催化材料对病毒吸附及灭活作用特性的研究
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为与常见的一般吸附剂进行比较，我们也对1# 分子筛的吸附性能进行了研究，发现其对 $"# 分 子有一定的吸附，但作用较弱。同时比较了水洗脱
及甲醇6水（体积比为)=)）溶液洗脱的效果，发现两 种洗脱方法的 效 果 相 近（ 见 图 +），因 此 对 所 有 催 化 材料的 $"#吸附能力评价均选用水洗脱。
催化剂进行快速筛选的方法。由于拟发展的催化材
料是广谱性的吸附、氧化材料，初步可考虑选用构成
O:XO病毒的 XC: 及与 O:XO病毒中#个糖蛋白 相近的糖蛋白作为催化材料快速筛选的评价对象。
但由于糖蛋白的分析、检测方法的建立以及 XC: 的合成均需要较长的时间，也存在一定难度，而且我
收稿日期：!""#$"%$!& 作者简介：赵春霞，女，’()&年生，博士研究生* 通讯联系人：许国旺，男，博士生导师，研究员，+,-：（"&’’）#.(#&"#，/$012-：3245&"!!012-*3-566*-7*47*
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第(期
赵春霞等：催化材料对病毒吸附及灭活作用特性的研究
·++(·
们的最终目的是筛选非特异性的高效催化材料，因
此本 实 验 选 用 较 !"# 更 稳 定 的 脱 氧 核 糖 核 酸 （$"#）分子作探针，对新合成催化剂［%］的吸附、抗
wk.baidu.com水性能进行研究，筛选出不怕水且有较好吸附性能
的催化剂进行下一轮的细胞毒性和病毒杀灭实验。
对催化材料的吸附时间实验结果表明，大部分
吸附性能强的催化材料在)*/2Q内即可将 $"#完 全吸附（见图(），少部分需要近+*/2Q才能完全吸 附（见图-）；对 $"#分子吸附性能较差的催化材料 在+*/2Q后，其洗脱液中仍然含有大量 $"#分子。
·77E·
色
谱
第7;卷
图 ! 玻璃微球的 "#$洗脱液的毛细管电泳图
将上述的 9:! 产物用去离子水稀释(*倍后作 为 $"# 分子原 液。称 取 *?+"*?(J 催 化 材 料，并 将其均匀铺在表面皿上。取1*!E的 $"# 分子原 液喷 洒 到 催 化 材 料 表 面 并 调 匀，分 别 在 )*，+* /2Q 后用水超声洗脱，离心过滤，取上清液进行分析。
在()*型 $"#全自动遗传分析仪上进行电泳 分析，采用激光诱导荧光检测器检测。筛分介质为 短链线性聚丙烯酰胺凝胶［)*］，涂层毛细管柱［))（］-, ./01*!/2343），进样时间和进样电压分别为1"
炎的传播。共评价了(#种新合成的催化剂，发现两种催化材料对病毒具有杀灭作用。 关键词：毛细管电泳；副流感病毒；核酸；催化材料；非典型性肺炎
中图分类号：8.%9
文献标识码：:
文章编号：’"""$9)’#（!""#）"#$"!!!$"&
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1*M和 )1VW，分离温 度 为 1* U，分 离 电 压 为 )1 VW。 !"( 催化材料对细胞毒性的实验
本实验所用的细胞株为白血病耐药细胞株
（G15+／#）和白血病敏感细胞株（G15+／A）。分别将 G15+／# 和 G15+／A 制成 +0)*1个／/E 和 )0)*1 个／/E的细胞悬液。每种催化材料均制成(个浓度 梯度 的 溶 液：原 液（)*** /J／E），)／)* 原 液（)** /J／E），)／)**原液（)*/J／E）。取各催化材料样品 )**!E和细胞悬液)**!E 加至>5孔细胞培养板 中，以催化材料的(个剂量（绝对量）)**，)*，)!J来 确定其 对 细 胞 毒 性 的 范 围。 将 该 细 胞 培 养 板 放 入
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（’*中国科学院大连化学物理研究所，辽宁 大连 ’’."!#；!*大连医科大学，辽宁 大连 ’’."!#）
摘要：以核酸分子及普通病毒作为探针和模拟对象，进行了催化材料吸附、灭活副流感病毒的研究，旨在筛选出对
病毒有过滤、吸附及灭活作用的高效非特异性催化材料，以应用于病毒的各种防护设施以及有效控制非典型性肺
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图 > 吸附性能较强的催化材料（$?@8!A）的 "#$ 洗脱液的毛细管电泳图
:K+ 孵箱中孵育+-X，显微镜下观察细胞的形态。 !") 催化材料的抗病毒检验
称 取 催 化 材 料 )J 于 无 菌 瓶 中，加 病 毒 液（)= )+%*）*?) /E 于 室 温 下 混 合 作 用 (* /2Q，每 )* /2Q振荡+/2Q，共操作(次；然后加入+/E无菌生 理盐水，立即混匀振荡+/2Q，以)***L／/2Q的速率 离心1 /2Q。 吸 取 洗 脱 病 毒 液 进 行 血 凝 试 验，同 时 吸取*?)/E 稀释)**倍后，取该稀释液*3)/E 接 种（尿囊腔接种）>"))日龄鸡胚，置于(, U孵箱中 孵育,+X后收集尿液测病毒血凝效价，并与培养前 的血凝效价进行比较。
;<:8=>?7@21’，ABCDE27FG,7’，H:CDI27F’，IBJ;>K7F027’，;<:CD;>?KL17!，A:I,2’，MJI,2’， NBH?,’，OJC=>,7F-27’，<:C M2?G,7’，=</C H17’，NJ;>,7527F’，AB:8O>1KP?7’， ;</CD=K7F-K7F!，;<:8M27P2,’，QJ M?7R?’，IBJSK’，T8CD <K7FG,2’， U:CD=>17F’，H/V,7’，IBJO>K?@27’，<JD17F’，IBJ H,’，;<:CD+1K’， <J:CDM217FW17F’，S:8M27>,’，MJ D?KG17F’
隔、吸附和 灭 活 的 催 化 材 料 及 相 关 作 用 机 制 ”的 研
究，利用特制的催化材料，研究其对核酸分子、副流
感病毒的吸附及灭活作用，以期将该催化材料进一
步应用于O:XO病毒的各种防护设施以及有效地控 制O:XO的传播。
O:XO病毒主要是由近#万个碱基组成的核糖 核 酸（XC:）和 # 个 糖 蛋 白 组 成 的 蛋 白 外 壳 构 成［’")］。由于直接使用病 毒 评 价 催 化 材 料 的 过 滤、 吸附及灭活性能的周期较长，因此首先要建立可对
! 实验部分
!"! 仪器和试剂 #&’()*型 $"# 全自动遗传分析仪、+,**型
$"# 扩增仪，购 自 美 国 应 用 生 物 系 统（#&’）公 司； 超速低温离心机，购自美国科峻仪器公司；-,./0 1*!/2343石英毛细管柱，河北永年光导纤维厂产 品。1# 分子筛、5*"%* 目玻璃微球，购自天津化学 试剂二厂；商品化分离胶、分析缓冲液（(6羟甲基氨 基甲烷6硼酸6乙二胺四乙酸钠，7&8），购自 #&’公 司；聚合酶链反应（9:!）缓冲液、7;<$"# 聚合酶、 脱氧核苷酸（4"79）混合物、荧光标记 9:! 引物，购 自大连宝生物（工程）有限公司；副流感病毒液（按) =)+%*（体积比）的比例稀释病毒原液获得）、鸡胚（> "))日龄）、*?1@鸡红细胞，由大连医科大学提供。 >(种催化材料样品（#A:)"#A:5*，$A#)"$A#-， #&6)"#&61，#&6)6)，#&6+6)，#&6,，#&6%，#&616+， B!)"B!(，C#)" C#1，D#)"D#1，E9)，EF， GHI*>6)#，GH*>6)，#J／A2K+，活性炭）由中国科学院 大连化学物理研究所催化实验室提供。
# 结果与讨论
#"! %&’分子吸附实验结果 考虑到研制出的催化材料的使用环境，我们认
为：一个有前途的新催化材料，应该能吸附、杀灭病
毒，且不怕水。为此，要对新研制的催化材料在含水
环境中的吸附性能进行研究。首先用5*"%*目玻 璃微球作为对照。结果表明，未经纯化处理的玻璃
微球对 $"# 分子有少量吸附，经过乙醇和水清洗 的玻璃微球对 $"#分子无吸附（图)），这也说明所 建立的 方 法 可 以 用 于 催 化 材 料 的 $"# 吸 附 能 力 评价。
L,Y52L16KLWYW73LK0,（O:XO）
非典型性肺炎（16W5241-57,?0K721）又名严重急 性呼 吸 系 统 综 合 征（Y,Z,L,14?6,L,Y52L16KLWYW7$ 3LK0,，O:XO）［’")］。当前，O:XO 的流行 是 人 类 社 会面临的又一重大灾难。为了预防 O:XO，保障人 类的安全 与 健 康，我 们 开 展 了“ 用 于 呼 吸 道 病 毒 阻
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色
谱
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催化材料对病毒吸附及灭活作用特性的研究
赵春霞’， 明平文’， 杨 凌’， 刘中民’， 张卓然!， 马 磊’， 许 磊’， 齐 越’， 孙承林’， 韩秀文’， 陈 严’， 曲振平’， 缪少军’， 郑丛龙!， 赵欣捷’， 杜逊甫’， 刘 波’， 孔宏伟’， 王 畅’， 叶 芬’， 刘守新’， 胡 刚’， 刘 页’， 张 涛’， 黄向阳’， 包信和’， 许国旺’
!"# 聚合酶链反应 本实验所用的 $"# 分子为 G6L;M基因［>］第一
外显子中一段长为+))NO的 $"# 片段，由荧光（56 P#C）标记的引物经 9:! 扩增而成。9:! 反应体 积为 1*!E，包 括 )!E 模 板 $"#（)**QJ）、1!E 9:! 缓冲液、-!E4"79 混合物、)?1R 7;<$"# 聚合 酶、9:! 引 物 各 +1O/ST及 适 量 去 离 子 水。 9:!反应条件为>5 U下预变性1/2Q，然后在>U下变性)/2Q，1* U下退火)/2Q，,+ U下延伸) /2Q；如 此 循 环 (1 个 周 期 后，在 ,+ U 下 再 延 伸 , /2Q，在- U条件下放置。 !"$ 催化材料的 %&’分子吸附实验
及甲醇6水（体积比为)=)）溶液洗脱的效果，发现两 种洗脱方法的 效 果 相 近（ 见 图 +），因 此 对 所 有 催 化 材料的 $"#吸附能力评价均选用水洗脱。
催化剂进行快速筛选的方法。由于拟发展的催化材
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但由于糖蛋白的分析、检测方法的建立以及 XC: 的合成均需要较长的时间，也存在一定难度，而且我
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吸附性能强的催化材料在)*/2Q内即可将 $"#完 全吸附（见图(），少部分需要近+*/2Q才能完全吸 附（见图-）；对 $"#分子吸附性能较差的催化材料 在+*/2Q后，其洗脱液中仍然含有大量 $"#分子。
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图 ! 玻璃微球的 "#$洗脱液的毛细管电泳图
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本实验所用的细胞株为白血病耐药细胞株
（G15+／#）和白血病敏感细胞株（G15+／A）。分别将 G15+／# 和 G15+／A 制成 +0)*1个／/E 和 )0)*1 个／/E的细胞悬液。每种催化材料均制成(个浓度 梯度 的 溶 液：原 液（)*** /J／E），)／)* 原 液（)** /J／E），)／)**原液（)*/J／E）。取各催化材料样品 )**!E和细胞悬液)**!E 加至>5孔细胞培养板 中，以催化材料的(个剂量（绝对量）)**，)*，)!J来 确定其 对 细 胞 毒 性 的 范 围。 将 该 细 胞 培 养 板 放 入
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（’*中国科学院大连化学物理研究所，辽宁 大连 ’’."!#；!*大连医科大学，辽宁 大连 ’’."!#）
摘要：以核酸分子及普通病毒作为探针和模拟对象，进行了催化材料吸附、灭活副流感病毒的研究，旨在筛选出对
病毒有过滤、吸附及灭活作用的高效非特异性催化材料，以应用于病毒的各种防护设施以及有效控制非典型性肺
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图 > 吸附性能较强的催化材料（$?@8!A）的 "#$ 洗脱液的毛细管电泳图
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称 取 催 化 材 料 )J 于 无 菌 瓶 中，加 病 毒 液（)= )+%*）*?) /E 于 室 温 下 混 合 作 用 (* /2Q，每 )* /2Q振荡+/2Q，共操作(次；然后加入+/E无菌生 理盐水，立即混匀振荡+/2Q，以)***L／/2Q的速率 离心1 /2Q。 吸 取 洗 脱 病 毒 液 进 行 血 凝 试 验，同 时 吸取*?)/E 稀释)**倍后，取该稀释液*3)/E 接 种（尿囊腔接种）>"))日龄鸡胚，置于(, U孵箱中 孵育,+X后收集尿液测病毒血凝效价，并与培养前 的血凝效价进行比较。
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感病毒的吸附及灭活作用，以期将该催化材料进一
步应用于O:XO病毒的各种防护设施以及有效地控 制O:XO的传播。
O:XO病毒主要是由近#万个碱基组成的核糖 核 酸（XC:）和 # 个 糖 蛋 白 组 成 的 蛋 白 外 壳 构 成［’")］。由于直接使用病 毒 评 价 催 化 材 料 的 过 滤、 吸附及灭活性能的周期较长，因此首先要建立可对
! 实验部分
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$"# 扩增仪，购 自 美 国 应 用 生 物 系 统（#&’）公 司； 超速低温离心机，购自美国科峻仪器公司；-,./0 1*!/2343石英毛细管柱，河北永年光导纤维厂产 品。1# 分子筛、5*"%* 目玻璃微球，购自天津化学 试剂二厂；商品化分离胶、分析缓冲液（(6羟甲基氨 基甲烷6硼酸6乙二胺四乙酸钠，7&8），购自 #&’公 司；聚合酶链反应（9:!）缓冲液、7;<$"# 聚合酶、 脱氧核苷酸（4"79）混合物、荧光标记 9:! 引物，购 自大连宝生物（工程）有限公司；副流感病毒液（按) =)+%*（体积比）的比例稀释病毒原液获得）、鸡胚（> "))日龄）、*?1@鸡红细胞，由大连医科大学提供。 >(种催化材料样品（#A:)"#A:5*，$A#)"$A#-， #&6)"#&61，#&6)6)，#&6+6)，#&6,，#&6%，#&616+， B!)"B!(，C#)" C#1，D#)"D#1，E9)，EF， GHI*>6)#，GH*>6)，#J／A2K+，活性炭）由中国科学院 大连化学物理研究所催化实验室提供。
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L,Y52L16KLWYW73LK0,（O:XO）
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催化材料对病毒吸附及灭活作用特性的研究
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