抗肿瘤药效
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3. 对模型生长情况应全面了解，尤其是生长 快的模型
4. 为了保持移植瘤的生物学特性和遗传特性， 复苏后移植瘤体内传代应少于 15-20代
15
人类肿瘤裸鼠移植模型建立时的注意点
细胞要求达到最低质量保证标准（支原体、 MAP、人类同功酶、核型和体内致瘤性的检 查）、适应同一培养液以及具有可重复的生长 和药物敏感特性。制备大量的保种细胞，并冷 冻保存，用于药物筛选过程中细胞经20代传代 后的替换。所有细胞在筛选过程中均要进行详 细特性确认，如组织病理、超微结构、免疫细 胞化学，以确定和证明组织和肿瘤类型。
13
人癌移植模型
通常移植临床拟治疗的肿瘤细胞
NCI回顾性研究： 多个人癌移植模型试验的阳性结果可在一定 程度上提示临床有效性 非小细胞肺癌移植模型具有临床相关性
14
人类肿瘤裸鼠移植模型建立时的注意点
1. 移植瘤一般由相应的细胞株移植而建立， 对细胞株和移植瘤的化疗敏感性应予了解。
2. 移植瘤复苏后一般应传2-3代后再用于体内 抗肿瘤试验。
1
抗肿瘤药物分类
(1)细胞毒类药物(cytotoxic agent)：包括干扰核酸和蛋白 质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等
(2) 生物反应调节剂(biological response modifier) (3) 肿瘤耐药逆转剂(resistance reversal agent) (4) 肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer) (5) 肿瘤血管生成抑制剂(tumor angiogenesis inhibitor) (6) 分化诱导剂(differentiation inducing agent) (7)生长因子抑制剂(growth factor inhibitor) (8)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide)
2
抗肿瘤药物药效学
包括体外抗肿瘤试验，体内抗肿瘤试验 评价药物的抗癌活性时，以体内试验结
果为主，同时参考体外试验结果以做出 正确的结论。 I类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步 研究。
3
体外抗肿瘤活性试验
试验目的 对候选化合物进行初步筛选 了解候选化合物的抗瘤谱 为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考，
6
测定细胞生长和存活方法
对系列蛋白质染色剂进行实验，发现磺 酰 罗 丹 明 B （ sulforhodamine B ） (SRB)可替代tetrazolium assay方法， 具有最好的燃料结合强度，信噪比率， 并且和细胞数具有很好的线形关系， SRB是一亮粉色染料，在稀醋酸中，可 结合于TCA固定细胞的碱性氨基酸上。 具有十分稳定的终点 。
10
肿瘤模型
小鼠肿瘤模型 淋巴细胞白血病腹水瘤L1210和P388、白血 病L-615、宫颈癌U14、肝癌H22、Lewis肺 癌、黑色素瘤B16、网织细胞瘤M5076、肠 癌26、肠腺癌38、乳腺癌CD8F1、艾氏腹水 瘤（EAC）、肉瘤-180等，以及各种小鼠肿瘤 的亚型和耐药株等。
11
肿瘤模型
新药的开发过程
am
Drug Nபைடு நூலகம்n-Clinical Discovery Development
Clinical Trials
Market
Phase I Phase II Phase III Launch
CS
FHD
PD
Submission
Toxicology/ADME
$600 millions 6 to 12 Years
16
肿瘤模型产生免疫原性的表现
近交系动物的遗传特性发生漂移，对肿瘤模型 产生免疫性。
产生免疫性的表现有： 1.在传代和对照组中出现肿瘤消退，假如肿瘤
出现溃疡、消退和再生长，可能是感染造成， 如果是溃疡、消退，并且不再生长，通常是由 于免疫原性引起。如果用60mg的同种肿瘤攻 击动物，结果没有生长，基本可以肯定产生了 免疫性。
7
评价标准
以同一样品不同浓度对肿瘤细胞抑制率 作图可得到剂量效应曲线
采用Logit法计算半数有效浓度(IC50值 或EC50值)。
体外试验至少重复一次。
8
体内抗肿瘤试验
体内抗肿瘤试验必须选用三种以上肿瘤模型 动物肿瘤移植模型 人类肿瘤裸鼠移植瘤模型 重复试验 鼓励使用人类肿瘤裸鼠移植瘤模型和多种类的移
人类肿瘤裸鼠移植模型 应选用体外试验敏感细胞株进行体内抗
人类肿瘤裸鼠移植试验。
12
人癌移植模型
优点
可预测细胞毒类 化合物的活性
有助于筛选化合 物，为临床用药 程序和联合用药 方案提供参考
可用于研究获得 性药物抗性
缺点
部分模型很难构建， 皮下抑制肿瘤很少转 移，生存时间不适合 作为试验终点
植瘤模型、原位接种模型和中空纤维测定 (hollow-fiber assay)等 方法。
9
动物
动物要求健康，符合等级动物要求，有 实验动物合格证。
雌雄均可，但同一批实验中动物性别必 须相同。
小鼠鼠龄为5-6周，体重为18-22克。 评价同一物质的活性时，不同批次的实
验必须采用同一品系的小鼠。
如剂量范围、肿瘤类别等
4
试验方法
选用10-15株人癌细胞株 根据试验目的选择相应细胞系及适量的细胞接种浓度，
按常规细胞培养法进行培养 推荐使用四氮唑盐MTT还原法、XTT 还原法、磺酰罗
丹明B(SRB)染色法、或51Cr释放试验、集落形成法等 测定药物的抗癌作用。 药物与细胞共培养时间一般为48-72 小时，贴壁细胞 需先贴壁24 小时后再给药。 试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照用一定浓度的 标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照。
5
测定细胞生长和存活方法
MTT 法 和 XTT 法 是 代 谢 测 定 法 ， 没 有 颜 色 的 tetrazolium salt (MTT 和XTT)被细胞还原，产生具 有颜色的与活细胞数成比例的formazan， 比色测定。
为了简化MTT solubilization步骤，发展了XTT tetrazolium测定方法，MTT还原产生不溶性 formazan ,比色测定前溶解于DMSO，XTT试剂可被 活细胞直接代谢成水溶性formazan，不需进一步处理 培养细胞，便可以立即读取光密度。方便简单，其缺 点是可产生相对比较高的背景数据，同时也具有MTT 的不稳定终点特性。
4. 为了保持移植瘤的生物学特性和遗传特性， 复苏后移植瘤体内传代应少于 15-20代
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人类肿瘤裸鼠移植模型建立时的注意点
细胞要求达到最低质量保证标准（支原体、 MAP、人类同功酶、核型和体内致瘤性的检 查）、适应同一培养液以及具有可重复的生长 和药物敏感特性。制备大量的保种细胞，并冷 冻保存，用于药物筛选过程中细胞经20代传代 后的替换。所有细胞在筛选过程中均要进行详 细特性确认，如组织病理、超微结构、免疫细 胞化学，以确定和证明组织和肿瘤类型。
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人癌移植模型
通常移植临床拟治疗的肿瘤细胞
NCI回顾性研究： 多个人癌移植模型试验的阳性结果可在一定 程度上提示临床有效性 非小细胞肺癌移植模型具有临床相关性
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人类肿瘤裸鼠移植模型建立时的注意点
1. 移植瘤一般由相应的细胞株移植而建立， 对细胞株和移植瘤的化疗敏感性应予了解。
2. 移植瘤复苏后一般应传2-3代后再用于体内 抗肿瘤试验。
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抗肿瘤药物分类
(1)细胞毒类药物(cytotoxic agent)：包括干扰核酸和蛋白 质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等
(2) 生物反应调节剂(biological response modifier) (3) 肿瘤耐药逆转剂(resistance reversal agent) (4) 肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer) (5) 肿瘤血管生成抑制剂(tumor angiogenesis inhibitor) (6) 分化诱导剂(differentiation inducing agent) (7)生长因子抑制剂(growth factor inhibitor) (8)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide)
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抗肿瘤药物药效学
包括体外抗肿瘤试验，体内抗肿瘤试验 评价药物的抗癌活性时，以体内试验结
果为主，同时参考体外试验结果以做出 正确的结论。 I类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步 研究。
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体外抗肿瘤活性试验
试验目的 对候选化合物进行初步筛选 了解候选化合物的抗瘤谱 为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考，
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测定细胞生长和存活方法
对系列蛋白质染色剂进行实验，发现磺 酰 罗 丹 明 B （ sulforhodamine B ） (SRB)可替代tetrazolium assay方法， 具有最好的燃料结合强度，信噪比率， 并且和细胞数具有很好的线形关系， SRB是一亮粉色染料，在稀醋酸中，可 结合于TCA固定细胞的碱性氨基酸上。 具有十分稳定的终点 。
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肿瘤模型
小鼠肿瘤模型 淋巴细胞白血病腹水瘤L1210和P388、白血 病L-615、宫颈癌U14、肝癌H22、Lewis肺 癌、黑色素瘤B16、网织细胞瘤M5076、肠 癌26、肠腺癌38、乳腺癌CD8F1、艾氏腹水 瘤（EAC）、肉瘤-180等，以及各种小鼠肿瘤 的亚型和耐药株等。
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肿瘤模型
新药的开发过程
am
Drug Nபைடு நூலகம்n-Clinical Discovery Development
Clinical Trials
Market
Phase I Phase II Phase III Launch
CS
FHD
PD
Submission
Toxicology/ADME
$600 millions 6 to 12 Years
16
肿瘤模型产生免疫原性的表现
近交系动物的遗传特性发生漂移，对肿瘤模型 产生免疫性。
产生免疫性的表现有： 1.在传代和对照组中出现肿瘤消退，假如肿瘤
出现溃疡、消退和再生长，可能是感染造成， 如果是溃疡、消退，并且不再生长，通常是由 于免疫原性引起。如果用60mg的同种肿瘤攻 击动物，结果没有生长，基本可以肯定产生了 免疫性。
7
评价标准
以同一样品不同浓度对肿瘤细胞抑制率 作图可得到剂量效应曲线
采用Logit法计算半数有效浓度(IC50值 或EC50值)。
体外试验至少重复一次。
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体内抗肿瘤试验
体内抗肿瘤试验必须选用三种以上肿瘤模型 动物肿瘤移植模型 人类肿瘤裸鼠移植瘤模型 重复试验 鼓励使用人类肿瘤裸鼠移植瘤模型和多种类的移
人类肿瘤裸鼠移植模型 应选用体外试验敏感细胞株进行体内抗
人类肿瘤裸鼠移植试验。
12
人癌移植模型
优点
可预测细胞毒类 化合物的活性
有助于筛选化合 物，为临床用药 程序和联合用药 方案提供参考
可用于研究获得 性药物抗性
缺点
部分模型很难构建， 皮下抑制肿瘤很少转 移，生存时间不适合 作为试验终点
植瘤模型、原位接种模型和中空纤维测定 (hollow-fiber assay)等 方法。
9
动物
动物要求健康，符合等级动物要求，有 实验动物合格证。
雌雄均可，但同一批实验中动物性别必 须相同。
小鼠鼠龄为5-6周，体重为18-22克。 评价同一物质的活性时，不同批次的实
验必须采用同一品系的小鼠。
如剂量范围、肿瘤类别等
4
试验方法
选用10-15株人癌细胞株 根据试验目的选择相应细胞系及适量的细胞接种浓度，
按常规细胞培养法进行培养 推荐使用四氮唑盐MTT还原法、XTT 还原法、磺酰罗
丹明B(SRB)染色法、或51Cr释放试验、集落形成法等 测定药物的抗癌作用。 药物与细胞共培养时间一般为48-72 小时，贴壁细胞 需先贴壁24 小时后再给药。 试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照用一定浓度的 标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照。
5
测定细胞生长和存活方法
MTT 法 和 XTT 法 是 代 谢 测 定 法 ， 没 有 颜 色 的 tetrazolium salt (MTT 和XTT)被细胞还原，产生具 有颜色的与活细胞数成比例的formazan， 比色测定。
为了简化MTT solubilization步骤，发展了XTT tetrazolium测定方法，MTT还原产生不溶性 formazan ,比色测定前溶解于DMSO，XTT试剂可被 活细胞直接代谢成水溶性formazan，不需进一步处理 培养细胞，便可以立即读取光密度。方便简单，其缺 点是可产生相对比较高的背景数据，同时也具有MTT 的不稳定终点特性。