Folin-Wu法定量测定血糖的含量(精)
血糖的测定Folin吴法
原理
无蛋白血滤液 葡萄糖
碱性铜试剂 磷钼酸试剂
Cu(OH) 2 磷钼酸
原理
葡萄糖 ＋ Cu(OH)2
Cu2O↓
Cu2O ＋ 磷钼酸
钼兰
原理
钼兰的蓝色深浅与葡萄糖的含量成正比 用比色法可测定空
准
定
白
管
管
管
已知浓度葡 萄糖溶液 0.025mg/ ml
未知浓度 无蛋白血 滤液
蒸馏水
（mg/dl） 空腹血糖
临床意义
正常
怀疑
糠尿病
＜110 110-139 ≥140
餐后两小时血糖 ＜140 140-199 ≥200
服糖后两小时糖 ＜140 140-199 ≥200
注意事项
测定结果比实际血糖含量高，因为 无蛋白血滤液中，除含有葡萄糖外， 尚有微量的其他还原物质 ,如Vit C、 尿酸等。
实验八 血糖的测定
Folin-吴法
Folin-吴法
吴宪：我国著名生物化学家和营养学家 1912 年 美国麻省理工学院 学习化学 1917 年 哈佛大学医学院 师从美国著 名生物化学家福林(Otto Folin）教授 进行血液化学研究
Folin-吴法
研究期间改进血糖定量分析方法 吴宪改进的血糖测定法，为后来的胰岛 素发现奠定了基础
中国海洋大学资料生物化学课件实验实验 Folin-Wu法定量测定 (2)
2、血糖的定量测定：
取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸 馏水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液； 用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶
液，同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷
却后,勿摇动，各加4ml酸性钼酸盐溶液。
式中: m=100ml全血中含血糖毫克数 ; C0=标准液葡萄糖含量 （0.1mg/ml） A1=样品液光吸收值 ; A0=标准液光吸收值
0.1：1ml无蛋白血溶液相对于0.1ml全血
七、思考题
实验过程中那些操作可能影响实验结果的
准确性？
实验中，血糖管有什么作用？ 实验过程中，为什么要用流水冷却加入碱
无蛋白血滤液中的葡萄糖和碱性硫酸铜溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物— 钼蓝 。 Cu2O+酸性钼酸试剂 蓝色钼化合物 OD420比色
血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量 与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。三、实Leabharlann 仪器性硫酸铜液反应后的血糖管？
注意事项
1.加硫酸、钨酸钠时，要边加边摇匀 2.沉淀由鲜红变为暗棕色，是因钨酸钠与硫酸生成钨酸，在 适当酸度时，使血红蛋白变性沉淀，如果沉淀不变暗棕色或 重新过滤后仍混浊，是因为血液中所加抗凝剂过多，可以加 入10％硫酸1-2滴，待暗棕色后再过滤。 3.用定量滤纸过滤后应该得到完全澄清无色之无蛋白血滤液。 如果得到仍带有红色的血滤液则说明蛋白质未被完全去除。
五、实验步骤
• 1、无蛋白血滤液的制备：
• 用奥氏吸管吸取全血（已加抗凝剂） 1ml, 缓缓放入 100ml 锥形瓶中，加蒸馏水 7ml ，摇匀，溶血后（血 液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。 • 再加0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀， 放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可再 加0.33mol/L H2SO41-2滴）。 • 用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部 倒入，如滤液不清需重新过滤。每毫升无蛋白血滤 液相当于1/10ml全血。
folin吴法测血糖实验报告
folin吴法测血糖实验报告一、实验目的血糖的测定在医学诊断和糖尿病的监测中具有重要意义。
本实验旨在通过 folin 吴法测定血糖浓度，掌握该实验的原理、操作步骤及注意事项，并对实验结果进行分析和讨论。
二、实验原理folin 吴法是一种常用的血糖测定方法。
其原理基于葡萄糖在碱性溶液中与硫酸铜反应生成氧化亚铜，氧化亚铜与磷钼酸试剂反应生成蓝色的钼蓝。
颜色的深浅与葡萄糖的含量成正比，通过比色法可测定血糖浓度。
三、实验材料1、仪器分光光度计、离心机、恒温水浴锅、移液器、试管、刻度吸管等。
2、试剂（1）10%钨酸钠溶液（2）033mol/L 硫酸溶液（3）碱性硫酸铜溶液（4）磷钼酸试剂3、样本待测血液样本四、实验步骤1、样本处理（1）取适量待测血液，加入 10%钨酸钠溶液和 033mol/L 硫酸溶液，摇匀后离心，取上清液备用。
2、反应（1）取两支试管，分别标记为测定管和空白管。
（2）向测定管中加入处理后的上清液和碱性硫酸铜溶液，混匀后置于沸水浴中加热 8 分钟，取出后迅速冷却。
（3）向空白管中加入蒸馏水和碱性硫酸铜溶液，同样进行沸水浴加热和冷却处理。
3、显色（1）向测定管和空白管中分别加入磷钼酸试剂，充分混匀。
4、比色测定（1）使用分光光度计，以空白管调零，在波长 620nm 处测定测定管的吸光度值。
五、实验结果根据标准曲线或计算公式，将测定管的吸光度值转换为血糖浓度。
六、注意事项1、样本采集和处理要严格按照操作规程进行，避免溶血和污染。
2、试剂的配制要准确，保存条件要符合要求，避免失效。
3、反应过程中的温度和时间要控制准确，以保证反应的充分进行。
4、比色测定时要注意仪器的校准和调零，确保结果的准确性。
七、实验讨论1、实验结果的准确性分析可能影响实验结果准确性的因素，如样本采集、处理和保存不当，试剂质量问题，操作误差等，并提出相应的改进措施。
2、与其他血糖测定方法的比较简要介绍其他常见的血糖测定方法，如葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法等，并比较它们与 folin 吴法的优缺点。
实验二血糖定量测定
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分光光度技术
有色溶液对光线有选择性的吸收作用，不同物质由 于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同， 因此，每种物质都具有其特异的吸收光谱。有些无色溶 液虽对可见光无吸收作用，但所含物质可以吸收特定波 长的紫外线或红外线。分光光度法是利用物质特有的吸 收光谱来鉴别物质或测定其含量的技术。使用的仪器则 称为分光光度计 。
Cu2+( CuSO4 ) 还原糖 Cu2O +酸性钼酸试剂
Cu+(Cu2O) 蓝色钼化合物
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测定血糖含量时必须先除去其中的蛋白质，制成 无蛋白滤液，再行检验。向抗凝血中加入钨酸钠、 硫酸锌、氢氧化锌及三氯乙酸等均可制得无蛋白滤 液，现常用钨酸法。钨酸钠与硫酸作用，生成钨酸， 可使血红蛋白等变性、凝固、沉淀，离心或过滤除 去沉淀，即得无蛋白血滤液，此种滤液还适用于测 定非蛋白氮、肌酸和尿酸等
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754型操作规程
1. 开启电源，用可见光测定时打开钨灯即可，如使用紫外测定则还需打开氘灯， 指标灯亮，使仪器预热20min以上。
2. 按“Mod”键选择测试方式，使开关置于"T"。 3. 打开样品室盖（光门自动关闭），按"0％T"键进行机械调零，使数字显示为
２.０
２.０
２.０
混匀，室温放置２min，以蒸馏水定容至２５ml，混匀，倒入比色杯， 用７５４型分光光度计４４０nm波长比色（先以空白管调节零点，继测标准 管及样品管）。记录各管吸光度值。
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３、结果计算
根据比色结果计算每１００ml血液中所含葡萄糖的毫克数： １００ml全血含血糖毫克数＝OD1/OD2×C×10×100 其中C＝标准葡萄糖含量（mg/ml）； OD1＝样品液光密度 OD2＝标准液光密度
中国海洋大学资料生物化学课件实验生物化学实验教案 (2)
操作： 1、双缩脲的反应：取少量尿素晶体放在干
燥的试管中，微火加热使其熔化成液体， 此时有氨气放出，可用湿润的试纸检验， 至液体重新结晶出现白色固体时， 停止加 热，冷却。然后加10%NaOH溶液1ml，摇匀， 再加2-4滴1% CuSO4溶液，混匀，观察有无 紫色出现。 2、蛋白反应：取蛋白液 1ml，加10%NaOH溶 液 1ml ，摇匀，再加 2-4 滴 1% CuSO4 溶液， 混匀，观察有无紫色出现。
（四）
茚三酮反应
原理：蛋白质与茚三酮共热，产生兰紫色的还原茚三酮、茚 三酮和氨的缩合物。此反应为一切蛋白质及a-氨基酸所共 有。亚氨基酸（脯氨酸和羟脯氨酸）与茚三酮反应呈黄色， 含有氨基的其他物质（氨、β-Ala和许多一级胺）亦呈此 反应。反应灵敏度达1:1500000(pH5-7)，广泛用于氨基酸 定量测定。
匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。
五、实验步骤
1、无蛋白血滤液的制备： •用奥氏吸管吸取全血（已加抗凝剂—草酸钠）1ml,缓缓
放入50ml 锥形瓶中，加蒸馏水 7ml ，摇匀，溶血后（血
液 变 为 红 色 透 明 ） 加 10% 钨 酸 钠 1ml ， 摇 匀 。 再 加 0.33mol/LH2SO41ml ，边加边摇，加毕充分摇匀，防止
温下乙醇、丙酮、中性盐硫酸胺等。
不可逆的沉淀反应：内部结构、空间构象遭到破坏，失去天然特性， 不能恢复溶解状态。重金属、生物碱试剂、过酸碱、加热、超声波、
有机溶剂等。
二、实验仪器
1、移液管 2、吸管 3、试管 4、电炉
三、实验试剂
1 、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释 10-20 倍，3-4 层纱布过滤，滤液 放在冰箱里冷藏备用。 2、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。 3、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。 4、95%乙醇。 5、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml。 6、硫酸铜溶液：1g CuSO4晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml。 7、氯化钠晶体。 8、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml。 9、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。 10、1%醋酸溶液。
生物化学实验--Folin-Wu法定量测定
2、血糖的定量测定：
• 取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸馏
水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸 管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。 • 然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液， 同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后,勿摇
• 掌握7200型可见分光光度计的使用方
法。
二、实验原理
葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。其醛基具有还原性， 与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧 基，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。 Cu2+( CuSO4 )+葡萄糖 Cu+ （Cu2O）
无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合 物—钼蓝 。 Cu2O+酸性钼酸试剂 蓝色钼化合物 OD420比色
血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量 与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。
三、实验仪器
1、25mL血糖管×3支； 3、沸水浴小锅×1个； 5、电炉×1个； 7、吸耳球×2个； 2、血糖管橡胶塞×3个； 4、100mL锥形瓶×2个； 6、滤纸×1盒； 8、7200型分光光度计×1台;
四、实验试剂
5、酸性钼酸盐溶液： • 称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml 的容量瓶中，加蒸 馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀， 静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入 225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。 • 置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀， 用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。
18生物化学实验吴宪Folin法测定血糖含量
18生物化学实验--吴宪-Folin法测定血糖含量标题：18生物化学实验——吴宪-Folin法测定血糖含量一、实验目的1.掌握吴宪-Folin法测定血糖含量的原理和方法。
2.学习使用分光光度计测量样品吸光度。
3.了解血糖的生理意义及其调节机制。
二、实验原理吴宪-Folin法是一种利用邻甲苯胺和硫酸铜反应生成紫红色络合物的原理，通过测量该络合物在特定波长下的吸光度来测定血糖含量的方法。
由于葡萄糖分子中含有醛基，因此可以利用这一特性进行测定。
本实验采用吴宪-Folin法进行血糖含量的测定。
三、实验步骤1.样品准备：收集受试者在禁食12小时后的静脉血，分离血清备用。
2.试剂准备：将邻甲苯胺、硫酸铜、碳酸钠等试剂按照配方准确称量，溶解定容，现配现用。
3.测定步骤：将试剂和样品按照规定比例混合，在规定温度下静置一段时间，用分光光度计在特定波长下测量吸光度，记录数据。
4.数据处理：根据吸光度和标准曲线计算血糖浓度。
四、实验结果与数据分析1.数据记录：记录受试者血糖吸光度数据（表1）。
表1：血糖吸光度数据记录表表2：血糖浓度计算表3.数据统计：对所有受试者的血糖浓度进行平均值和标准差统计（表3）。
表3：血糖浓度统计表平均值：x̄= ΣC/n (mg/dl) 标准差：s= [Σ(C-x̄)²/n]½五、结论总结与讨论根据实验数据，我们得出以下结论：1.所有受试者的血糖浓度均处于正常范围内。
这表明受试者在禁食12小时后的血糖水平处于生理正常范围。
这一结果与我们所知的人体在禁食状态下的血糖调节机制相符。
当人体处于禁食状态时，胰高血糖素分泌增加，促进肝糖原分解，使血糖水平维持在正常范围。
2.实验结果存在一定差异。
这可能与个体差异、采血时间、实验操作等因素有关。
为了获得更为准确的数据，需要进一步改进实验方法，提高操作精度和标准化程度。
此外，对于不同个体之间的比较，应考虑个体差异对实验结果的影响。
3.吴宪-Folin法是一种灵敏度高、操作简便的血糖测定方法。
2 血糖的定量测定(Folin-Wu法)
中国海洋大学实验报告姓名庞裕智专业年级生命基地班2011 题目血糖的定量测定(Folin-Wu法)学号************科目生物化学实验时间周一90节同组者田特一、实验目的1、掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。
2、学会制备无蛋白血滤液。
3、掌握7200型可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。
其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。
Cu2+(CuSO4) + 葡萄糖 Cu+ （Cu2O）无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物——钼蓝。
Cu2O+酸性钼酸试剂蓝色钼化合物 OD420比色血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。
可用比色法定量的测定。
三、实验仪器1、25mL血糖管×3支；2、血糖管橡胶塞×3个；3、1mL胖肚吸管×1支；4、100mL锥形瓶×2个；5、漏斗架×1个；6、普通漏斗×2个；7、水浴锅×1个；8、电炉×1个；9、移液管1mL×2支；2mL×3支；5mL×2支；10mL×1支；10、滤纸×1盒；11、吸耳球×2个；12、7200型分光光度计×1台；13、表面皿×1个。
四、实验试剂1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）(1)1%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。
(2)葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。
2、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。
3、0.33mol/L H2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。
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血糖含量的定量测定(Folin-Wu法
一、目的
1、掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。
2、学会制备无蛋白血滤液。
3、掌握7200型可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理
葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。
其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。
无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物—钼蓝。
血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。
可用比色法定量的测定。
3、实验仪器
1、25mL血糖管×3支；
2、血糖管橡胶塞×3个；
3、1mL胖肚吸管×1支；
4、100mL锥形瓶×2个；
5、漏斗架×1个；
6、普通漏斗×2个；
7、水浴锅×1个；
8、电炉×1个；
9、移液管 1mL×2支; 2mL×3支;5 mL×2支;
10 mL×1支; 10、滤纸×1盒；
11、吸耳球×2个；
12、7200型分光光度计×1台;
13、表面皿×1个
4、实验试剂
1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）
(11%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。
(2葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。
2、碱性硫酸铜溶液
A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g及碳酸氢钠11g溶于蒸馏水，稀释定容至1000ml.
B液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
临用时，A液：B液=9：1混合（体积比），混合液于冰箱中保存（4℃）。
3、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。
4、0.33mol/LH2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。
5、酸性钼酸盐溶液：
称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml 的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀，静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。
置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。
然后加99%醋酸75ml，摇匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。
5、实验步骤
1、无蛋白血滤液的制备：
氏吸管吸取全血（已加抗凝剂）1ml,缓缓放入100ml锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。
再加0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀，放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可再加0.33mol/L H2SO41-2滴）。
用干滤纸过滤。
先倾入少许，待滤纸湿润后在全部倒入，如滤液不清需重新过滤。
每毫升无蛋白血滤液相当于1/10ml全血。
2、血糖的定量测定：
1、取25ml的血糖管3支，编号。
第一支血糖管中加入2ml蒸馏水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
2、然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液，同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后,勿摇动，各加4ml酸性钼酸盐溶液。
3、一分钟后，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用7200分光光度计在420nm波长处比色，以空白管调节零点。
六、实验结果
样品A1（吸光度）标准液A0
（吸光度）
水
（吸光度）
10.1690.1300.000 20.1900.1350.000 30.1940.1280.000平均值0.1840.1310.000
m=A1/A2*C*10*100
m代表100ml全血中含血糖毫克数
C0代表标准液葡萄糖含量（0.1mg/ml）
A1代表样品液光吸收值
A0代表标准液光吸收值
所以可得出m=0.184/0.131*0.1*10*100=140.4580153···约等于140.458mg。
7、实验分析
1、实验过程中哪些操作可能影响实验结果的准确性？
在沉淀不完全时过滤，吸管中放出血液太快使大量血液黏在吸管内壁，或有亚铜离子氧化成铜离子，比色测量时也可能会出现误差。
2、实验中，血糖管有什么作用？
可减少亚铜离子与空气的接触，防止氧化成铜离子。
3、实验过程中，为什么要用流水冷却加入碱性硫酸铜液反应后的血糖管？
流水冷却比较稳定，可以迅速降温。
如不冷却会继续反应造成误差。