可溶性总糖的测定

采用蒽酮比色法测定可溶性总糖

李合生，植物生理生化实验原理和技术，北京：高等教育出版社，2000

材料：杨树粉碎叶片

仪器：1. 分光光度计、2. 电子天平、3. 恒温水浴锅、4. 25ml三角烧瓶、5. 烧杯、6. 25ml 容量瓶、7. 20ml试管、8. 移液管（5ml一支，1ml二支）、9. 漏斗、10. 定性滤纸

试剂：

蒽酮试剂：

称取1g蒽酮结晶粉末，溶解于50ml乙酸乙酯，贮于棕色瓶中（黑暗中可保存数周，如有结晶可微热溶解）。

浓硫酸（比重1.84）

实验步骤

1.标准曲线的制作

1%蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，在电子天平上精确称取1.000g，溶于少量蒸馏水中，转入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。

100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。

取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表1－1加入标准蔗糖液和水；

试剂管号

0 1、2 3、4 5、6 7、8 9、10

100ug/L蔗糖液ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0

水ml 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0

蔗糖量ug 0 20 40 60 80 100

然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作对照，在630nm波长下测其吸光度，以吸光度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

2.可溶性糖的提取

取已粉碎杨树叶片，称取0.10～0.30g放入20ml刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。

3.显色测定

吸取0.5ml样品液于20ml刻度试管中(3次重复)，加蒸馏水1.5ml，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入蒽酮乙酸乙酯试剂、浓硫酸溶液，显色并测定吸光度。由标准线性方程求出糖的量（ug），按式（1－1）计算测试样品中的糖含量。

从回归方程求得糖的量×提取液量×稀释倍数

吸取样品液的体积

可溶性糖含量=——————————————————————×100%

样品干重×106

注意事项：

切勿将未溶残渣滤入提取液，否则将影响实验准确度，增大误差。