网织红细胞计数
《临床检验基础》课件——第九讲：网织红细胞计数实验
不允许以血红 蛋白浓度来折 算红细胞数
充池要均匀， 不能有气泡混 入、溢出或不
满
请认真书写实 验报告
谢谢 大家
数板等
试剂
红细胞稀释液
改良牛鲍氏计数板
操作步骤
01
02
03
04
取中号试管1支 ，加红细胞稀 释液20ml。用清洁干燥微量吸管 取末梢血10μl ，擦去 管外余血后加至红细 胞稀释液底部，再轻 吸上层清洗吸管2-3次
立即混匀。
混匀后，用干净 微量吸管将红细 胞悬液充人计数 池，不得有空泡 或外溢，充池后 静置2-3 min后计
参考区间
男：
（4.09～5.74）×1012/L
女：
（3.68～5.13）×1012/L
新生儿：（5.2～6.4）×1012/L
注意事项
1
2
3
4
5
采血时不能 挤压过甚， 因此针刺深 度必须适
当。。
稀释液要过滤， 试管、计数板 均须清洁，以 免杂质、微粒 等被误认为红
细胞
参考范围数 值内，两次 红细胞计数 相差不得超
临床检验基础
第九讲 网织红细胞计数
目录
CONTENTS
实验原理 实验器材 实验试剂 操作步骤
计算 参考值 注意事项 思考题
实验原理
用等渗稀释液将血液按一定倍 数稀释，充人计数池后显微镜下 计数一定体积内红细胞数，换算 求出每升血液中红细胞的数量
试验器材、试剂
试验器材
显微镜、改良 Neubauer血细胞计
数。
高倍镜下依次计 数中央大方格内 四角和正中共5 个中方格内的红 细胞。对压线细 胞按"数上不数下 、数左不数右"的
临检--网织红细胞计数(Ret)
网织红细胞计数（Ret）【定义】网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞，属于尚未完全成熟的红细胞，其胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸（RNA），经活体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。
【分型】根据网织红细胞发育阶段分为4型，分别是：Ⅰ型（丝球型）：红细胞充满网状物，见于骨髓。
Ⅱ型（网型）：红细胞网状物结构松散，见于骨髓。
Ⅲ型（破网型）：红细胞网状物结构稀少，呈不规则枝点状排列，见于外周血。
Ⅳ型（点粒型）：红细胞内为分散的细颗粒、短丝状网状物，见于外周血。
【检测原理】1.普通光学显微镜法2.网织细胞计数仪法和血液分析仪法【操作方法】1.显微镜试管法操作（1）加染液：于试管中加入10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液2滴，再加新鲜血2滴，立即混匀，置37℃下15～20min。
（2）制片：取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。
（3）观察：在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。
（4）计数：在油镜下计数至少1000个红细胞中网织红细胞数。
（5）计算：网织红细胞分数=（计数的网织红细胞数）/1O00，网织红细胞绝对值（×109/L）=红细胞数×1012/L×网织红细胞分数。
2.显微镜法注意事项（1）网织红细胞必须活体染色，WH0推荐使用新亚甲蓝染液，其染色力强且稳定。
煌焦油蓝染液操作简单、费用低廉，但易产生沉淀、工作效率不高、精度差。
染液与血液比例以1:1为宜，严重贫血时，可适量增加血量。
（2）为提高网织红细胞计数精度和速度，ICSH推荐使用Miller窥盘，方法是将Miller 窥盘置于目镜内，选择红细胞散在且分布均匀的部位（3）用小方格（A）计数红细胞，大方格（B）计数网织红细胞，按下式计算：（4）注意鉴别网织红细胞与HbH包涵体。
Ret为蓝绿色网状或点粒状物质，分布不均，HbH包涵体为蓝绿色圆形小体，均匀散布于整个红细胞内。
网织红细胞计数
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3．作为病情观察的指标
溶血性贫血及失血性贫血，治疗过程中 连续观察网织红细胞计数，可作为判断 病情变化的参考指标。 如治疗后网织红细胞逐渐降低，表示溶 血或出血已得到控制。 如网织红细胞持续不减低，甚至更增高， 表示病情未得以控制，甚至加重。
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四、红细胞沉降率测定
红细胞沉降率（ESR），简称血沉率 指红细胞在一定条件下沉降的速率。 正常情况下，红细胞在血浆中具有相对 的悬浮稳定性，沉降极其缓慢。 在病理情况下，血沉率可明显增快。
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临床意义
2．血细胞比容减低 见于各种贫血。 不同类型的贫血，红细胞体积大小不同， 故血细胞比容的减少与红细胞数量减少 并不—定成正比。 因此必须将红细胞数、血红蛋白量和血 细胞比容三者结合起来，计算红细胞各 项平均值才有参考意义。
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(二)红细胞平均值的计算
1．平均红细胞容积(MCV) 指每个红细胞的平均体积，以飞升（ fl ）为单 位。
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参考值
魏氏(Westergoen)法： 成年男性0~15mm/1小时末
成年女性0~20mm/1小时末
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临床意义
(一)生理性变化 12岁以下的儿童血沉略快。 妇女月经期血沉略增快，可能与子宫内膜破损 及出血有关。 妊娠3个月以后至分娩后3周血沉快，与生理性 贫血及纤维蛋白原含量增加等有关。 老年人血浆纤维蛋白原含量增加血沉加快。 高原地区居民红细胞增多，血沉低于平原地区。
(三)网织红细胞计数
（2）评价疗效
网织红细胞反应： 网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别 或巨幼细胞贫血分别 给予铁剂、维生素B 或叶酸治疗2~3d后，网织 给予铁剂、维生素 12或叶酸治疗 后 红细胞计数值开始上升， 达到最高(10% 红细胞计数值开始上升，7~10d达到最高 达到最高 左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 左右 ；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 血红蛋白开始升高。 血红蛋白开始升高。 骨髓移植、 治疗后： 骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造 治疗后 血功能， 升高， 血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。 升高 网织红细胞计数值上升。
六、参考值
成人： 成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%） （ ） 新生儿： 新生儿：0.02-0.06（2%-6%） （ ） 儿童： 儿童：0.005-0.075（0.5%-7.5%） （ ） 成人绝对值（ 成人绝对值（24-84） ×109/L ）
七、临床意义
（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型 ）评价骨髓增生能力， 再障时 明显降低。绝对值低于 × 再障时，明显降低。绝对值低于5×109/L可 可 做为急性再障的辅助诊断指标。 做为急性再障的辅助诊断指标。 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 溶血性贫血 显高于正常。 显高于正常。 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 正常、轻度升高或降低。 正常、轻度升高或降低。
（3）放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织 降低， 早期 和 降低 红细胞的降低。而停止放、化疗， 红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功 能恢复后，又见上述指标依次上升。 能恢复后，又见上述指标依次上升。可指 导临床医师适时调整治疗方案， 导临床医师适时调整治疗方案，避免造成 严重的骨髓抑制。 严重的骨髓抑制。
网织红细胞计数法的流程
网织红细胞计数法的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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网织红细胞计数
网织红细胞计数1．项目名称网织红细胞计数2．检验目的2．1观察贫血疗效2．2骨髓移植后监测骨髓造血恢复2．3其他疾病协诊等临床实验室3．检验原理：网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，甲蓝活体染色后，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚呈浅蓝或深蓝色的网状结构。
4．性能参数4．1重复性4．2分析和计算参数：百分比（%）4．3样本量：染液量=1：14．4精密度5．原始样品系统：全血6．容器和添加剂类型容器采用真空负压专用抗凝管，添加剂类型为0.109M乙二胺四乙酸钾7．试及显微镜7．1 10G/L新亚甲蓝（或煌焦油蓝）生理盐水溶液：新亚甲蓝 1.0G枸橼酸钠0.4G氯化钠0.85G溶于双蒸馏水100ML中，混匀，过滤后备用。
7．2 显微镜7．2．1 商标8．校准程序:显微镜的验证，光路系统校正灯泡大约半年更换一次9．程序步骤：9．1标本采集与要求9．1．1标本采集：抽取静脉血1.8ml，加入到含有乙二胺四乙酸钾溶液的抗凝真空试管中，并轻轻颠倒10次使之充分混匀，不得有凝块、不得形成泡沫，总量不得超过2.0±0.2ml，并在试管上做好标识。
采血应避免溶血，采血后2小时内送到检验科，需要运输时应在低温条件下运输。
采集标本时宜“一针见血”,以防止组织损伤。
9．1．2不合格标本的处理对凝固、有凝块、采血量不符合要求、无条码或无标识等不合格的标本,距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的标本,按程序文件《样品核收、登记和保存程序》处理9．1．3标本保存检测应在标本采集后2小时内完成,2～8℃保存不超过4小时,分析后的标本保存三天。
9．2检验前准备9．2．1把接收到的标本按顺序编写序号。
9．2．2准备清洁、干燥、无尘、无油脂的载玻片、盖玻片、毛细管，玻璃笔。
9．3病人标本的检验9．3．1取小试管1支加10G/L新亚甲蓝盐水溶液2滴。
9．3．2加入末梢血（或EDTA钾抗凝静脉血）2滴于上述试管中，混匀。
网织红细胞计数
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手工法
魏氏法、温氏法、ζ血沉率及潘氏法, 检测原理相似。 差别在于抗凝剂、用血量、血沉管规 格、观察时间的不同，故各种方法的参 考值不同。 ICSH推荐魏氏法为血沉测定参考方法
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魏氏法
将枸橼酸钠抗凝血吸入
10mm
特制血沉管内，垂直立 ESR：10mm/h 于室温中，1h末读取红
细胞层下沉的距离，用
Ⅳ点粒型
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对网织红细胞的描述
是晚幼红细胞脱核后的未完全成熟的红细胞 体积比成熟红细胞体积稍大 胞浆内残存有正常核糖核酸(RNA) 具有合成血红蛋白的能力 核糖核酸越多，网织红细胞越幼稚 外周血中主要是Ⅳ型网织红细胞 网织红细胞经瑞氏染色为嗜多色性红细胞 存在于骨髓与外周血中
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网织红细胞计数（Ret）
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毫米（mm）数值报告。
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魏氏血沉测定
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自动血沉仪法
抗凝血液静置后，红细胞下降，红细胞 与血浆分离，其界面随时间而下移。血 沉仪用光电比浊法、红外线扫描法或摄 影法定时扫描红细胞与血浆界面位置， 得到血沉值并显示红细胞沉降高度H与 对应时间t相关的H-t曲线。
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方法学评价
方法 优点
缺点
魏氏法 国内规范方法， 测定血沉某时刻最
贫血→RBC总面积减少，ESR↑ RBC增多，ESR ↓ RBC直径愈大，ESR ↑ 球形RBC增多，ESR↓
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其他因素
血沉管位置 血沉管倾斜，血沉增快
温度 温度＞25℃，血沉增快，结 果应校正
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质量保证（魏氏法）
抗凝剂用量准确：枸橼酸钠（109mmol/L） 与血液之比（1：4）。
网织红细胞数 100%
1000
医学检验科新项目临床应用课件(网织红细胞计数(RET)等项目)
FT3
与TT3基本相同，但比TT3更为灵敏，且测定值不受TBG的影响；在亚临床甲亢患者，病人甲亢症状不明显， TT3可在正常范围，但FT3多已升高
FT4
与TT3基本相同，但比TT3更为灵敏，且测定值不受TBG的影响
TG-Ab
升高：慢性淋巴细胞性甲状腺炎、Graves病、甲减
anti-TPOAb 一种自身抗体，IgG型抗TPO抗体常见于桥本甲状腺炎，其水平与疾病活动期相关
6.孕产妇贫血的 诊断
当溶血性贫血溶血时大量网织红细胞进入血循环，Ret可达6%～8%，急性溶 血，可达约20%，甚至50%以上，绝对值超过100×10^9／L。急性失血后 ，5～10d网织红细胞达高峰，2周后恢复正常。
RET和IRF（ 未 成 熟 网 织 红 细 胞 ） ：血容量增加以满足胎儿生长的需要，势 必刺激骨髓造血功能的增强，因此网织红细胞明显增高，尤其是未成熟网织 红细胞增高。
医嘱：甲状旁腺激素 采样管:黄管
治疗骨质疏松
骨质疏松患者血清PTH水平异常升高，血清骨钙 素、25-羟基维生素D3水平异常降低，临床上， 可以将PTH作为骨质疏松诊断的主要参考指标。
甲状旁腺功能减退症
甲状旁腺功能减退症(HP)简称甲旁 减，是指PTH分泌过少或效应不足 引起的一组临床综合征。
甲状旁腺功能亢进
CT降低： 1. 甲状腺发育不全或甲状腺全切除者，血清降钙素水平降低。 2. 重度甲状腺功能亢进时，血清降钙素水平降低。 3. 妇女停经以后、低血钙、老年性骨质疏松等。
降钙素（CT）
降钙素 （CT）
与
降钙素原 （PCT）
一字之差，降钙素（CT）和降钙素原（PCT）意义大不同！
降钙素（CT）
CT
降钙素（CT）是人体内分 泌系统分泌的一种调节钙 磷代谢的激素，可以降低
SOP008网织红细胞百分数计数
网织红细胞计数一、检验目的：了解骨髓红细胞增殖增加或减低等情况二、原理网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或亚甲蓝活体染色后呈浅蓝色或深蓝色的网状结构一、标本要求取末梢外周血或抗凝静脉血二、试剂10g/L新亚甲蓝（或煌焦油蓝）生理盐水溶液：新亚甲蓝1g枸橼酸钠0.4g氯化钠0.85g溶于双蒸馏水100ml中，混匀，过滤后备用。
三、仪器设备普通光学显微镜和Miller窥盘四、操作步骤1.于小试管中滴加2滴网织红细胞染液。
2.加入末梢血2滴于上述试管中，混匀。
3.静置15--20分钟后，取用1滴制成薄片。
4.油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对值报告。
七、质量控制：1、95%的可信限法：（1）Sp=√R（1—R）/NSp为标准差，R为网织红细胞百分数，N为所数红细胞数。
网织红细胞计数95%可信限范围为0.028—0.0522、两差比值法：r=IR1-R2I/√R1（1--R1）+R2（1—R2）/N。
R1、R2分别为两次计数结果N为所数红细胞数，r＜2时结果可靠。
八、计算方法：九、生物参考区间0.5%~1.5%十、操作性能十一、超出可报告范围的处理：十二、危急值：十三、干扰因素：1、工作人员的责任心。
2、推血片的质量。
3、染色时间。
十四、临床意义：1、网织红细胞增多：表示骨髓红细胞系统的增生旺盛。
多见于各种增生性贫血，如溶血性贫血，特别是急性溶血性贫血，急性大出血引起的失血性贫血。
当缺铁性贫血和巨幼细胞性贫血治疗有效时，可出现短时间的网织红细胞大量增加，以后即降至正常或稍高于正常。
2、网织红细胞减少：多见于骨髓增生低下，如再生障碍性贫血和某些溶血性贫血有再障危象时。
阵发性睡眠性血红蛋白尿症网织红细胞有所减少，但有些慢性再生障碍性贫血患者的网织红细胞并不明显减低。
3、可以作为贫血治疗疗效的判断监察指标，用于观察治疗效果和判断病情变化。
十五|参考文献：1、《全国临床检验操作规程》2、罗春丽主编《临床检验基础》3、刘成玉主编《临床检验基础实验指导》。
一、网织红细胞(Ret)计数
血红蛋白结构图
血红蛋白特点
3. 亚铁血红素无种族特异性，由2价铁离子和原卟啉组成呈扁平型。 4. Hb状态 氧合Hb(HbO2 ）
--与O2结合，
还原Hb(Hbred）-脱氧 高铁Hb(Hi)-被氧化成。
碳氧Hb（HbCO）-与CO结合， 硫化Hb（SHb）-病理情况
Hb及衍生物因结构不同具有不同的吸收光谱。
费用低廉，国内目前使用的主要方法；但易产生沉淀。
四、操作 1. 取小试管一支，加染液和血液各2滴，混匀。 2. 置37℃水浴箱15min，取出后微振2min，推片。 3. 将Miller 窥盘放入目镜，选择合适部位计数，油镜下 Miller 窥盘的小格A内计数所有无核红细胞，大格B （含小格面积）内计数网织红细胞。或计数1000个红 细胞中的网织红细胞数。 五、计算 大格网织红细胞总数 1. Ret% = ×100 小格红细胞总数×9 B 2. 绝对值计算:RBC×Ret%（ × 109/L）
【临床意义】
（1） 评价骨髓造血功能： ① RET↑是红系造血功能活跃的反映。表示骨髓造血功能旺
盛，见于增生性贫血，以溶贫最为显著（6～8%，急性溶血 可达20%，严重者可达40～50%）；急性失血可明显↑ ；缺 铁和巨贫RET正常或轻度↑ 。
② RET↓表示骨髓造血功能减低，多见于再障，尤以急性再
染色后，使含有RNA的RBC被计数，自动计算出RET的%及绝对数。优点：
测量细胞多，避免主观因素、方法易于标准化。国外已广泛使用，国 内逐步推广使用。但成本高。
近年来，新型多参数血细胞分析仪具有Ret计数功能。
【质量控制】
1.抗凝血最好在4h内处理，保存在4º C，可延长至8h. 2.染色温度控制在37º C为宜，无论何种染液，室温（25º C） 以下染色时，RET检出率明显减低，故要求37º C恒温染 色。 3. 玻片法容易使血液中的水分蒸发，造成涂片困难，受染料沉 淀的干扰，故已少用。 4. 试管法为手工RET计数的首选方法，染液与血液的比例以 1:1为宜，严重贫血时可适当增加血液比例。 5. 推制血膜不宜太薄或太厚，否则会造成RET分布不均。 6. ICSH推荐使用Miller窥盘作Ret计数，其CV=10%±
网织红细胞计数的临床意义
检验科更换网织红细胞计数新方法的公告我科现更换网织红细胞计数方法，引进了希斯美康配套检验试剂，现发布公告【网织红细胞的临床意义】网织红细胞计数（尤其是网织红细胞绝对值）是反映骨髓造血功能的重要指标。
正常情况下，骨髓中网织红细胞均值为150×109／L，血液中为65×109/L。
当骨髓网织红细胞计数增多，外周血减少时，提示释放障碍；骨髓和外周血网织红细胞计数6%～50%以上，绝对值超过100×109／L。
急性失血后，5～10d网织红细胞达高峰，2周后恢复正常。
②放疗、化疗后：恢复造血时，网织红细胞计数短暂和迅速增高，是骨髓恢复较敏感的指标。
③红系无效造血：骨髓中红系增生活跃，外周血网织红细胞计数正常或轻度增高。
（2）减少：见于再生障碍性贫血、溶血性贫血再障危象。
典型再生障碍性贫血诊断标准之一是网织红细胞计数计数常低于0.005，绝对值低于15×109／L。
2、观察贫血疗效缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血患者治疗前，网织红细胞计数仅轻度增高（也可正常或减少），给予铁剂或维生素B12、叶酸治疗后，用药3～5天后，网织红细胞计数开始上升，7～10天达高峰，2周左右，网织红细胞计数逐渐下降，表明治疗有效医学*教育*网整理。
3、骨髓移植后监测骨髓移植后第21小于15×109／L4、网织红细胞生成指数（RPI来反映网织红细胞计数生成速率。
计算公式为：被测网织红细胞百分比。
在估计红细胞生成有效性方面，使用RPI较准确。
【贫血的网织红细胞检查标准】男：Hb<115.0g/LRBC<4.0×109/L女：Hb<110.0g/LRBC<3.5×109/L【参考范围】成人：绝对值（22～84）×10^9/L。
?百分率：0.005～0.015（仪器法）。
?儿童：百分率0.03～0.06（仪器法）。
?荧光染色激光流式细胞技术：?LFR（低荧光强度比率）：0.813～0.909（仪器法）。
网织红细胞计数
骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造 血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。
2020/7/30
（3）放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，
早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织 红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功 能恢复后，又见上述指标依次上升。可指 导临床医师适时调整治疗方案，避免造成 严重的骨髓抑制。
2.直接计数法：网织红细胞（Retic）百 分率(%)= 多个视野内Retic总数/多个 视野内RBC总数×100%
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五、注意事项
1.用酒精染液时，应待玻璃片上的酒精挥发干燥后 ，才能加血液，染色时应用推片角不停搅动， 使染料和血液混合，防止凝固。
2.染色时间一定要充足，混合后不能立即推片，室 温低时染色时间应适当延长，应覆以另一玻片 防止蒸发。
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七、临床意义
（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型 再障时，明显降低。绝对值低于5×109/L可 做为急性再障的辅助诊断指标。 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 显高于正常。 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 正常、轻度升高或降低。
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（2）评价疗效
网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别 给予铁剂、维生素B12或叶酸治疗2~3d后，网织 红细胞计数值开始上升，7~10d达到最高(10% 左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 血红蛋白开始升高。
网织红细胞
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计数方法
• 1、普通光学显微镜法：活 体染色后推片镜检
• 2、网织细胞计数仪法：荧 光染色后用流式细胞术计数
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二、试剂器材
1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精（水）溶液 2、器材 毛细血管采血用具、小试管、
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号的部位，按一定顺序计数。由于网织红细胞体
积较大，应兼顾血涂片的边缘和尾部。凡含有2个
问答题
1.网织红细胞的分类和特点。 2.网织红细胞计数可用哪些染液？ 3.影响网织红细胞计数的因素有哪些? 4.网织红细胞计数增高的临床意义。 5.Ret测定注意事项。 6.如何根据血液标本的血红蛋白浓度推 一张好的血玻片?
网织红细胞比值=
1000
网织红细胞绝对值（个/L）=网织红细胞比值×红细胞数/L
[注意事项]
• 血液与染液的比例以1：1为宜，贫血时适当增加
血量。
• 染色时间不能过短，室温低时，可适当延长染色
时间或放置37℃恒温水浴箱染色，否则会因为染
色浅造成结果偏低。
• 选择红细胞分布均匀、不重叠、网织红细胞着色
的一角轻轻将血液与染料混匀。用另张载玻片盖于其上，使
两玻片黏合，以防染色过程中水分蒸发而使血液和染料干燥。 （3）染色和制片室温放置5-10min后，移开上层载玻片,取1 小滴制成薄血涂片(或两载玻片贴合轻轻对拉，制备成两张 涂片)。 （4）观察、计数和计算。
网织红细胞
四、结果计算
计数1000个全部红细胞中的网织红细胞数
（2）加血标本 于上述试管内加人新鲜全血2滴，立 即混匀。
（3）染色和制片 水浴15-20min,取混匀染色血1小 滴制成薄血涂片，自然干燥。 （4）观察网织红细胞 低倍视野下观察红细胞的分 布和染色情况，并选择红细胞分布均匀、平铺、着 色好的部位。
2.玻片法
（1）滴加染液取载玻片1张,在其 一端滴染液1滴,待自然干 燥后备用。 （2）加血液标本加人新鲜全血1滴于千燥的染料上，用推片
实验四
网织红细胞计数
一、实验目的及原理
[实验目的] 掌握网织红细胞试管法及玻片法计数原理及
操作方法。
[实验原理] 网织红细胞胞质内尚存在少量核蛋白体和核
糖核酸( RNA )等嗜碱性物质。煌焦油蓝、新亚甲蓝和天青B 染料都含有氨基,在水溶液中呈弱碱性,带正电荷可与酸性集 团发生电耦合，特别是与核酸分子中的磷酸基结合，使核糖 核酸胶体的电位发生变化，分子间斥力下降，胶体分散力降 低而凝集成蓝色颗粒。网织红细胞经染液活体染色后，胞质 中出现蓝色的网织状或点粒状结构，可与完全成熟的红细胞 区别。在显微镜下计数一定数量红细胞中的网织红细胞数， 可以计算出网织红细胞所占的比例。
二、实验材料
[器材] 试管、试管架、载玻片、推片、显微镜、
香柏油、擦镜纸、Miller。Miller窥盘为一个厚为 1mm、直径为19mm的圆形玻片,玻片上刻有大小两个
正方形格子，大方格B面积(含小方格)为小方格A面
积的9倍。
[试剂]
新亚甲蓝N溶液
三、实验操作
1.试管法
（1）滴加染液 液2 滴