水生生物急性毒性试验一般程序

水生生物急性毒性试验一般程序

1、试验准备

1）实验容器准备、清洁和消毒处理

——容器：大小合适、材料无毒、不易吸附、对生物不造成损伤

2）受试生物的采集与驯化

3）稀释水（试验关键）

——来源：无污染自然水、去氯自来水、配置标准水（OECD ASTM推荐配方）

——质量控制：pH、温度、溶解氧、盐度、硬度、无其它污染物，有参比

4）环境条件：控制系统

2、实验设计

1）测试方式选择

——可选用静止、更新式和直流式。

——挥发性高、降解速率大化合物不能用静止式，选用更新式，最好用直流式

——BOD高的废水不能用静止式，选用更新式，最好用直流式

——生长速率快、代谢快的生物不能用静止式，选用更新式，最好用直流式

2）试验生物选择

3）被测毒物的配置

——配成高浓度储备液

——不溶或溶解度小用助溶试剂，如丙酮等，并设置溶剂对照，助溶试剂的毒性要小、溶解度高、实验系统用量要少，关键是要了解被测毒物的溶解度

4）生物指标确定及试验重点

5）试验浓度的设置（获得毒性数据的关键）

——文献资料

——预备试验

——浓度确定方式：等对数浓度

3、正式试验

1）实验浓度的配置

2）试验动物的数量

——数量分配：5~10

——生物量：＜0.8g/L；个体小的热带种＜0.1g/L

3）实验组数

——5个浓度+对照（稀释水）

——5个浓度+对照（稀释水）+溶剂对照

——对照组死亡率＜10%

——3~5个平行（不少于30个受试生物）

4）实验周期（暴露时间）

——根据试验目的和生物不同而不同

——标准方法：藻类生长抑制试验，72h

枝角类急性毒性试验，48h

鱼类急性毒性试验，96h

5）试验终点观察：不同生物不同，同一实验相同

6）理化指标测定：温度、溶解氧、pH、硬度等

7）受试毒物浓度确定（计算得的数值VS实测）

8）实验记录

P.S.急性毒性试验期间不喂食物

4、LC50的求法

1）直线内插法——图解计算LC50、EC50的一种简便方法。在半对数纸上作图，即可求解。

2）概率单位法

依据：浓度对数与概率单位呈直线关系

方法一：查死亡率——概率单位换算表，然后作图（浓度对数——概率单位图）

方法二：直接用对数——概率纸作图

——求直线回归方程

——求LC50的置信区间（范围）

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