目的基因(COR)转入细菌细胞的方法及其检测
20-21版：3.2.2 将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定（创新设计）
第2课时将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定将目的基因导入受体细胞———————————————自主梳理———————————————提醒：农杆菌转化法中的两次拼接、两次导入(1)两次拼接：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的TDNA上；第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的TDNA拼接到受体细胞染色体的DNA上。
(2)两次导入：第一次导入是将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌；第二次导入(非人工操作)是指含目的基因的TDNA导入受体细胞。
(1)花粉管通道法是我国科学家独创的一种方法，主要适用于双子叶植物和裸子植物。
(×)提示：农杆菌转化法主要适用于双子叶植物和裸子植物。
(2)农杆菌侵入植物细胞后，其Ti质粒上的T－DNA能转移到被侵染的细胞，并且整合到该细胞的染色体DNA上。
(√)(3)培育转基因动物时，常选择受精卵作为受体细胞，利用显微注射法将目的基因直接注入受精卵中。
(√)(4)将目的基因导入原核细胞时，通常用大肠杆菌作为受体细胞，并需要用Ca2＋处理大肠杆菌，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的状态。
(√)[典型例题](2020·黑龙江哈尔滨三中高二期末)下列关于目的基因导入受体细胞的方法中，不正确的是()A.我国利用花粉管通道法培育了转基因抗虫棉B.用Ca2＋处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞C.将目的基因导入动物细胞最常用、最有效的方法是显微注射法D.利用农杆菌转化法培育大多单子叶转基因植物解析目前我国的转基因抗虫棉是利用花粉管通道法培育的，A正确；为使大肠杆菌易吸收DNA分子，应先用氯化钙溶液进行处理，使大肠杆菌处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态，B正确；显微注射技术是将目的基因导入动物细胞最为有效的一种方法，C正确；农杆菌转化法可将目的基因导入双子叶植物细胞，D错误。
答案D[变式训练](2020·郑州一中高二期末)下列关于农杆菌转化法的叙述，错误的是()A.农杆菌是一种生活在土壤中的微生物，能在自然情况下侵染双子叶植物和裸子植物B.可以将新鲜的从叶片上取下的圆形小片与农杆菌共同培养，然后筛选转化细胞，并再生成植株C.可以将花序直接浸没在含有农杆菌的溶液中一段时间，然后培养植物并获得种子，再进行筛选鉴定D.由于农杆菌自然状态下对大多数单子叶植物没有侵染能力，所以不可能利用农杆菌转化法转化玉米、水稻等单子叶植物细胞解析随着转化方法的突破，用农杆菌侵染水稻、玉米等多种单子叶植物也取得了成功，D错误。
目的基因的检测与鉴定方法
目的基因的检测与鉴定方法一、分子水平检测。
1.1 DNA分子杂交技术。
咱先来说说这个DNA分子杂交技术啊。
这就像是给目的基因和它对应的DNA来一场“认亲大会”。
把从受体细胞提取出来的DNA，和咱们用放射性同位素等标记过的含有目的基因的DNA片段放在一块儿。
如果两者能互补配对，那就是对上号了，就说明目的基因成功导入受体细胞的DNA里了。
这就好比一把钥匙开一把锁，对上了那就是找对地方了。
1.2 分子杂交技术。
这里面还有RNA分子杂交技术呢。
这是用来检测目的基因是否转录出mRNA的。
你想啊，目的基因要是在受体细胞里开始工作了，那得先转录出mRNA吧。
我们用标记的目的基因作探针，和从受体细胞里提取出来的mRNA杂交。
要是能杂交成功，就像两个久别重逢的老友紧紧相拥，那就说明目的基因转录出mRNA了。
这就像火车启动的第一步，转录成功才有后续的可能。
二、个体水平鉴定。
2.1 抗虫或抗病的接种实验。
如果咱们导入的是抗虫或者抗病的目的基因，那得检验一下到底有没有效果啊。
就拿抗虫来说，把受体植物种好，然后让害虫去“进攻”。
如果害虫吃了几口就“敬而远之”，那这植物大概率就是成功导入并表达抗虫基因了。
这就像一个战士经过训练后，要上战场检验一下是不是真的有战斗力。
要是植物被害虫吃得七零八落，那可能就是导入或者表达出问题了，就像竹篮打水一场空啊。
2.2 活性鉴定。
要是导入的是某种和活性相关的目的基因，比如说某种酶的基因。
那就得检测这个受体生物有没有表现出相应的活性。
就好比我们给一个机器安装了一个新的零件，得看看这个机器是不是能像预期的那样更好地运转。
如果有相应的活性，那就大功告成，要是没有，那就得重新检查整个过程，这就像大海捞针一样，得找出问题所在。
2.3 生长发育情况鉴定。
对于一些影响生长发育的目的基因，咱们得观察受体生物的生长发育情况。
如果导入的是让植物长得更高更壮的基因，那植物要是真的茁壮成长，就像芝麻开花节节高，那说明目的基因发挥作用了。
目的基因的检测与鉴定步骤
目的基因的检测与鉴定步骤目的基因的检测与鉴定是一项重要的生物技术，它可以帮助科学家们了解生物体内的特定基因，以及这些基因在生物体中的功能和表达方式。
下面将介绍目的基因的检测与鉴定的步骤。
第一步：提取DNA样本目的基因的检测与鉴定首先需要从生物体中提取DNA样本。
这可以通过不同的方法来实现，比如采用化学试剂的方法或者利用机械方法破碎细胞膜来释放DNA。
第二步：PCR扩增在获得DNA样本后，科学家们需要进行PCR扩增，以增加目的基因的数量。
PCR是一种基于DNA聚合酶的体外DNA复制技术。
它可以在短时间内扩增目的基因的特定区域，从而使其数量增加。
第三步：凝胶电泳分离PCR扩增后，科学家们需要进行凝胶电泳分离，以检测目的基因的扩增效果。
凝胶电泳是一种分离DNA片段的常用方法，它可以根据DNA片段的大小将其分离出来，并通过染料来可视化目的基因的扩增结果。
第四步：测序分析凝胶电泳分离后，科学家们需要进行测序分析，以确定目的基因的具体序列。
测序分析可以通过不同的方法来实现，如Sanger测序或者新一代测序技术。
通过测序分析，科学家们可以获得目的基因的完整序列信息。
第五步：功能鉴定在得到目的基因的序列后，科学家们可以进行功能鉴定，以了解目的基因在生物体中的功能和表达方式。
功能鉴定可以通过不同的方法来实现，如基因敲除、基因过表达或基因沉默等技术。
通过功能鉴定，科学家们可以深入研究目的基因的生物学功能。
目的基因的检测与鉴定包括提取DNA样本、PCR扩增、凝胶电泳分离、测序分析和功能鉴定等步骤。
这些步骤的顺序和操作方法可以根据具体的实验目的和要求进行调整和优化。
通过目的基因的检测与鉴定，科学家们可以更好地了解生物体内的基因信息，为生命科学研究和应用提供基础支持。
1.2 基因工程的基本操作程序(2)
3、检测目的基因是否翻译成蛋白质
方法: 抗原抗体杂交
（二）、鉴定（个体生物学水平） 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等
归纳: 基因工程的基本操作程序
1. 获取目的基因 从基因 利用PCR 化学方法人工合成
2. 构建基因表达载体
目的基因、启动子、终止子、标记基因
3. 将目的基因导入受体细胞
1.2 基因工程的基本操作程序
3、将目的基因导入微生物细胞
常用法：Ca2+处理 常用菌：大肠杆菌 微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 过程：
Ca2+处理
大杆菌
感受态 细胞
表达载体 与感受态 细胞混合
感受态细 胞吸收 DNA
将目的基因导入受体细胞
1.将目的基因导入植物细胞
如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来？
不存活
接种 培养 接种 培养
证明：
完全培养基
接种 培养 接种 培养
抗大 四肠 环杆 素菌 含有四环素的 基 不 完全培养基 因含 存 活
含有四环素的 完全培养基
四环素 抗性基因
导入
完全培养基
证明： 大肠杆菌 的受体细胞含 四环素 有目的基因 抗性基因
四大 环肠 证明： 素杆 基菌 因含 抗
练习1：(2008理综山东卷)为扩大可耕地面积，增 加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备 受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐 水稻新品系。 （2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方 法有农杆菌转化法和 法。 （3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要 利用 技术，该技术的核心是 和 。 （4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既 要用放射性同位素标记的 作探针进行分子杂交 检测，又要用 方法从个体水平鉴定水稻植株 的耐盐性。
20-21版：1.2.2 目的基因的导入、检测与鉴定（步步高）
1.2.2目的基因的导入、检测与鉴定一、将目的基因导入受体细胞1．转化的概念：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
2．将目的基因导入植物细胞(1)农杆菌转化法：将目的基因导入双子叶植物和裸子植物常用的方法。
方法步骤：目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→转入农杆菌→导入植物细胞→目的基因插入植物细胞染色体的DNA上→目的基因表达。
(2)基因枪法：将目的基因导入单子叶植物常用的方法。
(3)花粉管通道法：我国科学家独创的一种方法。
3．将目的基因导入动物细胞(1)方法：显微注射技术。
(2)常用的受体细胞：受精卵。
(3)步骤：目的基因表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→胚胎早期培养→移植到雌性动物的输卵管或子宫内→获得具有新性状的转基因动物。
4．将目的基因导入微生物细胞(1)方法：用Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(这种细胞称为感受态细胞)。
(2)受体细胞：原核生物(使用最广泛的是大肠杆菌)。
(3)选择原核生物作为受体细胞的原因：繁殖快，多为单细胞、遗传物质相对较少等。
(1)为培育抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体()(2)目的基因导入双子叶植物一般采用农杆菌转化法()(3)棉花植株受到损伤时，伤口处细胞会分泌酚类化合物，吸引农杆菌，引起植株感染()(4)Ti质粒上的T-DNA可与植物受体细胞的染色体DNA整合在一起()答案(1)×(2)√(3)√(4)√如图为抗虫棉的培育过程，请据图回答下列问题：(1)该基因工程中的目的基因和载体分别是什么？提示目的基因是Bt毒蛋白基因，载体是Ti质粒。
(2)该实例中，采用何种方法导入目的基因？为什么目的基因可以整合到染色体的DNA上？提示采用的方法是农杆菌转化法；由于Ti质粒上的T-DNA可转移并整合到受体细胞的染色体DNA上，而目的基因又插入到了T-DNA上，所以目的基因可以整合到受体细胞的染色体DNA上。
菌落PCR步骤详解及注意事项
菌落PCR 步骤详解及注意事项菌落PCR（colony PCR）, 是一种快速、高通量筛选目的片段是否存在的方法，操作起来十分简单。
筛选目的是为了得到含有目的片段的菌株进行测序，提高效率。
以大肠杆菌为例，一般来说，在转化了携带外源基因的质粒后，需要检查并确保所设计的质粒确实已经存在于细胞中了；那么，面对一整板的菌落，如何才能知道哪个小细菌携带了目标片段并且是完全准确的目的片段呢？按照一般的步骤，可以把每个菌落挑出来进行培养提取质粒，然后质粒进行测序或者酶切验证目的片段。
但是从培养细菌到最后送测序，花费太多时间。
如果说只有一个菌落去验证，那工作量倒不是很大；万一有100个菌落，怎么办呢？那么，我们就可以进行菌落PCR 筛选。
基本步骤1. 单菌落挑取把LB培养基倒入排枪槽中，然后用排枪加400μL LB培养基到48孔深孔板，用镊子拿已灭菌的小白枪头挑取平板上的单菌落并放到48孔深孔板中，同时在48孔深孔板和相应的表单上做好记录，注意对于蓝白斑筛选的板子要挑的是白斑。
挑好的48孔深孔板用封口膜盖好并做好相应标记（日期、板号等），用针头在封口膜打孔，把它放在37℃摇床上摇一个小时。
2. 菌落PCR反应配置好PCR反应的反应体系，把配好的反应液加到 96孔反应板中，用排枪加2.5μL 的菌液到其中，注意在96孔反应板上做好标记。
把96孔反应板放在PCR仪器上盖好橡胶垫，按照PCR反应条件设置反应程序，注意一定要把PCR仪器的盖子盖紧。
3. 琼脂糖凝胶电泳一般先配置1.0%-1.2%琼脂糖凝胶（即称1.2g的琼脂糖加100ml的TAE），在96孔反应板每个管中加0.5μL的溴酚蓝，震荡均匀，然后点样，电泳好的琼脂糖凝胶拍照，命名保存。
4. 判断阳性克隆并测序根据琼脂糖凝胶电泳图条带来判断阳性克隆，把阳性克隆的菌液进行扩大培养，进行测序验证，看看是否有完全正确的序列。
注意事项1. 对于要求筛选出插入片段方向的。
【高中生物】高中生物知识点：基因工程的基本操作程序
【高中生物】高中生物知识点：基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序：1、目的基因的获取（1）目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。
（2）获取方法：①从基因文库中获取；②人工合成（反转录法和化学合成法）；③PCR技术扩增目的基因。
2、基因表达载体的构建（1）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。
（2）组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。
如图：①启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。
②终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。
③标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
常用的标记基因是抗生素基因。
（3）基因表达载体的构建过程：3、将目的基因导入受体细胞（1）转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
（2）常用的转化方法：生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射技术Ca2+处理法受体细胞体细胞受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达将含有目的基因的表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子（3）重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。
4、目的基因的检测和表达（1）首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA 分子杂交技术。
（2）其次还要检测目的基因是否转录出mRNA，方法是用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。
（3）最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原--抗体杂交。
pcr检测目的基因是否转录的原理
pcr检测目的基因是否转录的原理PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种用于扩增DNA片段的技术，它在许多生物学研究中发挥着重要作用，其中之一就是检测目的基因是否转录。
PCR检测目的基因是否转录的原理是通过扩增RNA转录产物中的cDNA，从而判断该基因是否在特定条件下发生转录。
本文将从PCR技术的基本原理、PCR在基因转录检测中的应用、PCR技术的优势和局限性等方面进行深入探讨。
PCR作为一种在实验室中常用的技术，在许多生物学研究中都得到了广泛应用。
其基本原理是通过连续进行三个步骤来扩增目标DNA片段，这三个步骤分别是变性、退火和延伸。
在变性步骤中，通过高温使双链DNA解链形成单链；在退火步骤中，引物（primers）会结合到目标DNA的两端；在延伸步骤中，DNA聚合酶会在引物的引导下合成新的DNA链。
通过不断循环这三个步骤，可以在较短的时间内扩增出数以百万计的目标DNA片段，从而进行后续的分析和检测。
PCR技术在基因转录检测中的应用主要是通过检测RNA转录产物中的cDNA，来判断目的基因是否在特定条件下处于转录状态。
首先需要将RNA提取出来，通过逆转录酶将RNA转录为cDNA，然后利用PCR技术对这些cDNA进行扩增。
PCR扩增出的产物可以通过凝胶电泳等方法进行分析，从而可以确定目的基因在实验条件下是否处于转录状态。
这种方法可以帮助研究人员了解基因的表达情况，探索基因在不同条件下的调控机制，从而为相关研究提供重要参考。
PCR技术在基因转录检测中有许多优势。
首先，PCR技术非常灵敏，可以在非常低的RNA浓度下进行检测，这对于检测低表达基因或者初步筛选基因表达差异都非常有帮助。
其次，PCR技术具有很高的特异性，可以根据引物的设计来选择性地扩增目标基因，避免了其他干扰因素的影响。
此外，PCR技术操作简单、快速，可以在较短时间内得到检测结果，对于实验室中研究人员来说非常方便。
菌落PCR实验步骤、原理及应用介绍
菌落PCR实验步骤、原理及应用介绍一、引言常规的PCR扩增需要进行细菌培养、质粒制备等多步操作后才能进行基因扩增,操作繁琐耗时较长,同时在反复的操作中DNA量损失也较大,产率较低。
在1989年Gussow Clackson3建立了菌落PCR( colony PCR)法,菌落PR与我们通常的普通DNA的PCR的不同在于,直接以单个菌作为模板。
是一种可以快速鉴定菌落是否为含目的质粒的阳性菌落,操作简单,快速,在转化鉴定中较常用。
二、原理常规的PCR需要专门制备DNA模板,面菌落PCR可直接以单个菌落作为模板,用无菌牙挑取单个菌落到TE级冲液中,煮沸10mn,涡旋振荡后短暂离心,用1-2pl裂解液作为DNA模板,省去抽提模板DNA这一步,通过特异性引物或通用引物对目的基因进行快速扩增大大节约了时间和成本三、材料1.固体平板培养基上培养出的单菌落②10XPCR缓冲液(100mmol/ L. Tris-HCL, pH8.3,500 mmol/L KCL;0.1%明胶;15mmol/LMgCl2)。
③目的基因引物④高压灭菌牙签⑤抗性平板。
⑥ Triton x1007.EP管8.离心机四、操作方法①用高压灭菌的牙签挑取单个菌落,先在含抗性的平板上画线,做保种用,然后将牙签置于2 Intar×100中搅和一下,以便悬浮涂在牙签上的菌,将相应的菌和平板上的画线区做上对应的②将装有20 u Triton×100的EP管煮沸10min,冷却后120r/min离心lmin去除细胞③反应体系(25ul)Taq酶(5U/ul）0.5ul 引物P2(10umol/L） 0.5ul10×Taq缓冲液 2. 5ul dNTPs(各 2. 5mmol/L) 2ul模板引物Pl(10mo/L) 0.5ul④PR扩增条件:95℃5min 94℃30s, 55℃30s,72℃60s,30循环;72℃5min;4℃⑤电泳,观察结果,对阳性的结果相对应的主平板上的菌落保种或者进行测序。
pcr检测目的基因是否转入受体植物的原理 -回复
pcr检测目的基因是否转入受体植物的原理-回复PCR（聚合酶链式反应）是一种用于扩增DNA片段的技术，可以检测基因是否转入受体植物。
基于这个技术，本文将详细介绍PCR检测目的基因是否转入受体植物的原理和步骤。
第一部分：PCR基本原理PCR反应是由DNA模板、DNA引物（寡核苷酸引物）和DNA聚合酶组成的。
在PCR过程中，DNA模板将会被DNA聚合酶通过反复的扩增使之数量大幅增加。
第二部分：引物的设计在PCR检测目的基因是否转入受体植物时，需要设计特异性引物，即只能与目的基因片段配对，而不与其他非目的基因片段配对。
在设计引物时，需要考虑到目的基因的序列信息和受体植物的基因组信息。
第三部分：DNA模板的提取在进行PCR反应之前，需要从受体植物中提取DNA模板。
DNA提取方法可以根据不同的植物材料进行调整，常用的方法有CTAB法、酚/氯仿法和商业化的DNA提取试剂盒。
第四部分：PCR反应条件的设定PCR反应需要根据引物设计和模板DNA的性质来确定适当的条件。
其中，主要包括温度、时间和反应体系的优化。
一般情况下，PCR反应包含初步变性、引物结合、DNA合成和终结扩增四个阶段。
第五部分：PCR反应的扩增过程在PCR反应中，首先将反应体系加热到94-96C，使DNA模板变性。
然后，在特定的温度下，引物可以与目的DNA片段互相配对，即结合。
接下来，DNA聚合酶会在45-72C的适宜温度下合成新的DNA链，在这个过程中，DNA增长指数级扩增。
最后，反应结束时，加热到72-74的温度保持一段时间，以保证DNA扩增的完全结束。
第六部分：PCR产物的分析PCR反应产物可以通过凝胶电泳进行分离和分析。
凝胶电泳可以根据DNA片段的大小进行分离，通过观察PCR反应的条带来判断目的基因是否转入了受体植物。
第七部分：结果的解读如果PCR反应的电泳结果显示，存在了目的基因特异性的扩增产物草带，则说明目的基因已经成功转入受体植物。
菌落PCR实验步骤
菌落PCR资料PCR, 菌落, 资料菌落PCR菌落PCR与我们通常的普通D NA的PC R的不同在于，直接以单个菌作为模板。
是一种可以快速鉴定菌落是否为含目的质粒的阳性菌落。
操作简单，快接，阳性率较高，在转化鉴定中较常见。
操作方法：1，挑取单个菌落，可以用高压灭菌的牙签。
现在含抗性的平板上画线，做保种用，然后置于20u l trito n－x100中搅和一下，将相应的菌和板子上的画线区做上对应的记号2，将装有20ul Triton x－100的EP管100度煮2分钟3，按照菌中预期包含的质粒加好P CR体系，建议做20ul体系，模板加煮过的菌的上清1ul4，上机即可。
退火温度可以稍低，虽然没有什么根据可言，但是个人经验，推荐比质粒PCR时稍低5，电泳，看结果，阳性的菌落对应的板子可以直接挑菌小摇，保种或者送测序都可以我的做法是：用枪头挑选单菌落到装有20uL水的pcr管中，然后悬浮菌液。
在做PCR时，吸取1uL做摸板，但电泳检测后，选有阳性克隆相对的菌液10uL与试管的液体培养基中培养。
这样做，既初步检测了阳性克隆，又保存了所需要的菌落。
当然，在挑菌时也有用接种环挑的，有用牙签挑的，看个人的爱好了我们都是直接拿牙签挑单菌落往PCR反应体系中搅拌一下，一般都能鉴定出来。
想节省麻烦的话，还可以菌落鉴定同时挑单克隆，用1.5的EP管装1m L左右培养基，牙签挑出菌落后先在培养基上搅拌然后再放到PCR反应体系中。
把PCR体系先加好，用接种针直接往菌落上戳一下然后伸到体系里面晃晃就可以上机P了，我每次都是这样，可能是最方便的方法了。
取200ul水，牙签挑菌，煮沸5‘，冰浴5’，12000rp m，取上清5ul做模版。
其他的和普通pcr一样。
我们都是用过夜培养的菌液0.3ul（不要超过0.5ul）做模板，很简单的，其它都不变。
【高中生物】将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定课件 高二下学期生物人教版选择性必修3
将含有目的 基因的表达 载体导入受 体细胞
检测和鉴定 目的基因是 否稳定维持 和表达其遗 传特性
核心归纳
1.受体细胞的选择 (1)对于植物来说，受体细胞可以是受精卵或体细胞，因为植物细胞具有全能性。 (2)对于动物来说，受体细胞一般是受精卵，因为受精卵的全能性高，而高度 分化的动物体细胞的全能性受到抑制。 (3)大肠杆菌和酵母菌在基因工程中都可以作为受体细胞，但又有所不同。大 肠杆菌为原核细胞，而酵母菌为真核细胞(具有多种细胞器)，所以在生产需 要加工和分泌的蛋白质时，酵母菌比大肠杆菌有优势。
<的检测与鉴定
1.将目的基因导入受体细胞
将目的基因 导入受体细 胞的方法
导入植物细胞
花粉管通道法（我国科学家独创） 农杆菌转化法（常用）
导入动物细胞 ——显微注射法 导入微生物细胞 ——Ca2+处理法
转化：目的基因进入 受体细胞内，并且在 受体细胞内维持稳定 和表达的过程。
2. 目的基因的检测与鉴定
1.分子水平的检测
②检测目的基因是否转录 ——通过PCR等技术检测 如：检测Bt基因是否翻译出mRNA
提取棉花细胞 mRNA
逆转录 产生DNA
用与Bt基因相关的 引物进行PCR扩增
对扩增产物 进行检测
M3 C0
Bt 10个PCR阳性棉花植株中，有四株Bt基因发生转录
2. 目的基因的检测与鉴定
原因是农杆菌中的Ti质粒上的 T－DNA (可转移的DNA)可转移至 被侵染的细胞，并且整合到该细胞的染色体DNA上。
1.将目的基因导入受体细胞
导入动物细胞 ——显微注射法
目的基因的表达载体提纯
取卵（受精卵） 显微注射
受精卵发育
①个体大，易操作。 ②受精卵全能性高， 易培养成完整个体。
目的基因(COR)转入受体细胞的方法及检测
目的基因（COR）转入受体细胞的方法及检测学生：魏烈斌指导老师：高海宁(河西学院农业与生物技术学院甘肃张掖734000）摘要：利用PGEM—T -easy质粒为载体，用CaCl2法制备感受态细胞，把人工合成的抗氨苄青霉素的基因导COR基因导入大肠杆菌，通过含有氨苄青霉素的选择培养基筛选出含有抗氨苄青霉素基因的大肠杆菌，对筛选出的大肠杆菌用碱裂解法进行质粒DNA提取,并对质粒进行PCR扩增和酶切凝胶电泳图的分析。
用EcoRI酶进行酶切研究。
结果表明：人工合成的抗氨苄青霉素的基因在大肠杆菌中跟随质粒的复制进行同步复制并通过大肠杆菌自身的表达系统表达出了抗氨苄青霉素的产物，使大肠杆菌能在含氨苄青霉素的LB培养基上正常生长。
关键字： PGEM--Teasy质粒抗氨苄青霉素氯化钙法大肠杆菌引言：在DNA体外重组技术的研究和应用中，转化是个很重要的步骤。
自Cohen等人在1972年首次用CaCl2：处理的方法成功地进行了R因子对E. colt C600的转化之后，这个方法一直广泛地应用于大肠杆菌各受体菌系的转化。
鼠伤寒沙门氏杆菌S. typhimurium和金黄色葡萄球菌S. aureus，的转化也都沿用此法。
直至1978年，Michael等在用pBR 322质粒DNA对E. colt X1776的转化中却采用了与此不同的方法。
1 材料和方法1.1 实验材料1.1.1 供试材料：大肠杆菌（实验室提供） PGEM--Teasy质粒 Taq酶1.1.2 仪器：基因扩增仪移液器电泳仪紫外检测仪恒温摇床恒温水浴器恒温培养箱低温离心机超净工作台冰箱离心管小指管1.1.3 试剂： PCR缓冲液(含Mg@+) 4种dNTP Taq酶 DNA模板两种引物（正向引物和反向引物） EB溶液氯化钠(Nacl) 氨苄青霉素氯化钙(CaCl2) 酒精灯牙签 LB液体培养基 ddH2O 溶液Ⅰ（50 mmol/L 葡萄糖，25mmol/L Tris.HCl pH8.0,10 mmol/L EDTA）溶液Ⅱ 0.4mol/L NaOH，2%SDS用前等体积混合溶液Ⅲ 5 mol/L KAc 溶液60ml， 11.5 ml冰醋酸，28.5 ml 去离子水。
将目的基因导入细菌细胞的方法
将目的基因导入细菌细胞的方法
将目的基因导入细菌细胞有多种方法，其中最常见的包括转化、转染和电穿孔等。
转化是最常见的方法之一，它利用细菌的自然转化能力或者通
过化学方法，将外源DNA导入细菌细胞内。
通常情况下，外源DNA
会被包裹在质粒中，然后通过热激冲或电穿孔等方法将质粒导入细
菌细胞内。
一旦细菌细胞内成功导入了目的基因的质粒，目的基因
就可以在细菌细胞内进行表达。
另一种常见的方法是转染，这种方法通常用于将大片段的DNA
导入细菌细胞内。
转染是利用离子缔合物或脂质体等载体，使DNA
与载体结合后，通过与细菌细胞膜的相互作用，将DNA转移到细菌
细胞内。
电穿孔是一种利用高压脉冲使细菌细胞膜通透性增加，从而使
外源DNA能够进入细菌细胞内的方法。
通过电穿孔，外源DNA可以
直接进入细菌细胞内，实现基因的导入。
除了上述方法外，还有一些其他的方法，比如利用嗜热菌的自
然转化能力、利用嗜热菌的DNA聚合酶酶来实现DNA的导入等。
不同的方法适用于不同类型的细菌和不同的实验目的。
综上所述，将目的基因导入细菌细胞的方法有多种，每种方法都有其特点和适用范围。
选择合适的方法需要根据实验的具体情况和要求来决定。
将目的基因导入细菌的方法
将目的基因导入细菌的方法一种常见的方法是转化法呢。
这就像是给细菌送个小包裹，这个包裹就是咱的目的基因啦。
细菌它得处于一种特殊的状态，叫感受态。
怎么让它进入这种状态呢？通常可以用化学试剂处理一下细菌，就像给细菌洗个特殊的“化学澡”，让它的细胞膜变得比较容易让基因进去。
然后把含有目的基因的重组DNA分子和这些感受态细菌混在一起，这个时候呀，目的基因就有可能偷偷溜进细菌里面啦。
还有一种超酷的方法叫转导法哦。
想象一下，有个小小的快递员在细菌之间穿梭，这个快递员就是噬菌体啦。
噬菌体可以把自己的基因注入细菌，那咱就可以把目的基因整合到噬菌体的基因组里。
这样噬菌体在感染细菌的时候，就顺便把目的基因也带进去了。
这就像是搭便车一样，目的基因借着噬菌体这个小快车，成功到达细菌内部。
电穿孔法也很有趣呢。
就好比给细菌来一个小小的电击，让它的细胞膜上突然出现一些小孔。
这个时候把含有目的基因的溶液和细菌放在一起，目的基因就可以顺着这些小孔钻进细菌里去啦。
不过这个电击的强度可得控制好哦，就像做菜放盐一样，少了没效果，多了可能就把细菌给弄“坏”啦。
另外呀，还有接合转移法。
这就像是细菌之间的社交活动呢。
有些细菌能够通过一种特殊的结构，把自己的基因传递给别的细菌。
咱就可以利用这种特性，把目的基因放在能进行接合转移的细菌里面，让它把这个基因传递给咱们想要导入基因的细菌。
这就像是细菌之间的互相分享小秘密，只不过这个秘密就是我们的目的基因啦。
这些方法各有各的妙处，科学家们就根据不同的情况，选择最合适的方法把目的基因导入细菌，这样就能让细菌为我们做很多有趣的事情啦，比如生产一些有用的蛋白质之类的呢。
目的基因的检测的方法
目的基因的检测的方法
目的基因的检测方法主要包括以下几种：
1. 基因测序：通过对目的基因序列进行测序，可以确定其碱基序列，进而分析该基因的功能、变异情况等信息。
目前常用的基因测序方法包括Sanger测序和下一代测序技术（如Illumina、Ion T orrent等）。
2. 聚合酶链式反应（PCR）：通过特异性引物扩增目的基因的特定片段，可以进行目的基因的检测和定量。
PCR是一种常用的基因分析方法，广泛应用于疾病诊断、DNA指纹鉴定等领域。
3. 基因芯片：基因芯片利用芯片上固定的探针，可以同时检测大量基因的表达或突变状态。
通过检测被固定探针杂交的目的基因序列，可以快速、高通量地获得基因表达或变异信息。
4. 单核苷酸多态性（SNP）分析：SNP是基因组中常见的遗传变异形式，用于研究基因与疾病的关联。
SNP分析可以通过基因芯片、基因测序等方法检测目的基因中的SNP位点，从而判断基因型和突变状态。
5. 质谱法：质谱法主要应用于蛋白质的分析与定量，可以用于检测目的基因所编码的蛋白质的表达水平和修饰情况。
质谱法包括质谱仪器、样品预处理、质谱数据分析等步骤。
以上是常用的目的基因检测方法，各种方法具有不同的特点和适用范围，选择合适的方法进行目的基因的检测取决于研究或应用的具体需求。
《基因工程的基本操作程序》 知识清单
《基因工程的基本操作程序》知识清单基因工程，这个听起来颇具科幻色彩的词汇，实际上已经在我们的生活中发挥着重要作用。
从农业领域的转基因作物，到医疗领域的基因治疗，基因工程的应用无处不在。
要理解基因工程，就需要了解其基本操作程序，下面咱们就来详细说一说。
一、获取目的基因目的基因是我们想要研究或应用的特定基因。
获取目的基因的方法主要有以下几种：1、从基因文库中获取基因文库就像是一个基因的“图书馆”，里面保存着各种生物的基因。
我们可以根据目的基因的有关信息，比如它的核苷酸序列、功能等，从这个“图书馆”中筛选出我们需要的基因。
2、利用 PCR 技术扩增目的基因PCR 技术，全称为聚合酶链式反应。
如果我们已经知道了目的基因的核苷酸序列，就可以通过设计引物，利用 PCR 技术在体外大量扩增目的基因。
这个过程就像是在一个巨大的基因混合物中，专门挑选出我们想要的那部分，并让它迅速增多。
3、人工合成法如果目的基因比较小，而且核苷酸序列已知，我们还可以通过化学方法直接人工合成目的基因。
二、构建基因表达载体获取了目的基因后，接下来就要构建基因表达载体了。
这就好比给目的基因打造一个“专属座驾”，让它能够顺利地进入受体细胞并发挥作用。
基因表达载体通常由目的基因、启动子、终止子、标记基因等部分组成。
启动子是基因转录的起点，就像是发动机的启动按钮，决定了基因什么时候开始表达。
终止子则是基因转录的终点，告诉基因表达到这里就可以结束了。
标记基因的作用是便于筛选含有目的基因的受体细胞。
比如常见的抗生素抗性基因，能够让含有目的基因的细胞在含有特定抗生素的培养基中存活下来，从而被筛选出来。
构建基因表达载体需要用到限制酶和 DNA 连接酶。
限制酶能够识别特定的核苷酸序列，并在特定的位点切割 DNA 分子，产生粘性末端或平末端。
DNA 连接酶则能够将切割后的目的基因和载体连接起来，形成一个完整的基因表达载体。
三、将目的基因导入受体细胞有了基因表达载体，接下来就要把它导入受体细胞了。
目的基因(COR)转入细菌细胞的方法及其检测
目的基因（COR）转入细菌细胞的方法及其检测XXX（XXX农业与生物技术学院，XXX XXX，XXX）摘要：以PGEM-T-easy质粒为载体，将氨苄青霉素抗性基因导入大肠杆菌，通过含有氨苄青霉素的培养基筛选出具有氨苄青霉素抗性基因的大肠杆菌，对筛选出的大肠杆菌进行质粒DNA提取,并对质粒进行PCR扩增和酶切，将产物进行琼脂糖凝胶电泳图谱分析。
结果表明：氨苄青霉素抗性基因被导入大肠杆菌中并在大肠杆菌中得到表达。
关键字：PCR扩增氨苄青霉素抗性基因大肠杆菌引言：随着生物科技的飞速发展，越来越多的生物技术被广泛的应用于各类应用领域。
如PCR技术、基因重组、DNA连接等等已被人们广泛的应用于生物体内基因的扩增及新的生物性状的研究。
然而，对于氨苄青霉素抗性基因在大肠杆菌染色体上整合及表达尚未见研究。
本研究借助于PCR、DNA连接转化、琼脂糖凝胶电泳对氨苄青霉素抗性基因在大肠杆菌染色体上整合及表达进行了研究。
旨在为氨苄青霉素抗性基因在大肠杆菌染色体上整合及表达提供一定的理论依据。
1 材料和方法1.1 试剂与器材1.1.1 材料试剂：大肠杆菌；PGEM-T-easy质粒；Taq酶；引物(正向、反向；10umol/ml)；模板DNA；10×RCRbuffer；ddH2O；dNTP（2.5mol/L）；T4DNAligase；Cacl2（0.1mol/L）；LB培养基；氨苄青霉素（50mg/ml）；溶液Ⅰ（葡萄糖，50mmol/L；Tris-HCl，25mmol/L；EDTA，10 mmol/L）；溶液Ⅱ（0.4mol/LNaOH和2%SDS用前等体积混合）；溶液Ⅲ（5mol/L乙酸钾，60ml；冰醋酸，11.5ml；水，28.5ml）；TE缓冲液（pH8.0）；0.5mol/LEDTA；70%乙醇；氯仿：异戊醇（V:V，24：1）；Tris 饱和酚：氯仿：异戊醇（V:V：V，24：24：1）；琼脂糖。
实验报告目的基因与载体的连接转化及工程菌导入表达并PCR验证
题目：目的基因与载体的连接转化及工程菌导入表达并PCR验证。
一．实验目的:1.学习目的基因连接转化载体的原理和方法。
2.学习制备感受态细胞并将质粒导入工程菌的原理和方法。
3.学习菌落PCR鉴定阳性克隆的方法和步骤二．实验原理1. DNA的连接重组：具有相同粘性末端的两段DNA分子在DNA连接酶的作用下可以连接在一起。
因为相同的粘性末端同一通过碱基互补配对形成一个相对稳定的结构。
连接温度的选择，理论上的最适温度是连接酶的最适温度---37摄氏度，但是该温度下粘性末端形成的配对结构稳定，所以在室温下（12~16度）既可最大限度发挥连接酶的活性，又有助于短暂配对结构的稳定。
2.感受态细胞的制备：将快速生长的大肠杆菌置于经低温（0℃）预处理的低渗氯化钙溶液中，便会造成细胞膨胀，同时Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来，离开所在区域，诱导细胞成为感受态细胞，细胞膜通透性发生变化，极易与外源DNA相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基－磷酸钙复合物。
联合其它的二价金属离子（如Mn、Co）、DMSO或还原剂等物质处理细菌，则可使转化率提高100～1000倍。
3.质粒的导入在冰上融化感受态细胞，经过42度短暂热激后，由于细胞膜处于液晶态产生裂缝，外源DNA黏附于细胞表面，而后立即冰浴，促使细胞膜愈合。
然后将菌体放入适宜的培养基中培养，以促进细胞的愈合恢复。
4.阳性转化的培养基筛选方法。
普通的大肠杆菌难以在含有Kana的LB培养基上存活繁殖，但由于载体质粒含有Kana霉素的抗性基因，所以成功导入载体质粒的大肠杆菌能够在含有Kana的LB培养基上形成菌落，即转化阳性，但是由于成功导入的质粒不一定携带了目的基因，所以可能会出现伪阳性，故需要进行PCR鉴定。
5.菌落PCR的原理通过目的基因的引物进行菌落PCR，如果菌体成功导入了目的基因，则能够通过PCR获取大量目的基因片段，而不含有目的基因的菌落不会扩增出目的基因片段。
检测目的基因的方法
检测目的基因的方法
目的基因是指在研究中所关注的特定基因，它可能与某种疾病、生理过程或其他生物学现象相关联。
因此，检测目的基因的方法对于科研工作者来说是非常重要的。
在本文中，我们将介绍几种常用的检测目的基因的方法，希望能为您的研究工作提供一些帮助。
首先，常用的检测目的基因的方法之一是PCR（聚合酶链反应）。
PCR是一种能够快速复制DNA片段的技术，它可以将目的基因扩增出大量的复制品，从而方便后续的实验操作。
通过PCR，可以对目的基因进行定量和定性的检测，为后续的实验提供可靠的数据支持。
其次，另一种常用的检测目的基因的方法是基因测序。
基因测序是指对DNA 序列进行逐个碱基的测定，通过测序技术可以准确地获取目的基因的序列信息。
这对于研究目的基因的结构和功能非常重要，也为后续的分子生物学实验提供了重要的参考。
此外，还有一种常用的检测目的基因的方法是基因组编辑技术。
基因组编辑技术可以精确地对目的基因进行修改和调控，从而研究目的基因在生物体内的功能和作用机制。
通过基因组编辑技术，可以实现对目的基因的精准操控，为研究提供更多的可能性。
除了上述提到的几种方法外，还有许多其他的检测目的基因的方法，例如原位杂交、Northern blotting等。
这些方法各有其特点，可以根据具体的研究目的和需求选择合适的方法进行检测。
总之，检测目的基因的方法是科研工作者在研究中不可或缺的重要环节。
选择合适的检测方法，可以为研究提供可靠的数据支持，推动科学研究的进展。
希望本文介绍的几种方法能够对您的研究工作有所帮助，也希望您能在科研工作中取得更多的成果。
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目的基因（COR）转入细菌细胞的方法及其检测
XXX
（XXX农业与生物技术学院，XXX XXX，XXX）
摘要：以PGEM-T-easy质粒为载体，将氨苄青霉素抗性基因导入大肠杆菌，通过含有氨苄青霉素的培养基筛选出具有氨苄青霉素抗性基因的大肠杆菌，对筛选出的大肠杆菌进行质粒DNA提取,并对质粒进行PCR扩增和酶切，将产物进行琼脂糖凝胶电泳图谱分析。
结果表明：氨苄青霉素抗性基因被导入大肠杆菌中并在大肠杆菌中得到表达。
关键字：PCR扩增氨苄青霉素抗性基因大肠杆菌
引言：随着生物科技的飞速发展，越来越多的生物技术被广泛的应用于各类应用领域。
如PCR技术、基因重组、DNA连接等等已被人们广泛的应用于生物体内基因的扩增及新的生物性状的研究。
然而，对于氨苄青霉素抗性基因在大肠杆菌染色体上整合及表达尚未见研究。
本研究借助于PCR、DNA连接转化、琼脂糖凝胶电泳对氨苄青霉素抗性基因在大肠杆菌染色体上整合及表达进行了研究。
旨在为氨苄青霉素抗性基因在大肠杆菌染色体上整合及表达提供一定的理论依据。
1 材料和方法
1.1 试剂与器材
1.1.1 材料试剂：大肠杆菌；PGEM-T-easy质粒；Taq酶；引物(正向、反向；
10umol/ml)；模板DNA；10×RCRbuffer；ddH
2O；dNTP（2.5mol/L）；T
4
DNAligase；
Cacl
2
（0.1mol/L）；LB培养基；氨苄青霉素（50mg/ml）；溶液Ⅰ（葡萄糖，50mmol/L；Tris-HCl，25mmol/L；EDTA，10 mmol/L）；溶液Ⅱ（0.4mol/LNaOH和2%SDS用前等体积混合）；溶液Ⅲ（5mol/L乙酸钾，60ml；冰醋酸，11.5ml；水，28.5ml）；TE缓冲液（pH8.0）；0.5mol/LEDTA；70%乙醇；氯仿：异戊醇（V:V，24：1）；Tris 饱和酚：氯仿：异戊醇（V:V：V，24：24：1）；琼脂糖。
1.1.2 器材：PCR扩增仪；移液枪；电泳仪；紫外检测仪；恒温摇床；恒温水浴器；恒温培养箱；低温离心机；超净工作台；冰箱；离心管；小指管；酒精灯；牙签；培养皿、试管若干。
1.2 方法
1.2.1 PCR基因扩增
1.2.1.1 加样：
在PCR管中加入ddH
O(35μl)； DNA 样品（1μl）； 10×PCR 缓冲液（5μl）；
2
2.1mmol/L dNTP （4μl）；正向引物（2μl）；反向引物（2μl），振荡混匀。
1.2.1.2 PCR反应
(1) 94℃预变性 5min
(2) 94℃变性 1min
(3) 55℃退火 1min
(4) 72 ℃延伸 2min。
(5) 重复(2)-(4) 30次
（6）72 ℃延伸 10min。
（7）4℃保存
1.2.1.3 琼脂糖凝胶电泳检测PCR的结果：取10μl PCR扩增产物，琼脂糖凝胶电泳检测。
电泳结束后，用EB染色15min，紫外灯下观察。
1.2.2 DNA重组
1.2.2.1 配制连接体系：
DNA ligase（1.0ul）；buffer（1.0ul）；PGEM-T-easy（0.5ul）；DNA（7.5ul） T
4
1.2.2.2 将配制的连接体系保温过夜。
1.2.3大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
1.2.3.1从大肠杆菌平板上用镊子夹取牙签挑取一个单菌落接于3mlLB液体培养基试管中， 37℃振荡过夜。
1.2.3.2将培养液1ml分装入1.5ml离心管中，在冰上冷却10--30min于4℃离心，4000r/min×10min，弃去上清。
1.2.3.3用冰浴的0.1mol/LCaCl
20µl悬浮细胞，立即放入冰上冰浴30min，
2
0-4℃，4000r/min离心10min。
溶液200μl悬浮细胞，立即放入1.2.3.4弃去上清，加入冰浴的0.1mol/LCaCl
2
冰上冰浴30min。
4℃，4000r/min离心10min，弃去上清。
溶液100μl悬浮细胞，即制成1.2.3.5 弃去上清，加入冰浴的0.1mol/LCaCl
2
了感受态细胞。
加入10 l连接体系，轻轻混匀，冰上放置30分钟。
1.2.3.6于42℃水浴保温90s，迅速转移至冰浴中，冷却2min
1.2.3.7立即向上述管中加0.8ml LB培养液，37℃振荡培养50min，使受体菌恢
复生长状态，并使转化体表达抗生素基因产物。
1.2.3.8取转化细胞200ul涂于含氨苄青霉素5mg/L的 LB固体培养基平板上，37℃恒温培养8-12h。
1.2.4质粒DNA的提取及酶切
1.2.4.1 提取质粒
1.2.4.1.1 根据LB固体培养基上生长的菌落，挑取单一菌种接种于2.0mlLB含抗生素的液体培养基，37℃震荡培养过夜。
1.2.4.1.2 取 1.5ml培养物倒入微量离心管中，室温4000r/min离心2min。
1.2.4.1.3吸去上清液，将细胞悬浮于100μl（5 mg/ml 溶菌酶）预冷的溶液Ⅰ，剧烈震荡使菌体悬浮，混合，室温放置10min。
1.2.4.1.4加入200μl新鲜配置的溶液Ⅱ，轻轻混匀，冰浴5 min。
1.2.4.1.5 加入150μl的溶液Ⅲ，混匀，见絮状沉淀，冰浴5 分钟，12000r/min，离心15min，取上清。
1.2.4.1.6 向上清液中加入450ul苯酚/氯仿/异戊醇混合物混匀，12000r/min 离心10min。
1.2.4.1.7 吸取上清液，加2倍体积预冷的无水乙醇，充分混匀，室温放置5——10min。
4℃120000 r/min离心5 min。
1.2.4.1.8 用400ul70℅乙醇洗涤质粒DNA沉淀2次，4℃8000 r/min离心7 min，弃上清，将沉淀室温下晾干。
1.2.4.1.9 加20ul TE 37℃水浴30min，使DNA完全溶解。
1.2.4.1.10对质粒进行琼脂糖凝胶电泳。
1.2.4.2 酶切
取5ul DNA 溶液，EcoR
α（0.5ul），H×buffer（1.0ul），ddH2O(3ul),加入微量管中酶切1h，用移液枪加样进行凝胶电泳，分析质粒DNA的限制性酶切图谱。
2 结果与分析
2.1 PCR扩增目的基因的电泳图结果
图1 PCR目的基因的扩增电泳图
图1中3泳道为PCR扩增后电泳结果条带，扩增DNA分子量为1000bp左右，这与目的基因相对分子质量相符，达到了目的基因的扩增。
2.2 重组后的质粒导入大肠杆菌后的表达
图2 转化成功的大肠杆菌菌落
图2中的白色菌落为重组后的质粒经转化导入大肠杆菌细胞，在含氨苄青霉素培养基上长出的具有氨苄青霉素抗性的菌落，说明目的基因导入细胞并且得到了表达。
2.3质粒DNA的电泳图谱
图3 质粒DNA电泳图
图3泳道3和7为本实验电泳泳道，泳道3经电泳后条带较暗淡，其显示出DNA长度大于2000bp，与所预期结果一致；而泳道7经电泳后没有出现条带，分析其原因可能是洗涤DNA过程中，由于移液枪使用不当，连其目的产物一起吸出，致使目的产物流失，而在电泳时没有出现条带。
2.4 质粒酶切产物电泳结果
图4 质粒酶切产物电泳结果
图4 中泳道3和7为本实验质粒酶切产物电泳结果，有图可以看出，质粒DNA经酶切后隐约的出现了一条大约750bp左右的条带，说明经酶切后，质粒DNA 仅有部分被切开，而大多数没有被切开，其长度则显示的是长度大于2000bp的比较清晰的条带。
分析其原因一方面可能是由于在进行酶切时酶切的时间太短，
另一方面则可能是酶的活性不够高，在一定的时间内无法达到质粒DNA的酶切位点完全被切开的目的。
通过本实验，我们得到了具有氨苄青霉素抗性基因的大肠杆菌。
参考文献
[ 1 ]张惟材, 焦迎晖, 袁红杰, 等. 一种新的L-山梨糖脱氢酶基因及其编码的
蛋白质. 中国专利, 申请号: 031020607
[ 2]山梨糖脱氢酶基因在大肠杆菌染色体上整合及表达高书颖；张惟材；汪建华；郭蔼光；（微生物学报第45 卷第 1 期 2005 年2 月）
[ 3]大肠杆菌多重耐药调控基因soxS 的克隆及其原核表达于晓颖, 刘玉堂,
丛薇, 刘树明, 马红霞 (中国兽医学报2010年10月第30卷第10期) [ 4] ret基因真核表达载体的构建及其瞬时表达郭小兵张钦宪（Journal of Zhengzhou University (Medical Sciences) Sep. 2006 Vo.l 41 No. 5）[5] 韩聪, 张惟材, 游松大肠杆菌ptsG 基因敲除及其缺陷株生长特性研究（生物工程学报, 2004, 20(1) : 16- 20）。