定性免疫学检验的性能验证与质量控制(PPT46页)
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定性免疫学检验的性能验证与质量控制
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辽宁中医药大学附属医院临床检验中心
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临床特异性和临床敏感性
临床敏感性：在患有明确临床疾病的患者中，其检 测结果呈阳性或者超过正常值范围的比率 （即出现 阳性结果和确定患者患病）。
临床特异性：在没有特定临床疾病的患者中，其检 测结果呈阴性或者在正常值范围内的比率。
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二、检验结果质量的保证-----室内质控 质控品的来源
第三方质控品 检测系统配套质控品 自制质控品
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质控物的选择
基质：应尽量选择人血清基质，动物源性的基质由 于人体内有大量的异嗜性抗体的存在引起假失控。稀 释液也应用人血清，冻干品复溶可以使用生理盐水。
阳性符合率和阴性符合率的计算
待评价试剂与已验证方法相比较进行阳性符合率和阴性符合率的计算
待评价试剂的检测结果 +
已验证方法
+
-
a
b
共计
c
d
a+c
b+d
阳性符合率= a/(a+c) ×100%。 阴性符合率= d/(b+d) ×100%。 总符合率=(a+d)/(a+b+c+d)×100%。
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（二）检出限的验证
检测限（limit of detection）是指检测方法可检 测 出 的 最 低 被 测 量 浓 度 ， 也 称 检 测 低 限 （ lower limit of detection ） 或 最 小 检 出 浓 度 （ minimum detectable concentration），有时也称为分析灵敏 度（analytical sensitivity）。 如前所述，分析物浓度位于C5-C95区间之外（小于 C5或大于C95）时，候选方法对同一样本的重复性检 测将得到相同结果。因此，C95代表了某一试剂可以 测出的最低被测量浓度。
免疫学实验的质量控制PPT课件
非患者 FP（假阳性） TN（真阴性） FP+TN
合计 TP+FP
FN+TN
TP+FP+FN+TN TP
5/4—/202——1 —————————T—P+精—F选Np—pt课—件×—最1新0—0%———————————13
诊断特异性
概念 非患者（正常人与无关疾病的患者）中用 此试验得到阴性结果的百分率。
真值 真值是在大多数情况下无法确切知道
的数值。根据1976年国际临床化学会 （IFCC）公布的有关质控的规定，真值是 指采用一组最可靠的参考方法测得的近似 真实的数值。
定值 是指标定的质控材料的已知值。
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三、与质控有关的重要术语
决定性方法
是指经过彻底研究未发现任何不精密 和不准确因素的方法。在分析某被测物时 是所有测定方法中具有最高准确度的方法。 国际公认的决定性方法很少，并且其设备 昂贵及技术操作复杂。
（1）Reproducibility： 不同操作者用同一方法对同一标本在不同时
间内重复检测结果的差别。 （2）Repeatability：
用同一方法对同一标本在同一时间重复检测 结果的差别。 意义 5/4/2021 不涉及被测物精选质ppt的课件最真新 值，差别越小，方9法
准确度
概念 ：表示测量结果与真值的一致程度， 是测量结果中系统误差与随机误差的综 合。
概述
定义：
质量控制（quality control，QC）是利用 现代科学管理的方法和技术检测分析过程中 的误差，控制与分析有关的各个环节，确保 实验结果的准确可靠。也称为实验室质量保 证。
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免疫学检验的质量控制
（一）定量免疫检验
• 定量免疫检验通常需要使用全自动免疫分析仪， 在测定时须用校准品对仪器进行校准。
• 室内质控则应选择特定试剂盒或方法的测定范围 内的高、中和低三种浓度的质控品， 以监测不同 浓度标本测定结果的变化。
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（二）半定量免疫检验
• 半定量实验在免疫检验中比较少用，此类实验主 要有酶免疫试验、荧光免疫试验等，测定结果通 常以抗体的滴度、效价等表示。
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• 临床免疫检验试剂盒保质期一般为6个月以上，有 些检验机构为了节约成本，分数次使用试剂盒，势 必会使酶标抗原处于溶解状态，影响试验结果。
• 试剂盒抗体储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成
• 抗体浓度越高（浓度大于10mg/ml），越稳定，易 保存；浓度低时，应加0.1%~1.5%的牛血清白蛋白 作保护剂。
• 利用可靠的定值血清对购入的试剂盒进行性能
检测和批间差异评价，只有质量符合实验质量
要求的试剂盒方可用于临床实际检测工作。
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• 引起试剂盒批间变异原因是多方面的：
1、试剂盒的原材料是依靠生物工程技术生产的， 生产技 术要求难度大，工艺提纯方法不好掌握， 质量控制要求较 高，产品质量不易稳定，使每批原材料的纯度和活性都有所 差别；
• 半定量免疫检验质控要点在于在有阴性质控的前 提下，采用多个相应滴度或效价的抗体作为室内 质控品，与临床标本同时测定。
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（三）定性实验
• 定性免疫检验是免疫学检验的重点，其测定方法有很多， 常以“有”或“无”也即“阳性”或“阴性”来表达测定
结果。
• 定性测定的室内质控要点是控制测定下限，设置临界 cutoff值（CO值）的低值弱阳性质控物是定性室内质控的
定性免疫学检验的性能验证与质量控制ppt课件
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分析物浓度接近C50的定性方法精密度试验
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进行重复性研究时，理想情况下需绘制在规定条件下候选方 法的整个不精密度曲线，然而具体操作时需要检测的样本数 量较大 可使用一个简单的方法，即为待评价的检测方法建立分析物 的临界浓度，并判定某一特定浓度范围，例如C50±20%，是 否包含了C5-C95区间。 若-20%到+20%浓度范围包含了C5-C95区间，那么20%或距离 C50更远浓度的样本将得到一致的检测结果，即在 C5-C95区 间之外的样本检测结果可认为是精密的，浓度>C95，将持续 得到阳性结果，浓度<C5，将持续得到阴性结果。
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结果判断-4
用该方法检测，C50-20%的样本检测结果一致，C50+20%的样本不一定能得到一致 结果；需要用高于C50更大百分率浓度的样本（如+30%）进行补充试验。
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检出限的验证
检测限（limit of detection）是指检测方法可检 测 出 的 最 低 被 测 量 浓 度 ， 也 称 检 测 低 限 （ lower limit of detection ） 或 最 小 检 出 浓 度 （ minimum detectable concentration），有时也称为分析灵敏 度（analytical sensitivity）。 如前所述，分析物浓度位于C5-C95区间之外（小于 C5或大于C95）时，候选方法对同一样本的重复性检 测将得到相同结果。因此，C95代表了某一试剂可以 测出的最低被测量浓度。
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定性测定的性能验证PPT课件
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定性测定系统/试剂 性能验证
特异性 敏感性 确性 抗干扰能力
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性能验证的合格标准从何而来？
试剂盒说明书
国际和／或国际标准
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什么时候进行性能验证
筛查试验：临床上，筛查方法通常用于检测整个人群
（或者人群中的特定部分）中特定指标的情况。例如对样 本做粪便隐血检测或者性病研究实验室（VDRL）梅毒血清 学试验。一般来说，这些用于筛查的定性试验必须具有高 敏感性以确保真阳性结果的检出。因此通常筛查试验比诊 断试验或确认试验会产生更多的假阳性结果。如果筛查试 验的假阳性结果所造成的社会及经济后果不是非常严重， 这种低特异性可通过特异性较好的确认试验加以弥补。
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“预示值”对临床检验结果影响
预示值对一个有95%敏感性和95%特异性的试 剂检测结果的影响（100,000人）
结果
10%感染率
1%感染率
检出 (+) 未检出 (－) 检出 未检出(－) (+)
+
9,500
500
950
50
－
4,500
85,500
4,950 94,050
敏感性
95%
95%
(TP/[TP+FN])
尽管阳性筛查试验结果需要确认试验来进一步证实， 但是这依然要优于假阴性筛查试验结果的出现。因为假阴 性结果会造成更严重的后果，例如疾病通过已感染的血液 传播或者延误了对于可治愈的严重疾病的治疗。
定性免疫学检验的性能验证与质量控制
检出限的验证方法
样本选择：评估试剂分析灵敏度所使用的样本，如 检测项目有国家参考品，则可使用国家参考品或经国 家参考品标化的参考品进行检测，如没有国家参考品 ，则使用可以溯源或量化的样本，如国际标准物质， 或与国际标准物质溯源的样本。 验证方法：处于测定下限浓度（ C95 ）的样本，重 复检测20次，应至少有18次以上为阳性反应。
精密度评估的基本原则（2）
评估精密度时，应至少评估两个浓度水平样本的精 密度。 所选样本浓度应在测量范围内有医学意义，即至少 有一个浓度在医学决定水平左右，在定性测定，即为 接近临界水平的浓度。
批内精密度的评估
评估方法：三个不同浓度的样本，在一个测试批内 重复进行至少20次检测，计算所得S/CO值的均值和SD ，计算批内CV%。 质量控制：检验时应同时至少测一个质控品。 判断结论：应≤试剂说明书所标明的批内变异。 ELISA的批内变异CV%应≤10%。
（三）准确度验证
验证方法及指标： 以与临床诊断、金标准方法和标准血清盘的检 测比较来评价，常以敏感性（包括临床敏感性）/ 特异性（包括临床特异性）和阳性符合率/阴性符 合率来表示。
临床特异性和临床敏感性
临床敏感性：在患有明确临床疾病的患者中，其检 测结果呈阳性或者超过正常值范围的比率 （即出现 阳性结果和确定患者患病）。 临床特异性：在没有特定临床疾病的患者中，其检 测结果呈阴性或者在正常值范围内的比率。
（一）不精密度的验证
纯定性试验：采用浓度接近临界值的分析物作为检 测材料，不宜采用阴性低值或强阳性样本来评价定性 检测方法的不精密度。 量值化定性试验：以COI（cut-off Index）或S/CO 比值作为分析方法的精密度评价指标。
纯定性测定不精密度的评估方法
免疫学检验的质量控制PPT课件
• 如何保证检验结果的质量，在日常检测中如何贯 彻实施质量保证是免疫学检验的一个重要内容。
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第一节 免疫学检验质量控制的概念
• 免疫检验要保证检验结果的准确、可靠、及时、 有效，并尽可能使各实验室间检验结果有可比性， 这是免疫学检验质量控制的基本目的。
• 只有明确免疫学检验质量控制的有关概念，才能 真正理解免疫检验的质量控制，有助于准确、有 效地完成质量控制工作。
• 引起试剂盒批间变异原因是多方面的：
1、试剂盒的原材料是依靠生物工程技术生产的， 生产技术 要求难度大，工艺提纯方法不好掌握， 质量控制要求较高， 产品质量不易稳定，使每批原材料的纯度和活性都有所差别； 2、用不同的提纯方法及不同批号的抗原或抗体所制备的试 剂质量不一样； 3、同一批号的原料， 不同组装工艺， 其结果也不尽一样； 4、组装工艺相同， 质量标准控制稍有欠缺， 其结果也会有
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• 质控品（quality testing materisls）
又称质控物，是指含量已知并处于与实际标本相同 的基质当中特性明确的物质，这种物质通常与其他 杂质混在一起，故质控品必须按患者标本一样对待 进行检测。
1、室内质控品：用于临床实验室标本检测误差的控制
2、室间质评样本： 评价实验室常规测定的准确度
卫生检验与检疫技术专业
目录
1 免疫学检验质量控制的概念 2 免疫检验质量控制的特殊性 3 免疫学实验常用评价指标 4 室内质量控制 5 室间质量评价 6 实验室质量控返制回总数目据录的管理和信息系统
3
前言
• 免疫学检验是临床检验中一大类重要的常规检查, 对疾病的诊断、筛查、监测疾病的发展过程和观 察患者对治疗的反应等方面发挥着重要的作用。
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• 运输模拟研究是将样本暴露于预先设定的改变的环境条件下 用于模拟产品在到达消费者前的过程中所能忍受的最坏的环 境条件，此研究结果用于确定检测试剂最适宜的运输和保存 条件，要求检测试剂至少有1个产品批号通过这种测试。
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第一节 免疫学检验质量控制的概念
• 免疫检验要保证检验结果的准确、可靠、及时、 有效，并尽可能使各实验室间检验结果有可比性， 这是免疫学检验质量控制的基本目的。
• 只有明确免疫学检验质量控制的有关概念，才能 真正理解免疫检验的质量控制，有助于准确、有 效地完成质量控制工作。
• 引起试剂盒批间变异原因是多方面的：
1、试剂盒的原材料是依靠生物工程技术生产的， 生产技术 要求难度大，工艺提纯方法不好掌握， 质量控制要求较高， 产品质量不易稳定，使每批原材料的纯度和活性都有所差别； 2、用不同的提纯方法及不同批号的抗原或抗体所制备的试 剂质量不一样； 3、同一批号的原料， 不同组装工艺， 其结果也不尽一样； 4、组装工艺相同， 质量标准控制稍有欠缺， 其结果也会有
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• 质控品（quality testing materisls）
又称质控物，是指含量已知并处于与实际标本相同 的基质当中特性明确的物质，这种物质通常与其他 杂质混在一起，故质控品必须按患者标本一样对待 进行检测。
1、室内质控品：用于临床实验室标本检测误差的控制
2、室间质评样本： 评价实验室常规测定的准确度
卫生检验与检疫技术专业
目录
1 免疫学检验质量控制的概念 2 免疫检验质量控制的特殊性 3 免疫学实验常用评价指标 4 室内质量控制 5 室间质量评价 6 实验室质量控返制回总数目据录的管理和信息系统
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前言
• 免疫学检验是临床检验中一大类重要的常规检查, 对疾病的诊断、筛查、监测疾病的发展过程和观 察患者对治疗的反应等方面发挥着重要的作用。
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• 运输模拟研究是将样本暴露于预先设定的改变的环境条件下 用于模拟产品在到达消费者前的过程中所能忍受的最坏的环 境条件，此研究结果用于确定检测试剂最适宜的运输和保存 条件，要求检测试剂至少有1个产品批号通过这种测试。
定性免疫学检验的性能验证与质量控制(PDF 69页)
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分析物浓度接近C50的定性方法精密度试验
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进行重复性研究时，理想情况下需绘制在规定条件下候选方 法的整个不精密度曲线，然而具体操作时需要检测的样本数量 较大 可使用一个简单的方法，即为待评价的检测方法建立分析物 的临界浓度，并判定某一特定浓度范围，例如C50±20%，是否 包含了C5-C95区间。 若-20%到+20%浓度范围包含了C5-C95区间，那么20%或距离 C50更远浓度的样本将得到一致的检测结果，即在 C5-C95区间 之外的样本检测结果可认为是精密的，浓度>C95，将持续得到 阳性结果，浓度<C5，将持续得到阴性结果。
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5.5 检验程序
5.5.1.1 检验方法和程序的分析性能验证内容应参考 试剂盒说明书上明确标示的性能参数进行验证，至少 应包括：检出限、符合率（采用国家标准血清盘或临 床诊断明确的阴阳性样品各20份或与其他分析方法比 对），如为定量方法应验证精密度（包括重复性和中 间精密度）；并应明确检验项目的预期用途，如筛查 、诊断、确认。
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确认试验
确认试验用于验证筛查试验或者诊断试验结果的确 认。
对于确认试验，特异性比敏感性更为重要。
如梅毒密螺旋体抗体荧光吸收试验（FTA-ABS）C50）浓度的定义
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一份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获得 阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。
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分析物浓度接近临界值时的不精密度曲线
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性能验证相关概念
筛查试验 诊断试验 确认实验 C50 C5 C95
临界点（C50）浓度的定义
一份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获得 阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。对特定试剂， C50一旦确定，是恒定不变的。
C50
C5 浓度的定义
一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阴 性结果时该分析物的浓度。
定性免疫学检验的性能验 证与质量控制
一、定性免疫试验的性能验证
CNAS-CL39：2012《医学实验室质量和能力认可准 则》在临床免疫学检验领域的应用说明：
检验方法和程序的分析性能验证内容应参考试剂 盒说明书上明确标示的性能参数进行验证，至少应包 括：检出限、符合率（采用国家标准血清盘或临床诊 断明确的阴阳性样品各20份或与其他分析方法比对） ，精密度（包括重复性和批间精密度）；并应明确检 验项目的预期用途，如筛查、诊断、确认。
检出限的验证方法
样本选择：评估试剂分析灵敏度所使用的样本，如 检测项目有国家参考品，则可使用国家参考品或经国 家参考品标化的参考品进行检测，如没有国家参考品 ，则使用可以溯源或量化的样本，如国际标准物质， 或与国际标准物质溯源的样本。
验证方法：处于测定下限浓度（C95）的样本，重 复检测20次，应至少有18次以上为阳性反应。
精应至少评估两个浓度水平样本的精 密度。
所选样本浓度应在测量范围内有医学意义，即至少 有一个浓度在医学决定水平左右，在定性测定，即为 接近临界水平的浓度。
批内精密度的评估
评估方法：三个不同浓度的样本，在一个测试批内 重复进行至少20次检测，计算所得S/CO值的均值和SD ，计算批内CV%。 质量控制：检验时应同时至少测一个质控品。 判 断 结 论 ： 应 ≤ 试 剂 说 明 书 所 标 明 的 批 内 变 异 。 ELISA的批内变异CV%应≤10%。
分为批内精密度评估和批间精密度评估
精密度评估的基本原则（1）
操作者必须熟悉检测系统工作原理，了解并掌握仪 器的操作步骤和各项注意事项，应在评估阶段维持仪 器的可靠和稳定。
用于评估试验的样本一般常采用临床实验室收集的 血清(浆)样本；当实验室收集的样本不稳定或不易得 到时，也可考虑使用稳定的、以蛋白质为基质的商品 物质，如校准品或质控品。
C5
C95 浓度的定义
一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阳 性结果时该分析物的浓度。
C95
性能验证的样本准备
质控品：商用或自备，含阳性和阴性。 C50和C5（C50-20%）及C95（C50+20%）浓度样本： 用于重复性及最低检出限验证，不少于40次检测量。 临床样本或血清盘：用于准确性验证，不少于50份 阳性和阴性样本。
不精密度评价结果判断-2
-20%～+20%浓度范围包含了C5-C95区间；用该方法检测，浓度超过C50±20%的样 本检测结果一致
不精密度评价结果判断-3
用该方法检测，C50+20%的样本检测结果一致，C50-20%的样本不一定能得到一致 结果；需要用低于C50更大百分率浓度的样本（如-30%）进行补充试验。
（一）不精密度的验证
纯定性试验：采用浓度接近临界值的分析物作为检 测材料，不宜采用阴性低值或强阳性样本来评价定性 检测方法的不精密度。 量值化定性试验：以COI（cut-off Index）或S/CO 比值作为分析方法的精密度评价指标。
纯定性测定不精密度的评估方法
定性测定精密度分析质量指标为C5-C95浓度区间（ 亦即“灰区”），这一区间范围≤C50±20%。
检测限（limit of detection）是指检测方法可检 测 出 的 最 低 被 测 量 浓 度 ， 也 称 检 测 低 限 （ lower limit of detection ） 或 最 小 检 出 浓 度 （ minimum detectable concentration），有时也称为分析灵敏 度（analytical sensitivity）。 如前所述，分析物浓度位于C5-C95区间之外（小于 C5或大于C95）时，候选方法对同一样本的重复性检 测将得到相同结果。因此，C95代表了某一试剂可以 测出的最低被测量浓度。
不精密度评价结果判断-4
用该方法检测，C50-20%的样本检测结果一致，C50+20%的样本不一定能得到一致 结果；需要用高于C50更大百分率浓度的样本（如+30%）进行补充试验。
数值化定性免疫测定的精密度评价方法
有些定性免疫测定，如ELISA等，样本的测定结果 可以COI（cut-off Index）或S/CO比值来表示，检测 系统或试剂厂家会在其试剂说明书中给出试剂的批内 和批间变异，这对于对实验室评价试剂的精密度以及 评估其室内质控的批间变异结果有参考价值。
批间精密度的评估
评估方法：三个不同浓度的样本，在10天以上时间 内单次重复进行至少20批检测，计算所得S/CO值的均 值和SD，计算批间CV%。 质量控制： 判 断 结 论 ： 应 ≤ 试 剂 说 明 书 所 标 明 的 批 间 变 异 。 ELISA的批间变异CV%应≤15%。
（二）检出限的验证
纯定性试验不精密度评价步骤
制备评价用样本 制备3份样本：一份浓度为C50，一份为C50+20%
，一份为C50-20%。 每份样本的体积需保证40次或更多次重复检测的
需要。 评价方法
每份样本检测40次，确定每一份样本结果为阳性 和阴性的百分比。
不精密度评价结果判断-1
-20%～+20%浓度范围在C5-C95区间之内；用该方法检测，浓度超过C50±20%的样 本检测结果不一致；此结论错误率5% ，需使用更宽浓度范围的样本（如±30%） 进行另外的试验。
分析物浓度接近临界值时的不精密度曲线
两种不同方法的不精密度曲线比较
如何获得 “临界点（C50）”
检测试剂或系统的说明书可能会注明分析物的临界 浓度，但需验证。
如果临界浓度未知，则可以将阳性样本进行一系列 稀释，然后将他们进行重复检测以确定能够获得50% 阳性和50%阴性结果的那个稀释度，这一稀释度的分 析物浓度即为临界点（C50）。