实验六、酵母菌染色和细菌的革兰氏染色

实验六、酵母菌染色和细菌的革兰氏染色

一、实验目的

1、学习并掌握革兰氏染色法。

2、了解革兰氏染色原理

二、实验原理

革兰氏染色法可讲细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两种类型，这是由这两种细菌细胞壁结构和组成的差异决定的。前者细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘—结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩而使碘—结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。而后者细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先滞留在细胞壁中的碘—结晶紫复合物容易洗脱下来，菌体变为无色，用复染剂（番红）染色后又变为复染剂染色。

三、实验材料

1、菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌

2、溶液和试剂：草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红复染液等。

3、仪器和其他用品：酒精灯、载玻片、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、

试管架、镊子、滤纸、滴管和无菌生理盐水等。

四、实验方法与步骤

(1)革兰氏染色步骤：

1、制片

取菌种按常规方法涂片（不宜过厚）、干燥、固定。

2、初染

滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1min后倾去染液，水洗至流出无色。

3、媒染

先用卢戈氏碘液冲去残留水迹象，再用碘液覆盖1min，倾去碘液

4、95%酒精脱色

在白色背景下用滴管流加95%乙醇脱色（一般25-30s），当流出液无色时立即用水洗去乙醇。

4、复染

将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色1min，水洗，吸去残水晾干。

5、镜检

将制好的片在显微镜下观察。

6、混合涂片染色

在载玻片同一区域用大肠杆菌和枯草芽孢杆菌混合涂片，其他步骤同上，显微镜下观察。

（2）酵母菌的普通染色

1、制片

取菌种按常规方法涂片（不宜过厚）、干燥、固定。

2、染色

滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1min后倾去染液，水洗至流出无色。

3、显微镜下观察

五、思考题

1、革兰氏染色法操作下的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在显微镜下的颜色是怎么样的，他们分别属于什么菌（G+ 、G﹣）。

2、混合涂片染色的意义？