(优选)实验四地中海贫血与红细胞渗透脆性试验
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风险
• 每850个胎儿就有1个重型地贫患儿
定义
• 地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障 碍性贫血）： 由于遗传性珠蛋白基因缺陷（突变、缺失 等）引起的一种或多种珠蛋白肽链生物合 成减少或完全不能合成，导致珠蛋白肽链 间的正常平衡不能维持，同时成人型Hb （HbA：α2β2）合成降低的一种遗传性血 红蛋白病。
PCR-ASO
诊断(Diagnosis)
• 临床特点＋实验室检查＋父母调查阳性＋ （基因分析）
地中海贫血初筛检查
• MCV < 80fl 和/ 或MCH <27pg ,则高度怀 疑为地贫;
• 红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test ,ROFT ;< 0.60 ): 即可 怀疑为地贫;
【样品要求】 新鲜抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD）， 置2℃~8℃保存。已发生溶血或有血凝块的 标本为不合格样品。标本采集后，测试应在 三日内完成。
【实验操作】
1、取试管一只，加入A试验液1ml，放37℃，预热1-2分钟。 2、加入待测抗凝全血10μl，立刻混匀，继续放在37℃保温5分 钟。
• HbA2 < 2. 5 % ,则高度怀疑为α地贫基因携 带者;ξ阳性为标准α地贫.
• HbA2 >3. 5 % ,则为β地贫基因携带者
地中海贫血确诊试验
• 地贫诊断基因芯片(Thalachip); • 地贫基因诊断条膜(反向点杂交)/一管法多
重PCR • ASO寡核苷酸探针点杂交 • DNA测序
携带率(%) β地贫
6.4 2.5 2.7 7.3
5.1 2.0
合计
24.0 11.0 15.4 17.1 9.3 7.2
高发区人群遗传负荷评估
广 西
• 每4人就有1个地贫缺陷基因携带者 • 每55个家庭就有1个有重型地贫出生风险 • 每230个胎儿就有1个重型地贫患儿
广 东
• 每10人就有1个地贫缺陷基因携带者 • 每250个家庭就有1个有重型地贫出生
3.产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出 生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。
4.绒毛活检和羊膜腔穿刺均可行地贫产前诊 断，但推荐羊膜腔穿刺。
5.无创性产前诊断是未来发展的方向。
羊膜腔穿刺术
羊膜腔穿刺术
实验室检查
--靶型RBC
地贫患者
红细胞脆性实验
正常人
Erythrocyte fragility test
鉴别诊断(Differential diagnosis)
• 缺铁性贫血 • 遗传性球形红细胞增多症 • 传染性肝炎或肝硬化
实验：红细胞渗透脆性检验 (试剂盒一管法)
【检验原理】 贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。 测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率， 可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起 的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）
6、将混匀后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波长比色， 读取光密度D2。 7、按下列公式计算出溶血率百分比。
溶血 ％ = D1
×100 ％
D2 X 1.25
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等
重度β-地中海贫血
Байду номын сангаас
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
结论
1.广西人群地贫基因携带率很高。一方为基 因携带者，推荐配偶行基因检测。
2.父母双方同类型地贫者需行遗传咨询和产 前诊断。
【主要组成成分】 组成： 由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）； SG-B母液（终止红细胞溶血液）； SG-C母液（红细胞溶血液）组成； 成分： SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二 钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4） 制成； SG-B母液采用氯化钠制成； SG-C母液采用皂素（saponin）制成。
• 其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋 白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少 或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改 变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多 表现为慢性进行性溶血性贫血。
地中海贫血的病理生理
α-地中海贫血
重型α地贫 （HbBart’s胎儿水肿综合征）
4个α基因都缺失了(--/--) ， 在孕后期或出生后即死亡。
血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresis
肽链分析Peptide chain analyses
123 4
1 2 34
βchain disappear (β0-thal major)
αchain disappear
(HbBart’s hydrop fetalis)
单管多重PCR
3、5分钟后，加入B试验液1ml。混匀，3000转/分钟，离心5 分钟。
4、将上清液轻轻倒入1.0cm × 1.0cm的比色杯中（切勿搅动 试管底的红细胞），于530nm波长读取光密度D1（以纯化水 作空白对照）。（勿倒掉比色杯中的溶液）
5、向试管中加入C试验液0.5ml，混匀，待血液全部溶血（透 明红色）后，将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀。
（优选）实验四地中海贫血与 红细胞渗透脆性试验
地贫的发病率、地域分布及危害
• 地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见； • 广西发病率为20%； • 重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担
和难以估量的精神负担；
中国南方人群地贫基因携带率
地区
广西 广东 海南 云南 贵州 重庆
地贫
17.6 8.5 12.7 9.8 4.2 5.2
• 每850个胎儿就有1个重型地贫患儿
定义
• 地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障 碍性贫血）： 由于遗传性珠蛋白基因缺陷（突变、缺失 等）引起的一种或多种珠蛋白肽链生物合 成减少或完全不能合成，导致珠蛋白肽链 间的正常平衡不能维持，同时成人型Hb （HbA：α2β2）合成降低的一种遗传性血 红蛋白病。
PCR-ASO
诊断(Diagnosis)
• 临床特点＋实验室检查＋父母调查阳性＋ （基因分析）
地中海贫血初筛检查
• MCV < 80fl 和/ 或MCH <27pg ,则高度怀 疑为地贫;
• 红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test ,ROFT ;< 0.60 ): 即可 怀疑为地贫;
【样品要求】 新鲜抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD）， 置2℃~8℃保存。已发生溶血或有血凝块的 标本为不合格样品。标本采集后，测试应在 三日内完成。
【实验操作】
1、取试管一只，加入A试验液1ml，放37℃，预热1-2分钟。 2、加入待测抗凝全血10μl，立刻混匀，继续放在37℃保温5分 钟。
• HbA2 < 2. 5 % ,则高度怀疑为α地贫基因携 带者;ξ阳性为标准α地贫.
• HbA2 >3. 5 % ,则为β地贫基因携带者
地中海贫血确诊试验
• 地贫诊断基因芯片(Thalachip); • 地贫基因诊断条膜(反向点杂交)/一管法多
重PCR • ASO寡核苷酸探针点杂交 • DNA测序
携带率(%) β地贫
6.4 2.5 2.7 7.3
5.1 2.0
合计
24.0 11.0 15.4 17.1 9.3 7.2
高发区人群遗传负荷评估
广 西
• 每4人就有1个地贫缺陷基因携带者 • 每55个家庭就有1个有重型地贫出生风险 • 每230个胎儿就有1个重型地贫患儿
广 东
• 每10人就有1个地贫缺陷基因携带者 • 每250个家庭就有1个有重型地贫出生
3.产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出 生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。
4.绒毛活检和羊膜腔穿刺均可行地贫产前诊 断，但推荐羊膜腔穿刺。
5.无创性产前诊断是未来发展的方向。
羊膜腔穿刺术
羊膜腔穿刺术
实验室检查
--靶型RBC
地贫患者
红细胞脆性实验
正常人
Erythrocyte fragility test
鉴别诊断(Differential diagnosis)
• 缺铁性贫血 • 遗传性球形红细胞增多症 • 传染性肝炎或肝硬化
实验：红细胞渗透脆性检验 (试剂盒一管法)
【检验原理】 贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。 测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率， 可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起 的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）
6、将混匀后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波长比色， 读取光密度D2。 7、按下列公式计算出溶血率百分比。
溶血 ％ = D1
×100 ％
D2 X 1.25
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等
重度β-地中海贫血
Байду номын сангаас
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
结论
1.广西人群地贫基因携带率很高。一方为基 因携带者，推荐配偶行基因检测。
2.父母双方同类型地贫者需行遗传咨询和产 前诊断。
【主要组成成分】 组成： 由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）； SG-B母液（终止红细胞溶血液）； SG-C母液（红细胞溶血液）组成； 成分： SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二 钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4） 制成； SG-B母液采用氯化钠制成； SG-C母液采用皂素（saponin）制成。
• 其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋 白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少 或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改 变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多 表现为慢性进行性溶血性贫血。
地中海贫血的病理生理
α-地中海贫血
重型α地贫 （HbBart’s胎儿水肿综合征）
4个α基因都缺失了(--/--) ， 在孕后期或出生后即死亡。
血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresis
肽链分析Peptide chain analyses
123 4
1 2 34
βchain disappear (β0-thal major)
αchain disappear
(HbBart’s hydrop fetalis)
单管多重PCR
3、5分钟后，加入B试验液1ml。混匀，3000转/分钟，离心5 分钟。
4、将上清液轻轻倒入1.0cm × 1.0cm的比色杯中（切勿搅动 试管底的红细胞），于530nm波长读取光密度D1（以纯化水 作空白对照）。（勿倒掉比色杯中的溶液）
5、向试管中加入C试验液0.5ml，混匀，待血液全部溶血（透 明红色）后，将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀。
（优选）实验四地中海贫血与 红细胞渗透脆性试验
地贫的发病率、地域分布及危害
• 地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见； • 广西发病率为20%； • 重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担
和难以估量的精神负担；
中国南方人群地贫基因携带率
地区
广西 广东 海南 云南 贵州 重庆
地贫
17.6 8.5 12.7 9.8 4.2 5.2