

当细胞持续生长繁殖一段时间，到达一定的细胞密度后，就应当将细胞分离成两部

分（或更多）至新的培养器皿中并补充、更新培养液，即称为传代或再培养。

二、问答题

1、简述人脐静脉血管内皮细胞的原代培养及鉴定

原代培养步骤：

（1）无菌条件下切取血管；

（2）超净台内剔除外膜上的脂肪组织，结扎静脉细段。用长血管钳外翻动脉内膜。

PBSA液冲洗内膜上的血液。

（3）静脉浸入混合消化液，37℃水浴，消化20~30min。

（4）弃血管，加含20％血清的培养液终止消化。

（5）收集到的消化液1000r/min离心5min，在培养液中洗两次。

（6）收集细胞，重新悬浮于培养液中，接种于铺有明胶的培养皿或瓶中。

鉴定：内皮细胞能分泌第8因子，细胞内含有Weibel-Palade小体，吞噬低密度乙

酰脂蛋白，表达内皮细胞特异性表面抗原。

2、细胞冻存和复苏的基本方法和原理

细胞冻存

（1）原理

细胞冻存时要尽可能地均匀减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成是减

少细胞损伤的关键。采用甘油或二甲基亚砜作为保护剂，这两种物质在深

低温冷冻后对细胞无明显毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以

使冰点下降，提高胞膜对水的通透性；加上分步冷冻方法可使细胞内的水

分渗出细胞外，在胞外形成冰晶，减少细胞内冰晶的形成，从而减少细胞

的损伤。

（2）基本方法：

1、去生长状态好的细胞消化制成细胞悬液

2、离心洗涤

3、加含10%DMSO冻存液

4、加入冻存管

5、熔封

6、-70°C放置2~3h

7、移入液氮罐中

8、记录

细胞复苏

（1）原理

细胞复苏应采用快速融化的手段，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间

内即融化。避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造

成损害。

（2）基本方法：

1、取出冻存管立即放入37°C水中

2、消毒冻存管开封后将细胞移入离心管加培养液离心

3、计数

4、接种培养瓶培养

3、光学显微镜的分辨率与那些因素有关

分辨率r=0.61λ/n sinα，

λ=照明光源波长；n=聚光镜和物镜之间介质的折射率；α=样品对物镜孔径角的半角。这些都影响显微镜的分辨率。

4、什么是动物细胞培养，应注意哪些问题

动物细胞培养是把在动物体内取得的组织用机械或消化的方法分散成单个细胞悬液，然后进行培养、繁殖。

需要注意的地方有：（1）无菌、无毒的环境：培养液与器皿的无菌处理，定期更换培养液，防止代谢产物积累；

（2）营养物质：氨基酸、维生素、碳水化合物及一些无机盐分子；

（3）血清：含有许多细胞生长必须的成分以及促生长因子；

（4）温度和pH：36.5±0.5℃，pH=7.2~7.4；

（5）气体环境：95％空气+5％CO2。

5、细胞培养在生物和医学等领域中的应用

答：1、利用细胞融合杂交技术，可以制备单克隆抗体来对临床疾病进行特异性诊断和治疗。

2、利用细胞培养，组织块或器官培养技术，可在体外诱导生长和组织器官的分化，

将有力地揭示胚胎发育和组织分化的秘密，为人工受精及卵的体外分裂、分化条件和胚体发育的诱导分化等的研究提供了便利的研究手段。

3、细胞培养可以用来检测药物的致畸、致突变效应。

4、采用癌细胞体外培养方法，既可研究某种药物对不同癌细胞的敏感性，为延误

抗癌敏感谱提供依据。

5、用细胞培养方法研究药物的药理效应，观察不同药物对离体细胞的作用，可为

临床世纪使用时提供参考依据，也可为药物的药效作用提供实验依据。

6、如何培养胚胎干细胞及胚胎干细胞的定义

答：

胚胎干细胞的定义：

是由动物囊胚的内细胞群或原始生殖细胞分离出来，经体外分化抑制培养筛选出的具有全能性的胚胎细胞。

胚胎肝细胞的培养过程

1、取怀孕3.5天的孕鼠，断颈处死，70%乙醇消毒20~30min,剪开腹部皮肤及

打开腹腔，取出子宫角，用注射器吸入冲胚液5ml，在解剖镜下冲洗子宫

角，用毛细管收集胚胎，吹入预先接种了饲养层四宝的4孔培养板中，每

孔一枚，15%~20%FCS（10%~20%胎牛血清）的DMEM（高糖）培养液，37°

C、5%CO2、饱和湿度恒温箱中培养。

2、4~5天后，将附着于培养皿底，生长良好，且无分化现象的鸟巢状ICM（动

物细胞囊胚中的内细胞群）细胞团在解剖显微镜下用无菌玻璃针从滋养层

上挖出（尽量将滋养层细胞分离干净）

3、用毛细管将ICM细胞团移入另一无菌平皿中，消化液消化使之分散成为仅

含2~5个细胞的小细胞团，中止消化。

4、将小细胞团移入预先接种了饲养层细胞的4孔培养板中，15%~20%FCS的

DMEM培养液、37°C、5%CO2、饱和湿度恒温箱中培养，3天后观察ES

细胞集落

7、如何应用杂交瘤技术制备单克隆抗体

答：

小鼠预处理：腹腔液注射0.5ml降植烷或医用液体石蜡或福氏不完全佐剂

1、收集生长良好的杂交瘤细胞，离心洗涤1次，重悬浮于无血清培养液中，调整

细胞密度为1×106 ~2×106 /ml，每只小鼠腹腔注射0.5ml细胞悬液。

2、接种细胞7~12天，可见小鼠腹部明显膨大。消毒腹部皮肤，用5ml注射器接8

号针头，刺入腹腔，卸下注射器，抬高小鼠头部，是腹水滴入离心管中，一般可收集3~5ml.

3、3000rpm离心15min，弃上层油脂，吸取淡黄色腹水，分装，-70°C保存备用。