细胞因子的检测
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CD8+T淋巴细胞下降 常见疾病有类风湿性关节炎、重症 肌无力、胰岛素依赖型糖尿病以及膜性肾小球肾炎等。
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T淋巴细胞表面标志物检测的临床意义
CD4+/CD8+细胞比值下降 见于AIDS、恶性肿瘤进行期 和复发时、瘤型麻风病，也见于传染性单核细胞增多症、 巨细胞病毒感染、血吸虫病等感染性疾病。
7
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E玫瑰花形成试验
显微镜下计数花结形成细胞占淋巴细胞的比例，以每个淋巴 细胞黏附3个或3个以上绵羊红细胞者为花结形成细胞。本试 验所得E玫瑰花环的百分率，基本上可以代表被检标本中全 部T淋巴细胞的百分率(Et)。
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E玫瑰花形成试验
9
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E玫瑰花形成试验
此方法是最经典的方法，但是由于操作繁琐，影响因素多， 结果判断需要经验丰富的技术人员，主观判断性强，故现在 临床实验室基本不用。
13
流式细胞术
目前，检测T淋巴细胞最简便的方法是流式细胞术检测其表 面标志物。
14
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T淋巴细胞表面标志物检测的临床意义
CD3+T淋巴细胞升高，常见于甲状腺功能亢进、淋巴细 胞性甲状腺炎、重症肌无力以及器官移植后排斥反应等。
CD3+T淋巴细胞降低主要见于免疫缺陷病，恶性肿瘤、 系统性红斑狼疮（SLE）、某些病毒感染。
免疫细胞化学法
首先通过密度梯度离心法获取外周血单个核细胞，再以酶作 为抗体标记物，采用细胞酶免疫化学技术完成，并结合生物 素-链霉亲和素放大系统提高灵敏度。用普通显微镜观察， 凡着色的细胞即为相应CD抗原阳性的细胞。
12
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Baidu Nhomakorabea式细胞术
采用多参数标记的单克隆荧光抗体标记单个核细胞悬液，根 据T细胞的表面标志，用适当的荧光素标记特异性单克隆抗 体与淋巴细胞反应，通过流式细胞仪测定，首先在淋巴细胞 中识别出CD3+T细胞，然后在CD3+细胞中再区分CD4+T 细胞和CD8+T细胞，可分别CD4+T细胞和CD8+T细胞得到 占淋巴细胞的百分比和荧光强1度3 。
10
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免疫荧光法
首先通过密度梯度离心法获取外周血单个核细胞，再加入荧 光素标记的抗CD单克隆抗体与分离得到的外周血单个核细 胞（PBMC）结合，孵育30分钟后，用荧光显微镜观察并计 数。一般计数200个淋巴细胞，求出荧光阳性细胞与计数细 胞总数之比，即为相应CD抗原阳性T细胞的百分含量。
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T淋巴细胞表面标志物检测的临床意义
CD4+T淋巴细胞升高 见于类风湿性关节炎活动期。 CD4+T淋巴细胞降低 某些病毒感染性疾病，如AIDS、巨
细胞病毒感染、严重创伤、全身麻醉、大手术、应用免疫 抑制剂（如环孢素A）等可见到。
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T淋巴细胞表面标志物检测的临床意义
CD8+T淋巴细胞升高 见于部分病毒感染性疾病如传染性 单核细胞增多症急性期、巨细胞病毒感染以及慢性乙型肝 炎。
20
淋巴细胞转化试验是检测细胞免疫功能的经典试验。
20
检测细胞增殖的方法
1
形态法
同位素法
2
3
21
MTT比色法
21
【测定原理】
形态法
分离外周血PBMC，与适量的PHA（或其他丝裂原物质）混 合，置于37℃培养72小时。取培养细胞做涂片染色，依据淋 巴母细胞转化的形态特征（细胞的大小、核质比、胞质染色 性、有无核仁等），借助光学显微镜，计数200个淋巴细胞，
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CD3分子是所有的T细胞均有的共同标志物抗原，同时，不同功能 的T细胞亚群也有各自的标志性抗原。
5
T淋巴细胞表面标志物的检测
T淋巴细胞表面标志检测的方法包括E玫瑰花形成试验、免疫 荧光法（IFA）、免疫细胞化学法、流式细胞术等。
6
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E玫瑰花形成试验
T淋巴细胞表面具有特异性绵羊红细胞（SRBC）受体（CD2 ）,在一定条件下可与SRBC结合形成玫瑰花样的花环，称为E 玫瑰花形成试验（erythrocyte rosette formation test,ERFT）。
22
按下式算出转化率。
22
形态法
形态法转化率公式：
【参考值】 T淋巴细胞转化率2360.1%±7.6%
23
同位素法
【测定原理】 将PBMC与PHA共同培养，淋巴细胞受刺激发生增殖， 新合 成的DNA明显增加，需要摄取核苷酸原料。此时，若将3H标 记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）加入到培养液中，新合成的 DNA中就会掺入已标记的核苷酸。培养结束后，用液体闪烁 仪测定放射性核素量，记录每分钟脉冲数（cpm）,计算刺激
25
按下式算出转化率。
25
计算公式为：
同位素法
26
【参考值】 SI>2为有意义，SI<2为淋巴细胞转化率降低
26
MTT比色法
【测定原理】 MTT是一种噻唑盐，化学名为3-（4,5-二甲基-2-噻唑）2,5-二苯基溴化四唑。将PBMC与PHA共同培养，在细胞培 养终止前数小时加入MTT，继续混合培养，由于活细胞内的 线粒体中存在琥珀酸脱氢酶，琥珀酸脱氢酶可作用于MTT， 生成蓝黑色的甲臜颗粒并沉积于细胞内或细胞周围，且其生
CD4+/CD8+细胞比值升高 见于自身免疫性疾病如类风 湿性关节炎活动期、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、重
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症肌无力、膜性肾小球肾炎、器官移植后排斥反应等。
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T淋巴细胞功能的检测
1
淋巴细胞转化试验
2
混合1淋9 巴细胞反应
19
淋巴细胞转化试验
T淋巴细胞与植物血凝素(PHA)等非特异性有丝分裂原或特异 性抗原（曾经致敏T淋巴细胞的抗原）在体外共同培养时，细 胞内核酸和蛋白质合成增加，同时细胞形态转化为母细胞， 依据细胞的转化程度测定T细胞的免疫功能，这个试验称为淋 巴细胞转化试验。
24
指数(stimulating index,SI),判断淋巴细胞的转化程度。
24
【测定原理】
同位素法
分离外周血PBMC，与适量的PHA（或其他丝裂原物质）混 合，置于37℃培养72小时。取培养细胞做涂片染色，依据淋 巴母细胞转化的形态特征（细胞的大小、核质比、胞质染色 性、有无核仁等），借助光学显微镜，计数200个淋巴细胞，
第二十二章 临床免疫学检测
第一节 体液免疫检测 第二节 细胞免疫检测 第三节 肿瘤标志物检测
第二节 细胞免疫检测
T细胞亚群检测 B细胞亚群检测 自然杀伤细胞检测 细胞因子检测
3
3
T细胞亚群的检测
1
T淋巴细胞表面标志物的检测
2
T淋巴细4 胞功能的检测
4
T淋巴细胞表面标志物的检测
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T淋巴细胞表面标志物检测的临床意义
CD4+/CD8+细胞比值下降 见于AIDS、恶性肿瘤进行期 和复发时、瘤型麻风病，也见于传染性单核细胞增多症、 巨细胞病毒感染、血吸虫病等感染性疾病。
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E玫瑰花形成试验
显微镜下计数花结形成细胞占淋巴细胞的比例，以每个淋巴 细胞黏附3个或3个以上绵羊红细胞者为花结形成细胞。本试 验所得E玫瑰花环的百分率，基本上可以代表被检标本中全 部T淋巴细胞的百分率(Et)。
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E玫瑰花形成试验
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E玫瑰花形成试验
此方法是最经典的方法，但是由于操作繁琐，影响因素多， 结果判断需要经验丰富的技术人员，主观判断性强，故现在 临床实验室基本不用。
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流式细胞术
目前，检测T淋巴细胞最简便的方法是流式细胞术检测其表 面标志物。
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T淋巴细胞表面标志物检测的临床意义
CD3+T淋巴细胞升高，常见于甲状腺功能亢进、淋巴细 胞性甲状腺炎、重症肌无力以及器官移植后排斥反应等。
CD3+T淋巴细胞降低主要见于免疫缺陷病，恶性肿瘤、 系统性红斑狼疮（SLE）、某些病毒感染。
免疫细胞化学法
首先通过密度梯度离心法获取外周血单个核细胞，再以酶作 为抗体标记物，采用细胞酶免疫化学技术完成，并结合生物 素-链霉亲和素放大系统提高灵敏度。用普通显微镜观察， 凡着色的细胞即为相应CD抗原阳性的细胞。
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Baidu Nhomakorabea式细胞术
采用多参数标记的单克隆荧光抗体标记单个核细胞悬液，根 据T细胞的表面标志，用适当的荧光素标记特异性单克隆抗 体与淋巴细胞反应，通过流式细胞仪测定，首先在淋巴细胞 中识别出CD3+T细胞，然后在CD3+细胞中再区分CD4+T 细胞和CD8+T细胞，可分别CD4+T细胞和CD8+T细胞得到 占淋巴细胞的百分比和荧光强1度3 。
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免疫荧光法
首先通过密度梯度离心法获取外周血单个核细胞，再加入荧 光素标记的抗CD单克隆抗体与分离得到的外周血单个核细 胞（PBMC）结合，孵育30分钟后，用荧光显微镜观察并计 数。一般计数200个淋巴细胞，求出荧光阳性细胞与计数细 胞总数之比，即为相应CD抗原阳性T细胞的百分含量。
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T淋巴细胞表面标志物检测的临床意义
CD4+T淋巴细胞升高 见于类风湿性关节炎活动期。 CD4+T淋巴细胞降低 某些病毒感染性疾病，如AIDS、巨
细胞病毒感染、严重创伤、全身麻醉、大手术、应用免疫 抑制剂（如环孢素A）等可见到。
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T淋巴细胞表面标志物检测的临床意义
CD8+T淋巴细胞升高 见于部分病毒感染性疾病如传染性 单核细胞增多症急性期、巨细胞病毒感染以及慢性乙型肝 炎。
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淋巴细胞转化试验是检测细胞免疫功能的经典试验。
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检测细胞增殖的方法
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形态法
同位素法
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MTT比色法
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【测定原理】
形态法
分离外周血PBMC，与适量的PHA（或其他丝裂原物质）混 合，置于37℃培养72小时。取培养细胞做涂片染色，依据淋 巴母细胞转化的形态特征（细胞的大小、核质比、胞质染色 性、有无核仁等），借助光学显微镜，计数200个淋巴细胞，
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CD3分子是所有的T细胞均有的共同标志物抗原，同时，不同功能 的T细胞亚群也有各自的标志性抗原。
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T淋巴细胞表面标志物的检测
T淋巴细胞表面标志检测的方法包括E玫瑰花形成试验、免疫 荧光法（IFA）、免疫细胞化学法、流式细胞术等。
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E玫瑰花形成试验
T淋巴细胞表面具有特异性绵羊红细胞（SRBC）受体（CD2 ）,在一定条件下可与SRBC结合形成玫瑰花样的花环，称为E 玫瑰花形成试验（erythrocyte rosette formation test,ERFT）。
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按下式算出转化率。
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形态法
形态法转化率公式：
【参考值】 T淋巴细胞转化率2360.1%±7.6%
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同位素法
【测定原理】 将PBMC与PHA共同培养，淋巴细胞受刺激发生增殖， 新合 成的DNA明显增加，需要摄取核苷酸原料。此时，若将3H标 记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）加入到培养液中，新合成的 DNA中就会掺入已标记的核苷酸。培养结束后，用液体闪烁 仪测定放射性核素量，记录每分钟脉冲数（cpm）,计算刺激
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按下式算出转化率。
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计算公式为：
同位素法
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【参考值】 SI>2为有意义，SI<2为淋巴细胞转化率降低
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MTT比色法
【测定原理】 MTT是一种噻唑盐，化学名为3-（4,5-二甲基-2-噻唑）2,5-二苯基溴化四唑。将PBMC与PHA共同培养，在细胞培 养终止前数小时加入MTT，继续混合培养，由于活细胞内的 线粒体中存在琥珀酸脱氢酶，琥珀酸脱氢酶可作用于MTT， 生成蓝黑色的甲臜颗粒并沉积于细胞内或细胞周围，且其生
CD4+/CD8+细胞比值升高 见于自身免疫性疾病如类风 湿性关节炎活动期、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、重
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症肌无力、膜性肾小球肾炎、器官移植后排斥反应等。
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T淋巴细胞功能的检测
1
淋巴细胞转化试验
2
混合1淋9 巴细胞反应
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淋巴细胞转化试验
T淋巴细胞与植物血凝素(PHA)等非特异性有丝分裂原或特异 性抗原（曾经致敏T淋巴细胞的抗原）在体外共同培养时，细 胞内核酸和蛋白质合成增加，同时细胞形态转化为母细胞， 依据细胞的转化程度测定T细胞的免疫功能，这个试验称为淋 巴细胞转化试验。
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指数(stimulating index,SI),判断淋巴细胞的转化程度。
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【测定原理】
同位素法
分离外周血PBMC，与适量的PHA（或其他丝裂原物质）混 合，置于37℃培养72小时。取培养细胞做涂片染色，依据淋 巴母细胞转化的形态特征（细胞的大小、核质比、胞质染色 性、有无核仁等），借助光学显微镜，计数200个淋巴细胞，
第二十二章 临床免疫学检测
第一节 体液免疫检测 第二节 细胞免疫检测 第三节 肿瘤标志物检测
第二节 细胞免疫检测
T细胞亚群检测 B细胞亚群检测 自然杀伤细胞检测 细胞因子检测
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T细胞亚群的检测
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T淋巴细胞表面标志物的检测
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T淋巴细4 胞功能的检测
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T淋巴细胞表面标志物的检测