单克隆抗体制备中两次筛选
单克隆抗体的第二次筛选原理
单克隆抗体的第二次筛选原理今天来聊聊单克隆抗体的第二次筛选原理，这可真是个挺有趣的事儿呢。
我先给你讲个生活中的小现象吧，就好比我们从一群混杂着各种不同类型小珠子的盒子里，挑出某一种特定颜色和形状的珠子。
单克隆抗体制备的过程有点类似，不过这可比挑珠子复杂太多啦。
在单克隆抗体产生的过程中，我们先由骨髓瘤细胞和经过免疫的B淋巴细胞融合形成杂交瘤细胞。
这个时候就像是一个大杂烩，里面融合的细胞多种多样，有正常的B淋巴细胞之间的融合、骨髓瘤细胞之间的融合，还有没用的没融合的骨髓瘤细胞和B淋巴细胞呢。
这就像是混在一起的不同颜色、大小、材质的多种珠子一样。
于是就需要进行筛选啦。
第一次筛选是用特定的培养基，把没融合的骨髓瘤细胞和融合后细胞中那些不正常的淘汰掉，其实就是选出我们想要的包含杂交瘤细胞这个大概范围的“珠子”。
这就要说到第二次筛选了。
老实说，我一开始也不明白为什么已经筛选过一次了还需要第二次筛选呢？原因是这样的，在第一次筛选留下的杂交瘤细胞中，它们产生的抗体不一定都能完全符合我们的要求：不是所有的杂交瘤细胞都产生了那种我们想要的特异性很强的单克隆抗体。
就好比在一堆形状相近的珠子里，有的只是稍微有点相似，但不是完全一样。
打个比方吧，假如把我们要的能产生特定作用单克隆抗体的杂交瘤细胞想象成是出色的歌手，其他的杂交瘤细胞产生的抗体可能就像是那些只能偶尔唱出一两个高音或者根本走调的歌手。
第二次筛选就是要把那些真正出色的“歌手”找出来，也就是产生特异性抗体的杂交瘤细胞。
这个筛选方法呢，一般是通过克隆化培养和专一抗体检测阳性，找到那个能产生我们所需特异性抗体的单个杂交瘤细胞。
说到这里，你可能会问，那这个在实际生活中有啥用呢？作用可大啦。
在医学上治疗癌症方面，像赫赛汀是一种单克隆抗体药物。
它就是针对癌细胞表面的特定蛋白这种“坏蛋分子”产生作用的，就像精确制导的导弹一样，只打击癌细胞，而不会误伤正常细胞，这都得益于单克隆抗体特异性很强的这个特性，所以二次筛选准确选出能产生这种特异性抗体的细胞很关键。
单克隆抗体制备过程中经过两次筛选
单克隆抗体制备过程中经过两次筛选制备单克隆抗体的过程一般包括以下步骤：免疫原的制备、免疫小鼠、脾细胞融合、杂交瘤筛选和克隆、筛选单克隆杂交瘤、扩增和纯化单克隆抗体。
首先，免疫原的制备是制备单克隆抗体过程的第一步。
免疫原可以是纯化的蛋白质、多肽、细胞表面抗原等。
免疫原的选择和制备需要根据实验的目的和需求进行设计。
第二步是免疫小鼠。
免疫小鼠是制备单克隆抗体的常用动物模型。
通常选择BALB/c小鼠作为实验动物，并使用免疫佐剂增强免疫效果。
小鼠需要进行免疫，例如通过皮下注射、肌肉注射等途径将制备好的免疫原注射到小鼠体内。
第三步是脾细胞融合。
在获得免疫反应满意的小鼠后，需要从其脾脏中获得淋巴细胞。
将脾细胞与合适的骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。
融合的方法包括传统的体外融合和新型的凭借细胞融合特性的电融合等。
第四步是杂交瘤筛选和克隆。
将融合得到的细胞悬浮液进行稀释，使得每个孔中只存在一个细胞。
然后需要在含有细胞导入剂的选择培养基中培养杂交瘤细胞。
导入剂可以使得杂交瘤细胞在含有肿瘤抗原的培养基中进行生长，而非杂交瘤细胞则会死亡或生长缓慢。
通过这样的选择，可以筛选出产生特定单克隆抗体的杂交瘤细胞。
第五步是筛选单克隆杂交瘤。
通过酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法，筛选出产生特定抗原结合特异性的单克隆杂交瘤细胞。
这一步骤可以帮助确定那些产生目标抗原结合特异性抗体的杂交瘤细胞。
经过初步筛选和单克隆筛选之后，通常会得到一定量的单克隆抗体，然而这些抗体还需要经过进一步的扩增和纯化。
扩增单克隆抗体的过程涉及到培养大量的单克隆杂交瘤细胞，并进行培养和收集细胞上清液。
最后一步是纯化单克隆抗体。
通过蛋白质A/G亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等技术手段，将目标单克隆抗体从细胞上清液中纯化出来。
在整个制备单克隆抗体的过程中，经过两次筛选是确保获得特异性抗原结合能力的单克隆杂交瘤细胞的重要步骤。
只有通过这样的筛选过程，才能获得具有较高亲和力和特异性的单克隆抗体。
单克隆抗体制备过程中的两次筛选
单克隆抗体制备过程中的两次筛选动物细胞工程中动物细胞融合的主要应用是制备单克隆抗体。
在单克隆抗体制备过程中，有两次筛选，这地方学生很容易弄混了。
第一次筛选的目的是筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选的目的是筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法并不相同。
第一次筛选：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。
普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。
其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。
在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。
另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。
因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。
对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。
惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。
第二次筛选：在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。
单克隆抗体制备过程中经过两次筛选
单克隆抗体制备过程中经过两次筛选单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。
第一次筛选的原理与方法:细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。
普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A)和胸腺嘧啶核苷酸（T）。
其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径"），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。
在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”.另一条途径是应急途径或补救途径(“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可.因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S 途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力,一般10d左右会死亡.对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型(HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径",且“D 途径"又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。
惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞,既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT 培养液中选择性存活下来，并不断增殖。
第二次筛选的原理和方法：在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HA T培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。
如何筛选杂交瘤细胞-华采豆
如何筛选杂交瘤细胞在单克隆抗体制备过程中，有两次的筛选过程，第一次是筛选出杂交瘤细胞（用选择性培养基），第二次是进一步选出能生产我们需要的抗体的杂交瘤细胞。
利用杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理是：根据以下三个原则：①一种淋巴细胞克隆只产生一种抗体；②细胞荣恶化技术产生的杂交瘤细胞可以保持双方亲代细胞的特性；③利用代谢缺陷补救机理筛选出杂交瘤细胞，并进行克隆化，然后大量培养增殖，制备所需的单克隆抗体。
单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。
第一次筛选的原理与方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。
普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。
其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。
在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。
另一条途径是应急途径或补救途径（“S 途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。
因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D 途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。
对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。
惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。
解读单克隆抗体制备过程中的两次筛选
解读单克隆抗体制备过程中的两次筛选在单克隆抗体制备中两次提到筛选问题，那么两次筛选的目的和方法到底是什么。
关键词选择性培养基多孔培养板单克隆抗体制备过程中两次提到了筛选，对于两次筛选中的目的和方法许多人也存在疑惑，那么到底是如何筛选的呢？现总结如下：第一次筛选: 首先在（效应）B淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行杂交时可能出现的情况应该先弄清楚，（一）可能的情况有：1 （效应）B淋巴细胞和（效应）B淋巴细胞的融合2 (效应）B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合（即杂交瘤细胞）3 骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合（即瘤瘤细胞）4 单个骨髓瘤细胞5 单个（效应）B淋巴细胞（二）筛选的目的————获得杂交瘤细胞（三）筛选的方法用选择性培养基来完成，即HAT培养基。
含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶，其中氨基喋呤可阻断DNA合成的主要途径。
主要途径阻断后，依靠应急途径即在HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）和TK（胸苷激酶）作用下，利用胸腺嘧啶和次黄嘌呤合成DNA，缺少其中一种，DNA合成不能发生。
用于杂交的骨髓瘤细胞系均由经有毒药物诱导而成选择产生的代谢缺陷型细胞，细胞内均无TK或HGPRT，所以单个或融合骨髓瘤细胞在HAT培养液中将死亡。
B细胞虽然有HGPRT和TK，但在体外通常培养条件下，尤其是在单个细胞环境下难于长期存活和增殖传代。
因此只有杂交瘤细胞才能在HAT培养液中生长繁殖。
所以通过以上方法可以选择出杂交瘤细胞，但虽然都是杂交瘤细胞，但可能是同一抗原的不同抗原决定基刺激产生的。
所以产生抗体是不纯的。
如果不进一步提纯，这样得到的是多克隆抗体。
所以就有了第二次筛选。
第二次筛选要想获得单克隆抗体，所以必须得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群，由这样的细胞群产生的抗体才是真正意义的单克隆抗体。
(一) 筛选的目的筛选只针对某一种特定的抗原决定簇产生抗体的杂交瘤细胞，即得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群并且能产生所需抗体（二）筛选的方法1、分离单个细胞置入多孔培养板的每个孔中培养2、检测每孔细胞是否产生所注射抗原的抗体（即教材插图中提到的选出能产生特定抗体的细胞群）所以筛选的条件是两层意思：单个细胞单孔培养保证每个孔中的细胞在产生抗体时是针对同一抗原的同一抗原决定簇产生的的，但每个孔中细胞却不一定都能产生抗体，把那些不产生抗体的细胞淘汰，对能分泌针对抗原某一决定簇抗体的阳性细胞选择下来继续克隆，从而保证大量的生产所需抗体。
单克隆抗体的制备操作至少要进行几次细胞筛选（）A.1次B.2次C.3次D.4次题目和参考答案
单克隆抗体的制备操作⾄少要进⾏⼏次细胞筛选（ ）
A、1次
B、2次
C、3次
D、4次
考点：单克隆抗体的制备过程
专题：
分析：单克隆抗体的制备过程的细节：
（1）⼆次筛选：①筛选得到杂交瘤细胞（去掉未杂交的细胞以及⾃⾝融合的细胞）；
②筛选出能够产⽣特异性抗体的细胞群．
（2）细胞来源：B淋巴细胞：能产⽣特异性抗体，在体外不能⽆限繁殖；
⾻髓瘤细胞：不产⽣专⼀性抗体，体外能⽆限繁殖．
（3）杂交瘤细胞的特点：既能⼤量增殖，⼜能产⽣特异性抗体．
（4）提取单克隆抗体：从培养液或⼩⿏腹⽔中提取．
解答：解：单克隆抗体制备过程的两次筛选：①筛选得到杂交瘤细胞（去掉未杂交的细胞以及⾃⾝融合的细胞）；②筛选出能够产⽣特异性抗体的细胞群．
故选：B．
点评：本题考查单克隆抗体的制备过程，意在考查考⽣的识记能⼒和理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能⼒；能运⽤所学知识，对⽣物学问题作出准确的判断，难度不⼤．。
单克隆抗体制备知识点总结
单克隆抗体制备知识点总结一、流程：二、说明：1、对小鼠的处理是：注射特定的抗原蛋白2、单克隆抗体制备过程中的三个“两”（1）诱导融合的两种细胞名称及作用：①骨髓瘤细胞；无限增殖②B淋巴细胞（效应B细胞、浆细胞）；产生特定抗体（2）两次筛选的目的及方法：①第一次：筛选出杂交瘤细胞；选择培养基②第二次：筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞；克隆化培养及专一抗体检测（3）培养杂交瘤细胞的两个场所：①体外培养：从培养液中提取（该方法缺点：设备复杂，要有严格的条件限制，产量低，成本高。
）②体内培养：从小鼠腹水中提取（最常用的方法）（4）单克隆抗体制备所用到的两种技术：动物细胞培养、动物细胞融合（5）两个原理：细胞增殖、细胞膜流动性3、动物细胞融合特有的方法是：灭活的病毒。
（融合率低，有一定局限性。
）4、第二次筛选出的杂交瘤细胞的特点：①无限增殖②产生所需抗体5、单克隆抗体的优点:灵敏度高，特异性强，可大量制备6、单克隆抗体的用途：①作为诊断试剂：能准确地识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。
②用于治疗疾病和运载药物：主要用于癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于其他疾病的治疗。
“生物导弹”＝“瞄准装置”（单克隆抗体）＋“杀伤性弹头”（药物）7、抗体的传统生产方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从血清中分离所需抗体。
缺点是：产量低、纯度低，特异性差、灵敏度低。
练习：1、科研人员将抗癌药物连接在单抗上制成“生物导弹”用于癌症治疗。
“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是“杀伤性弹头”，分析下列有关描述，其中不正确的是[]A．“瞄准装置”由识别肿瘤的单克隆抗体组成B．“弹头”由放射性同位素、化学药物或毒素等物质构成C．“弹头”中的药物有选择杀伤肿瘤细胞的功能D．“生物导弹”的制备应用了细胞工程技术2、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图（1）单克隆抗体制备过程用到了技术。
单克隆抗体制备两次筛选的原理
单克隆抗体制备两次筛选的原理一、引言单克隆抗体是一种具有高度特异性和亲和性的抗体，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和治疗等领域。
制备单克隆抗体的关键步骤之一就是筛选，而为了获得更高亲和力和特异性的抗体，通常需要进行两次筛选。
本文将介绍单克隆抗体制备两次筛选的原理及其意义。
二、第一次筛选原理第一次筛选是为了从混合的抗体群体中筛选出特异性较高的单克隆抗体。
筛选的关键是对目标抗原进行免疫反应，然后通过适当的方法分离和检测抗体。
1. 免疫反应：通常采用的方法是将目标抗原免疫到动物体内，激发免疫反应。
免疫反应的方式可以是免疫原注射或者抗原与适当的载体融合，然后注射到动物体内。
2. 分离抗体：在免疫反应完成后，可以从动物体内采集到血清或者细胞，其中含有大量的抗体。
通过一系列的分离步骤，如离心、过滤、层析等，将目标抗原特异性较高的抗体分离出来。
3. 检测抗体：得到抗体后，需要进行检测以确定其特异性。
常用的方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组化和免疫印迹等。
这些方法可以通过检测抗体与目标抗原的结合情况来评估抗体的特异性。
三、第二次筛选原理第一次筛选得到的抗体是一种多克隆抗体，包含多个亲和力和特异性不同的抗体。
第二次筛选的目的是从第一次筛选得到的抗体中筛选出特异性和亲和力更高的单克隆抗体。
1. 单克隆化：将第一次筛选得到的抗体进行单克隆化处理。
常用的方法有杂交瘤技术和限制稀释法。
杂交瘤技术是将抗体产生的B细胞与肿瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，进而筛选出单克隆抗体。
限制稀释法是将抗体稀释到一定程度，使得每个孔只有一个抗体分子，然后进行培养，最终得到单克隆抗体。
2. 亲和度筛选：通过亲和层析等方法对单克隆抗体进行筛选，选择亲和度更高的抗体。
亲和层析是将抗体与亲和基质结合，然后通过洗脱的方式分离出亲和度较高的抗体。
这一步骤可以进一步提高抗体的特异性和亲和力。
四、意义与应用单克隆抗体制备两次筛选的原理可以提高抗体的特异性和亲和力，使得抗体在生物医学研究、临床诊断和治疗等领域具有更广泛的应用。
单克隆抗体二次筛选目的
单克隆抗体二次筛选目的
单克隆抗体的二次筛选是为了确认初步筛选出的阳性细胞株中，是否存在单一的克隆细胞株，其所产生的抗体具有特异性和稳定性。
在初步筛选中，我们可能会得到一些阳性细胞株，但这些细胞株中
可能存在多个克隆细胞株，它们分泌的抗体可能具有不同的特异性
和亲和力。
因此，二次筛选的目的是要从中筛选出单一的克隆细胞株，确保所得的单克隆抗体具有较高的特异性和亲和力。
在进行单克隆抗体的二次筛选时，我们通常会进行单细胞克隆化，即将阳性细胞株进行限稀释，使得每个细胞在培养皿中独立生长，形成单个克隆细胞株。
接着，我们会对每个克隆细胞株进行抗
体的表征，包括抗体的特异性、亲和力和稳定性等方面的检测。
通
过这些检测，我们可以筛选出表现最佳的单克隆细胞株，从而确保
最终获得的单克隆抗体具有较高的特异性和稳定性。
此外，单克隆抗体的二次筛选也可以帮助我们评估不同克隆细
胞株产生的抗体在不同条件下的表现差异，比如在不同培养基、不
同温度或不同培养时间下的抗体产量和特异性等。
这些信息对于后
续的抗体生产和应用具有重要的指导意义。
总之，单克隆抗体的二次筛选的目的是为了确认单一的克隆细胞株，筛选出具有较高特异性和稳定性的单克隆抗体，为后续的抗体生产和应用奠定基础。
单克隆抗体生产为何要多次克隆专一抗体检验阳性细胞
课本中的图解谈到了在筛选培养基选择了杂交瘤细胞之后，专一抗体检验阳性细胞需进行多次克隆后检查，其机制和原理，教参与课本都没有解释清楚，经查询专业医药生产文章得知以下解释：筛选培养基得到的专一阳性克隆需再次克隆的原因：可以简单理解为：1.可能含有不分泌抗体的细胞或有多株分泌抗体的细胞2.刚融合的细胞不稳定一般再经三次克隆选择后，才能达到100%阳性克隆。
细解做法为：第一次筛选培养（HAT）：去除无关细胞，得到杂交瘤细胞。
将融合的细胞悬浮于HAT培养基中，加入到96孔板内，根据情况2-3天换液一次，每次吸去二分之一到三分之二培养液，再加入等量新鲜培养液。
7-14天改用HT培养液，14天以后用普通的RPMI1640完全培养液。
因为杂交瘤数量很少，多半不易存活，所以通常要加入饲养细胞才能使其繁殖，常用小鼠腹腔巨噬细胞、脾细胞和胸腺细胞。
能释放某些生长刺激因子，并能满足杂交瘤细胞对细胞密度的依赖性。
（有的死，有的活，活的有些可以用单一抗体检验阳性，但阳性孔可能由1~多个细胞克隆得到）第二次筛选：初筛阳性克隆可能含有不分泌抗体的细胞或有多株分泌抗体的细胞，且刚融合的细胞不稳定，故应尽早进行克隆。
克隆后的细胞集团生物学特性完全相同。
（将其单个分开）融合后的杂交瘤细胞要经过三次克隆化才能达到100%的阳性克隆。
常用方法：有限稀释法和软琼脂法。
有限稀释法，把杂交瘤细胞悬液稀释后，加入到96孔板中，理论上每孔一个细胞，第一次克隆化时用HT培养液，以后的克隆化可以用不含HT的RPMI1640培养液。
也要加入饲养细胞。
软琼脂法，在培养液中加入0.5%左右的琼脂糖凝胶，细胞分裂后形成小球样团块，由于培养基是半固体的，可用毛细管将小球吸出，团块经打碎后，移入96孔板继续培养。
单克隆抗体多次筛选的原理
单克隆抗体多次筛选的原理单克隆抗体多次筛选的原理单克隆抗体是一种可以识别和结合到特定抗原的抗体分子。
在制备单克隆抗体的过程中，需要经过多次筛选，以确保获得高亲和力和高特异性的单克隆抗体。
下面将介绍单克隆抗体多次筛选的原理。
第一次筛选：免疫原与抗体结合在制备单克隆抗体的第一次筛选中，需要将免疫原与小鼠或兔子等动物的免疫系统接触，激发其产生抗体。
然后从动物体内收集血清，将其与免疫原结合，筛选出与免疫原结合能力较强的抗体。
第二次筛选：抗体与免疫原结合在第一次筛选后，需要将抗体与免疫原结合，筛选出与免疫原结合能力最强的抗体。
这一步通常采用ELISA等技术进行。
第三次筛选：亲和力筛选在第二次筛选后，需要对抗体进行亲和力筛选，以筛选出具有高亲和力的抗体。
亲和力是指抗体与抗原结合的强度，亲和力越高，结合越紧密，抗原的识别和结合能力就越强。
第四次筛选：特异性筛选在第三次筛选后，需要对抗体进行特异性筛选，以筛选出具有高特异性的抗体。
特异性是指抗体只能识别和结合到目标抗原，而不会与其他抗原结合。
通常采用Western blot等技术进行特异性筛选。
第五次筛选：克隆化在第四次筛选后，需要对抗体进行克隆化，以获得单克隆抗体。
克隆化是指将抗体分离成单个细胞，并培养成单个细胞克隆。
通过克隆化，可以获得具有相同特异性和亲和力的单克隆抗体。
总结单克隆抗体的制备需要经过多次筛选，以确保获得高亲和力和高特异性的单克隆抗体。
在筛选过程中，需要进行免疫原与抗体结合、抗体与免疫原结合、亲和力筛选、特异性筛选和克隆化等步骤。
通过多次筛选，可以获得高质量的单克隆抗体，用于科研和临床应用。
单克隆抗体制备过程中经过两次筛选[1]
![单克隆抗体制备过程中经过两次筛选[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/9a194bfd6394dd88d0d233d4b14e852458fb39b0.png)
单克隆抗体制备过程中经过两次筛选单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。
第一次筛选的原理与方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。
普遍采用的H A T选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。
其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。
在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HA T培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DN A合成的“D途径”。
另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。
因此，在HA T培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。
对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。
惟有骨髓瘤细胞与效应B 细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HA T培养液中选择性存活下来，并不断增殖。
第二次筛选的原理和方法：在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HA T培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。
单克隆抗体制备中杂交瘤细胞的两次筛选
单克隆抗体制备中杂交瘤细胞的两次筛选(资料)单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。
第一次筛选的原理与方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。
普遍采用的HA T选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。
其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。
在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。
另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。
因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d 左右会死亡。
对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S 途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。
惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。
第二次筛选的原理和方法：在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。
单克隆抗体制备若干问题解答
单克隆抗体制备若干问题解答问题一：单克隆抗体与多克隆抗体有何区别？单克隆抗体：指抗体形成细胞克隆所产生的抗体，即由一个细胞的后代所产生的针对一种它能识别的抗原决定簇的的专一性抗体。
多克隆抗体：指抗原入侵机体（由于抗原物质可能包含多种分子，当然有时即便是只含有一种分子也是由多种抗原决定簇组成的），刺激具有相应抗原受体的不同淋巴细胞增殖分化，而产生的多种抗血清抗体。
可见单克隆抗体与多克隆抗体的主要区别在于其抗体种类是否单一，而不是抗体数量的多少。
问题二：单克隆抗体制备流程中的“两次筛选”是如何进行的？第一次筛选：（1）筛选对象：脾细胞、瘤细胞、脾-脾细胞、瘤-瘤细胞、脾-瘤细胞（即羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后得到的细胞混合液）。
另有少量多细胞聚体，因寿命短而迅速死亡，故无需特别筛选。
（2）筛选方法：用HAT选择培养基筛选出正常生长的细胞。
（注意：HAT培养基含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。
其中氨基喋呤能阻断核酸合成的主通路，而次黄嘌呤在磷酸核糖转移酶HGPRT的催化下能合成RNA或胸腺嘧啶核苷在胸腺嘧啶核苷激酶TK的催化下合成DNA均属于核酸合成的旁通路。
）（3）筛选结果：脾-瘤细胞正常生长，其它细胞都会死亡。
（析因：脾细胞和脾-脾细胞的核酸合成主通路被氨基喋呤阻断，虽有核酸合成的旁通路，但不能长期增殖；瘤细胞和瘤-瘤细胞缺乏核酸合成旁通路的酶，核酸合成主通路又被氨基喋呤阻断，因核酸合成障碍而死亡；脾-瘤细胞具有脾细胞的核酸合成旁通路酶，虽核酸合成主通路被氨基喋呤阻断，但可利用培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核酸而得以生存。
）第二次筛选：（1）筛选对象：多克隆杂交瘤细胞群体。
（即产生多种抗体的脾-瘤细胞混合群体。
）（2）筛选方法：抗体检测（如免疫荧光技术、放射免疫技术等，实际上是利用稀释法，在聚乙烯微板孔内逐个杂交瘤细胞分开培养，然后检查每孔中产生特定抗体的能力）。
单克隆抗体制备中筛选杂交瘤细胞的原理
单克隆抗机造备历程中筛选纯接瘤细胞的本理战要领之阳早格格创做单克隆抗机造备历程中，有二次筛选历程，第一次是选出纯接瘤细胞（用采用培植基），第二次是进一步选出能爆收咱们需要的抗体的纯接瘤细胞.第一次筛选的本理战要领：细胞混合后，纯接瘤细胞的采用性培植是第一次筛选的闭键.一致采与的HAT采用性培植液是正在一般的动物细胞培植液中家次黄嘌呤、氨基蝶呤战胸腺嘧啶核苷酸.其一居室细胞中的DNA 合成油二条道路：一条道路是死物合成道路（“D道路”），即由氨基酸及其其余小分子化合物合成氨基酸，为DNA分子的合成提供本料.再此合成历程中，叶酸动做要害的辅酶介进那一历程，而HAT培植液中氨基蝶呤是一种叶酸的拮抗物，不妨阻断DNA合成的D道路.另一条道路是应慢道路（“S道路”），她是利用次黄嘌呤——鸟嘌呤磷酸核苷变化酶战胸腺嘧啶核苷激酶催化次黄嘌呤战胸腺嘧啶死成相映的核苷酸，二种酶缺一不可.果此，正在HAT培植液中，已混合的效力B 细胞核二个效力B细胞混合的D道路被氨基蝶呤阻断，随S道路平常，但是果缺累正在体中培植液中删殖的本领，普遍10天安排会牺牲.对付于骨髓瘤细胞以及自己混合细胞而止，由于常常采与的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核苷变化酶缺陷型细胞，果此自己不S 道路，且D道路又被氨基蝶呤阻断，所有正在HAT培植液中也不克不迭删殖而很快牺牲.惟有骨髓瘤细胞与效力B细胞相互混合产死的纯接瘤细胞，既具备效力B细胞的S道路，又具备骨髓瘤细胞正在体中培植液中少久删殖的个性，果此能正在HAT培植液中采用性存活下去，本去不竭删殖.第二次筛选的本理战要领：正在单克隆抗体的死产历程中，由于效力B细胞的特同性是分歧的，经HAT培植液第一次筛选出的纯接瘤细胞爆收的抗体存留好别，必须对付纯接瘤细胞举止第二次筛选，选出能爆收特定抗体的纯接瘤细胞.二次筛选常常采与有限密释克隆细胞的要领，将纯接瘤细胞多倍密释，接种正在多孔的细胞培植板上，是每孔细胞不超出一个，通过培植让其删殖，而后检测各孔上浑液中的细胞分泌的抗体，上浑液可与特定抗本分离的培植孔为阳性孔.阳性孔中的细胞还不克不迭包管是去自单个细胞，继承举止有限密释，普遍沉复3-4次，曲至确疑每孔中删殖的细胞为单克隆细胞.第二次筛选也是审定的历程.。
高中生物论文 动物细胞工程中的目的杂种细胞的两次筛选人教版
动物细胞工程中目的杂种细胞的两次筛选在单克隆抗体的制备中，获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞是关键。
当已免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的过程中，将会形成多种细胞的混合体，包括B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、B—B融合细胞、骨髓瘤——骨髓瘤融合细胞、B——骨髓瘤融合细胞（即杂交瘤细胞）和细胞多聚体（容易死亡，无需筛选），如何从混合细胞中提取到杂交瘤细胞呢？我们通过下面的例题进行说明。
下图是制备分泌抗X抗体的过程，根据图解回答问题：（1）图中有A、B两次筛选过程，其中A过程目的是筛选出，B过程目的是筛选出。
（2）请根据以下信息，设计一方法（不考虑机械方法）从培养液中筛选出杂交瘤细胞。
已知细胞合成DNA有D和S两种途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。
人淋巴细胞有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖；鼠骨髓瘤细胞中虽然没有S途径，但能不断分裂增殖。
将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。
方法：。
原理：。
【解析】从不同种类细胞中筛选出杂交瘤细胞一般要经过两次筛选。
第一次筛选（图中A过程）：目前常采用HAT选择培养基筛选杂交瘤细胞。
其原理是：DNA的合成有D和S两种途径。
B淋巴细胞具有D和S两种DNA合成途径，但一般不分裂增殖；骨髓瘤细胞只有一种DNA合成途径，即D途径，可无限增殖；杂交瘤细胞具有D和S两种DNA合成途径，它利用其中任何一个途径都可无限增殖。
由于HAT选择培养基是在普通培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）等物质配制而成，由于氨基喋呤可阻断D途径，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞不断增殖，而且B淋巴细胞一般不增殖，淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂交瘤细胞可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。
所以多种不同形式细胞的混合体在HAT选择培养液中，只有杂交瘤细胞能存活下来并不断增殖。
第二次筛选（图中B过程）：由于实验小鼠在注射目标抗原前，其体内已存在大量的病原体，因此小鼠体内会存在大量的针对不同种类抗原的免疫B淋巴细胞。
单克隆抗体制备中筛选杂交瘤细胞的原理
单克隆抗体系体例备进程中筛选杂交瘤细胞的道理和办法【1 】单克隆抗体系体例备进程中,有两次筛选进程,第一次是选出杂交瘤细胞（用选择造就基）,第二次是进一步选出能产生我们须要的抗体的杂交瘤细胞.第一次筛选的道理和办法：细胞融会后,杂交瘤细胞的选择性造就是第一次筛选的症结.广泛采取的HA T选择性造就液是在通俗的动物细胞造就液中家次黄嘌呤.氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷酸.其一居室细胞中的DNA合成油两条门路：一条门路是生物合成门路（“D门路”）,即由氨基酸及其其他小分子化合物合成氨基酸,为DNA 分子的合成供给原料.再此合成进程中,叶酸作为主要的辅酶介入这一进程,而HAT造就液中氨基蝶呤是一种叶酸的拮抗物,可以阻断DNA合成的D门路.另一条门路是应急门路（“S门路”）,她是应用次黄嘌呤——鸟嘌呤磷酸核苷转移酶和胸腺嘧啶核苷激酶催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶生成响应的核苷酸,两种酶缺一不成.是以,在HAT造就液中,未融会的效应B 细胞核两个效应B细胞融会的D门路被氨基蝶呤阻断,随S门路正常,但因缺少在体外造就液中增殖的才能,一般10天阁下会逝世亡.对于骨髓瘤细胞以及自身融会细胞而言,因为平日采取的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺点型细胞,是以自身没有S门路,且D门路又被氨基蝶呤阻断,所有在HAT造就液中也不克不及增殖而很快逝世亡.只有骨髓瘤细胞与效应B细胞互相融会形成的杂交瘤细胞,既具有用应B细胞的S门路,又具有骨髓瘤细胞在体外造就液中长期增殖的特征,是以能在HAT造就液中选择性存活下来,其实不竭增殖.第二次筛选的道理和办法：在单克隆抗体的临盆进程中,因为效应B细胞的特异性是不合的,经HAT造就液第一次筛选出的杂交瘤细胞产生的抗体消失差别,必须对杂交瘤细胞进行第二次筛选,选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞.二次筛选平日采取有限稀释克隆细胞的办法,将杂交瘤细胞多倍稀释,接种在多孔的细胞造就板上,是每孔细胞不超出一个,经由过程造就让其增殖,然后检测各孔上清液中的细胞排泄的抗体,上清液可与特定抗原联合的造就孔为阳性孔.阳性孔中的细胞还不克不及包管是来自单个细胞,持续进行有限稀释,一般反复3-4次,直至确信每孔中增殖的细胞为单克隆细胞.第二次筛选也是判定的进程.。
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筛选的方法： 用选择性培养基来完成，即HAT培养基。
加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）及胸腺嘧啶核苷（T）的培养基称HAT培养基。
其中，氨基喋呤可阻断DNA合成的主要途径。主要途径阻断后，依靠应急途径即在HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）和TK（胸苷激酶）作用下，利用胸腺嘧啶和次黄嘌呤合成DNA，缺少其中一种，DNA合成不能发生。
阳性孔中的细胞除了含有分泌需要的特异性抗体的细胞外，还可能含有分泌其他抗体的细胞，也可能含有不分泌抗体的细胞，所以不能直接把阳性孔的细胞用以生产单克隆抗体。要进行第二次筛选，这个步骤称为“杂交瘤细胞的克隆化”。所谓克隆化是指使单个细胞无性繁殖而获得该细胞集团的整个培养过程。常用的方法包括有限稀释法、软琼脂法、单细胞显微操作法、单克隆细胞集团显微操作法等。有限稀释法的简要过程就是将阳性孔细胞计数，将计数后的细胞准确地进行系列稀释，直至每毫升含10个细胞，再把稀释液接种到细胞培养板，按每孔接种0．1mL细胞悬液，即每孔含1个细胞。其他方法原理和操作不同，但是最终目的都是每个孔中接种1个细胞。如此每个孔中培养出来的细胞都是单克隆细胞。
最后，对选择下来的细胞进行克隆方法有两种：一种可以在体外培养；一种可以一直到小鼠腹腔中增殖,即可从中提取所需要的单克隆抗体。
附：关于两次专一抗体检验阳性（《生物学教学》）
在制备单克隆抗体的过程中要进行至少两次专一抗体检验阳性，如何理解多次专一抗体检验阳性这个概念呢？
融合后细胞是用细胞培养板来培养的，此时每个孔里加的是HAT培养基。培养的结果是有的孔有细胞，即有杂交瘤细胞；有的孔可能没有细胞，也就是无杂交瘤细胞。但是，有细胞的孔并不是都能产生目标抗体，有可能产生的是其他抗体。这是因为脾细胞中包含多种B细胞，它们产生的是不同的抗体。为了得到目标抗体，当然要进行检测，这就是所谓的“专一抗体检验”。“阳性”是一种术语，代表“存在”;“阴性”代表“不存在”。“检验阳性”的意思就是有这种抗体。被检验为阳性的孔称为“阳性孔”，这个孔里的细胞才有进行下一步处理的价值。这是第一次“专一抗体检验”。
接下来就要进行第二次“专一抗体检验”，结果为阳性的细胞就是能分泌目标抗体的单克隆细胞，这些细胞就可以进行大规模的培养。教材中提到可能要进行多次“专一抗体检验”，是因为进行一次有限稀释法可能得到的不是单克隆细胞，要进行第三次甚至更多次的有限稀释和克隆化培养，还要再进行第三次甚至更多次“专一抗体检验”。
由于通过以上方法选择出杂交瘤细胞，虽然都是杂交瘤细胞，但可能是同一抗原的不同抗原决定簇刺激产生的。所以产生抗体是不纯的。如果不进一步提纯，这样得到的是多克隆抗体，所以，需要第二次筛选。
第二次筛选
要想获得单克隆抗体，所以必须得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群，由这样的细胞群产生的抗体才是真正意义的单克隆抗体。
用于杂交的骨髓瘤细胞系均由经有毒药物诱导而成选择产生的代谢缺陷型细胞，细胞内均无TK或HGPRT，所以单个或融合骨髓瘤细胞在HAT培养液中将死亡。B细胞虽然有HGPRT和TK，但在体外通常培养条件下，尤其是在单个细胞环境下难于长期存活和增殖传代。
因此，只有杂交瘤细胞才能在HAT培养液中生长繁殖。
第一类细胞在体外培养的条件下，因为无法无限增殖，最终死亡，因此，筛选的关键是限制第二类细胞的增殖。科学家在设计实验时，已经考虑到这方面问题，所以他们选择的瘤细胞是有遗传缺陷的，即胸腺嘧啶核苷激酶缺陷（TK－）或者次黄嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT－）缺陷。
筛选的目的：获得杂交瘤细胞。
筛选的目的：
筛选只针对某一种特定的抗原决定簇产生抗体的杂交瘤细胞，即得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群并且能产生所需ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ体
筛选的方法：
（1）分离单个细胞置入多孔培养板的每个孔中培养。
（2） 检测每孔细胞是否产生所注射抗原的抗体（即教材插图中提到的选出能产生特定抗体的阳性细胞群）所以筛选的条件是两层意思：单个细胞单孔培养保证每个孔中的细胞在产生抗体时是针对同一抗原的同一抗原决定簇产生的的，但每个孔中细胞却不一定都能产生抗体，把那些不产生抗体的细胞淘汰，对能分泌针对抗原某一决定簇抗体的阳性细胞选择下来继续克隆，从而保证大量的生产所需抗体。
学生的问题：教材中，在单克隆抗体制备中两次提到筛选问题，甚至提到了阳性细胞，对于两次筛选的方法和目的始终是一些人的困惑，那么两次筛选的目的和方法到底是什么。
第一次筛选
首先，在已免疫过的B淋巴细胞（即效应B细胞）和骨髓瘤细胞进行杂交时，可能出现的情况应该先弄清楚。
如果只考虑两两融合，可能的情况有：（效应）B淋巴细胞和（效应）B淋巴细胞的融合；（效应）B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合（即杂交瘤细胞）；骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合（即瘤瘤细胞）。
即:
淋巴细胞：不能生长，5到7天死亡；DNA的主要合成途径被A阻断。
骨髓瘤细胞：不能生长，5到7天死亡；HGPRT缺乏，DNA合成的旁路途经受阻。
骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成杂交瘤细胞，可长期生长繁殖。利用淋巴细胞的HGRT将H合成为嘌呤碱并最终与T一起合成DNA从淋巴细胞获得产生某种抗体的遗传信息，从骨髓瘤细胞获得不断繁殖的能力。