菠萝蛋白酶的制备原理

操作方法
去刺、洗净，用压榨机压汁液
澄清 菠萝汁
板框压滤机
1.榨汁除杂质
离心机 3000r/min 20 min
取1000g 菠萝汁
5％ 苯 甲 酸 钠 溶 液 10ml
操作方法
澄清 菠萝汁
移入 搪瓷桶
加入0.5％EDTA-Na 80ml 0.1％的抗坏血酸溶液60ml
沉析物
收集
离心机 3000r/min 15 min
加 0.06％ 抗 坏 血 酸
30ml
操作方法
沉淀物
加0.5％硫代硫酸钠20 ml
搅拌 静置
5min
菠萝 蛋白 酶沉 淀
离心 3500r/min 10 min
4.激活
搅拌 静置
10min
1％ L半 胱 氨 酸
10ml
菠萝 蛋白 酶沉 淀
研磨 成粉 2～10℃ 保存
操作方法
-15℃冷冻 10～15h
氯化钙 五氧化二磷 干燥5～10h
解冻 离心 3000r/min 10 min
5.冷冻干燥
注意事项
1.选取70％～80％成熟的新鲜菠萝
2.避免热、酸、碱、重金属盐、紫外线的影响 3.整个操作中注意温度的变化 4.常用pH试纸检测pH值的变化
思考 题
1．洗脱时如果不加入氯化钠溶液应如何继续 分离纯化菠萝蛋白酶？
2.加稳定剂单宁沉析
4℃下 静置
1h
立 刻 加 1％ 单 宁 100ml
操作方法
沉淀物
加0.5％乙酸锌溶液20 ml
静5min 离心
3500r/min 10 min 取沉淀
加 0.5％ EDTA 溶液
20ml
搅拌 静置
10min
3.洗脱
加 1.5％ 氯 化 钠
20 ml
搅拌 静置 5min
搅拌 静置 10min
2．如何提高菠萝蛋白酶收率和酶的活力？
实训五、菠萝蛋白酶的制备
21 目的要求 2 实验原理
3 材料用具 4 操作方法 5 注意事项 5
目的要求
了解单宁源自文库析法提取菠萝蛋白酶的原理
掌握提取菠萝蛋白酶的基本操作技术
原理
菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白酶 ，稍溶于水，不溶 于乙醇、丙酮、氯仿、乙醚，最适pH值为7，微有 异臭，其酶活力能被半胱氨酸激活，而受重金属 抑制
用单宁沉析法提取鲜菠萝中的菠萝蛋白酶，用乙二 胺四乙酸螯合原料中重金属离子 ，抗坏血酸则可使 酶活性中心保持还原状态 ，锌离子、硫代酸钠、 L-半胱氨酸对酶有激活作用
材料用具
鲜菠萝（1500g左右）
0.5％、0.1％EDTA-Na（二乙胺四乙酸钠） 0.5％乙酸锌溶液 0.06％、0.1％抗坏血酸溶液 1％单宁（别名鞣酸） 1.5％氯化钠溶液 0.5％硫代硫酸钠溶液； 1％L-半胱氨酸溶液。其配制方法是：①称取L半胱氨酸0.1g，加水10ml，加1mol／L盐酸溶液 6～8滴使之溶解；②用6mol／L的氢氧化钠溶液 中和至pH3～4。