定性免疫学检验的性能验证与质量控制 ppt课件
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定性免疫学检验的性能验证与质量控制
25
辽宁中医药大学附属医院临床检验中心
ISO15189实验室认可系列培训讲座
临床特异性和临床敏感性
临床敏感性：在患有明确临床疾病的患者中，其检 测结果呈阳性或者超过正常值范围的比率 （即出现 阳性结果和确定患者患病）。
临床特异性：在没有特定临床疾病的患者中，其检 测结果呈阴性或者在正常值范围内的比率。
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二、检验结果质量的保证-----室内质控 质控品的来源
第三方质控品 检测系统配套质控品 自制质控品
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质控物的选择
基质：应尽量选择人血清基质，动物源性的基质由 于人体内有大量的异嗜性抗体的存在引起假失控。稀 释液也应用人血清，冻干品复溶可以使用生理盐水。
阳性符合率和阴性符合率的计算
待评价试剂与已验证方法相比较进行阳性符合率和阴性符合率的计算
待评价试剂的检测结果 +
已验证方法
+
-
a
b
共计
c
d
a+c
b+d
阳性符合率= a/(a+c) ×100%。 阴性符合率= d/(b+d) ×100%。 总符合率=(a+d)/(a+b+c+d)×100%。
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（二）检出限的验证
检测限（limit of detection）是指检测方法可检 测 出 的 最 低 被 测 量 浓 度 ， 也 称 检 测 低 限 （ lower limit of detection ） 或 最 小 检 出 浓 度 （ minimum detectable concentration），有时也称为分析灵敏 度（analytical sensitivity）。 如前所述，分析物浓度位于C5-C95区间之外（小于 C5或大于C95）时，候选方法对同一样本的重复性检 测将得到相同结果。因此，C95代表了某一试剂可以 测出的最低被测量浓度。
定性免疫学检验的性能验证与质量控制ppt课件
±20%仅用于举例，实验室也可根据检验目的和可接受的精密度选择±10% 或±30%。
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xx
只提供两种检测结果(-/+)的定性检测的精密度
ISO15189实验室认可系列培训讲座
评价定性检测试剂或系统精密度时，需采用浓度接 近临界值的分析物作为检测材料，不宜采用阴性低值 或强阳性样本来评价xx
分析物浓度接近C50的定性方法精密度试验
ISO15189实验室认可系列培训讲座
进行重复性研究时，理想情况下需绘制在规定条件下候选方 法的整个不精密度曲线，然而具体操作时需要检测的样本数 量较大 可使用一个简单的方法，即为待评价的检测方法建立分析物 的临界浓度，并判定某一特定浓度范围，例如C50±20%，是 否包含了C5-C95区间。 若-20%到+20%浓度范围包含了C5-C95区间，那么20%或距离 C50更远浓度的样本将得到一致的检测结果，即在 C5-C95区 间之外的样本检测结果可认为是精密的，浓度>C95，将持续 得到阳性结果，浓度<C5，将持续得到阴性结果。
这里的C50指的是一个处于试剂检测临界点的样本 浓度，其一旦确定，是不变的。
试剂盒CUT-OFF值指的是一个判断某一次测定结果 的由阴性和阳性对照信号值按一定公式计算出来的信 号值，每次测定都会有所差异。
13
xx
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C5 浓度的定义
一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阴 性结果时该分析物的浓度。
定性测定精密度分析质量指标为C5-C95浓度区间（ 亦即“灰区”），这一区间范围≤C50±20%。
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xx
分析物浓度接近临界值时的不精密度曲线
ISO15189实验室认可系列培训讲座
18
xx
只提供两种检测结果(-/+)的定性检测的精密度
ISO15189实验室认可系列培训讲座
评价定性检测试剂或系统精密度时，需采用浓度接 近临界值的分析物作为检测材料，不宜采用阴性低值 或强阳性样本来评价xx
分析物浓度接近C50的定性方法精密度试验
ISO15189实验室认可系列培训讲座
进行重复性研究时，理想情况下需绘制在规定条件下候选方 法的整个不精密度曲线，然而具体操作时需要检测的样本数 量较大 可使用一个简单的方法，即为待评价的检测方法建立分析物 的临界浓度，并判定某一特定浓度范围，例如C50±20%，是 否包含了C5-C95区间。 若-20%到+20%浓度范围包含了C5-C95区间，那么20%或距离 C50更远浓度的样本将得到一致的检测结果，即在 C5-C95区 间之外的样本检测结果可认为是精密的，浓度>C95，将持续 得到阳性结果，浓度<C5，将持续得到阴性结果。
这里的C50指的是一个处于试剂检测临界点的样本 浓度，其一旦确定，是不变的。
试剂盒CUT-OFF值指的是一个判断某一次测定结果 的由阴性和阳性对照信号值按一定公式计算出来的信 号值，每次测定都会有所差异。
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xx
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C5 浓度的定义
一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阴 性结果时该分析物的浓度。
定性测定精密度分析质量指标为C5-C95浓度区间（ 亦即“灰区”），这一区间范围≤C50±20%。
19
xx
分析物浓度接近临界值时的不精密度曲线
ISO15189实验室认可系列培训讲座
定性免疫学检验的性能验证与质量控制
检出限的验证方法
样本选择：评估试剂分析灵敏度所使用的样本，如 检测项目有国家参考品，则可使用国家参考品或经国 家参考品标化的参考品进行检测，如没有国家参考品 ，则使用可以溯源或量化的样本，如国际标准物质， 或与国际标准物质溯源的样本。 验证方法：处于测定下限浓度（ C95 ）的样本，重 复检测20次，应至少有18次以上为阳性反应。
精密度评估的基本原则（2）
评估精密度时，应至少评估两个浓度水平样本的精 密度。 所选样本浓度应在测量范围内有医学意义，即至少 有一个浓度在医学决定水平左右，在定性测定，即为 接近临界水平的浓度。
批内精密度的评估
评估方法：三个不同浓度的样本，在一个测试批内 重复进行至少20次检测，计算所得S/CO值的均值和SD ，计算批内CV%。 质量控制：检验时应同时至少测一个质控品。 判断结论：应≤试剂说明书所标明的批内变异。 ELISA的批内变异CV%应≤10%。
（三）准确度验证
验证方法及指标： 以与临床诊断、金标准方法和标准血清盘的检 测比较来评价，常以敏感性（包括临床敏感性）/ 特异性（包括临床特异性）和阳性符合率/阴性符 合率来表示。
临床特异性和临床敏感性
临床敏感性：在患有明确临床疾病的患者中，其检 测结果呈阳性或者超过正常值范围的比率 （即出现 阳性结果和确定患者患病）。 临床特异性：在没有特定临床疾病的患者中，其检 测结果呈阴性或者在正常值范围内的比率。
（一）不精密度的验证
纯定性试验：采用浓度接近临界值的分析物作为检 测材料，不宜采用阴性低值或强阳性样本来评价定性 检测方法的不精密度。 量值化定性试验：以COI（cut-off Index）或S/CO 比值作为分析方法的精密度评价指标。
纯定性测定不精密度的评估方法
免疫学实验质量控制课件
01
培训内容：免 疫学实验的基 本原理、操作 流程、注意事
项等
02
考核方式：笔 试、实际操作、
案例分析等
03
考核标准：根 据实验人员的 技能水平和实 际操作能力进
行评分
04
培训与考核的 目的：提高实 验人员的专业 素质和实验技 能，确保实验 结果的准确性
和可靠性。
免疫学实验质量控 制的案例分析
案例背景
保障实验安全
01
04
确保实验环境安全：保 持实验室整洁，避免污 染和交叉污染
03
确保实验数据可靠：采 用严格的数据记录和统 计方法，避免数据造假
02
确保实验结果准确：采 用标准操作流程，避免 实验误差
确保实验人员安全：遵 循操作规程，避免接触 有害物质
免疫学实验质量控 制的方法
实验设计
01
实验目的：明确实验目的， 确保实验结果的准确性和可 靠性
实验操作
实验设计：合理设计实验步
01 骤，确保实验结果的准确性
和可靠性
操作规范：严格按照实验操
03 作规程进行实验，避免操作
失误导致的实验结果误差
试剂选择：选择合适的试
02 剂，保证实验结果的准确
性和可靠性
数据记录：准确记录实验
04 数据，便于实验结果的分
析和评估
数据分析
01
实验数据的收集：包括样本来源、实验方法、数据记录等
免疫学实验质量控 制课件
演讲人
目录
01. 免疫学实验质量控制的重要 性
02. 免疫学实验质量控制的方法 03. 免疫学实验质量控制的注意
事项
04. 免疫学实验质量控制的案例 分析
免疫学实验质量控 制的重要性
第21章免疫检测的质量控制ppt课件
统计学质控的特点
检验误差有两类：一是系统误差，一是随机误差。 系统误差通常表现为质控物测定均值的漂移，是由
操作者所使用的仪器设备、试剂、标准品或校准物 出现问题而造成的，这种误差可以通过前述的措施 方法加以控制，是可以排除的。 随机误差则表现为测定SD的增大，主要是由实验操 作人员的操作等随机因素所致，其出现难以完全避 免和控制。
室内质量控制〔Internal Quality Control,IQC) 由实验室工作人员，采取一定 的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠 性程度。
室间质量评价 （External Quality Assessment, EQA） 为客观比较一实 验室的测定结果与靶值的差异，由外单 位机构客观地评价实验室的结果，发现 误差并校正结果
稀释标本 改变标记抗体 用变性IgG预先封闭标本中RF 测抗原,可加入还原剂如2-巯基乙醇去除RF 使用特异的鸡抗体IgY作为标记或固相抗体
补体干扰
固相抗体和标记二抗可抗体分子发生变构，从 而其Fc段的补体C1q结合位点被暴露出来，这 样C1q就成为一个中介物将二者交联起来，从 而出现假阳性结果。
建议采用真空采血管及蝶形针具，以免 直接接触血液。采集容器最好为一次性 无菌密闭容器。
标本采集时间及患者准备
激素和治疗药物 感染性病原体抗原、抗体 肿瘤标志物 特定蛋白
内源性干扰因素
类风湿因子、补体、异嗜性抗体、治疗性抗体、 自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物小分子、总蛋 白浓度等
类风湿因子干扰的排除
重复性条件(repeatability conditions) 是指在短的间隔时间内，在同一实验室对 相同的测定项目使用同一方法和同一仪器 设备，由相同的操作者获得独立的测定结 果的条件。
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定性测定精密度分析质量指标为C5-C95浓度区间（ 亦即“灰区”），这一区间范围≤C50±20%。
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辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
分析物浓度接近临界值时的不精密度曲线
CNAS-CL39：2012《医学实验室质量和能力认可准则在临床 免疫学检验领域的应用说明-2014改版
6
辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
性能验证的合格标准从何而来？
ISO15189实验室认可系列培训讲座
试剂盒说明书（先决条件！） 国际和／或国内标准
7
辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
如粪便隐血检测
11
辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
ISO15189实验室认可系列培训讲座
诊断试验
用于临床怀疑某种特定疾病或状况是否存在。
诊断试验需具有良好的敏感性和特异性。
诊断试验后如需进行确认试验，对诊断试验的特 异性要求可以稍微降低。
如各种微生物培养12 Nhomakorabea辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
ISO15189实验室认可系列培训讲座
确认试验
确认试验用于验证筛查试验或者诊断试验结果的确 认。
对于确认试验，特异性比敏感性更为重要。
如梅毒密螺旋体抗体荧光吸收试验（FTA-ABS）
13
辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
临界点（C50）浓度的定义
ISO15189实验室认可系列培训讲座
一份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获得 阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。
15
辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
ISO15189实验室认可系列培训讲座
C5 浓度的定义
一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阴 性结果时该分析物的浓度。
C5
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辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
ISO15189实验室认可系列培训讲座
C95 浓度的定义
一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阳 性结果时该分析物的浓度。
19
辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
分析物浓度接近C50的定性方法精密度试验
ISO15189实验室认可系列培训讲座
进行重复性研究时，理想情况下需绘制在规定条件下候选方 法的整个不精密度曲线，然而具体操作时需要检测的样本数 量较大 可使用一个简单的方法，即为待评价的检测方法建立分析物 的临界浓度，并判定某一特定浓度范围，例如C50±20%，是 否包含了C5-C95区间。 若-20%到+20%浓度范围包含了C5-C95区间，那么20%或距离 C50更远浓度的样本将得到一致的检测结果，即在 C5-C95区 间之外的样本检测结果可认为是精密的，浓度>C95，将持续 得到阳性结果，浓度<C5，将持续得到阴性结果。
2
辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
精品资料
• 你怎么称呼老师？
• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
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PPT课件
9
PPT课件
ISO15189实验室认可系列培训讲座
概念准备
筛查试验 诊断试验 确认实验 C50 C5 C95
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辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
ISO15189实验室认可系列培训讲座
筛查试验
筛查试验用于检测整个人群或部分人群中分析物的 存在情况。
一般而言，筛查试验应当具有较高的临床敏感性（ 即临床检出率大于95%），对其特异性的要求（和阳 性预测值）则取决于对各种因素的综合考虑。
C50
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辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
C50与试剂盒阳性反应判断值（CUT-OFF值）的区别
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这里的C50指的是一个处于试剂检测临界点的样本 浓度，其一旦确定，是不变的。
试剂盒CUT-OFF值指的是一个判断某一次测定结果 的由阴性和阳性对照信号值按一定公式计算出来的信 号值，每次测定都会有所差异。
±20%仅用于举例，实验室也可根据检验目的和可接受的精密度选择±10% 或±30%。
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只提供两种检测结果(-/+)的定性检测的精密度
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评价定性检测试剂或系统精密度时，需采用浓度接 近临界值的分析物作为检测材料，不宜采用阴性低值 或强阳性样本来评价定性检测方法的不精密度。
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定性免疫学检验的性能验 证与质量控制
辽宁中医药大学附属医院临床检验中心
ISO15189认可中大家到困惑的问题
ISO15189实验室认可系列培训讲座
定性免疫项目如： ELISA检测、自身抗体 免疫印迹试验、抗核抗体免疫荧光（IIF）检测 质量控制和性能验证及验证内容？如何做？标 准？
5
PPT课件
ISO15189实验室认可系列培训讲座
5.5 检验程序
5.5.1.1 检验方法和程序的分析性能验证内容应参考 试剂盒说明书上明确标示的性能参数进行验证，至少 应包括：检出限、符合率（采用国家标准血清盘或临 床诊断明确的阴阳性样品各20份或与其他分析方法比 对），如为定量方法应验证精密度（包括重复性和中 间精密度）；并应明确检验项目的预期用途，如筛查 、诊断、确认。
C95
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辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
性能验证专业知识技能准备
ISO15189实验室认可系列培训讲座
应熟悉待验证的试剂或系统 进行必要的培训，包括样本的处理和储存、试剂的 处理和储存、合理的检测方案、对结果合理的解释以 及系统的质量控制等。 制定质量保证计划 确定患者样本的数量及强弱（评价重复性） 确定比较的方法
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ISO15189实验室认可系列培训讲座
样本准备
质控品：可为商品质控品，有阳性和阴性。 C50和可能的C5（低于C50浓度20%）及C95浓度样本 （高于C50浓度20%） ：用于重复性及最低检出限验 证，不少于40次检测量） 临床样本或血清盘（准确性验证）（不少于50份阳 性和阴性样本）
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分析物浓度接近临界值时的不精密度曲线
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性能验证的合格标准从何而来？
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试剂盒说明书（先决条件！） 国际和／或国内标准
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如粪便隐血检测
11
辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
ISO15189实验室认可系列培训讲座
诊断试验
用于临床怀疑某种特定疾病或状况是否存在。
诊断试验需具有良好的敏感性和特异性。
诊断试验后如需进行确认试验，对诊断试验的特 异性要求可以稍微降低。
如各种微生物培养12 Nhomakorabea辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
ISO15189实验室认可系列培训讲座
确认试验
确认试验用于验证筛查试验或者诊断试验结果的确 认。
对于确认试验，特异性比敏感性更为重要。
如梅毒密螺旋体抗体荧光吸收试验（FTA-ABS）
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临界点（C50）浓度的定义
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一份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获得 阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。
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C5 浓度的定义
一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阴 性结果时该分析物的浓度。
C5
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C95 浓度的定义
一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阳 性结果时该分析物的浓度。
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分析物浓度接近C50的定性方法精密度试验
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进行重复性研究时，理想情况下需绘制在规定条件下候选方 法的整个不精密度曲线，然而具体操作时需要检测的样本数 量较大 可使用一个简单的方法，即为待评价的检测方法建立分析物 的临界浓度，并判定某一特定浓度范围，例如C50±20%，是 否包含了C5-C95区间。 若-20%到+20%浓度范围包含了C5-C95区间，那么20%或距离 C50更远浓度的样本将得到一致的检测结果，即在 C5-C95区 间之外的样本检测结果可认为是精密的，浓度>C95，将持续 得到阳性结果，浓度<C5，将持续得到阴性结果。
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精品资料
• 你怎么称呼老师？
• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
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筛查试验 诊断试验 确认实验 C50 C5 C95
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筛查试验
筛查试验用于检测整个人群或部分人群中分析物的 存在情况。
一般而言，筛查试验应当具有较高的临床敏感性（ 即临床检出率大于95%），对其特异性的要求（和阳 性预测值）则取决于对各种因素的综合考虑。
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C50与试剂盒阳性反应判断值（CUT-OFF值）的区别
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这里的C50指的是一个处于试剂检测临界点的样本 浓度，其一旦确定，是不变的。
试剂盒CUT-OFF值指的是一个判断某一次测定结果 的由阴性和阳性对照信号值按一定公式计算出来的信 号值，每次测定都会有所差异。
±20%仅用于举例，实验室也可根据检验目的和可接受的精密度选择±10% 或±30%。
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辽宁中医药大学附属医院临床P检P验T课中心件
只提供两种检测结果(-/+)的定性检测的精密度
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评价定性检测试剂或系统精密度时，需采用浓度接 近临界值的分析物作为检测材料，不宜采用阴性低值 或强阳性样本来评价定性检测方法的不精密度。
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定性免疫项目如： ELISA检测、自身抗体 免疫印迹试验、抗核抗体免疫荧光（IIF）检测 质量控制和性能验证及验证内容？如何做？标 准？
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5.5 检验程序
5.5.1.1 检验方法和程序的分析性能验证内容应参考 试剂盒说明书上明确标示的性能参数进行验证，至少 应包括：检出限、符合率（采用国家标准血清盘或临 床诊断明确的阴阳性样品各20份或与其他分析方法比 对），如为定量方法应验证精密度（包括重复性和中 间精密度）；并应明确检验项目的预期用途，如筛查 、诊断、确认。
C95
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性能验证专业知识技能准备
ISO15189实验室认可系列培训讲座
应熟悉待验证的试剂或系统 进行必要的培训，包括样本的处理和储存、试剂的 处理和储存、合理的检测方案、对结果合理的解释以 及系统的质量控制等。 制定质量保证计划 确定患者样本的数量及强弱（评价重复性） 确定比较的方法
18
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样本准备
质控品：可为商品质控品，有阳性和阴性。 C50和可能的C5（低于C50浓度20%）及C95浓度样本 （高于C50浓度20%） ：用于重复性及最低检出限验 证，不少于40次检测量） 临床样本或血清盘（准确性验证）（不少于50份阳 性和阴性样本）