临床微生物检验标本的采集、运送及接种要点

临床常见微生物学检验标本通常有血液、脑 脊液、尿液、伤口的脓液、胸水、腹水、粪 便、痰液及泌尿生殖系统的分泌物等，下面
分别介绍各种标本的采集方法及运送。
第二节
血液
一、 标本采集
1.皮肤消毒程序 严格执行以下三步法:
(1) 70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30秒以上。
(2) 1%～2%碘酊作用60秒或10 %碘伏60～90秒， 从穿
血培养。
二、标本运送
采集后标本应置于无菌密封容器立即送检或在15min 内送至实验室并且保温（禁止放冰箱，因脑膜炎双
球菌遇冷死亡）。某些细菌具有自溶酶，放置时间
过长易自溶死亡，实验室收到标本后应立即接种。
第四节
脓液、穿刺液和引流液
一、标本采集
脓液：用无菌盐水或70%酒精拭去表面渗出物，尽可能
一、标本采集
采集前清洁、消毒尿道口及外阴，尿道分泌物可将无菌
棉拭子伸入尿道3～4cm捻转拭子采集。
阴道分泌物采集时可用无菌棉拭子自阴道深部或阴道穹 隆后部，宫颈2～3cm处，转动并停留10～30s取分泌物。 淋球菌培养需保温及时送检，衣原体、支原体等培养 无法及时送检时应4℃保存。
第九节 厌氧培养标本的采集
抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样（接近肉芽
组织的脓液）。
穿刺液及引流液：由临床医生无菌采集胸腔、腹腔积液、 关节液及心包积液等，臵无菌试管中送检。。 厌氧菌感染的脓液常有腐臭应予注意。特别要注意避免 正常菌群所污染以及由采集至接种前尽量避免接触空气。
第五节
痰液
一、标本采集
自然咳痰法 以晨痰为佳，尽可能在用抗菌药物之前采集标 本。用力咳出呼吸道深部的痰，将痰液直接吐入
采血后应该立即送检,如不能立即送检，可室温保存，切勿冷藏。
第三节
脑脊液
一、标本采集
以70%的酒精或2%碘酊消毒背部下方，并麻醉之，然后以
一特制通管针，轻轻的由第三与第四腰椎间的中线部位 穿刺入脊髓蜘蛛膜，采集约3-5ml脑脊液于3支无菌试管中， 每支试管至少1-2ml,第一支做细菌培养，整个过程以最严 格的无菌操作技术进行。做脑脊液培养时，建议同时做
第七节
尿液
一、标本采集
力争在使用抗生素之前，注意避免消毒剂污染标本。 清洁中段尿：最好留取早晨清洁中段尿标本；嘱咐患 者睡前少饮水，清晨起床后按尿标本采集消毒程序消 毒后，开始排尿，将前段尿排去，留取中段尿。 耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上经皮 肤消毒穿入膀胱吸取尿液。 直接导尿：按尿标本采集消毒程序消毒后，用导尿管 直接经尿道插入膀胱，获取尿液。 留臵导尿管收集尿液：利用留臵管采集标本时，应先 消毒导尿管外部，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿 管吸取尿液。注意不能从尿液收集袋中采集尿液。
刺点向外画圈消毒,至消毒区域直径达3cm以上。
(3) 70%酒精脱碘：对碘过敏的患者，用70%酒精消 毒60秒，待酒精挥发干燥后采血。
2.采血部位
通常采血部位为肘静脉。 疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。 对疑为细菌性骨髓炎或伤寒患者，在病灶或者髂前（后） 上棘处严格消毒后抽取骨髓1ml作增菌培养。
3. 静脉穿刺和培养瓶接种程序
(1) 在穿刺前或穿刺期间，为防止静脉滑动，可戴乳胶手 套固定静脉，不可接触穿刺点。 (2) 用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头直接注入血培养 瓶，或严格按厂商推荐的方法采血。 (3) 血标本接种到培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。 立即送检，切勿冷藏。
4.采血量
自动化仪器要求成人采血量是8～10 ml/瓶，儿童1～5 ml/瓶。
临床微生物检验标本 的采集、运送及接种要点
泰兴市人民医院检验科微生物室
刘鸿丽
第一节 标本的采集和处理原则
一、标本采集的一般原则
1.早期采集
2.无菌采集
3.根据目的菌的特性用不同的方法采集
4.采集适量标本
5.安全采集
二、标本的处理
一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病 奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检 厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送， 有时可直接用抽取标本的注射器运送。
2%碘酒消毒，以防正常菌群的污染。
采取标本时应尽量避免接触空气，多使用针
筒抽取，减少标本与空气接触的机会。
细菌接种技术
平板接种（分区划线法） 斜面接种法 穿刺培养法 液体培养基接种法
分区划线法
用于标本的分离培养，通常采用四区划线法(尿液、留臵管除外) 1、操作者坐在微型加热器前，右手持接种环将圈环至少烧红两次， 再接触标本或菌种。 2、左手正持平板（盖上底下），轻轻将平板盖打开少许，将接种 环涂于平板的1/4区域，将接种环烧红，待冷却后接触第一区边缘45次，再涂划平板的另外1/4区域（第二划线区），以同样的方式进 行第三区及第四区的涂划。也可反持平板（底上盖下）的底部迅速 涂划各区。 3、尿液标本定量加入后，垂直划线即可。 4、导管标本直接放到血平板上用接种环滚动4次即可。 5、涂划完毕后，平板合盖，标明标本的编号、标本种类、病人姓 名和送检时间，再倒臵(盖下底上)于CO2培养箱(粪便除外)培养。 6、接种完毕后，接种环必须再通过火焰烧红一次，作为灭菌。
其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室。若不能
及时送检，标本应臵于一定环境中保存，如支气管洗液、 心包液、痰、尿等标本应保存在4℃环境中，血标本需室 温保存或臵35℃-37℃孵箱中,脑脊液等则要在25℃保存。
患者标本中可能含有大量致病菌，不管标本运送距离远近，
都必须注意安全防护。标本切勿污染容器的瓶口和外壁， 容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出。
刺激咳痰时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。
幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。
注意：对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺 鼠疫等）患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。
三、标本运送
常温2h内送检实验室。因时间延长可能引起革兰 氏阴性菌的过度繁殖，嗜血杆菌和肺炎链球菌的
如排便困难或婴幼儿患者，可用直肠拭子法采集
标本。
粪便标本送检 对住院的腹泻成人患者，应采集住院3日内粪 便标本送检，标本采集后应尽快送检，有条件的 提倡使用运送培养基。
消化道溃疡、幽门螺杆菌标本可取胃窦和胃
体等部位各一块胃黏膜活检标本，臵入无菌
生理盐水中立即送检，或将标本放于运送培
养基，于4℃保存，24h内送检。
采集容器的要求：洁净、无菌、加盖、封闭、防
渗漏、广口、容积应> 50 ml、盒盖易于开启，不
含防腐剂和抑菌剂。
标本采集后应及时送检、及时接种，室温下保存
时间不得超过2小时（夏季保存时间应适当缩短或
冷藏保存），4℃冷藏保存时间不得超过8小时。
但应注意淋病奈瑟菌培养时标本不能冷藏保存。
第八节 生殖道标本
接种与分离的注意事项
1、平皿放臵温箱培养时，应底向上，以免培 养基中的凝结水落入培养的菌中，影响分离培 养结果。 2、分区划线分离细菌时，所划直线应尽可能 直并且要密集、均匀，且不可重划线。 3、不要将培养基划破，也不要将接种环接触 管壁或管口。 4、取试管塞时要缓慢拔出，不宜用力过猛。 5、半固体培养基接种时，接种针不可穿刺至 管底。
穿刺培养法
此法用于观察动力及某些生化反应。 1、以接种针挑取细菌培养物，插入半固体培 养基的中央，穿刺至培养基底部，然后沿穿刺 线退出接种针。 2、其他灭菌操作与斜面接种类似。
液体培养基接种法
1、用灭菌接种环挑取菌落或标本。 2、在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细 菌混匀在液体培养基中。 3、其他灭菌操作与斜面接种类似。
死亡。
注： 鳞状上皮细胞细胞<10个/低倍视野、白细胞
>25/低倍视野为合格的痰标本特别是有细菌被白细
胞吞噬的现象时更有临床意义；
第六节 粪便
一、标本采集
用药前自然排便，采集脓血、黏液部分2～3g。
外观无异常的粪便应从粪便的表面不同部位取材。
液体便取絮状物1～2ml,臵无菌容器内送检。
一ห้องสมุดไป่ตู้ 标本采集与运送
最好以针筒直接由病灶处抽取标本，一般 情况下应从无正常菌群寄居的部位采取标本
不宜做厌氧菌培养 ①鼻咽拭子；②齿龈拭子；③痰和气管抽取 物；④胃和肠道内容物、肛拭；⑤接近皮肤 和黏膜的分泌物；⑥褥疮溃疡及黏膜层表面；
⑦排出的尿或导尿；⑧阴道或子宫拭子；⑨
前列腺分泌物。
经皮肤黏膜组织采集标本时，皮肤表面需要
5.血培养次数和采血时间 只要怀疑血液细菌感染，应即刻采集。 采血培养应该尽量在使用抗菌药物之前进行，在1h内采集2～3次 做血培养。
对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1h 采集
血液，或于寒战或发烧后1h进行。 入院前两周内接受抗菌药物治疗的患者，连续3d，每天采2 份。 6.标本运送
斜面接种法
用于鉴定或保存菌种，或观察细菌的某些生化特征 和动力。 1、用左手握住斜面培养管底部，右手持接种针（环）。 2、用右手小指与手掌拔出管的塞子，将管口通过火焰 灭菌。 3、用烧红过的接种针挑取菌落。 4、将接种针垂直插入半固体培养基的中央，穿刺至培 养基中下部（不要到底部），然后沿原穿刺线退出接 种针。 5、伸入到斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条 接种线，再自下而上地呈“Z”划线。 6、接种完，火焰灭菌管口，塞上塞子。
无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖
的容器中，标本量应≥1ml。
支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经
气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗 法均由临床医生按相应操作规程采集，但必须注意采 集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。
小儿取痰法 用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌