抗狂犬病血清生产简介

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(三)免疫方法
❖ 基础免疫：从马体初次接受免疫原刺激， 到产生少量特异性抗体的阶段即第一次免 疫应答阶段。 ❖ 超免疫：基础免疫以后的强化免疫。
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有了第一次免疫应答后，再次接触同一免疫原 就会迅速出现第二次免疫应答。抗血清效价将会 急剧上升。 对超免成功的马匹予以采血并开始 再次免疫注射，如此反复的每一循环通称“1 程”、“2程”……超免疫。
1．安全性
主要指制品污染的杂质引起的副作用。 例如细菌、热原质、类A血型物质以及其 它毒性物质等， 2019年版《药典》三部中 都有具体的检定方法并规定有最低要求标 准(参阅2019年版《药典》三部)。
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2．纯度及比活性
由于马匹免疫方法及抗血清精制方法的 改进，抗血清的纯度(免疫球蛋白的纯一性) 与比活性(每g蛋白所含单位数)均有显著的 提高，这些是代表精制抗毒素质量的主要 指标，2019年版《药典》三部中均有检查 方法及要求标准的规定。
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层析技术
抗血清纯度提高 从 50%--60% 提高到80%以上。
比活性 从 <4000 IU/g 提高到 > 10000 IU/g以上。
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抗狂犬病血清工艺流程
免疫血浆 ← 马匹检疫、免疫、基免、超免、 采血、血浆分离
↓ 血浆精制 ← 去除杂蛋白
↓ 胃酶消化 ← 切去Fc端
↓ 第一次沉淀 ← 硫酸铵沉淀、去除Fc端 及加热处理
↓
↓ 第二次沉淀 ← 硫酸铵沉淀 明矾沉淀
↓ 纯化
↓
浓缩
↓ 最后处理
↓
↓ 原液检定
↓ 半成品配制及除菌
↓ 半成品检定
↓ 分装
↓ 成品检定
↓ 入库
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❖ 最初的阶段是“原制血清”．即不做加工处理， 仅加防腐剂、除菌过滤。 ❖ 其次是应用适宜的理化方法(主要是硫酸铵盐析法) 去除血浆中的大部分非特异性蛋白(包括白蛋白、纤维 蛋白等)，并使抗体蛋白得到一定的浓缩，单位体积所 含抗毒素单位数量显著提高，称为“浓制血清”。 ❖ 蛋白酶精制法的研究和创建，使得抗血清制造方 法跨入了一个新的历史阶段。
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精制工艺改进
抗血清制造工艺的改进很大的提高了临 床应用于治病防病的免疫血清制品的质量。
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蛋白酶精制法
马血清抗体的分子结构与人的IgG基本相同，分子量 184KD，大小4×27.7nm。
马血清抗体在马匹免疫初期阶段从属于免疫血清的γ 球蛋白。
随着免疫程度的逐步加深，抗血清的分布逐渐向β球 蛋白转移，从属于γ与β两球蛋白之间新出现的免疫球 蛋白，被称为T球蛋白或β2球蛋白(此时原β球蛋白称 作β1球蛋白)。
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(四)采血及血浆的分离
❖ 免疫血清效价不低于100IU/ml时即可采血。 ( 2019年版《药典》三部 ) ❖ 采血有 “部分采血”与“全采血”两种方式。 前者指每程超免疫后由颈静脉采血l—3次，每次 5000m1左右；后者指由颈动脉采血直至马匹死 亡。
二、抗血清的精制
抗血清制造方法的改进与制品质量 的提高大体经历了三个历史阶段。
❖ 制造抗毒素所用马匹应健壮(过幼者免疫器官 发育不健全，过老者免疫机能衰退，最好是4∽8 岁)。 ❖ 无传染病(包括马传染性贫血、马鼻疽、布氏 杆菌病、马副伤寒性流产及其他传染病)和恶性肿 瘤等。
（二）免疫原长期反复地给马进行免 疫，在马体内将产生高效价的抗血清。
由液体石蜡与羊毛脂配成“油包水” 的 不完全福氏佐剂是马匹免疫最常用、效能 最好的佐剂。
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抗毒免疫马血清经硫酸铵盐析。30％一50％ 饱和沉淀β2与γ之间出现一个 新峰。进一步用硫酸铵盐析浓缩，此新峰乃被 提纯成精制抗血清。
经胃酶处理，IgG分子在重链间的二硫键的c 端侧被切断。切下的Fc片段无抗毒活性，不耐 热，经继续消化与热变性而被除掉。保留下来的 F(ab)2片段具有抗毒活性，即前述的所谓改性球 蛋白抗毒素，分子量98KD，分子大小 4.1×13.6nm，电泳位置在β2与γ两球蛋白之间。
衡量精制效果优劣的主要指标
①纯净度：含杂蛋白的程度。 ②提纯系数：通称R值，即精制品每g蛋白 所含单位数与原血浆每g蛋白所含单位数的 比值。 ③收获率：精制品总单位数与原血浆总单 位数的比值(%)。
前两指标经常与后者互相矛盾，在工艺
上予以适度调节而兼顾。
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质量的要求及检定
抗毒素除做预防用外还常被用于治疗， 而且治疗剂量往往很大。 制造工艺比较复 杂，生产周期较长，容易被污染。
抗狂犬病血清 生产简介
2019年5月
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抗狂犬病血清
系由狂犬病固定毒免疫马的血浆，经精制、 胃酶消化、纯化制得的液体或冻干免疫球蛋白 制剂。
用于狂犬病的预防。
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一、免疫血浆
为获抗毒效价高的免疫血浆 ，马匹、免 疫原及免疫方法是重要的条件。
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（一）马匹的选择