真菌多糖的加工提取

猴头菇种植基地
香菇多糖： 具有免疫增 强作用，其机制在体内 虽无直接杀伤肿瘤细胞 作用，但可通过增强机 体的免疫功能而发挥抗 肿瘤活性。在体内能使 脾脏和腹腔的NK细胞 活性增强，诱生干扰素 与本品剂量相关，其活 性与白细胞介素类或干 扰素诱导剂有协同作用。 另有证明，在体外本品 可增强脱氧胸腺嘧啶核 苷的抗艾滋病毒的活性。
真菌多糖的制取
• 灵芝多糖的分离提取
• 同香菇多糖的分离提取一样，传统的提取灵芝多糖的方法 生产周期长、产量低，使应用受到限制。如采用液体发酵 培养法则培养周期短、成本低，具有工业化生产前景。同 时应用超声波和超滤等物理手段能帮助提高提取速度和多 糖含量。由于灵芝子实体结构紧密，具有较好的维持力， 存在于细胞壁内的灵芝多糖较难渗出。超声波的高频振荡 及其产生的“空化效应”能破除这种维持力，使灵芝子实体 的结构层发生变化，并除去一部分影响酶接触纤维的妨碍 物，从而提高纤维素酶水解纤维素的水解效率，扩大透析 膜孔径，尽快释放细胞壁多糖。用中空纤维超滤器从灵芝 菌发酵液中分离和浓缩灵芝多糖的方法操作方便、效率高、 条件温和，适于工业规模生产。
灵芝多糖： 能提高机体免 疫力，加速血液微循环， 提高血液供氧能力，降低 机体静止状态下的无效耗 氧量，消除体内自由基， 提高机体细胞膜的封闭度， 抗放射，提高肝脏、骨髓、 血液合成 DNA,RNA，蛋白 质的能力，延长 寿命等。 灵芝的多种药理活性大多 和灵芝多糖有关。
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真菌多糖的制取
1969 年, 日本学者 Goro Chihara 首先利用热水从香菇子 实体中浸提出 4 种多糖, 其中 2 种有明显抗肿瘤作用, 一种是含 有 β糖苷键的线性葡聚糖, 测试表明其分子量为 95-105 万, 并 定名为Lentinan。从此, 科学界掀起了食(药)用真菌多糖研究的 热潮, 真菌多糖成为最具发展前途的医疗保健资源之一。目前对 于真菌多糖的研究主要集中在多糖的组成和结构, 以及多糖的生 物活性和作用机理。真菌多糖包括细胞外多糖、细胞内多糖和 菌丝壁多糖。细胞外多糖指液态培养条件下真菌细胞分泌到细 胞外的多糖, 可以给发酵上清液直接加入乙醇, 将其沉淀而获得。 与细胞外多糖不同,菌丝壁多糖存在于菌丝细胞壁内部, 细胞内 多糖存在于菌丝细胞内部, 由于真菌细胞或组织外大多有脂质包 围, 所以不易直接获得, 常需要通过一些物理或化学的方法破坏 脂质或细胞壁, 从而进行提取和纯化。显然, 如何有效地从原材 料中提取粗多糖, 是进行真菌多糖研究的关键。
真菌多糖的制取
• 多糖的药理作用 实验表明, 多糖具有抗 感染、抗消化性溃疡、抗凝血、抗病毒、 抗反射性及降血糖、降血脂等作用。80 年 代,日本学者确认, 香菇、灵芝、获荃、黑耳、 银耳等多糖是一种免疫激剂, 可通过活化N K 细胞阻止癌细胞增生, 对艾滋病等多种免 疫缺陷症均有良的防治作用。多糖还具有 提高肝脏解毒能力, 促进核酸和蛋白质生物 合成, 有助于受损伤细胞的修复和更新, 从 而延缓细胞衰老进程, 有利于延年益寿。
真菌多糖的制取
大多数真菌多糖在热水中溶出率较高, 遇乙醇沉淀, 因此通常 用水作溶剂来提取真菌多糖, 用乙醇来沉淀得到粗多糖, 目前 最常用的也是最基本的提取方法为热水浸提法。热水浸提法 提取多糖时的主要问题是提取率较低, 为了提高提取率, 研究 人员对真菌多糖的提取方法进行了改良, 包括提取前对原料 进行如微波、超声波等物理辅助处理或加酶处理,在提取中进 行适当加压处理, 对提取后残渣进行加酸加碱或加盐后再二 次提取的处理等, 形成了物理辅助提取法和化学辅助提取法。 采用上述方法提取的多糖为粗多糖, 其主要成分多糖的含量 一般在 60%以上。如果要得到精制的多糖, 还需经过脱蛋白、 脱色、透析等步骤去除其中的杂质。
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真菌多糖的提取，加工和分离
真菌多糖简介
• 活性多糖大多数可以刺激免疫活性，能增 强网状内皮系统吞噬肿瘤细胞的作用，促 进淋巴细胞转化，激活T细胞和B细胞，并 促进抗体的形成。从而在一定程度上具有 抗肿瘤的活性。但对于肿瘤细胞并无直接 的杀伤作用。活性多糖能降低甲基胆蒽诱 发肿瘤的发生率，对一些易发生广泛转移， 不易采取手术治疗和放射疗法的白血病， 淋巴瘤等，特别有价值。
真菌多糖的制取
• 多糖的提取
目前, 真菌多糖的提取可从子实体和采用深 层培养发酵液的菌丝中分离获得, 但以从子实体中提取多糖为主。 首先是将子实体粉碎, 加入甲醇或乙醇乙醚1 : 1 混合液, 水浴加 热搅拌1 一3 小时除去表面脂肪。其次是用残渣提取多糖, 常用 的方法有不同温度下的水提法、稀酸提法、冷热稀碱提法。水 提法采用的较多, 适合于提取水溶性多糖。稀酸提取法适用于提 取酸溶性多糖、时间宜短, 温度不超过50 ℃ , 以防止糖昔键断 裂。稀碱法适合于提取碱溶性糖。然后除去小分子杂质, 常采用 透析法, 将多糖提取液置于半透膜透析袋中, 逆向流水透析1 一3 天。第四步是沉淀多糖。大部分多糖在有机溶剂中的溶解度极 小, 所以可用有机溶剂来沉淀。常用4 一5 倍低级醇、丙酮, 一 般在p H = 7.0 左右沉淀多糖, 制得粗多糖。最后是除去蛋白质。 除去多糖中的蛋白质常用的方法是三氯醋酸法。得到的溶液基 本上是没有蛋白质与小分子杂质的多糖混合物或单一多糖。
真菌多糖的制取
• 多糖的纯化
多糖的纯化是将多糖混合物分离 为单一的多糖。纯化方法很多, 主要纯化方法有: • (l) 分步沉淀法 根据不同多糖在不同浓度的低级 醇或酮中具有不同溶解度的性质, 逐次按比例由小 而大加入这些醇或酮分步沉淀。此法适用于分离 各种溶解度相差较大的多糖。 • (2)盐析法 根据不同多糖在不同浓度盐中具有不 同溶解度而分离。
真菌多糖的制取
• 香菇的分离提取
• 香菇多糖是极性大分子化合物，其特定的结构与免疫活性 有密切关系。因此香菇多糖的提取大多采用不同温度的水 和稀碱溶液，并尽量避免在过于酸性的条件下操作，因为 强酸性能引起糖苷键的断裂。为了提高香菇多糖的提取率， 在浸提液中加入复合酶，可以破坏细胞壁，使多糖易于从 细胞内释放出来。适用于香菇多糖提取的酶有纤维素酶、 果胶酶和木瓜蛋白酶等。超声提取和超滤分离等物理手段 能提高香菇多糖的提取率、缩短提取时间和降低提取液的 粘度。利用香菇深层发酵工艺来获得香菇菌丝体和香菇菌 多糖，这样生产周期可缩短为1周，并使费用大为降低， 为香菇多糖规模化生产打下了良好的基础。