微生物工程复习题自己整理的山东.docx

第一章

1、微生物工程中的常用菌株

黑曲得Aspergillus niger柠檬酸

枯草芽砲杆菌Bacillus subtilis制曲

啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae

野油菜黄单胞菌x.campestris黄原胶

2、分离与筛选菌种的一般步骤

四个步骤样品采集增值培养纯种分离主产性能测定

3、四个圈儿

生长圈儿法

具体操作步骤：将待测物质缺陷型菌株•不含待测物质的琼脂混合到平板，再涂布上待检菌株，若能产生待测物质，则在该菌株的周围会产生浑浊的牛长圈儿

原理：将带检菌涂布于高浓度工具菌并缺少所需营养物的平板上进行培养，若该菌株能合成平板所需的营养物质，在该菌株的菌落周围会形成一个浑浊的工长圈儿。

抑菌圈儿同上

4、抗肿瘤药物产生菌的分离生化诱导分析法

5、菌种选育的方法自然选育诱变育种杂交育种原牛质体融合育种基因工程育种

诱变育种中常用诱变剂中氮芥引起染色体畸变

亚硝酸引起碱基的脱氨基

亚硝基弧引起营养缺陷型突变

紫外线的诱变机制是形成胸腺嚅唳二聚体以改变DNA的生物活

性，造成菌体变界甚至死广。

示培养的意义：遗传物质经诱变处理示发生的突变，必须经过复制才能表现岀来

研究表明，诱变后的-小时内必须进行新的蛋口的合成，这个变异才有效因此必

须在完全培养基中进行培养才能稳定变异，使菌株表现出高的突变频率。

6、抗反馈调节突变株的筛选帘选择产物的结构类似物

组成型菌株的筛选设计某种有利于组成型菌株牛长，，并限制诱导性菌株牛:长的培养条件，

造成组成型菌株生长优势和适当的分辨两类菌落的方法，选出组成型菌

株。比如加入限制诱导酶合成的物质，使组成型菌株处丁•选择优势。

或者在不含诱导物，但含有经酚解后呈现颜色变化的底物平板上进行培

养。

7、放线菌的杂交在木质上和细菌是类似的，但是在操作技术上和霉菌是类似的。

放线菌的杂交过程中会形成异核体或者是部分杂合体，但是异核体是没冇用的。

8原生质体融合育种

酚解法细菌放线菌用溶菌陆

酵母菌用蜗牛酶

霉菌用纤维素酶

促融剂PEG

灭活原生质体：采用热、紫外线电离辐射以及某些生化试剂，抗生素等作为

灭活剂来处理单一亲株或双亲株的原生质体，使其丧失再生

能力，经细胞融合后，由丁•损伤部位的互补可以形成能再生的

融合体。

第二章

1、酶活性调节

共价修饰（P酸化酶、酶原的激活）别构效应（阻遏物阻遏物蛋口）缔合与解离（蛋白质的活化为钝化）竞争性抑制

2、酶合成的调节

诱导阻遏（2）

机制暂略乳糖操纵子色氨酸操纵子（注意其弱化作用）

弱化调节方式是在mRNA水平上起作用的

3、二元系统调节：传感器起蛋白激酚作用跨膜蛋白

调节器可溶性蛋白

4^能荷调节

能荷指细胞中A T P\ADP\AMP系统小可为代谢反应提供能量的高能磷酸键的量度。

能荷调节指的是细胞通过改变A T P\ADP\AM P三者比例來调节其代谢活动，也称腺昔酸调节。

5、如何克服反馈调节？

A降低末端产物浓度a营养缺陷型的利用（不能积累直链代谢途径的末端产物）

b渗漏缺陷型的利用定义：一种特殊的营养缺陷型，是遗传性代谢障碍不完全的突变型。其特点是腮活力下降而不完全丧失，并能在基本培养基上少量牛长。将大量的营养缺陷型菌株接种在基本培养基上，挑选牛长特别慢而菌落小的即可。

c改变细胞膜的渗透性如何？

B应用抗反馈调节突变株

定义？

筛选末端产物的结构类似物

营养缺陷型的冋复突变株将冋复突变了代和野生型菌株杂交看示代是否含有突变型

则可以区别真正的回复突变和抑制基因的突变

6、克服分解代谢阻遏的调控？

避免使用有阻遏作用的碳源和氮源

流加碳源和氮源

利用抗分解代谢阻遏的突变株在以酶受阻遏的底物为唯一氮源的培养基上，选择正常生长的菌落

7、提高初级代谢产物或者次级代谢产物的方法？

8、代谢工程的研究对彖是代谢网络

分为相依型网络（改变一个节点的代谢流量分配就可能提高终端产物的产率）和独立型网络（若要提高目标产物的转化率，则所有节点都要改变）。

9、三种节点及其图像。

10、代谢工程的应用？

改变代谢途径？HOW?

扩展代谢途径？EXAMPLE

构建新的代谢途径？大肠杆菌

11、代谢工程的基本操作是靶点设计基因操作效果分析

第三章

1、在生产上，按照用途分类培养基可分为殖了培养基种了培养基和发酵培养基沦子培养基的基

本要求

营养不要太丰富特別是有机氮否则不易产他子一般为固体无机盐浓度

要适量，否则影响产他了的数量和他了的颜色注意PH和湿度

2、培养及成分

A碳源常用碳源冇糖类油脂冇机酸（可以使得PH上升）低碳醇

B氮源无机氮（鞍盐硝酸盐）和尿素玉米浆为速效氮可以被迅

速利用

蛋白质氮则需要先水解成肽和氨基酸示才能被吸收利用，属于迟效氮硫酸鞍被菌体利用后使培养液的PH下降为生理酸性物质硝酸钠

上升为生理碱性物质

C无机盐

D生长因子提供生长因子的农副产品有玉米浆鉄皮水解液糖蜜酵母浸出液牛肉膏蛋白豚等

E水

F前体概念：

指某些化合物加入到发酵培养基中，能直接被微生物在生物合成过程中结合到产物分

子中，而其自身的结构并没有多大变化，但是产物的产量却因加入前体而又较大的提

高

G促进剂和抑制剂促进剂不是前体或者营养物

3、淀粉水解糖的制备

A酸解法以酸为催化剂，在高温下将淀粉水解为匍萄糖的方法。

优点：住产简单由淀粉逐步水解为葡萄糖的梏个化学反应过程仅在一个高压容器内进行，水解时间短，设备生产能力大。

B双酶法第一步川a■淀粉酶将淀粉转化成糊精和低聚糖，使得淀粉的可溶性增加，此过程成为“液化”

第二步用糖化酶将糊粹或者是低聚糖进一步水解，转变成为葡萄糖，此过程成为

“糖化”

优点：酶解反映条件温和，对设备要求低

微生物解作用的专业性强，副反应少，

可在较高淀粉乳浓度卜•水解，可采用粗原料制备的糖液色浅，较纯净，无

苦味，质量高。

C酶酸结合法

酸酶法先是酸后是糖化酶