过氧化氢酶测定方法

过氧化氢酶测定(容量法)

过氧化氢酶也叫接触酶，能促进过氧化氢对各种化合物的氧化。几乎在所有的生物体内部有过氧化氢酶，在某些细菌里，其数量约为细胞干重的1％。土壤的过氧化氢酶活性，与土壤呼吸强度和土壤微生物活动相关，在一定程度上反映了土壤微生物学过程的强度。

原理

过氧化氢酶的测定有测压法和滴定法。测压法是测定过氧化氢分解时析出的氧量(反应过氧化氢酶

式为：H2O2+H2O O2+H2O，方法简单，但准确性较差。后者则是定量滴定酶促反应后剩余的过氧化氢量，反应式为

2KMnO4+5H2O2+3H2SO42MnSO4+K2SO4+8H2O+5O2，此法测定结果较好。试剂

(1) 0.3% H2O2：按1：100将30％的H2O2用水稀释。

(2) 3N H2SO4（也就是1.5mol/l H2SO4）：以配1000ml为例，需要的浓硫酸的体积为1.5*98.08/1.83=80.39ml，可以取80ml。

KMnO4的分子量=158.026,当量=31.605.高锰酸钾水溶液受到水中还原物和杂质以及受日光直射等影响能分解析出棕色的含水的二氧化锰沉淀，而有浓度的改变。因此在配制其标准溶液时必须使用棕色瓶盛装，以防日光直射作用.配制后并应放置一段时间，待与水中还原物完全作用后，滤去沉淀，然后进行标定，才能得到基本稳定不易变化的标准溶液。

(3) 0.1N KMnO4溶液：称取化学纯高锰酸钾3.161克，溶于l升无CO2蒸馏水（沸水）中，溶解后,在暗处放置一周, 然后用虹吸管将上部澄清溶液移于棕色瓶中(或用玻璃棉滤过)保存，以备标定.

注：C(1/5 KMnO4)=0.1mol/l表示的就是0.1N KMnO4溶液。

0.1N KMnO4溶液标定（GB/T601-2002）

称取0.2g（准至0.0001g）于105~110℃烘至恒重的基准草酸钠。溶于100mL（8+92）硫酸溶液中，用配制好的高锰酸钾溶液[c（1/5 KMnO4）=0.1mol/l]滴定，近终点时加热至65℃，继续滴定至溶液呈粉红色保持30s，同时作空白试验（不加草酸钠，其他一样）。

高锰酸钾溶液标准浓度按下式计算

c（1/5KMnO4）=m*1000/[（V1-V2）*M ]

式中c（1/5KMnO4）—高锰酸钾标准液之物质的量浓度，mol/L；

m——草酸钠之质量，g；

V1——滴定草酸钠消耗的高锰酸钾溶液之用量，mL；

V2——空白试验用高锰酸钾溶液之用量，mL；

M——草酸钠的摩尔质量的数值,单位为（g/mol），[ M(1/2Na2C2O4)=66.999 ]

或者c（1/5KMnO4）=m/（V1-V2）*0.06700

0.06700——与1.00mL高锰酸钾溶液c（1/5KMnO4）=0.1mol/l相当的以克表示的

草酸钠的质量。

操作步骤：

（1）取2.0 g土，置于100mL（或150ml）三角瓶中，并注入40mL蒸馏水和5mL 0.3％H2O2溶液。（B）

（2）同时设置对照，即三角瓶中注入40mL蒸馏水和5mL 0.3％过氧化氢溶液，而不加土样。（A）

（3）将三角瓶放在往返式振荡机上120r/min振荡20min后，加入5mL3N硫酸，以稳定未分解的过氧化氢。再将瓶中悬液用慢速滤纸过滤。吸取25mL滤液，用0.1N KMnO4滴定至淡粉红色终点。

结果计算

用于滴定土壤滤液所消耗的高锰酸钾量（毫升数）为B，用于滴定25mL原始的过氧化氢混合液所消耗的高锰酸钾量（毫升数）为A。以20min后1g土壤消耗的0.1N KMnO4溶液的毫升数表示（以20min后1g土壤中的过氧化氢的毫克数表示？）。

土壤过氧化氢酶活性=（A-B）×T/dwt

式中，T——为高锰酸钾滴定度的校正值。

dwt——烘干土质量（g）

滴定度：分析化学专属名词单位：g/ml、mg/ml

表示符号：

Ts：每毫升标准溶液中所含滴定剂（溶质）的克数。

例如：T HCl＝0.001012g/ml的HCl溶液，表示每毫升此溶液含有0.001012g纯

HCl。

Ts/x：指每毫升标准溶液相当于的待测组分的质量。