Folin-Wu法定量测定血糖的含量(精)
血糖的测定Folin吴法
原理
无蛋白血滤液 葡萄糖
碱性铜试剂 磷钼酸试剂
Cu(OH) 2 磷钼酸
原理
葡萄糖 ＋ Cu(OH)2
Cu2O↓
Cu2O ＋ 磷钼酸
钼兰
原理
钼兰的蓝色深浅与葡萄糖的含量成正比 用比色法可测定空
准
定
白
管
管
管
已知浓度葡 萄糖溶液 0.025mg/ ml
未知浓度 无蛋白血 滤液
蒸馏水
（mg/dl） 空腹血糖
临床意义
正常
怀疑
糠尿病
＜110 110-139 ≥140
餐后两小时血糖 ＜140 140-199 ≥200
服糖后两小时糖 ＜140 140-199 ≥200
注意事项
测定结果比实际血糖含量高，因为 无蛋白血滤液中，除含有葡萄糖外， 尚有微量的其他还原物质 ,如Vit C、 尿酸等。
实验八 血糖的测定
Folin-吴法
Folin-吴法
吴宪：我国著名生物化学家和营养学家 1912 年 美国麻省理工学院 学习化学 1917 年 哈佛大学医学院 师从美国著 名生物化学家福林(Otto Folin）教授 进行血液化学研究
Folin-吴法
研究期间改进血糖定量分析方法 吴宪改进的血糖测定法，为后来的胰岛 素发现奠定了基础
中国海洋大学资料生物化学课件实验实验 Folin-Wu法定量测定 (2)
2、血糖的定量测定：
取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸 馏水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液； 用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶
液，同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷
却后,勿摇动，各加4ml酸性钼酸盐溶液。
式中: m=100ml全血中含血糖毫克数 ; C0=标准液葡萄糖含量 （0.1mg/ml） A1=样品液光吸收值 ; A0=标准液光吸收值
0.1：1ml无蛋白血溶液相对于0.1ml全血
七、思考题
实验过程中那些操作可能影响实验结果的
准确性？
实验中，血糖管有什么作用？ 实验过程中，为什么要用流水冷却加入碱
无蛋白血滤液中的葡萄糖和碱性硫酸铜溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物— 钼蓝 。 Cu2O+酸性钼酸试剂 蓝色钼化合物 OD420比色
血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量 与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。三、实Leabharlann 仪器性硫酸铜液反应后的血糖管？
注意事项
1.加硫酸、钨酸钠时，要边加边摇匀 2.沉淀由鲜红变为暗棕色，是因钨酸钠与硫酸生成钨酸，在 适当酸度时，使血红蛋白变性沉淀，如果沉淀不变暗棕色或 重新过滤后仍混浊，是因为血液中所加抗凝剂过多，可以加 入10％硫酸1-2滴，待暗棕色后再过滤。 3.用定量滤纸过滤后应该得到完全澄清无色之无蛋白血滤液。 如果得到仍带有红色的血滤液则说明蛋白质未被完全去除。
五、实验步骤
• 1、无蛋白血滤液的制备：
• 用奥氏吸管吸取全血（已加抗凝剂） 1ml, 缓缓放入 100ml 锥形瓶中，加蒸馏水 7ml ，摇匀，溶血后（血 液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。 • 再加0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀， 放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可再 加0.33mol/L H2SO41-2滴）。 • 用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部 倒入，如滤液不清需重新过滤。每毫升无蛋白血滤 液相当于1/10ml全血。
folin吴法测血糖实验报告
folin吴法测血糖实验报告一、实验目的血糖的测定在医学诊断和糖尿病的监测中具有重要意义。
本实验旨在通过 folin 吴法测定血糖浓度，掌握该实验的原理、操作步骤及注意事项，并对实验结果进行分析和讨论。
二、实验原理folin 吴法是一种常用的血糖测定方法。
其原理基于葡萄糖在碱性溶液中与硫酸铜反应生成氧化亚铜，氧化亚铜与磷钼酸试剂反应生成蓝色的钼蓝。
颜色的深浅与葡萄糖的含量成正比，通过比色法可测定血糖浓度。
三、实验材料1、仪器分光光度计、离心机、恒温水浴锅、移液器、试管、刻度吸管等。
2、试剂（1）10%钨酸钠溶液（2）033mol/L 硫酸溶液（3）碱性硫酸铜溶液（4）磷钼酸试剂3、样本待测血液样本四、实验步骤1、样本处理（1）取适量待测血液，加入 10%钨酸钠溶液和 033mol/L 硫酸溶液，摇匀后离心，取上清液备用。
2、反应（1）取两支试管，分别标记为测定管和空白管。
（2）向测定管中加入处理后的上清液和碱性硫酸铜溶液，混匀后置于沸水浴中加热 8 分钟，取出后迅速冷却。
（3）向空白管中加入蒸馏水和碱性硫酸铜溶液，同样进行沸水浴加热和冷却处理。
3、显色（1）向测定管和空白管中分别加入磷钼酸试剂，充分混匀。
4、比色测定（1）使用分光光度计，以空白管调零，在波长 620nm 处测定测定管的吸光度值。
五、实验结果根据标准曲线或计算公式，将测定管的吸光度值转换为血糖浓度。
六、注意事项1、样本采集和处理要严格按照操作规程进行，避免溶血和污染。
2、试剂的配制要准确，保存条件要符合要求，避免失效。
3、反应过程中的温度和时间要控制准确，以保证反应的充分进行。
4、比色测定时要注意仪器的校准和调零，确保结果的准确性。
七、实验讨论1、实验结果的准确性分析可能影响实验结果准确性的因素，如样本采集、处理和保存不当，试剂质量问题，操作误差等，并提出相应的改进措施。
2、与其他血糖测定方法的比较简要介绍其他常见的血糖测定方法，如葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法等，并比较它们与 folin 吴法的优缺点。
实验二血糖定量测定
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分光光度技术
有色溶液对光线有选择性的吸收作用，不同物质由 于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同， 因此，每种物质都具有其特异的吸收光谱。有些无色溶 液虽对可见光无吸收作用，但所含物质可以吸收特定波 长的紫外线或红外线。分光光度法是利用物质特有的吸 收光谱来鉴别物质或测定其含量的技术。使用的仪器则 称为分光光度计 。
Cu2+( CuSO4 ) 还原糖 Cu2O +酸性钼酸试剂
Cu+(Cu2O) 蓝色钼化合物
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测定血糖含量时必须先除去其中的蛋白质，制成 无蛋白滤液，再行检验。向抗凝血中加入钨酸钠、 硫酸锌、氢氧化锌及三氯乙酸等均可制得无蛋白滤 液，现常用钨酸法。钨酸钠与硫酸作用，生成钨酸， 可使血红蛋白等变性、凝固、沉淀，离心或过滤除 去沉淀，即得无蛋白血滤液，此种滤液还适用于测 定非蛋白氮、肌酸和尿酸等
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754型操作规程
1. 开启电源，用可见光测定时打开钨灯即可，如使用紫外测定则还需打开氘灯， 指标灯亮，使仪器预热20min以上。
2. 按“Mod”键选择测试方式，使开关置于"T"。 3. 打开样品室盖（光门自动关闭），按"0％T"键进行机械调零，使数字显示为
２.０
２.０
２.０
混匀，室温放置２min，以蒸馏水定容至２５ml，混匀，倒入比色杯， 用７５４型分光光度计４４０nm波长比色（先以空白管调节零点，继测标准 管及样品管）。记录各管吸光度值。
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３、结果计算
根据比色结果计算每１００ml血液中所含葡萄糖的毫克数： １００ml全血含血糖毫克数＝OD1/OD2×C×10×100 其中C＝标准葡萄糖含量（mg/ml）； OD1＝样品液光密度 OD2＝标准液光密度
中国海洋大学资料生物化学课件实验生物化学实验教案 (2)
操作： 1、双缩脲的反应：取少量尿素晶体放在干
燥的试管中，微火加热使其熔化成液体， 此时有氨气放出，可用湿润的试纸检验， 至液体重新结晶出现白色固体时， 停止加 热，冷却。然后加10%NaOH溶液1ml，摇匀， 再加2-4滴1% CuSO4溶液，混匀，观察有无 紫色出现。 2、蛋白反应：取蛋白液 1ml，加10%NaOH溶 液 1ml ，摇匀，再加 2-4 滴 1% CuSO4 溶液， 混匀，观察有无紫色出现。
（四）
茚三酮反应
原理：蛋白质与茚三酮共热，产生兰紫色的还原茚三酮、茚 三酮和氨的缩合物。此反应为一切蛋白质及a-氨基酸所共 有。亚氨基酸（脯氨酸和羟脯氨酸）与茚三酮反应呈黄色， 含有氨基的其他物质（氨、β-Ala和许多一级胺）亦呈此 反应。反应灵敏度达1:1500000(pH5-7)，广泛用于氨基酸 定量测定。
匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。
五、实验步骤
1、无蛋白血滤液的制备： •用奥氏吸管吸取全血（已加抗凝剂—草酸钠）1ml,缓缓
放入50ml 锥形瓶中，加蒸馏水 7ml ，摇匀，溶血后（血
液 变 为 红 色 透 明 ） 加 10% 钨 酸 钠 1ml ， 摇 匀 。 再 加 0.33mol/LH2SO41ml ，边加边摇，加毕充分摇匀，防止
温下乙醇、丙酮、中性盐硫酸胺等。
不可逆的沉淀反应：内部结构、空间构象遭到破坏，失去天然特性， 不能恢复溶解状态。重金属、生物碱试剂、过酸碱、加热、超声波、
有机溶剂等。
二、实验仪器
1、移液管 2、吸管 3、试管 4、电炉
三、实验试剂
1 、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释 10-20 倍，3-4 层纱布过滤，滤液 放在冰箱里冷藏备用。 2、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。 3、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。 4、95%乙醇。 5、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml。 6、硫酸铜溶液：1g CuSO4晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml。 7、氯化钠晶体。 8、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml。 9、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。 10、1%醋酸溶液。
生物化学实验--Folin-Wu法定量测定
2、血糖的定量测定：
• 取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸馏
水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸 管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。 • 然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液， 同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后,勿摇
• 掌握7200型可见分光光度计的使用方
法。
二、实验原理
葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。其醛基具有还原性， 与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧 基，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。 Cu2+( CuSO4 )+葡萄糖 Cu+ （Cu2O）
无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合 物—钼蓝 。 Cu2O+酸性钼酸试剂 蓝色钼化合物 OD420比色
血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量 与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。
三、实验仪器
1、25mL血糖管×3支； 3、沸水浴小锅×1个； 5、电炉×1个； 7、吸耳球×2个； 2、血糖管橡胶塞×3个； 4、100mL锥形瓶×2个； 6、滤纸×1盒； 8、7200型分光光度计×1台;
四、实验试剂
5、酸性钼酸盐溶液： • 称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml 的容量瓶中，加蒸 馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀， 静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入 225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。 • 置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀， 用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。
18生物化学实验吴宪Folin法测定血糖含量
18生物化学实验--吴宪-Folin法测定血糖含量标题：18生物化学实验——吴宪-Folin法测定血糖含量一、实验目的1.掌握吴宪-Folin法测定血糖含量的原理和方法。
2.学习使用分光光度计测量样品吸光度。
3.了解血糖的生理意义及其调节机制。
二、实验原理吴宪-Folin法是一种利用邻甲苯胺和硫酸铜反应生成紫红色络合物的原理，通过测量该络合物在特定波长下的吸光度来测定血糖含量的方法。
由于葡萄糖分子中含有醛基，因此可以利用这一特性进行测定。
本实验采用吴宪-Folin法进行血糖含量的测定。
三、实验步骤1.样品准备：收集受试者在禁食12小时后的静脉血，分离血清备用。
2.试剂准备：将邻甲苯胺、硫酸铜、碳酸钠等试剂按照配方准确称量，溶解定容，现配现用。
3.测定步骤：将试剂和样品按照规定比例混合，在规定温度下静置一段时间，用分光光度计在特定波长下测量吸光度，记录数据。
4.数据处理：根据吸光度和标准曲线计算血糖浓度。
四、实验结果与数据分析1.数据记录：记录受试者血糖吸光度数据（表1）。
表1：血糖吸光度数据记录表表2：血糖浓度计算表3.数据统计：对所有受试者的血糖浓度进行平均值和标准差统计（表3）。
表3：血糖浓度统计表平均值：x̄= ΣC/n (mg/dl) 标准差：s= [Σ(C-x̄)²/n]½五、结论总结与讨论根据实验数据，我们得出以下结论：1.所有受试者的血糖浓度均处于正常范围内。
这表明受试者在禁食12小时后的血糖水平处于生理正常范围。
这一结果与我们所知的人体在禁食状态下的血糖调节机制相符。
当人体处于禁食状态时，胰高血糖素分泌增加，促进肝糖原分解，使血糖水平维持在正常范围。
2.实验结果存在一定差异。
这可能与个体差异、采血时间、实验操作等因素有关。
为了获得更为准确的数据，需要进一步改进实验方法，提高操作精度和标准化程度。
此外，对于不同个体之间的比较，应考虑个体差异对实验结果的影响。
3.吴宪-Folin法是一种灵敏度高、操作简便的血糖测定方法。
2 血糖的定量测定(Folin-Wu法)
中国海洋大学实验报告姓名庞裕智专业年级生命基地班2011 题目血糖的定量测定(Folin-Wu法)学号************科目生物化学实验时间周一90节同组者田特一、实验目的1、掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。
2、学会制备无蛋白血滤液。
3、掌握7200型可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。
其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。
Cu2+(CuSO4) + 葡萄糖 Cu+ （Cu2O）无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物——钼蓝。
Cu2O+酸性钼酸试剂蓝色钼化合物 OD420比色血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。
可用比色法定量的测定。
三、实验仪器1、25mL血糖管×3支；2、血糖管橡胶塞×3个；3、1mL胖肚吸管×1支；4、100mL锥形瓶×2个；5、漏斗架×1个；6、普通漏斗×2个；7、水浴锅×1个；8、电炉×1个；9、移液管1mL×2支；2mL×3支；5mL×2支；10mL×1支；10、滤纸×1盒；11、吸耳球×2个；12、7200型分光光度计×1台；13、表面皿×1个。
四、实验试剂1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）(1)1%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。
(2)葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。
2、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。
3、0.33mol/L H2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。
血糖的测定Folin吴法
吴宪：我国著名生物化学家和营养学家 1912 年 美国麻省理工学院 学习化学 1917 年 哈佛大学医学院 师从美国著 名生物化学家福林(Otto Folin）教授 进行血液化学研究
Folin-吴法
研究期间改进血糖定量分析方法 吴宪改进的血糖测定法，为后来的胰岛 素发现奠定了基础
原理
无蛋白血滤液 碱性铜试剂 磷钼酸试剂 葡萄糖 Cu(OH) 磷钼酸
2
原理
葡萄糖 ＋ Cu(OH)2 Cu2O↓
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱCu2O
＋
磷钼酸
钼兰
原理
钼兰的蓝色深浅与葡萄糖的含量成正比 用比色法可测定血糖的含量
操作
标 准 管 测 定 管 空 白 管
已知浓度葡 萄糖溶液 0.025mg/ ml
未知浓度 无蛋白血 滤液
蒸馏水
临床意义
（mg/dl） 空腹血糖
餐后两小时血糖 服糖后两小时糖
正常 ＜110
＜140 ＜140
怀疑 110-139
140-199 140-199
糠尿病 ≥140
≥200 ≥200
注意事项
测定结果比实际血糖含量高，因为 无蛋白血滤液中，除含有葡萄糖外， 尚有微量的其他还原物质 ,如Vit C、 尿酸等。
18生物化学实验--吴宪-Folin法测定血糖含量
18 生物化学实验--吴宪-Folin法测定血糖含量吴宪 -Folin 法测定血糖含量【目的】1 (掌握吴宪 -Folin 法测定血糖含量的实验方法。
2 (熟悉吴宪 -Folin 法测定血糖含量的实验原理。
【原理】钨酸钠( Na 2 WO 4 )和硫酸作用，生成钨酸，可沉淀血液样品中的蛋白质滤除蛋白质沉淀即可制得无蛋白血滤液，此血滤液中的葡萄糖具有还原性与硷性铜试剂共热可使兰色的二价铜离子( Cu 2+ )还原成红色的氧化亚铜( Cu 2 O )沉淀。
氧化亚铜再使无色的磷钼酸还原成兰色的钼兰。
颜色深浅与葡萄糖含量成正比。
因此，将血滤液和经同样处理的标准葡葡萄溶液分别进行比色，即可求出血糖含量。
其反应如下:1 (硷性铜试剂内的反应2 (定糖显色反应【器材】1 ( Folin- 吴氏定糖管2 (中号试管3 (电炉及加热器4 ( 刻度吸管5 (微量移液器6 (漏斗of the reform of distribution system, linked to the implementation of goals, tasks, benefits, payroll management by objectives approach, effectively mobilized the enthusiasm of the staff. Meanwhile, strengthened cost management, focus on staffTraining, employee skills, service quality has been significantly improved, saving7 (分光光度计【试剂】1 ( 1/3mol/L 硫酸溶液2 ( 10% 钨酸钠3 (碱性铜试剂取无水碳酸钠 40g 溶解于 400ml 蒸馏水中，再加入酒石酸 7.5g ，溶解后定量地移入 1000ml 量瓶中，再加入结晶硫酸铜 4.5g (可先用热水浴稍微加热)，待其完全溶解后加蒸馏水至刻度，混匀贮于棕色瓶中保存。
FosdelinWu法测定血液葡萄糖含量
实验23 Folin—Wu法测定血液葡萄糖含量一、目的学会用Folin—Wu法测定血液中葡萄糖含量。
二、原理葡萄糖的半缩醛羟基具有还原性，在加热条件下可使碱性铜试剂中的Cu2+还原为黄色的氧化亚铜沉淀，而其本身被氧化为羧基。
氧化亚铜可使磷钼酸还原成蓝色的钼蓝，蓝色的深度与葡萄糖的浓度成正比，故可用比色法测定钼蓝的光吸收值来测定葡萄糖的浓度。
3Cu2O + 2MoO3 →6CuO + Mo2O3(氧化亚铜) （钼蓝）血糖即指血液中存在的葡萄糖。
由于血液中成分复杂，尤其有许多种蛋白质存在，它们对血糖的测定会产生干扰。
因此，目前常用钨酸法处理抗凝血来制备无蛋白滤液，然后用来测定无蛋白滤液中的葡萄糖含量。
Na2WO4+ H2SO4→H2WO4+ Na2SO4(钨酸钠) （钨酸）在测定过程中，由于空气中的氧对Cu2O会产生再氧化作用从而影响测定结果，因此实验中要采用特制的福林—吴宪血糖管——有一细颈，可以尽量减少与空气的接触。
（图23-1）1 2图23-1 血糖管和奥氏吸管1．（Folin-吴宪式）血糖管 2.奥氏吸管三、材料、试剂和器具（一）材料饥饿16小时的鸡或兔（二）试剂1、草酸钾（A.R）2、0.25%苯甲酸溶液3、10%钨酸钠溶液称取10g钨酸钠，用双蒸水溶解后定容至100ml。
4、1/3mol/L硫酸溶液5、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）称取1.000g无水葡萄糖，用苯甲酸水溶液溶解后定容至1000ml，其浓度为1mg/ml。
可长期保存使用。
使用时用蒸馏水稀释，配成0.1mg/ml的葡萄糖溶液。
6、碱性铜试剂分别称取40g无水碳酸钠、7.5g酒石酸、4.5g硫酸铜结晶，用蒸馏水溶解后混合，定容至1000ml。
本试剂于室温下可长期保存使用，若有沉淀产生，应过滤后再使用。
7、磷钼酸试剂称取70g钼酸、10g钨酸钠，量取10%氢氧化钠400ml及蒸馏水400ml，于烧杯中混合加热20~40min（以除去可能夹杂于钼酸中的氨），冷却后加入85%磷酸250ml，混匀后定溶至1000ml..（三）器具1、剪刀2、烧杯3、试管与试管架4、玻璃棒5、奥氏吸量管（见图23—1）6、血糖管（见图23—1）7、小漏斗8、可见光分光光度计9、水浴锅10、移液管11、电炉12、天平13、容量瓶四、操作步骤（一）制备无蛋白滤液1．杀鸡取血后立即按2g草酸钾/L血液的比例加入草酸钾，以制备抗凝血。
生物化学实验
实 验 目 的
1
掌握Folin-Wu法测定血糖含量的原理和方法
2
学会制备无蛋白血滤液
一、实验原理
无蛋白血滤液中的葡萄糖与碱性硫酸铜共热，Cu2+ 即被血滤液中的葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）， Cu2O又使钼酸试剂还原成低价的蓝色钼化合物（钼 蓝）。血滤液的糖含量和产生的Cu2O成正比， Cu2O的量与形成钼化合物的量成正比，可用比色法 测定。
蛋白质名称 白蛋白 α1-球蛋白 α2-球蛋白 β-球蛋白 γ-球蛋白 等电点 4.88 5.06 5.06 5.12 6.85-7.50 相对分子量 69000 200000 300000 90000-150000 156000-300000
二、试剂与设备
巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，0.075M）：巴比妥2.76g和 巴比妥钠15.4g溶于1000mL蒸馏水，pH校正后用； 染色液：氨基黑10B 0.5g，甲醇50mL，冰乙酸10mL，蒸馏 水40mL，混匀； 漂洗液：乙醇45mL，冰乙酸5mL，蒸馏水50mL，混匀；
血清 醋酸纤维薄膜 镊子 载玻片 电泳仪 电泳槽 点样管
实验 酵母RNA的提取及鉴定
实 验 目 的
1
掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法
2
掌握苔黑酚法鉴定RNA的原理和方法
一、实验原理
酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。RNA可溶 于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，由此可制 得粗RNA制品。 在酸性条件下，RNA分子中的核糖基转变成α-呋喃甲醛，后 者与苔黑酚（3,5-二羟甲苯）作用生成绿色复合物。可用比色 法定量。当核糖核酸浓度在10-100μg/mL范围内，其浓度与 吸光值呈线性关系。
生物化学实验--Folin-Wu法定量测定
•
•中国海洋大学生物基础实验教学中心生化与分子生物学实 验室
•一、目的要 求 • 掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理
和方法。
• 学会制备无蛋白血滤液。 • 掌握7200型可见分光光度计的使用方法
。
•
•中国海洋大学生物基础实验教学中心生化与分子生物学实 验室
二、实验原理
葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。其醛基具有还原性，
血糖
7200型分光光度 •
•中国海洋大学生物基础实验教学中心生化与分子生物学实 验室
四、实验试剂
• 1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）
•(1)1%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml 。
•(2)葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。
•
•中国海洋大学生物基础实验教学中心生化与分子生物学实 验室
血糖的测定方法
•
•无机化学法： Folin-Wu法，特异性差
•测 定方 法
•有机化学法：邻甲苯胺法、联苯胺法、氨基联苯 法
•
干扰因素多
•酶法：（1）己糖激酶法（HK）
•
（2）葡萄糖氧化酶法（GOD法）
•特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化 分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵
• 用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部 倒入，如滤液不清需重新过滤。每毫升无蛋白血滤 液相当于1/10ml全血。
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•中国海洋大学生物基础实验教学中心生化与分子生物学实 验室
2、血糖的定量测定：
• 取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸馏 水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸 管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
Folin-Wu法定量测定血糖的含量(精)
血糖含量的定量测定 (Folin-Wu 法一、目的1、掌握 Folin － Wu法测定血糖含量的原理和方法。
2、学会制备无蛋白血滤液。
3、掌握 7200 型可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。
其醛基拥有复原性，与碱性铜试剂混淆加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，，Cu2+即被葡萄糖复原成 Cu+（Cu2O）而积淀。
无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反响, Cu2O 又把酸性钼酸试剂（ Mo6+）复原成廉价的蓝色钼化合物—钼蓝。
血滤液中葡萄糖的含量与产生的 Cu2O成正比，而 Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。
可用比色法定量的测定。
3、实验仪器1、25mL血糖管×3 支；2、血糖管橡胶塞×3 个；3、1mL胖肚吸管×1 支；4、100mL锥形瓶×2 个；5、漏斗架×1 个；6、一般漏斗×2 个；7、水浴锅×1 个；8、电炉×1 个；9、移液管 1mL×2 支; 2mL ×3 支;5 mL ×2 支;10 mL×1 支 ; 10 、滤纸×1 盒；11、吸耳球×2 个；12、7200 型分光光度计×1 台 ;13、表面皿×1 个4、实验试剂1、标准葡萄糖溶液（ 0.1mg/ml ）(11%葡萄糖母液：称取 1.000g 葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。
(2 葡萄糖标准液：取 1.0ml 葡萄糖母液于100ml 容量瓶中，加蒸馏水定容。
2、碱性硫酸铜溶液A 液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠 13g 及碳酸氢钠 11g 溶于蒸馏水，稀释定容至1000ml.B 液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
临用时， A 液： B 液=9：1 混淆（体积比），混淆液于冰箱中保留（4℃）。
3、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100 毫升。
血糖定量
四、实验操作流程
无蛋白血滤液的制备： Ⅰ.无蛋白血滤液的制备： 无蛋白血滤液的制备 注：用奥氏吸管吸全血较困难，可用普通的1ml移液 管代替。 全血（已加抗凝剂）1ml 已加抗凝剂） 50ml三角瓶 三角瓶 摇匀 H2O 7ml 血液变为红色透明 摇匀 10%钨酸钠 钨酸钠1ml 0.33mol/L 钨酸钠 H2SO4 1ml---->充分沉淀 充分沉淀---->过滤 过滤---->滤 充分沉淀 过滤 滤
（2）碱性硫酸铜溶液 ）
A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g，碳酸氢钠11g溶于蒸馏水后，稀释至约700ml， 液 无水碳酸钠 ，酒石酸钠 ，碳酸氢钠 溶于蒸馏水后，稀释至约 ， 溶于蒸馏水后 待溶液清晰后再稀释至1000ml。 待溶液清晰后再稀释至 。 B液：晶体硫酸铜 ，溶于蒸馏水并稀释至 液 晶体硫酸铜5g，溶于蒸馏水并稀释至100ml，加浓硫酸数滴作保护剂。 ，加浓硫酸数滴作保护剂。 临用时， 液至50ml，摇匀。并冰箱内可保存。 临用时，取A液25ml，B液5ml，混合后，再加 液至 液 ， 液 ，混合后，再加A液至 ，摇匀。并冰箱内可保存。
（4） 10%钨酸钠溶液： 钨酸钠溶液： ） 钨酸钠溶液
钨酸钠10g溶于蒸馏水并稀释至 溶于蒸馏水并稀释至100ml。 钨酸钠 溶于蒸馏水并稀释至 。
硫酸溶液： （5） 0.33mol/L硫酸溶液： ） 硫酸溶液
蒸馏水中加入1ml浓硫酸。 浓硫酸。 于53ml蒸馏水中加入 蒸馏水中加入 浓硫酸
：（草酸钠或草酸钾 （6）抗凝剂：（草酸钠或草酸钾） ）抗凝剂：（草酸钠或草酸钾）
六、注意事项
1.取血液时量要准确。由移液管放出血液的速 取血液时量要准确。 取血液时量要准确 度要慢，以尽量减少黏附在管壁上的血液， 度要慢，以尽量减少黏附在管壁上的血液，一般放 血液所用的时间应不少于1min。 出1ml血液所用的时间应不少于 血液所用的时间应不少于 。 2.如果血沉淀放置后不变为棕红色或重滤后仍 如果血沉淀放置后不变为棕红色或重滤后仍 混浊，可在钨酸与血混合液中加入10%硫酸 滴， 硫酸1-2滴 混浊，可在钨酸与血混合液中加入 硫酸 等变为暗棕红色后再滤。(沉淀由鲜红变为暗棕红色， 等变为暗棕红色后再滤。 沉淀由鲜红变为暗棕红色， 沉淀由鲜红变为暗棕红色 是因为钨酸钠与硫酸作用生成钨酸，在适当酸度时， 是因为钨酸钠与硫酸作用生成钨酸，在适当酸度时， 血红蛋白变性、沉淀。 血红蛋白变性、沉淀。) 3.过滤时盖上表面皿防水分蒸发。 过滤时盖上表面皿防水分蒸发。 过滤时盖上表面皿防水分蒸发
folin吴法测血糖实验报告
folin吴法测血糖实验报告Folin吴法测血糖实验报告一、实验目的掌握 Folin吴法测定血糖的原理和方法，熟悉实验操作过程，准确测定血液中葡萄糖的含量。
二、实验原理Folin吴法是一种常用的测定血糖的化学方法。
其原理是葡萄糖在碱性溶液中加热，能将斐林试剂中的铜离子还原为氧化亚铜沉淀。
然后用酸性的三价铁离子将氧化亚铜氧化为二价铜离子，同时三价铁离子被还原为亚铁离子。
亚铁离子与亚铁氰化钾反应生成普鲁士蓝，其颜色的深浅与葡萄糖的含量成正比。
通过比色法测定溶液的吸光度，即可计算出血糖的浓度。
三、实验材料与设备1、材料新鲜血液样本标准葡萄糖溶液斐林试剂（甲液：硫酸铜溶液；乙液：氢氧化钠与酒石酸钾钠溶液）三氯化铁溶液亚铁氰化钾溶液蒸馏水2、设备分光光度计恒温水浴锅移液器容量瓶试管刻度吸管四、实验步骤1、标准曲线的绘制准备一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液，浓度分别为 0、01、02、03、04、05mg/ml。
向每支试管中加入 1ml 相应浓度的标准葡萄糖溶液，再加入 1ml 斐林试剂甲液和 1ml 斐林试剂乙液，摇匀后在沸水浴中加热 10 分钟。
取出试管，迅速冷却后加入 2ml 三氯化铁溶液和 05ml 亚铁氰化钾溶液，摇匀。
使用分光光度计，以蒸馏水为空白对照，在波长 620nm 处测定各管溶液的吸光度。
以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品测定吸取 01ml 血液样本，用蒸馏水稀释至 10ml，摇匀。
吸取 1ml 稀释后的血液样本，按照与绘制标准曲线相同的步骤进行操作，测定吸光度。
五、实验结果与计算1、实验结果标准曲线的相关数据如下：｜葡萄糖浓度（mg/ml）｜吸光度|｜｜｜｜0|0|｜01|012|｜02|025|｜03|038|｜04|051|｜05|065|样品测定的吸光度为 042。
2、计算根据标准曲线，找到吸光度为 042 所对应的葡萄糖浓度。
由于血液样本进行了 100 倍稀释，所以计算出血糖浓度的实际值。
生化实验-血糖测定
葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理
葡萄糖氧化酶
（1）葡萄糖＋O2＋H2O （GOD） 葡萄糖酸＋H2O2
（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚
过氧化物酶 （POD）
H2O ＋红色醌式物质
Trinder反应
相对血糖浓度
光吸收法测定
505nm
分光光度计的原理
生物化学的四大研究技术：
◈分光光度技术
光的波粒二象性 物质的光吸收性
邻-甲苯胺法：该法涉及强酸、加热等反应条件，不 便于大规模检测，且使用的试剂具有毒性，临床和 科研上已很少采用。
思考题
1、为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖 参考值存在差异？
葡萄糖氧化酶法： 3.9~6.1mmol/L Folin-Wu法： 4.4~6.7mmol/L 邻-甲苯胺法： 3.9~6.1mmol/L
实验四
血糖的测定
血糖及血糖水平的概念：
血糖：指血液中的单糖：葡萄糖 血糖水平：血浆中葡萄糖浓度 血糖总维持在恒定水平： 3.9~6.7mmol/L
调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质 激素和肾上腺素。
血糖水平异常：⑴高血糖及糖尿病；⑵低血糖
测定血糖的意义
临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾 病的主要依据。
◈电泳技术
分光光度计的原理
◈层析技术
◈离心技术
分光光度计的工作原理
朗伯-比尔定律
朗伯定律：A=k1L 比尔定律：A=k2C 朗伯-比尔定律：如同时考虑液
层厚度和溶液浓度对吸光度的 影响，则吸光度与溶质的浓度 和溶液的厚度的乘积成正比。
A=KLC
朗伯-比尔定律应用
A标=KC标L A样=KC样L
评价
结果较可靠、但邻-甲苯胺须蒸馏后使用，有毒性。
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血糖含量的定量测定(Folin-Wu法
一、目的
1、掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。
2、学会制备无蛋白血滤液。
3、掌握7200型可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理
葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。
其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。
无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物—钼蓝。
血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。
可用比色法定量的测定。
3、实验仪器
1、25mL血糖管×3支；
2、血糖管橡胶塞×3个；
3、1mL胖肚吸管×1支；
4、100mL锥形瓶×2个；
5、漏斗架×1个；
6、普通漏斗×2个；
7、水浴锅×1个；
8、电炉×1个；
9、移液管 1mL×2支; 2mL×3支;5 mL×2支;
10 mL×1支; 10、滤纸×1盒；
11、吸耳球×2个；
12、7200型分光光度计×1台;
13、表面皿×1个
4、实验试剂
1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）
(11%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。
(2葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。
2、碱性硫酸铜溶液
A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g及碳酸氢钠11g溶于蒸馏水，稀释定容至1000ml.
B液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
临用时，A液：B液=9：1混合（体积比），混合液于冰箱中保存（4℃）。
3、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。
4、0.33mol/LH2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。
5、酸性钼酸盐溶液：
称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml 的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀，静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。
置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。
然后加99%醋酸75ml，摇匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。
5、实验步骤
1、无蛋白血滤液的制备：
氏吸管吸取全血（已加抗凝剂）1ml,缓缓放入100ml锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。
再加0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀，放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可再加0.33mol/L H2SO41-2滴）。
用干滤纸过滤。
先倾入少许，待滤纸湿润后在全部倒入，如滤液不清需重新过滤。
每毫升无蛋白血滤液相当于1/10ml全血。
2、血糖的定量测定：
1、取25ml的血糖管3支，编号。
第一支血糖管中加入2ml蒸馏水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
2、然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液，同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后,勿摇动，各加4ml酸性钼酸盐溶液。
3、一分钟后，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用7200分光光度计在420nm波长处比色，以空白管调节零点。
六、实验结果
样品A1（吸光度）标准液A0
（吸光度）
水
（吸光度）
10.1690.1300.000 20.1900.1350.000 30.1940.1280.000平均值0.1840.1310.000
m=A1/A2*C*10*100
m代表100ml全血中含血糖毫克数
C0代表标准液葡萄糖含量（0.1mg/ml）
A1代表样品液光吸收值
A0代表标准液光吸收值
所以可得出m=0.184/0.131*0.1*10*100=140.4580153···约等于140.458mg。
7、实验分析
1、实验过程中哪些操作可能影响实验结果的准确性？
在沉淀不完全时过滤，吸管中放出血液太快使大量血液黏在吸管内壁，或有亚铜离子氧化成铜离子，比色测量时也可能会出现误差。
2、实验中，血糖管有什么作用？
可减少亚铜离子与空气的接触，防止氧化成铜离子。
3、实验过程中，为什么要用流水冷却加入碱性硫酸铜液反应后的血糖管？
流水冷却比较稳定，可以迅速降温。
如不冷却会继续反应造成误差。