骨髓造血干细胞
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3）对干细胞的认识首先从HSC开始，因 此关于HSC的研究较NSC要深入得多。
4）HSC呈悬浮状态，再采集和培养等过 程中损伤较小。
（HSC）向神经细胞（NC）分化 及其治疗脊髓损伤的研究
临床价值
可将HSC培养分化出“神经细胞” 的特 性及功能，将这些“神经细胞”注入神 经系统病变局部，从而替代或部分替代 受损神经细胞的功能治疗神经系统疾病。
1）免疫亲和柱分离法
具体方法如下：取收集的单核细胞 置于RPMI 1640培养液中，并加入胎 牛血清过夜，以除去贴壁的细胞， 在形成玫瑰花环的细胞中直接加入 生物素标记的抗-CD34单克隆抗体， 于4℃条件下旋转孵育30分钟，然后 用Hanks液清洗。
3. 造血干细胞的体外研究
造血干细胞向红细胞分化 造血干细胞向粒细胞分化 造血干细胞向单核细胞分化 造血干细胞向淋巴细胞分化 造血干细胞向血小板分化 造血干细胞向NK细胞分化
3. 造血干细胞的体外研究
造血干细胞还可向心肌
细胞分化、肝细胞、神经组 织细胞、血管内皮细胞等非 血液细胞分化
1999年12月美国《SCIENCE》
人类干细胞研究
列入人类十大科学成就
榜首
2003年度
十大科学进展中同样涉及了干 细胞，即鼠的胚胎干细胞在培养 皿中既能发育成精子也能发育成 卵子，有望发展出新一代的试管 婴儿技术。
hematopoietic stem cell
in PubMed Items 1 - 500 of 56 663
神经性疾病
我们与昆医神经科学研究 所的合作研究表明，骨髓的 CD34+细胞移植对恢复全脊髓 损伤有治疗作用，相关论文 正在审稿之中。
（HSC）向神经细胞（NC）分化 及其治疗脊髓损伤的研究
干细胞移植成为治疗神经系统退行性疾 病唯一可能有效的手段。但是，目前NSC 移植还未广泛用于临床实践中，原因主 要有3点：
NSC取材困难，需做开颅手术，对患者创 伤较大，给患者带来较大痛苦。再加上 神经系统退行性疾病患者多为高龄者， 故患者已经受不住神经干细胞移植。
（HSC）向神经细胞（NC）分化 及其治疗脊髓损伤的研究
NSC分离提纯技术尚未成熟，想要得到一 定数量一定纯度的NSC困难较大。
NSC较脆弱，易受各种因素的影响，即使 分离提纯出NSC，也很难断定这些神经干 细胞仍具有正常功能和特性，以及将这 些“神经干细胞”注入神经系统后能否 分化为一定数量的神经细胞。
传统观念认为HSC的生物学特征是： –①具有高度增殖分裂能力； –②能多向分化产生各系血细胞； –③可移植性； –④能自我更新(self-renew) ，持久地 维持正常造血功能。
2.骨髓造血干细胞的研究历史
2.骨髓造血干细胞的研究历史
造血干细胞移植 在近30年里迅猛发展壮大至今
1990年，美国的Thomas因在骨 髓移植中做出重要贡献，从而共 同获得该年度的诺贝尔生理奖和 医学奖，这是临床医学首次获得 此项殊荣。
介绍两种方法：
– ②无菌条件下从髂骨抽取骨髓经输血 滤网过滤后，自然沉淀，去除大部分 红细胞，再以200r/min低速离心，漂 洗2～3次去除血浆，保留有核细胞。 然后加入到RPMI-1640液中，制成密度 为（1～5）×107MNC/ml的细胞悬液。
3.2 培养方法
两种常用的干细胞分离方法: 1、免疫亲和柱分离法 2、免疫磁珠分离法
特性
1.体外培养原理
1. 骨髓造血干细胞的体外培养指 在模拟体内生理环境等特定的 体外条件下，进行干细胞的孵 育培养，使之生存并生长。造 血干细胞体外培养呈悬浮状生 长，无需底物支持。
3.动物取材
在置备细胞悬液之前须将目 的细胞所在组织材料分散成 单细胞。
机械分离和酶学解离是将组 织分散成单细胞最常用的方 法。
HSC源自患者本人，既可以避免移植后免 疫排斥反应，年龄的限制也可延长。
（HSC）向神经细胞（NC）分化 及其治疗脊髓损伤的研究
预期研究成果
1、骨髓干细胞可诱导分化为具有神经细 胞功能的细胞
2、骨髓干细胞诱导分化的神经细胞对脊 髓损伤有治疗作用
第二部分
实验技术
1.问题
①如何取得干细胞 ②如何体外培养干细胞 ③如何保持体外培养干细胞的生物学
3.1细胞悬液的制备
介绍两种方法：
– ①在无菌条ห้องสมุดไป่ตู้下利用穿刺法从髂骨抽 取骨髓，缓慢加入到比重为1.077g/㎝ 3的淋巴细胞分离液中，经密度梯度离 心吸取白细胞层，多次离心后可得到 骨髓单个核细胞（BMNC），重新悬浮 在含有10U/ml肝素的RPMI-1640液中， 制成细胞悬液。
3.1细胞悬液的制备
12/5/2005
干细胞移植进展
第一部分 基础理论 第二部分 实验技术 第三部分 临床移植
1．骨髓造血干细胞的基本概念
骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)是指存在于骨髓 中的一小群具有无限或较长期的 自我更新能力,并具有多向分化
潜能的原始造血细胞
1．骨髓造血干细胞的基本概念
神经性疾病
南佛罗里达医学院和佐治 亚医学院的研究人员在2003 年美国神经年会上报告，将 血液中的干细胞移植到卒中 大鼠的大脑中能大大促进大 脑的功能恢复。
神经性疾病
巴西圣保罗大学的研究小 组从30例脊椎损伤所致瘫痪 患者的血液中抽取干细胞， 再注入患者脊椎动脉血管， 几个月后，12例患者的瘫痪 肢体恢复了知觉。
（HSC）向神经细胞（NC）分化 及其治疗脊髓损伤的研究
与NSC相比HSC具有以下优点： 1）HSC取材容易，无论是骨髓HSC还是外
周血HSC的采集都具有创口小、患者痛苦 小、安全性高的特点。
2）HSC的分离提纯技术已较为成熟，可 较容易的得到一定数量一定纯度的HSC。
（HSC）向神经细胞（NC）分化 及其治疗脊髓损伤的研究
4．造血干细胞的体内特性
骨髓造血干细胞来源于胚胎干细胞 的成血－血管内皮细胞，经由卵黄 囊、胎肝、胸腺、脾、最后到骨髓， 在体内不断增殖发育，产生髓系、 红细胞系和淋巴细胞系，逐步分化 至各系成熟血细胞。
4．造血干细胞的体内特性
骨髓造血干细胞在体内具 有高度的自我更新能力和 多向分化潜能，不断的产 生髓系、红系和淋巴系细 胞。
4）HSC呈悬浮状态，再采集和培养等过 程中损伤较小。
（HSC）向神经细胞（NC）分化 及其治疗脊髓损伤的研究
临床价值
可将HSC培养分化出“神经细胞” 的特 性及功能，将这些“神经细胞”注入神 经系统病变局部，从而替代或部分替代 受损神经细胞的功能治疗神经系统疾病。
1）免疫亲和柱分离法
具体方法如下：取收集的单核细胞 置于RPMI 1640培养液中，并加入胎 牛血清过夜，以除去贴壁的细胞， 在形成玫瑰花环的细胞中直接加入 生物素标记的抗-CD34单克隆抗体， 于4℃条件下旋转孵育30分钟，然后 用Hanks液清洗。
3. 造血干细胞的体外研究
造血干细胞向红细胞分化 造血干细胞向粒细胞分化 造血干细胞向单核细胞分化 造血干细胞向淋巴细胞分化 造血干细胞向血小板分化 造血干细胞向NK细胞分化
3. 造血干细胞的体外研究
造血干细胞还可向心肌
细胞分化、肝细胞、神经组 织细胞、血管内皮细胞等非 血液细胞分化
1999年12月美国《SCIENCE》
人类干细胞研究
列入人类十大科学成就
榜首
2003年度
十大科学进展中同样涉及了干 细胞，即鼠的胚胎干细胞在培养 皿中既能发育成精子也能发育成 卵子，有望发展出新一代的试管 婴儿技术。
hematopoietic stem cell
in PubMed Items 1 - 500 of 56 663
神经性疾病
我们与昆医神经科学研究 所的合作研究表明，骨髓的 CD34+细胞移植对恢复全脊髓 损伤有治疗作用，相关论文 正在审稿之中。
（HSC）向神经细胞（NC）分化 及其治疗脊髓损伤的研究
干细胞移植成为治疗神经系统退行性疾 病唯一可能有效的手段。但是，目前NSC 移植还未广泛用于临床实践中，原因主 要有3点：
NSC取材困难，需做开颅手术，对患者创 伤较大，给患者带来较大痛苦。再加上 神经系统退行性疾病患者多为高龄者， 故患者已经受不住神经干细胞移植。
（HSC）向神经细胞（NC）分化 及其治疗脊髓损伤的研究
NSC分离提纯技术尚未成熟，想要得到一 定数量一定纯度的NSC困难较大。
NSC较脆弱，易受各种因素的影响，即使 分离提纯出NSC，也很难断定这些神经干 细胞仍具有正常功能和特性，以及将这 些“神经干细胞”注入神经系统后能否 分化为一定数量的神经细胞。
传统观念认为HSC的生物学特征是： –①具有高度增殖分裂能力； –②能多向分化产生各系血细胞； –③可移植性； –④能自我更新(self-renew) ，持久地 维持正常造血功能。
2.骨髓造血干细胞的研究历史
2.骨髓造血干细胞的研究历史
造血干细胞移植 在近30年里迅猛发展壮大至今
1990年，美国的Thomas因在骨 髓移植中做出重要贡献，从而共 同获得该年度的诺贝尔生理奖和 医学奖，这是临床医学首次获得 此项殊荣。
介绍两种方法：
– ②无菌条件下从髂骨抽取骨髓经输血 滤网过滤后，自然沉淀，去除大部分 红细胞，再以200r/min低速离心，漂 洗2～3次去除血浆，保留有核细胞。 然后加入到RPMI-1640液中，制成密度 为（1～5）×107MNC/ml的细胞悬液。
3.2 培养方法
两种常用的干细胞分离方法: 1、免疫亲和柱分离法 2、免疫磁珠分离法
特性
1.体外培养原理
1. 骨髓造血干细胞的体外培养指 在模拟体内生理环境等特定的 体外条件下，进行干细胞的孵 育培养，使之生存并生长。造 血干细胞体外培养呈悬浮状生 长，无需底物支持。
3.动物取材
在置备细胞悬液之前须将目 的细胞所在组织材料分散成 单细胞。
机械分离和酶学解离是将组 织分散成单细胞最常用的方 法。
HSC源自患者本人，既可以避免移植后免 疫排斥反应，年龄的限制也可延长。
（HSC）向神经细胞（NC）分化 及其治疗脊髓损伤的研究
预期研究成果
1、骨髓干细胞可诱导分化为具有神经细 胞功能的细胞
2、骨髓干细胞诱导分化的神经细胞对脊 髓损伤有治疗作用
第二部分
实验技术
1.问题
①如何取得干细胞 ②如何体外培养干细胞 ③如何保持体外培养干细胞的生物学
3.1细胞悬液的制备
介绍两种方法：
– ①在无菌条ห้องสมุดไป่ตู้下利用穿刺法从髂骨抽 取骨髓，缓慢加入到比重为1.077g/㎝ 3的淋巴细胞分离液中，经密度梯度离 心吸取白细胞层，多次离心后可得到 骨髓单个核细胞（BMNC），重新悬浮 在含有10U/ml肝素的RPMI-1640液中， 制成细胞悬液。
3.1细胞悬液的制备
12/5/2005
干细胞移植进展
第一部分 基础理论 第二部分 实验技术 第三部分 临床移植
1．骨髓造血干细胞的基本概念
骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)是指存在于骨髓 中的一小群具有无限或较长期的 自我更新能力,并具有多向分化
潜能的原始造血细胞
1．骨髓造血干细胞的基本概念
神经性疾病
南佛罗里达医学院和佐治 亚医学院的研究人员在2003 年美国神经年会上报告，将 血液中的干细胞移植到卒中 大鼠的大脑中能大大促进大 脑的功能恢复。
神经性疾病
巴西圣保罗大学的研究小 组从30例脊椎损伤所致瘫痪 患者的血液中抽取干细胞， 再注入患者脊椎动脉血管， 几个月后，12例患者的瘫痪 肢体恢复了知觉。
（HSC）向神经细胞（NC）分化 及其治疗脊髓损伤的研究
与NSC相比HSC具有以下优点： 1）HSC取材容易，无论是骨髓HSC还是外
周血HSC的采集都具有创口小、患者痛苦 小、安全性高的特点。
2）HSC的分离提纯技术已较为成熟，可 较容易的得到一定数量一定纯度的HSC。
（HSC）向神经细胞（NC）分化 及其治疗脊髓损伤的研究
4．造血干细胞的体内特性
骨髓造血干细胞来源于胚胎干细胞 的成血－血管内皮细胞，经由卵黄 囊、胎肝、胸腺、脾、最后到骨髓， 在体内不断增殖发育，产生髓系、 红细胞系和淋巴细胞系，逐步分化 至各系成熟血细胞。
4．造血干细胞的体内特性
骨髓造血干细胞在体内具 有高度的自我更新能力和 多向分化潜能，不断的产 生髓系、红系和淋巴系细 胞。