免疫学性能验证

空白限（LOB）
α= 假阳性可能 β= 假阴性可能
相 对 频 率
β
α
0 < LoB
LoD < LoQ 能检出
LoQ总误差
可检测
检出限(LOD)
是检测方法可检测出的最低被测物浓 度，也称为检测低限或最小检出浓度。
定量限(LOQ)
是指在精密度和正确度可接受的情况下检测系统
阴性、阳性质控监测数据是否有效（10天，失效≤1次；
20天失控≤2次），失控后该该批数据舍弃，在当日或其
他补充新一批检测。
计算阴阳性率 数据分析（C50或临界值95%区间是否正确）
举例
乙肝表面抗原C50验证
稀释样 本号
1 2
40次检测结果
阳性 13 15 % 32.5% 37.5% 阴性 27 25 % 67.5% 62.5%
确定线性范围
做一次、二次和三次多项式回归分析。
SPS统计软件+统计学知识
界别 一次 二次 三次 回归方程 Y=b0+b1X Y=b0+b1x+b2X2 Y=b0+b1X+b2X2+b3X2 回归自由度 （Rdf） 2 3 4
计算大于LOB的测定结果所占比例是否符合（β=0.05）
要求。 符合要求，验证通过； 不符合，联系厂家。
定量检出限（LOQ）
选择浓度≥LOD的样本，测定25次（多样本，多天，重复 完成），每个样本测定结果与参考值的偏差和TEa（实验 室总误差）相比较。 计算小于TEa所占比例是否符合（β=0.05）的要求。 符合要求，验证通过； 不符合，联系厂家。
评价指标：符合率
定性：符合率≥80%
线性范围评价
难点
线性范围：指覆盖检测系统最终分析为可接受的线性关系 的浓度范围。 分析测量范围（AMR）:样本没有经过任何预处理（浓缩 和稀释），检测方法能够直接测定出待测物的可靠浓度范 围，也就是系统最终的输出值与被测物的实际活性或浓度 呈线性比例的范围。 AMR也就是线性范围。
EP17A
空白限、检测低限、定量限的验证 Limit of blank(LOB) 空白限
Limit of detection(LOD) 检出限
Limit of quantitation(LOQ)定量限 LOB <LOD≤LOQ
空白限（LOB）
是一定概率下(α)测量空白时可能得到的最高检测结果， 低浓度LOD的样本在一定概率下(β)能得到的最低测量结 果。 误判概率α、β：声称在给定物质中存在某成分的误判概 率为α时（Ⅰ类错误，假阳性），声称不存在该成分的误 判概率为β（Ⅱ类错误，假阴性）。 α、β默认值为0.05。
离群点判断
将每个浓度4次按从小到大排列（Yi-1到Yi-4）
计算极差D=Yi-1-Yi-4
计算D1=（Yi-1-Yi-2）/D
计算D4=(Yi-3-Yi-4) /D
D1或D4如果大于0.765（0.05）或0.889（0.01）则该点 为离群点； 单个离群点可以剔除。如果超过2个或以上离群点应查找 原因，重新测定。
免疫检验的质量控制及性能验证
李小花
2015.08.12
质量控制
报告单申请 样本采集/接收
样本检测
检测结果的获得
结果分析及报告发放
影响检验结果的要素
人员 设施和环境条件 实验室设备 试剂 培训、比对 温湿度控制 设备操作、校准 性能验证
操作规程
内部质量控制
SOP文件
室内质控程序
试剂性能验证
重点
应参考试剂盒说明书上明确标示的性能参数进行验证
系列浓度样本制备（有证，康彻斯坦标准品稀释） 标准曲线的制作 临界值附近浓度样本制备 样本的检测：对临界值附近浓度样本进行连续20次测定 当实验结果阳性率≥95%的最低浓度确认为检出限，表明 被测物在该浓度及以上样本，实验方法将给出稳定的结果。
定性-重复性（精密度）-EP12A
平。
临界点
临界点:对阳性样本进行系列稀释，然后对系列稀释样本 进行重复检测（20-40次），能获得50%阳性和50%阴性
结果的浓度。
20次（+20%与-20%浓度各10次），30%-70%
40次（+20%与-20%浓度各20次）, 35%-65%
定性-重复性（精密度）-EP12A
接近临界值浓度的分析物（临界值+20%与-20%） 对接近临界值浓度分析物的重复性检测（各20次）10天 （每日测定2次）或20天（每日单次测定）
线性范围评价
证实分析测量范围有效时：需5-7个样品，每个样品重复 测定2次。 验证声明范围或改良方法：需7-9个样品，每个样品重复 测定2-3次。 样品：可比预期的分析测量范围宽20-30%，以期检测到 “拐点”。
曲线制作
可用计算浓度或标定浓度作为X值，仪器测量结果或仪器 输出值（均值）作为Y值。 也可用相对浓度作为X值，如果浓度间为等间隔，可用样 品编号（如1、2、3、4、5等）代表X值。 如所制备的样品系列非等间隔，其浓度间的关系应明确， 在测定时可以这些间隔间的相对比值做为X值，此时的样 品编号可以不为整数。
能够得到可靠结果的被测物最低浓度，分析物在
这个浓度下被可靠检出。
验证空白限（LOB）
测定空白样本20次
测定结果与试剂厂家给定的LOB比较，不超过3个结果大 于LOB验证通过。
检测低限（LOD）
验证LOD
选择被测量的低浓度（LOB-4LOB）样本，获取至少20
次测量结果（多个样本，多天完成）。
Lower bound of observed proportion （%） 20 85 87 88 88 88 30 40 50 60
符合（β=0.05）的要求
70
80 90 100
89
89 90 90
150
200 250 300 400 500
91
92 92 92 93 93
定性检出限（LOQ）
至少应包括：检出限、符合率
定量方法应验证精密度
涉及免疫评价方法
EP5A2 EP15A2 EP6A EP17A EP12 定量测定方法精密度方法 医学实验室精密度和准确度的确认 定量测定方法线性的评价 检出限与定量限的评价 定性检测评价
临床实验室标准化协会
Clinical Laboratory and Standards Institute (CLSI)
定性精密度（只报告阴性、阳性、无反应性） 不宜用阴性或强阳性标本衡量定性试验的重复性 选择分析物浓度应接近医学决定水平（临界值） 评价指标：临界值验证 以COI(cut-off)或以s/co值报告结果的精密度评价。
临界值(cut-off value)
临界值：作为判断特定疾病、状态或被测量存在或不存在 的界限的量值。也就是指试验结果处于（阴性、阳性）分 界点时的样品中分析物的浓度。 对纯粹的定性检测来说，临界值就是（唯一）医学决定水
可信区间
35-65%
C50
不正确 正确
临界值的95%区间验证
临界值+20%与临界值-20%浓度分别进行20次检测。 +20%浓度的样本产生的阳性率≥95% -20%浓度的样本产生的阴性率≥95%。 意味着与临界值相差20%以上的样本就可预期用这种方法 得到一致的结果。
正确度
定性：以临床诊断、金标准方法比较、血清盘检测或参加 卫计委能力验证的来评价。