实验一 蛋白质和氨基酸的呈色反应-

3、操作 （1） 取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加 热使尿素熔化，尿素放出氨 。熔化的尿素开始硬化 时，停止加热，形成双缩脲。冷后，加10%氢氧化钠 溶液约1ml，振荡混匀，再加1%硫酸铜溶液1滴，再 振荡。观察出现的粉红颜色。添加要避免过量硫酸铜， 否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。 （2）向另一试管加卵清蛋白溶液约1ml和10%氢氧化 钠溶液约2ml，摇匀，再加1%硫酸铜溶液2滴，随加 随摇。观察紫玫瑰色的出现。
管号
1
2
3
4
5
6
材料 （滴）
浓硝酸 （滴） 现象
剂
蛋白
i ]
质
指甲
溶液 4
少许
2
40
头发 少许
40
0.5% 苯酚
4
4
0.3% 色氨
酸 4
4
0.3% 酪氨
酸 4
4
（四）乙醛酸反应
1、原理
剂 i ]
紫红色
2、试剂：
(1) 蛋白质溶液
鸡蛋清：水＝1：20
(2) 冰醋酸
(3) 浓硫酸(分析纯)
剂 i ]
试 剂 蛋白质溶液
管号 1
（ml）
剂 i ]
0
蒸馏水 （ml）
1
2
0.1
0.9
考马斯亮蓝 液（ml）
3 3
剂
3、操作
i ]
（1）取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶
液1ml，再各加0.5ml 0.1%茚三酮水溶液，混匀，
在沸水浴中加热1~2分钟，观察颜色由粉色变紫
色再变蓝。
（2）在一小块滤纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液，
风干后，再在原处滴一滴0.1%茚三酮乙醇溶液，
在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。
实验一 蛋白质和氨基酸的 呈色反应
一、实验目的
1、了解蛋白质和氨基酸的呈色反应原理 2、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方
法。 3、了解呈色反应在定性和定量分析中的应用。
（一）双缩脲反应
1、原理
一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但 有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
2、试剂 （1）尿素 （2）10%氢氧化钠溶液 （3）1%硫酸铜溶液 （4）2%卵清蛋白溶液
1、原理 考马斯亮蓝G250具有红色和蓝色两种色调。 在酸性溶液中，其以游离存在呈棕红色；当 它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。 它染色灵敏度高，比氨基黑高3倍。反应速 度快，约在2分钟左右时间达到平衡，在室 温一小时内稳定。在0.01-1.0mg蛋白质范围 内，蛋白质浓度与A595nm值成正比。所以常 用来测定蛋白质含量。
（二）茚三酮反应
+
水合茚三酮(无色)
加热 (弱酸)
NH3
+ CO2
RCHO
还原性茚三酮
+ 2NH3 +
还原性茚三酮
水合茚三酮
3H20
紫色化合物 570nm
2、试剂 （1）蛋白质溶液 （新鲜蛋清：水=1:9) 100ml
（2）0.5%甘氨酸溶液 （3）0.1%茚三酮水溶液 （4）0.1%茚三酮-乙醇溶液
2、试剂
（1）蛋白质溶液（鸡蛋清 : 水=1 : 20） 5 ml
（2）考马斯亮蓝染液 300 ml 考马斯亮蓝G250 100mg溶于50 ml 95%乙醇中， 加100 ml 85%磷酸混匀，配成原液。临用前取 原液15 ml，加蒸馏水至100 ml，用粗滤纸过滤 后，最终浓度为0.01%。
3、操作 取2支试管，按下表操作
3、操作
向试管中加数滴蛋白质溶液，再加冰醋酸约1ml, 倾斜试管，谨慎地沿着管壁加浓硫酸(A．R．)约1ml， 使其重叠，勿使两者混合。静置后，观察在两液界 面上出现的红紫色环，于水浴中微热，可帮助颜色 形成。
用20%白明胶作乙醛酸反应。白明胶分子中无色氨 酸，所以不呈此反应。
(五)考马斯亮蓝反应
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（三）黄色反应
1、原理
剂 i ]
2、试剂
（1）鸡蛋清溶液 （2）头发 （3）指甲 （4） 0.5%苯酚溶液
（5）浓硝酸
（6）0.3%色氨酸溶液 （7）0.3%酪氨酸溶 液 （8）10%氢氧化钠溶液
3、操作 向6个试管中分别按下表加入试剂，观察各管出
现的现象，有的试管反应慢可略放置或用微火加 热。待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入10% 氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。