菠萝蛋白酶的制备原理

菠萝蛋白酶分离方法(精)

• 工艺流程如图所示。超滤法生产工艺和操作比较复杂，且设备一次性投资大。超滤浓缩后的浓缩液若再用高岭土吸附法或者单宁沉淀法提取，可大大节约其他辅助原料的用量，总生产成本减少，且产品质量好，纯度高，酶活力高，酶活总回收率高，经济效益明显比传统工艺好。超滤浓缩后的浓缩液用有机溶剂沉淀法提取精酶，由于需要低温使生产成本上升，但产品质量、纯度、酶活都优于前者，是菠萝蛋白酶升级换代的新工艺。
菠萝蛋白酶制备方法及比较
工业生产上对菠萝蛋白酶的制备主要是从菠萝的下脚料中提取，制备工艺有高岭土吸附法、单宁沉淀法、盐析法和超滤法等。
• 比较:高岭土吸附法获得的菠萝蛋白酶虽然纯度较高，酶活力在410×10 U／g以上，但工艺流程长，原料消耗多，酶活总回收率低，会对环境有污染； • 单宁沉淀法比高岭土法简单，原料消耗少，酶活回收率较低，产品酶活力在315×10 －410×10 U／g，会对环境造成污染； • 盐析法获得的菠萝蛋白酶活性较低，纯度与药用要求相差甚远
• 超滤法能有效分离提取菠萝蛋白酶。从超滤法提取菠萝蛋白酶的工艺流程上看，其操作步骤简单，并且该法具有无相变、低温、能耗少、活力损失小、操作简单等特点，应用于菠萝蛋白酶的浓缩和分离，不仅能保护其活性，降低生产成本，使用的有机溶剂可回收再生产，基本上没有废物排放，而且超滤透过液还可用作饮料添加剂，可以达到清洁生产的要求；另外，超滤法分离得到的菠萝蛋白酶质量好，纯度高，能达到医药级水平。
菠萝蛋白酶的提取：称取1 kg制备好的鲜果皮汁，加5％苯甲酸钠溶液10 ml搅匀，以4 000 r ／min离心7 min，取上清液倒人干净烧杯中。上清液分装在6个小烧杯中，每个装100 ml菠萝汁，分别缓缓加入空白、0．1％、0．2％、0．3％、 0．4％、0．6％单宁溶液10 ml，边加边拌约1 5min，沉淀物析出，静止40 min。虹吸除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4 000 r ／min。离心5 min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物。分离、洗涤和保护把提取的蛋白酶糊倒人烧杯中，加0．1％EDTA溶液100 ml搅匀，再将 1．5％氯化钠溶液200 ml倒人烧杯中搅匀，以

从菠萝中提取菠萝蛋白酶

从菠萝中提取菠萝蛋白酶
菠萝蛋白酶是一种有机物，也称为溶菌酶或蛋白水解酶。

它的特点是可以分解蛋白质，具有较强的酸性和碱性环境适应能力，因此，广泛应用于医疗、食品、化妆品等领域中。

从菠萝中提取菠萝蛋白酶是一项艰巨的任务。

以下是一些步骤：第一步是采集新鲜的菠萝果肉。

必须选用成熟度好的金丝菠萝果肉。

应选择外皮金黄色、果肉红黄相间的菠萝果肉。

第二步是制备浸出液。

将新鲜的菠萝果肉去皮、去核，切成小块，加入适量的水，搅拌并煮沸，经过静置、过滤，即可得到浸出液。

第三步是提取菠萝蛋白酶。

将制备好的浸出液冷藏，待其沉淀，将上层的冰冷水慢慢倒出，留下沉淀。

然后，在沉淀中加入适量的酸性酶解剂，轻轻摇晃，放置几小时。

第四步是酶活测定。

将提取的菠萝蛋白酶放在适宜的酶活测定条件下，如适宜的温度和酸碱度等，测定其活性或浓度。

以上是从菠萝中提取菠萝蛋白酶的一些步骤。

菠萝蛋白酶的应用范围广泛，可用于肉制品、啤酒、乳制品、水产品等食品中。

同时，它还能被用于医疗和化妆品领域，例如用于抗肿瘤、消炎、增加皮肤弹性等。

因此，菠萝蛋白酶的提取十分重要，细节决定了酶的纯度和活性，也影响到菠萝蛋白酶在不同领域中的应用。

菠萝蛋白酶的制备及其活力的测定

试管号 1 1%酪蛋白（ml) 0.2 2 0.4 3 0.6 4 0.7 5 0.8
6、按步骤5混匀，在37℃水浴下反应10 min; 7、向10支试管中各加入8ml1mol/L的氢氧化钠溶液，摇匀，于室温放置30min; 8、取各自对应的试管在275nm波长下测定吸光度 9、测定结果如下
试管号
吸光度A
1
2
3
4
ห้องสมุดไป่ตู้
5
实验过后对结果进行分析和计算
数据的处理
1、由线性关系y=6.2357x，可以计算酶制品中蛋白酶的总质量m 2、菠萝蛋白酶活力=A/10 3、比活力=菠萝蛋白酶活力/m 4、提取率=m/菠萝的质量
应该注意的事项
1.操作过程温度的控制，确保所得的蛋白不失活。 2.弄清所加试剂和每步操作对实验结果的影响。 3.在酶活力的测定中，加入氢氧化钠是为了终止反应。 4.所加酪蛋白溶液的量对实验结果有影响。需要多次实验确定所加的量，避免反应不完全或蛋白剩余，影响实验结果。
一、菠萝蛋白酶在食品加工业的应用
1、焙烤食品：将菠萝蛋白酶加入生面团中，可使面筋降解，生面团被软化后易于加工。并能提高饼干与面包的口感与品质。 2、肉类的嫩化：菠萝蛋白酶将肉类蛋白质的大分子蛋白质水解为易吸收的小分子氨基酸和蛋白质。可广泛地应用于肉制品的精加工。 3、干酪：用于干酪素的凝结
菠萝蛋白酶的制备及其活力的测定
背景介绍
菠萝蛋白酶广泛存在于菠萝的果实、芽、叶、茎中，从菠萝的果实中提取的称为果菠萝蛋白酶（FruitBromelain），从菠萝的茎中提取的称为茎菠蛋白酶（Stem Bromelain）。菠萝蛋白酶的分子量为33000，是典型的巯基蛋白酶，能分解蛋白质，肽，酯，酰胺。它的水解蛋白的活性比木瓜蛋白酶的活性高十倍以上，因此有着广泛的用途。它作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化、啤酒澄清，还用于干酪、明胶、水解蛋白酶的生产。在医药上它可用于生物体内溶解纤维蛋白及血凝块，因此可用于治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。这里就菠萝蛋白酶的三种提取方法

菠萝蛋白酶应用

（四）菠萝蛋白酶制剂在饲料中的应用 • 菠萝蛋白酶还作为饲料添加剂可以提高哺乳期小猪和断奶期小猪的生长速度。将菠萝蛋白酶加入饲料配方或直接混合在饲料中，可以大大提高蛋白质的利用率和转化率，并能开发更广的蛋白源，从而降低饲料成本。
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（二）菠萝蛋白酶在医药、保健品业的应用 1．抑制肿瘤细胞的生长 2．对心血管疾病的防治 3．用于烧伤脱痂 4．消炎作用 5．增进药物吸收 6．具有免疫刺激作用 7．抑制毒素分泌
（三）菠萝蛋白酶在美容化妆品业中的应用
•
菠萝蛋白酶具有嫩肤、美白去斑的优异功效。基本作用原理：菠萝蛋白酶可作用于人体皮肤上的老化角质层，促使其退化、分解、去除，促进皮肤新陈代谢，减少因日晒引起的皮肤色深现象。使皮肤保养呈现良好白嫩状态。
菠萝蛋白酶的应用
• （一）菠萝蛋白酶在食品加工业的应用 • （二）菠萝蛋白酶在医药、保健品业的应用
• （三）菠萝蛋白酶在美容化妆品业中的应用 • （四）菠萝蛋白酶制剂在饲料中的应用
（一）菠萝蛋白酶在食品加工业的应用 1．焙烤食品 2．干酪：用于干酪素的凝结 3．肉类的嫩化 4．增加豆饼和豆粉的PDI值和NSI值 5．还有生产脱水豆类、婴儿食品和人造黄油；澄清苹果汁；制造软糖；为病人提供可消化的食品；给日常食品添味等
菠萝蛋白酶应用
植物蛋白酶
பைடு நூலகம்奇异果蛋白酶
菠萝蛋白酶
无花果蛋白酶
木瓜蛋白酶
菠萝蛋白酶的性质
• • • • • • • • 物理性质状态：粉末颜色：黄棕色水溶解性：可溶分子量：约33000 等电点pH值：9.35 最适pH值：6～8 最适温度：55℃ • 化学性质 • 白色至浅棕黄色无定形粉末。溶于水,水溶液无色至淡黄色,有时有乳白光,不溶于乙醇、氯仿和乙醚。属糖蛋白。主要作用原理是使多肽类水解为低分子量的肽类。尚有水解酰胺基键和酯类的作用。

菠萝蛋白酶的提取与活力测定

上清液沉淀物
加100ml0.1%EDTA溶液， 200ml1.5%氯化钠液
4200r/min,5min离心
氯化钠溶
酶复合物 10
在提取菠萝蛋白酶时,添加单宁溶液的浓度为0. 2 %沉淀蛋白的效果最好,同时果汁的总酸度不大,糖酸比合适,菠萝汁中菠萝蛋白酶的沉淀率达到72%。菠萝蛋白酶提取时,pH值为6. 5～8.5左右,温度为6 0℃,菠萝蛋白酶的活性最强 ,可作为最佳提取条件。
12
计算酶的比活性 • 酶的比活性 • （F.I.P.-U/mg)=E275/(Ew×0.116×10） • E275——275nm处得吸光度 • Ew——每2.5ml所用酶液中含酶的重量，mg • 0.116——275nm处酪氨酸溶液（1umol酪氨酸/10ml）的吸光度 • 10——反应时间，min
•
温度范围： 50～60℃
•
作用PH值: 6.0～9.0
6
三、实验材料和试剂 1、实验材料
新鲜菠萝(下脚料）、0.1mg/ml牛血清蛋白 2、实验试剂柠檬酸钠维生素C 单宁 0.1%EDTA溶液 1.5%氯化钠溶液 1%酪蛋白溶液 1mol/L氢氧化钠溶液 0.05mol/L磷酸缓冲液（溶解磷酸二氢钾，加氢氧化钾调PH至7.0）激活剂（PH7.0，0.05mol/L磷酸缓冲液，内含15mmol/L硫代硫酸钠和6mmol/LEDTA2Na,现配现用）
工艺流程：菠萝下脚料→压榨→汁液→去杂质→澄清液→超滤浓缩→浓缩液→降温→加有机溶
剂沉淀（ 95%乙醇）→湿酶→减压干燥→酶制品
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谢谢观赏
4
二、菠萝蛋白酶在医药、保健品
• 1、抑制肿瘤细胞的生长 • 2、对心血管疾病的防治 • 3、用于烧伤脱痂 • 4、消炎作用

菠萝蛋白酶提取

菠萝蛋白酶提取一、实验目的：1、了解菠萝蛋白酶的提取和纯化工艺2、优化和加深熟悉菠萝蛋白酶提取技术二、实验原理：菠萝蛋白酶(Bromelain，简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤梨酵素)是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。

其外观为浅灰色粉末状，分子量为33000 ，等电点为9.55 。

品质最佳的菠萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工,采用超滤方法进行过滤浓缩,低温冷冻干燥而得的。

产品已被广泛应用于食品、医药等行业。

结果表明。

提取菠萝中菠萝蛋白酶最佳提取工艺条件是添加单宁溶液的浓度为0．2％，提取时最适pH值为6．5～8．5左右，而最适提取温度为60℃。

菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化，啤酒澄清，还用于干酪、明胶及水解蛋白的生产。

在医药上它可以治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。

三、实验步骤操作要点：菠萝蛋白酶的提取称取1 kg制备好的鲜果皮汁，加5％苯甲酸钠溶液10 ml搅匀，以4 000 r／min离心7 min，取上清液倒人干净烧杯中。

上清液分装在6个小烧杯中，每个装100 ml菠萝汁，分别缓缓加入空白、0．1％、0．2％、0．3％、0．4％、0．6％单宁溶液10 ml，边加边拌约1 5min，沉淀物析出，静止40 min。

虹吸除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4 000 r／min。

离心5 min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物。

分离、洗涤和保护把提取的蛋白酶糊倒人烧杯中，加0．1％EDTA溶液100 ml搅匀，再将1．5％氯化钠溶液200 ml倒人烧杯中搅匀，以4 000 r／min离心7 min，倒掉上清废液，得到洗涤剂I酶复合沉淀物。

把洗涤剂I酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0．5％乙酸锌溶液20 min，搅拌均匀，静止5 min，加0．06％抗坏血酸溶液30 ml，搅匀，静止5 rain，加1．5％氯化钠溶液20 ml，搅匀，静止5 min，最后再加0．5％EDTA溶液20 ml，搅匀，静止5min，以4 000 r／min离心7 min，把上清废液倒掉，得到洗涤剂Ⅱ酶复合沉淀物。

菠萝蛋白酶的制备及其活力的测定

ABCD
2. 配置反应液
将底物和缓冲液混合，加入适量的酶液，调整反应体系。
4. 数据处理
根据测定的数据，计算酶活力并进行分析。
结果与分析
结果表示
以表格或图表形式表示测定的吸光度或荧光强度变化，以及计算得到的酶活力数据。
结果分析
根据实验结果，分析菠萝蛋白酶的活性水平，比较不同条件下酶活力的变化，探讨影响酶活性的因素。
白酶的粗品。
பைடு நூலகம்
结果与分析
结果
通过上述实验步骤，成功制备出菠萝蛋白酶的粗品。
分析
通过对实验结果的分析，可以得出制备菠萝蛋白酶的最佳条件和参数，为后续的酶活力测定和酶学性质研究提供基础。
03
菠萝蛋白酶活力的测定
测定方法
紫外分光光度法
利用菠萝蛋白酶分解底物产生特定波长的紫外吸收，通过测定吸光度变化计算酶活力。
感谢观看
菠萝蛋白酶的应用
01
在食品工业中，菠萝蛋白酶可用于改善食品的口感和质地，如肉类嫩化、奶酪制造等。
02
在医药领域，菠萝蛋白酶具有抗炎、抗水肿、促进伤口愈合等
作用，可用于治疗炎症、创伤等疾病。
在农业上，菠萝蛋白酶可以作为生物农药，用于防治植物病虫
03
害。
研究目的与意义
01
菠萝蛋白酶作为一种天然的蛋白质水解酶，具有广泛的应用前景。
菠萝蛋白酶的制备及其活力的测定
• 引言 • 菠萝蛋白酶的制备 • 菠萝蛋白酶活力的测定 • 结论
01
引言
菠萝蛋白酶简介
菠萝蛋白酶是一种植物来源的蛋白水解酶，具有高效催化蛋白质的能力。
菠萝蛋白酶具有较广的底物特异性，可以水解多种蛋白质底物。

[菠萝蛋白酶提取]果菠萝蛋白酶的提取失败原因

[菠萝蛋白酶提取]果菠萝蛋白酶的提取失败原因菠萝蛋白酶提取一、实验目的：1、了解菠萝蛋白酶的提取和纯化工艺2、优化和加深熟悉菠萝蛋白酶提取二、实验原理：菠萝蛋白酶(Bromelain，简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤梨酵素)是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。

其外观为浅灰色粉末状，分子量为 33000 ，等电点为 9.55 。

品质最佳的菠萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工,采用超滤方法进行过滤浓缩,低温冷冻干燥而得的。

产品已被广泛应用于食品、医药等行业。

结果表明。

提取菠萝中菠萝蛋白酶最佳提取工艺条件是添加单宁溶液的浓度为0．2％，提取时最适pH值为6．5～8．5左右，而最适提取温度为60℃。

菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化，啤酒澄清，还用于干酪、明胶及水解蛋白的生产。

在医药上它可以治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。

三、实验步骤操作要点：菠萝蛋白酶的提取称取1 kg制备好的鲜果皮汁，加5％苯甲酸钠溶液10 ml搅匀，以4 000 r／min离心7 min，取上清液倒人干净烧杯中。

上清液分装在6个小烧杯中，每个装100 ml菠萝汁，分别缓缓加入空白、0．1％、0．2％、0．3％、0．4％、0．6％单宁溶液10 ml，边加边拌约1 5min，沉淀物析出，静止40 min。

虹吸除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4 000 r／min。

离心5 min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物。

分离、洗涤和保护把提取的蛋白酶糊倒人烧杯中，加0．1％EDTA溶液100 ml搅匀，再将1．5％氯化钠溶液200 ml倒人烧杯中搅匀，以4 000 r／min离心7 min，倒掉上清废液，得到洗涤剂I酶复合沉淀物。

把洗涤剂I酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0．5％乙酸锌溶液20 min，搅拌均匀，静止5 min，加0．06％抗坏血酸溶液30 ml，搅匀，静止5 rain，加1．5％氯化钠溶液20 ml，搅匀，静止5 min，最后再加0．5％EDTA溶液20 ml，搅匀，静止5min，以4 000 r／min离心7 min，把上清废液倒掉，得到洗涤剂Ⅱ酶复合沉淀物。

菠萝蛋白酶的制备及活性测定

菠萝蛋白酶‎的制备及活‎性测定背景菠萝蛋白酶‎(Brome‎l ain)，别名菠萝酶‎，是存在于菠‎萝(Anana‎COmOS‎l2S)植株中的蛋‎白质水解酶‎，为浅黄色无‎定形粉末，微有异臭。

菠萝的果、茎、柄和叶片中‎都含有菠萝‎蛋白酶。

一般从菠萝‎果中提取的‎称为果菠萝‎蛋白酶，从菠萝皮、茎中提取的‎为茎菠萝蛋‎白酶。

八成熟的菠‎萝果汁含有‎约0．4％的菠萝蛋白‎酶，成熟的菠萝‎果汁含有O‎．3％左右的菠萝‎蛋白酶，茎汁含8．7％的菠萝蛋白‎酶(Murac‎h i，et a1．，1964)。

1981年‎，Marca‎n o首先发‎现菠萝汁中含‎有蛋白水解‎酶，随后Wil‎l stat‎t er，Bergm‎a nn和M‎a rtin‎相继指出，菠萝蛋白酶‎存在于果、皮和茎部中‎，存在于茎部‎的称为茎酶‎(Stemb‎r omel‎a in E．C．3．4．22．4)，存在于果汁‎中的酶称为‎果酶(Fruit‎brome‎l ainE‎．C．3．4．22．5)。

Murac‎h i和Ne‎u rath‎、E1．G harba‎w i和Wh‎i take‎r采取层析‎法分离提取‎了菠萝蛋白‎酶并研究了‎它的活性成‎分。

结构特性研‎究表明，果菠萝蛋白‎酶是酸性酶‎，等电点为p‎H4．6，茎菠，约为33，000，等电点为p‎H9．5，其活性中心‎的氨基酸顺‎序和催化机‎理与木瓜蛋‎白酶相似，并确定茎菠‎萝蛋白酶为‎糖蛋白。

Ota S et aL研究指‎出，茎菠萝酶分‎子量为36‎000，末端氨基酸‎残基是丙氨‎酸，果酶分子量‎为3000‎0，末端氨基酸‎残基也为丙‎氨酸，碳水化合物‎分析与Mu‎r acll‎i 的分析结‎果相似。

1988年‎，T．L．迈诺特等由‎十二烷基硫‎酸钠．聚丙烯胺凝‎胶电泳(SDS．PAGE)测定果菠萝‎蛋白酶分子‎量2220‎0．25080‎，等电点3．8~4．8。

菠萝蛋白酶‎是各种酶的‎混合物，已知菠萝蛋‎白酶粗品中‎包含至少五‎种蛋白水解‎酶，也包含非蛋‎白水解酶，包括酸性磷‎酸酶和过氧‎化物酶，并含有淀粉‎酶和纤维素‎酶活性，还存在其他‎成分。

菠萝中提取蛋白酶

实验原理蛋白质与单宁作用可以发生沉淀反应所以可以用单宁提取菠萝蛋菠萝肉各部分分别经打碎榨汁纱布粗滤min10min后得澄清液存放于冰箱中备用5柠檬酸钠维生素c单宁01edta溶液15氯化钠溶液1酪蛋白溶液1moll氢氧化钠溶液005moll磷酸缓冲液溶解磷酸二氢钾加氢氧化钾调ph至70激活剂ph70005moll磷酸缓冲液内含15mmoll硫代硫酸钠和6mmolledta2na现配现用榨汁机离心机分光光度计水浴锅方法及流程鲜果肉汁混合液上清液混合液沉淀物酶糊复合物5柠檬酸钠液10min离心4000rmin7min加入02单宁15min静止40min离心4200rmin5min分离洗涤和保护edta溶液100ml搅匀再将1
注意事项
菠萝蛋白酶易受热失活，应低温短时生产，一般在0℃左右进行。某些化学药品和金属离子易引起菠萝蛋白酶失活，生产过程忌碱、忌强酸作用，勿与铁、铜等重金属接触。菠萝蛋白酶是一种胶体，生产过程中易产生气泡造成损失，所以生产过程应注意操作。
THE END 谢谢欣赏！
准备知识
菠萝茎和菠萝皮的含水量都达到85％以上，但菠萝茎的榨汁率比菠萝皮的榨汁率低。菠萝皮和菠萝茎中的糖分含量占总干重的80％左右，其中菠萝茎中淀粉占总糖份量的一半。离心可以有效去除榨汁中的不溶物质及菠萝茎中的淀粉，能部分去除果胶，对一些大分子悬浮物质去除困难。
背景知识
菠萝蛋白酶在避光、低温条件下贮藏的酶活力损失最小。在55℃时具有最高的蛋白酶活性，40℃以上条件下酶活半衰期在2h以内，其热变性温度在55℃和60℃之间。金属离子对菠萝蛋白酶的酶活力具有影响， Ca2+引起的酶的失活速度最快；Fe2+和Cu2+对酶活力影响最大。
结果讨论
3、菠萝蛋白酶对热不稳定，试验中温度的控制是否、菠萝蛋白酶对热不稳定，合理；合理； 4、在活力测定的步骤中所加入的酪蛋白的量不足，、在活力测定的步骤中所加入的酪蛋白的量不足，导致结果偏低；导致结果偏低；

菠萝蛋白酶的提取原理

菠萝蛋白酶的提取原理菠萝蛋白酶是一种天然的蛋白酶，广泛存在于菠萝的果汁和果肉中。

提取菠萝蛋白酶的原理主要涉及菠萝蛋白酶的特性、细胞破碎、酶的活化与稳定化等过程。

下面将详细介绍菠萝蛋白酶的提取原理。

菠萝蛋白酶是一种催化蛋白质水解的酶，属于半胱氨酸蛋白酶家族。

菠萝蛋白酶具有较强的蛋白质降解活性，可以在酸性条件下或中性条件下发挥作用。

在酸性条件下，菠萝蛋白酶通常具有最佳催化活性。

提取菠萝蛋白酶的第一步是破碎菠萝，以释放细胞内的菠萝蛋白酶。

菠萝果实的表面有一层防护性的角质层，需要先去除这层角质层，使其暴露出果肉。

然后，将果肉切成小块，用果汁机或搅拌器进行细胞破碎，以破坏细胞壁释放细胞内的菠萝蛋白酶。

提取菠萝蛋白酶的第二步是酶的活化。

菠萝蛋白酶是一种活性酶，在一定条件下可以被活化。

常用的活化剂有酒精、盐酸、醋酸等，其中以酒精最常见。

将细胞破碎液与酒精混合，放置一段时间，使菠萝蛋白酶被活化。

提取菠萝蛋白酶的第三步是稳定酶的活性。

由于菠萝蛋白酶容易被环境因素（如温度、pH等）影响而失去活性，因此需要采用一些方法来稳定酶的活性。

常用的方法包括温度控制、pH调节、添加保护剂等。

例如，可以将活化后的菠萝蛋白酶溶液进行冷冻保存或加入抗氧化剂来延缓酶的衰老过程。

提取菠萝蛋白酶的最后一步是纯化酶。

菠萝蛋白酶的提取通常是作为一种复杂液体提取物，其中除了目标酶外还含有其他杂质。

为了获得高纯度的菠萝蛋白酶，需要进行纯化步骤，如离心、过滤、层析等。

这些步骤可根据酶的特性和特定实验要求来选择。

总的来说，菠萝蛋白酶的提取原理主要涉及菠萝蛋白酶的特性、细胞破碎、酶的活化与稳定化以及纯化。

通过这些步骤，可以获得菠萝蛋白酶的高纯度提取物，为进一步研究和应用菠萝蛋白酶提供了基础。

在实际操作过程中，还需根据具体需求和条件进行改进和优化，以提高菠萝蛋白酶的提取效果。

菠萝蛋白酶生产工艺

菠萝蛋白酶生产工艺
菠萝蛋白酶是一种能够降解蛋白质的酶，广泛应用于食品、酒类、制酶等行业中。

下面我将介绍菠萝蛋白酶的生产工艺。

菠萝蛋白酶的生产工艺主要包括以下几个步骤：原料准备、发酵、分离提纯和产品包装。

首先是原料准备。

菠萝蛋白酶的原料主要是新鲜菠萝。

首先将新鲜菠萝去皮、去核，然后用搅拌机将其搅碎成糊状物。

得到的菠萝糊经浸泡蛋白酶活性稳定剂，以提高蛋白酶的活性和稳定性。

接下来是发酵。

将经过处理的菠萝糊加入到发酵罐中，并加入适量的发酵基质，如糖、氨基酸等。

在适当的温度和pH条件下，接种适量的菌种，进行发酵培养。

发酵过程中需要控制好温度、pH值和搅拌速度等参数，以促进菌种生长和蛋白酶的产生。

发酵完成后，进行分离提纯。

首先对发酵液进行离心，分离出菠萝蛋白酶。

然后采用酒精沉淀、超滤、析出等一系列分离纯化工艺，去除杂质并提高蛋白酶的纯度。

最后是产品包装。

将提纯后的菠萝蛋白酶经过过滤、浓缩等处理，最终得到浓缩度适宜的酶液。

将酶液灌装到容器中，然后进行杀菌、封装等工序，最终得到成品。

总的来说，菠萝蛋白酶的生产工艺是一个较为复杂的过程，需
要进行原料处理、发酵、分离提纯和产品包装等多个步骤。

不同的厂家和工艺流程可能有所不同，但一般都遵循以上的基本流程。

通过科学合理的工艺控制，可以获得高活性和纯度的菠萝蛋白酶产品。

菠萝蛋白酶的制备及活力测定

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菠萝蛋白酶的生物学特征
三、储运特性库房通风低温干燥所需灭火剂：水,泡沫沙土,二氧化碳干粉所需灭火剂：泡沫,沙土二氧化碳,干粉泡沫沙土二氧化碳四、物理性质白色至浅棕黄色无定形粉末。溶于水，白色至浅棕黄色无定形粉末。溶于水，水溶液无色至淡黄有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。属糖蛋白。色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。属糖蛋白。主要作用原理：使多肽类水解为低分子量的肽类。主要作用原理：使多肽类水解为低分子量的肽类。尚有水解酰胺基键和酯类的作用。解酰胺基键和酯类的作用。分子量：分子量：约33000DA 等电点pH值等电点值：9.35 最适pH值最适值：7 最适温度： ℃ 最适温度：45℃
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实验仪器与试剂
1、仪器：压榨机、吸附槽、虹吸管、盐析槽、离心仪器：压榨机、吸附槽、虹吸管、盐析槽、溶解罐、玻璃棒、烧杯、漏斗、抽滤机、机、溶解罐、玻璃棒、烧杯、漏斗、抽滤机、电子天平等 2、试剂：菠萝、0.05%苯甲酸钠溶液、4%高岭土、试剂：菠萝、0.05%苯甲酸钠溶液、4%高岭土、苯甲酸钠溶液高岭土 16%氢氧化钠溶液质量分数7% 9%的食盐盐酸、氢氧化钠溶液、 7%— 的食盐、 16%氢氧化钠溶液、质量分数7%—9%的食盐、盐酸、质量分数为25 硫酸铵、体积分数1 25﹪ 质量分数为25﹪硫酸铵、体积分数1：3的盐酸等
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2、吸附
将汁液移人吸附槽中将汁液移人吸附槽中搅拌，同时加入 4 吸附槽高岭土，％的高岭土，搅拌约 20 min，在 10℃吸附， ℃ 30～60 min，用虹吸排掉上清液收集高岭土～，吸附物
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从菠萝中提取菠萝蛋白酶

从菠萝中提取菠萝蛋白酶
菠萝蛋白酶是一种酶类蛋白质，可分解蛋白质成分。

菠萝是其主要来源之一，因此，从菠萝中提取菠萝蛋白酶成为一种常见的方法。

提取菠萝蛋白酶的方法可以通过多种方式实现，其中包括机械压榨、超声波处理、低温浸泡、固相萃取和酵素技术等。

不同的方法会对提取效果产生不同的影响。

机械压榨是最简单的提取方法之一，通过将菠萝果肉或茎汁挤压后，分离出含有菠萝蛋白酶的液体。

超声波处理则是一种快速、高效的提取方法，它利用超声波能量刺激菠萝细胞释放菠萝蛋白酶。

低温浸泡是一种保留菠萝蛋白酶活性的提取方法，通过在低温下将菠萝浸泡一段时间，可提高菠萝蛋白酶的纯度和活性。

固相萃取是一种常用的精细化提取方法，它将菠萝蛋白酶从其他成分中分离出来，通过针对菠萝蛋白酶特异性的化学反应，可将菠萝蛋白酶浓缩，从而得到纯度高的菠萝蛋白酶。

酵素技术则是利用大肠杆菌等细菌表达人造菠萝蛋白酶，通过纯化酶产物得到菠萝蛋白酶。

总之，从菠萝中提取菠萝蛋白酶是一种常见的方法，通过不同的提取技术可以得到不同品质的菠萝蛋白酶。

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菠萝蛋白酶（菠萝酶）

菠萝蛋白酶（菠萝酶）菠萝蛋白酶编辑词条B 添加义项 ?菠萝蛋白酶是从菠萝水果皮、茎、芯等部分经生物技术制得的一种纯天然植物蛋白酶，其分子量为33000，等电点为9.55，属于疏基蛋白酶，其活动中心为疏基（-SH），能进行蛋白质水解等各种生化反应，菠萝蛋白酶是一种天然的、无毒无害，卫生安全的蛋白酶，它可广泛应用食品、医药及生物等行业。

目录1基本介绍2组成结构3理化性质4制备方法5价值应用6注意事项折叠编辑本段基本介绍菠萝蛋白酶(Bromelain），简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤111梨酵素。

是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。

其外观为浅灰色粉末状，分子量为33000，等电点为9.55。

品质最佳的菠萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工，采用超滤方法进行过滤浓缩，低温冷冻干燥而得的。

产品已被广泛应用于食品、医药等行业。

折叠编辑本段组成结构菠萝蛋白酶是由多种不同分子量和分子结构的酶所组成的酶系，其中至少包含了5种蛋白水解酶。

除此之外，有的还含磷酸酯酶、过氧化物酶、纤维素酶、其它糖苷酶及非蛋白物质。

菠萝蛋白酶是一种糖蛋白，分子结构中含有一个寡糖分子，由木糖（xylose，xy1）、岩藻糖（fucose，Fuc）、甘露糖（mannose，Man）和N—乙酰葡糖胺（N—aceltylglu2cosamine，GlcNAc）组成，共价连接在肽链上，Ishihara和Yasuda等人分别推测出了糖分子的结构。

折叠编辑本段理化性质菠萝蛋白酶的分子量为30000－33000，等电点为9155，酶液的最大吸收波长为280nm。

因其由多种酶分子构成，故在催化底物上具有多样性。

它能分解蛋白质、肽、脂和酰胺，其水解蛋白的活性较木瓜蛋白酶高10倍以上。

菠萝蛋白酶催化的必需基团不是糖分子，而是所含肽链中的巯基；另外，菠萝蛋白酶分子结构中的羧基和羟基亦与酶活性无关。

菠萝蛋白酶的催化活性易受到pH、温度、金属离子、EDT A 及还原剂等的影响。

菠萝蛋白酶提取

菠萝蛋白酶提取一．实验目的:1.了解菠萝蛋白酶的基本性质，设计提取方法并测性其蛋白总量及酶活性；2.计算从菠萝中提取菠萝蛋白酶时每步的回收率，判断提取方法的优劣。

二．实验原理：菠萝蛋白酶外观为白色至浅棕黄色无定形粉末；可溶于水，水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚；属糖蛋白。

主要作用原理是使多肽类水解为低分子量的肽类，尚有水解酰胺基键和酯类的作用。

其作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化,啤酒澄清,还用于干酪、明胶及水解蛋白的生产。

在医药上它可以治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂,对正常组织无害,不影响植皮,适用于中小面积深度烧伤的治疗。

提取菠萝蛋白酶的传统工艺是高岭土吸附法和单宁沉淀法。

高岭土吸附法生产工艺和操作都比较复杂,原材料消耗多,所需设备也多,酶活总回收率低,但产品质量较好,纯度较高,单宁沉淀法工艺和操作比高岭土法简单,原材料消耗少,所需设备少,但酶活回收率低。

有些研究用超滤法对传统工艺进行了改革,不仅使菠萝蛋白酶产品更纯,而且酶粉得率比传统工艺高,但超滤法生产工艺和和操作比上述两种方法复杂,工人素质要求高,且设备一次性投资大。

本实验采用新型吸附法提取菠萝蛋白酶,步骤简单,产率比传统方法有所提高,是一种有发展的方法。

在新型吸附沉淀法提取菠萝蛋白酶中,所使用的锌离子对酶有激活作用,乙二胺四乙酸是一种螯合物,可有效地螯合原料中某些重金属离子,以避免其与酶结合而使酶失去活性,抗坏血酸则具有还原性,分子上的活泼羟基氢可使酶活性中心保持还原状态,从而有效地保持酶活性,其中以EDTA 和L2半胱氨酸组合,效果最佳。

单宁用量多少会直接影响酶产量,一般范围0. 15 %～0. 25 %的浓度。

采用Folin-酚法测定蛋白酶含量，发生双缩脲反应的蛋白中酚基（酪氨酸），在碱性条件下将磷钼酸和磷钨酸还原成钼酸和钨酸，呈蓝色，在650nm和66onm处有最大吸收值。

Folin-酚试剂由甲试剂和乙试剂组成。

菠萝蛋白酶的制备试验原理

燥
解冻离心
3000r/min 10 min
注意事项
1.选取70％～80％成熟的新鲜菠萝 2.避免热、酸、碱、重金属盐、紫外线的影响 3.整个操作中注意温度的变化 4.常用pH试纸检测pH值的变化
思考题
1．洗脱时如果不加入氯化钠溶液应如何继续分离纯化菠萝蛋白酶？
生物制药技术
生物分离技术
实训五、菠萝蛋白酶的制备
21 目的要求 2 实验原理
3 材料用具 4 操作方法 5 注意事项 5
目的要求
了解单宁沉析法提取菠萝蛋白酶的原理掌握提取菠萝蛋白酶的基本操作技术
原理
菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白酶，稍溶于水，不溶于乙醇、丙酮、氯仿、乙醚，最适pH值为7，微有异臭，其酶活力能被半胱氨酸激活，而受重金属抑制
用单宁沉析法提取鲜菠萝中的菠萝蛋白酶，用乙二胺四乙酸螯合原料中重金属离子，抗坏血酸则可使酶活性中心保持还原状态，锌离子、硫代酸钠、 L-半胱氨酸对酶有激活作用
材料用具
鲜菠萝（1500g左右）
0.5％、0.1％EDTA-Na（二乙胺四乙酸钠） 0.5％乙酸锌溶液 0.06％、0.1％抗坏血酸溶液 1％单宁（别名鞣酸） 1.5％氯化钠溶液 0.5％硫代硫酸钠溶液； 1％L-半胱氨酸溶液。其配制方法是：①称取L半胱氨酸0.1g，加水10ml，加1mol／L盐酸溶液 6～8滴使之溶解；②用6mol／L的氢氧化钠溶液中和至pH3～4。
3.洗脱
加 0.06％抗坏血酸
30ml
操作方法
加0.5％硫代硫酸钠20 ml 沉淀物
菠萝蛋白酶沉淀
离心 3500r/min 10 min
4.激活
搅拌静置 5min
搅拌静置 10min

菠萝蛋白酶提取纯化及化学修饰对其活性的影响

菠萝蛋白酶提取纯化及化学修饰对其活性的影响一、实验目的1、掌握菠萝蛋白酶的提取和纯化方法2、研究菠萝蛋白酶的稳定性3、掌握菠萝蛋白酶的化学修饰并对修饰酶与未修饰酶的活性比较二、实验原理菠萝蛋白酶（Bromelain,EC 3.4.22.3）是从凤梨属植物菠萝中提取的一组复合的半胱氨酸巯基蛋白水解酶。

菠萝蛋白酶属于糖蛋白，分子量约为33000D，等电点为9.55，白色至浅棕黄色无定形粉末，溶于水。

水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。

菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白酶，能分解蛋白质，肽，酯，酰胺。

它的水解蛋白的活性比木瓜蛋白酶的活性高十倍以上，因此有着广泛的用途。

它作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化、啤酒澄清，还用于干酪、明胶、水解蛋白酶的生产。

在医药上它可用于生物体内溶解纤维蛋白及血凝块，因此可用于治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。

菠萝蛋白酶的最适温度范围比较稳定，最稳定范围是55℃~65℃。

菠萝蛋白酶的最适 pH 在7.1 左右，呈现中性。

金属盐离子中 NaCl、KCl对酶活的影响不是很大，较高浓度的 MgCl2、CaCl2对菠萝蛋白酶单宁复合物有一定程度的抑制作用，尤其在浓度较高的情况下对菠萝蛋2+白游离酶酶活的影响更大。

Zn的作用中以醋酸锌的作用更为显著，极低的浓度即能促使菠萝蛋白酶的酶活性明显提高。

较低浓度的 ZnCl2也能使酶的稳定性有所提高。

维生素 C、半胱氨酸、硫代硫酸钠、2-巯基乙醇是菠萝蛋白酶的稳定剂，都能使酶分子中巯基基团维持还原态，能够作为还原剂来提高酶活力。

0.05%的苯甲酸钠即能使氧化脱氢酶的活性得到抑制，对酶起到保护作用。

对酶活有影响的金属离子，EDTA 能通过螯合而保护菠萝蛋白酶，消除其对酶的失活作用。

其它试剂如 50%的甘油、葡萄糖、40%的半乳糖都能使菠萝蛋白酶的半衰期延长，蔗糖、麦芽糖、棉籽糖、松三糖、乙二醇和甘露醇均对菠萝蛋白酶有一定的保护作用。

菠萝蛋白酶

菠萝蛋白酶的提取纯化及化学修饰对其活性的影响一、实验目的1、掌握菠萝蛋白酶的提取纯化方法2、了解菠萝蛋白酶的活力测定方法3、了解化学修饰的方法并探究对其活力的影响。

4、探究菠萝蛋白酶的稳定性二、实验原理菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白质, 广泛存在于菠萝果实、芽、叶、茎中, 分子量为33 000, 能分解蛋白质和酰胺等。

它的水解活性较木瓜酶高10 倍以上。

因此有广泛的用途。

它作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化、啤酒澄清. 还用于胶、水解蛋白的生产, 在医药上它可在生物体内溶解纤维蛋白及血凝块。

因此可以治疗水肿及多种炎症, 它能迅速溶痂。

对正常组织无害, 不影响植皮, 适用于中小面积深度烧伤的治疗。

•菠萝蛋白酶的理化条性质•最佳温度：53±1℃•失活温度：≥65℃•最佳PH值： 5.0～8.0•失活PH值：小于3.0和大与9.5•推荐用量:0.05～0.1%对蛋白质计•温度范围：50～60℃作用PH值: 6.0～9.0提取菠萝蛋白酶的传统工艺是高岭土吸附法和单宁沉淀法。

高岭土吸附法生产工艺和操作都比较复杂,原材料消耗多,所需设备也多,酶活总回收率低,但产品质量较好,纯度较高,单宁沉淀法工艺和操作比高岭土法简单,原材料消耗少,所需设备少,但酶活回收率低。

超滤法使菠萝蛋白酶产品更纯,而且酶粉得率比传统工艺高,但超滤法生产工艺和和操作比上述两种方法复杂,工人素质要求高,且设备一次性投资大。

本实验采用单宁沉淀法提取菠萝蛋白酶。

活性测定方法是以酪蛋白水解释放的氨基酸在275nm的吸收值为基础。

酶活单位定义为在37℃，pH7.0的条件下，每分钟水解酪蛋白所产生的酪氨酸的微克数为一个菠萝蛋白酶单位。

pH 值对酶活力有很大的影响,大多数的酶在酸性条件下活力最强,最适合菠萝蛋白酶的pH 为7. 4 ,在碱性条件下就会失活,在操作过程中应注意pH 值的变化。

实验材料1、材料：新鲜的成熟菠萝2、仪器：榨汁机、离心机、紫外分光光度计、恒温水浴锅、氯化钙的干燥器、CMSepharose FF 凝胶（1.1cm×30.0cm）、研钵、滴管（大、小）、烧杯（大、中、小）、试管、具塞试管、白瓷板、温度计、PH计、搅拌棒3、试剂：0.2%单宁、5 %苯甲酸钠溶液、0. 1 %/0.5%EDTA 溶液、1. 5%氯化钠溶液、0. 5%乙酸锌溶液、0.06 %抗坏血酸溶液、0. 5%硫代硫酸钠、1 %L - 半胱氨酸溶液、20mM pH4.0 的醋酸缓冲液、1MNaCl~20mM pH4.0 醋酸缓冲液（含0.01%EDTA）、双缩脲试剂、pH7.0 的干酪素溶液、酶液激活液（pH4.5 ，L-cys 和EDTA-2Na 配制）、三氯乙酸溶液、标准酪蛋白试剂、0.1M盐酸、0.1M氢氧化钠、50%乙二醇、50%甘露醇、50%葡萄糖、50%甘油、O．1mol/L柠檬酸盐缓冲液(pH 3．0)、NEM1、实验材料新鲜菠萝(下脚料）、0.1mg/ml牛血清蛋白2、实验试剂①柠檬酸钠②维生素C ③单宁④0.1%EDTA溶液⑤1.5%氯化钠溶液⑥1%酪蛋白溶液⑦1mol/L氢氧化钠溶液⑧0.05mol/L磷酸缓冲液（溶解磷酸二氢钾，加氢氧化钾调PH至7.0）⑨激活剂（PH7.0，0.05mol/L磷酸缓冲液，内含15mmol/L硫代硫酸钠和6mmol/LEDTA-2Na,现配现用）1、榨汁机；2、离心机；3、紫外可见分光光度计（1cm石英比色皿）；4、恒温水浴锅（37℃）；5、试管、试管架；6、烧杯、容量瓶；7、移液管；三、实验步骤1、菠萝蛋白酶的提取提取：菠萝洗净榨汁。

菠萝蛋白酶提取

菠萝蛋白酶提取摘要：，运用盐析法从菠萝皮中提取菠萝蛋白酶，对菠萝蛋白酶的提取工艺及其影响因素进行了研究，并对提取后得到的菠萝蛋白酶进行测定。

关键词：菠萝皮，菠萝蛋白酶，白陶土吸附，盐析法一目的要求：学习盐析法提取菠萝蛋白酶的方法二实验原理菠萝蛋白酶(bromelain)是从菠萝植株中提取的一类蛋白水解酶的总称, 主要存在于菠萝茎和果实中,根据提取部位的不同, 分为茎菠萝蛋白酶和果菠萝蛋白酶。

物理性质：白色至浅棕黄色无定形粉末。

溶于水，水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。

是一种糖蛋白, 一般提取用的酶源是凤梨，但是价格较贵。

而用菠萝皮，不但可以减少资源的浪费，降低费用，又能减少环境的污染。

蛋白质在水溶液中的溶解度由蛋白质周围。

集聚而沉淀（实验书第3页）盐析法提取菠萝蛋白酶，菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白酶，是一种分子量为33000u的蛋白质，硫酸铵是强电解质，有强烈的水化作用，可破坏蛋白质颗粒表面的水化膜，并能中和蛋白质颗粒所带的电荷，使蛋白质在溶液中凝聚而析出但只有达到蛋白质等电点时，其才易于沉淀对于菠萝蛋白酶来说，使用盐析法提取是比较理想的一种方法，也使用得最广泛。

其基本原理是：因不同的蛋白质在高浓度的盐溶液中溶解度不同而能分离。

此法简便、安全白色至浅棕黄色无定形粉末。

溶于水，水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。

属糖蛋白。

三实验材料1试剂70%-80%成熟度的无刺卡因品种菠萝皮20g 高岭土化学纯品(用于作为吸附剂)、95%乙醇无水乙醇碳酸钠饱和溶液硫酸铵粉末14% NaCl溶液0.05%的苯甲酸钠(作为防腐剂)2实验仪器天平，砝码一套100ml量筒一个，50ml烧杯4个，滴管，玻璃棒，离心管2支高速组织捣碎机低速离心机一台四实验方法（1）滤液制备以全班为单位，选取干净的菠萝皮160g，除杂，在清水中漂洗三次，沥干，放入冰箱4℃冷冻备用-------用不锈钢剪刀将菠萝皮剪成碎片，放入高速组织捣碎机中，制备匀浆，打碎后的匀浆用纱布过滤，并150ml 95%乙醇进行第二次浸提、过滤合并两次滤液,滤液添加lml0.05%的苯甲酸钠，实验两人一组，每组取10ml左右于50ml小烧杯中（2）吸附、洗脱滤液置于冰水浴中，不断搅拌，加入汁液量 4%的白陶土搅拌20min，在10℃吸附15~20min ，于冰箱中4℃静置过夜，次日清晨虹吸除去上清液，留下湿陶土，加入冰冷的碳酸钠饱和液调节 PH6.5~7，再加入吸附物重50%的硫酸铵粉末，于冰水浴中振摇 40min进行洗脱，然后压滤，弃去杂物，收集洗脱滤液(3) 待测酶制备将上述洗脱液分装入2支离心管中，每两管天平平衡，3000转离心20min，用吸管吸取下层清液弃去，加入等体积14%NaCl沉淀（盐析），5min后2000r/min 离心10min，弃上清液，用95%乙醇沉淀洗涤一次，2000转离心10min，弃去上清液，用用无水乙醇沉淀洗涤一次，2000转离心10min，弃去上清液，用保鲜膜封口，膜上扎5~10个小孔，放入真空干燥器中干燥。