肌苷酸产业及工艺

（二）二步法（肌苷酸生产主要方法）
发酵法 原因： •IMP对细胞膜的透性很差。 •微生物中普遍存在使IMP脱磷酸化的酶类。 肌苷 磷酸化 肌苷酸
1.肌苷生产菌的选育
常用：Biblioteka Baidu草杆菌（Bacillus subtilis ）的腺嘌呤 缺陷型。
原因：
该菌磷酸酯酶活性强，有利于将IMP脱磷酸化 形成肌苷，分泌至胞外，而产氨短杆菌的磷酸酯酶
除菌体
（过滤、离心） 加乙醇沉淀 精制（结晶）
除对硝基酚
柱层析 活性炭吸附 肌苷酸
粗制品
肌苷酸产业及生产工艺
李查杭 生物工程101班
一、国内外生产水平
截至今日，日本的肌苷酸生产达 到最高的水平，最高达可达到到20— 27g/L，而在我国的生产水平达到 16g/L。
二、成本、应用分析
成本分析
肌苷酸过去一直靠进口，其价格高达每 千克200元。从70年代开始，我国成功地利 用细菌（如谷氨酸棒状杆菌265和产氨短杆 菌926）发酵法生产肌苷酸和乌苷酸，成本 仅为每千克2～3元。而现在肌苷酸二钠的 价格在每千克260元 。
因此，选择可以产生核苷酸的产氨短杆菌
（Brevibacterium ammoniagene）为出发菌株，
诱变为腺嘌呤缺陷型突变株，再诱变为鸟嘌呤
缺陷型突变株。
2.培养条件
（1）因所用菌株为腺嘌呤缺陷型，所以添加适量腺嘌
呤（加0.5%酵母膏或酵母水解液）。
（2）Mn2+亚适量 工业原料和工业用水含较多的Mn2+，难于控制Mn2+ 亚适量,有两条途径： a.筛选对Mn2+不敏感的突变株 b.加抗生素或表面活性剂以解除过量Mn2+的影响。 （3）添加较高浓度的磷盐。
（3）肌苷的提取
先过阳离子交换柱，再过活性炭柱（吸附），结晶。
3.肌苷的磷酸化
（1）酶法：
酶：核苷磷酸化酶 磷酸的供体：对硝基苯磷酸 难点：除5‘－磷酸化产物外，还有3’- 、 2‘-位 异构体，收率85％。
（2）化学法：用不同的磷酸化试剂（磷酰氯、
磷酸、 五氧化二磷等）。
4.肌苷酸的提取
离子交换法
活性较弱。
2.培养条件
（1）培养基：
碳源：淀粉水解糖或糖蜜
氮源：要充分（因肌苷含氮量高，20.9％） 无机盐：可溶性磷盐有抑制作用（胞外磷酸化） 生长因子：加适量含腺嘌呤的物质，如酵母膏。
腺嘌呤的最适浓度： 不影响菌体生长 使肌苷大量积累
（2）发酵条件
通气搅拌：供氧充足，促进肌苷生成，并可减少CO2 对肌苷生成的抑制。
二、成本、应用分析
（一）调味 是食品增鲜剂，其二钠盐与谷氨酸钠（味精） 混合使用，其呈味作用比单用味精高数倍，有“ 强力味精”之称。 （二）医疗 适用于各种原因引起的白细胞减少症、血小板 减少症、各种心脏疾患、急性及慢性肝炎、肝硬 化等，此外尚可治疗中心视网膜炎、视神经萎缩 等。
三、国内主要生产企业
山东双凤股份有限公司 江阴市蔚尔生物科技有限公司 南通秋之友生物科技有限公司 南京同凯兆业生物技术有限责任公司 广东江门甘蔗化工股份有限责任公司 武汉生科生物股份有限公司等

四、肌苷酸的生产 （一）一步法
1.肌苷酸生产菌选育 （1）解除微生物自身的反馈调节 a.解除AMP、GMP对PRPP（ 5-磷酸核糖-1-焦磷 酸）转酰胺酶的反馈抑制。 b.切断5‘-IMP继续代谢生成GMP和AMP的途径。