免疫定性项目性能验证
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特异性 (TN/[TN+FP])
95%
95%
95%
95%
阳性预示值 TP/[TP+FP]
阴性预示值 TN/[TN+FN]
950/[950+4950]=16%
9500/[9500+4500]=67.9% 85500/[85500+500]=99.4 % 94050/[94050+50]=99.9%
二.定性检测系统的性能验证
“预示值”对临床检验结果影响
预示值对一个有95%敏感性和95%特异性的 试剂检测结果的影响（100,000人）
结 果 + － 10%感染率 检出 (+) 9,500 4,500 未检出 (－) 500 85,500 950 4,950 1%感染率 检出(+) 未检出(－) 50 94,050
敏感性 (TP/[TP+FN])
性能验证的合格标准从何而来？
试剂盒说明书 国际和／或国际标准
性能验证前样本的准备
质控品：使用商品化质控物进行，包括阴 性和阳性。
样本的采集和保存：采集时间、保存方式 等必须保证一致性。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临床免疫定性检测 的性能验证
高速列车性能验证
空气动力学 速度 车体转向架运行 固定、悬挂的零部件强度 稳定性 舒适感 故障率 ……
测定系统的关键要素
方法学 试剂
测定系统
操作程序
校准品
仪器
第 3页
医学检验为什么需要“性能验证”？
评价检测系统是否满足临床检测和认 可组织的要求（ISO15189）；
这里的临界点指的是一个处于试剂检测临界 点的样本浓度，其一旦确定，是不变的。 试剂盒CUT-OFF值指的是一个判断某一次测 定结果的由阴性和阳性对照信号值按一定公 式计算出来的信号值，每次测定都会有所差 异。
(1) CUT-OFF重复性验证
CUT-OFF的重复性（同时包含测定下限 的验证） 批内变异的验证
2、定性实验的临床分类
筛查实验：如便潜血、TP 诊断实验：如微生物学培养与细菌鉴定 确认实验：对以上已做出的检验结果进行验 证和确认
3.几个重要概念
筛查试验：临床上筛查方法通常用于检测整个人 群（或者人群中的特定部分）中特定指标的情况。 例如对需输血患者样本做HIV血清学试验。 一般来说，这些用于筛查的定性试验必须具有 高敏感性以确保真阳性结果的检出。如果筛查试 验的假阳性结果所造成的社会及经济后果不是非 常严重，这种低特异性可通过特异性较好的确认 试验加以弥补。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
(2) 测定下限的验证
处于测定下限浓度（如临界点浓度 +20%）的样本，重复检测20次， 应至少有18次以上(>90%)为阳性 反应。
1. 准确度验证
1）检测已知值的参考物质
室间质评材料 (卫生部或者CAP)
厂商提供的已赋值的参考材料 分析用参考方法或决定方法定值的材料。
2） 方法比较试验：样本数为10-20个，两种方法 同时测定同样的样品，用KAPPA检验方法分析 两种方法检测结果一致性.(比如HBV酶免法和发 光法比对)
特异性验证（干扰）
特定病原体以外感染性疾病患者的样本。 含有干扰性物质的样本：类风湿因子（RF） 阳性、含异嗜性抗体、溶血、脂血、高胆红 素样本。 结果判断：非特定病原体感染患者样本均应 为阴性。含一定浓度干扰物质的样本检测应 为阴性。
5. CUT-OFF重复性和测定下限验证
CUT-OFF重复性验证：样本浓度应接近临 界值。不宜用阴性或强阳性样本。 批内和批间变异验证：高、中和低三个浓度 （与试剂盒说明书中所述相适应）
批间重复性的验证
高、中、低三个浓度的样本，在10天以上时间 内单次（孔或管）重复进行20批检测，计算所 得S/CO值的均值和SD，计算批间CV%。 判断结论：应≤试剂说明书所标明的批间变异。 ELISA的批间变异CV%应≤15%。
3. 敏感性
1）验证方法:
取10-20份已知真阳性的样本，用常规检测方法检测，计
2）样本来源:体检样本,体检者确认符合要求后即可. NOTE:部分项目在健康体检人群中阳性率也很高,此 类项目特异性验证很难执行,建议引用厂家说明书.
比如麻疹病毒IgG,CP-IgG,MP-IgG等一系列病毒抗体IgG.因为很难 确认体检者既往是否有过感染史,而IgG抗体在体内存留时间长.因此很 难收集到真正意义上的阴性样本.
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
3.几个重要概念
确认试验：确认试验用于验证筛查试验或者诊 断试验结果。如果确诊试验证实了之前的检测 结果，临床医生即可作出诊断。确认试验通过 设计使其具有较高的特异性（有时甚至以牺牲 敏感性为代价）以及高阳性预测值。免疫印迹 试验就是一种用于HIV血清学试验等筛查试验 之后的确认试验。
批间变异的验证
验证步骤
制备足够40次重复检测的3份样本：分别 为处于临界浓度、高于临界浓度20%和低 于临界浓度20%的样本。 重复检测样本40次，确定每一份样本结果 为阳性和阴性的百分比。 评价临界浓度是否准确？评价+20至20%的浓度范围是否包含于、位于或者超 出这种方法的95%区间？
方法比较用样本数量
取决于评价者的目的。作为最低要求，检 测要持续到至少用比较方法获得50个阳性 样本。
并且至少用比较方法获得50例阴性样本以 确定此种检测方法的特异性。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
Note:
用S/CO比值进行统计计算.
最好选择临界值,或弱阳性样本.
判断标准:批内CV小于15%,批间CV小于25%.
批内重复性的验证
高、中、低三个浓度的样本，在一批检测 内，重复检测20次（孔），计算所得 S/CO值的均值和SD，计算批内CV%。
判断结论：应≤试剂说明书所标明的批内变 异。ELISA的批内变异CV%应≤10%。
选取40份（20份）样本,最好阴阳性各半 ↓ 随机盲法重新分号 ↓ 检测样本 ↓ 将所有检测结果汇总填表 ↓ 计算评价性能指标
2. 精密度验证
1）批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重复检 测10次.然后计算均值,SD和CV. 2）批间精密度:同一份样本连续检测10天,每天平行 检测双孔.然后计算均值,SD和CV.
性能验证前的准备
应熟悉待验证的试剂或系统 进行必要的培训，包括样本的处理和储存、 试剂的处理和储存、合理的检测方案、对结 果合理的解释以及系统的质量控制等。 制定质量保证计划 确定患者样本的数量及强弱（评价重复性） 确定比较的方法
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C
A+C
D
B+D
C+D
N
敏感度 = 100%×[A/（A+C）] 特异性 = 100%×[D/（B+D）] 相关样本的患病率 = 100%×[（A+C）/N] 阳性预测值（PVP） = 100%×[A/（A+B）] 阴性预测值 （PVN）= 100%×[D/（C+D）] 方法效率（正确率） = 100%×[（A+D）/N]
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C50是否准确？
40次测试 1 阳性结果 =<13/40(32.5%) C50 不正确
>=27/40(67.5%) 2 阳性结果 （14-26）/40（35%-65%） 正确
验证厂家提供的试剂参数能否在本实 验室得到重现。
什么时候进行性能验证
使用新的检测试剂或系统时； 更换检测试剂或系统时。
更易于操作 更高的检测性能
更换新的试剂或系统意义：
更经济
更能满足实验室测定要求
一.
定性临床应用与分类
1、定性测定的临床应用
免疫学测定：感染性疾病、肿瘤标志物 核酸和基因检测 微生物检验 细胞学检验 寄生虫检验
3.几个重要概念
敏感性或阳性测定能力指数（DI（＋））： 可定义为一实验对阳性标本测定后给出阳性 结果的能力。 DI（＋）=[真阳性/（真阳性+假阴 性）]×100% 特异性或阴性测定能力指数（DI（－））： 则为对阴性样本测定给出阴性结果的能力 DI（－）= [真阴性/（真阴性+假阳 性）]×100%
临界点的定义
同样一份样本，在多次重复实验中各有
50%的几率获得阳性或阴性的结果时该
分析物的浓度。
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临界点（CUT-OFF)与试剂盒判断值 （CUT-OFF值）的区别
不同C50重复检测次数与检出 阳性数的关系
阳性结果
重复性 检测总 次数 次数 百分比 真正百分比 样本的实际 浓度
20 40 100
10 20 50
50% 50% 50%
30%-70% 35%-65% 40%-60%
C30-C70
临界点（CUT-OFF）的重复性指的是什么？
是为正在评价的检测试剂或系统建立分 析物的临界浓度(C50)，并且确保临界
算检测阳性的样本占样本总数的比例。
2）样本来源:
临床诊断的阳性病人血清； 厂家提供的阳性对照； 决定性参考方法检测阳性的样本；
以上阳性样本来源紧张时，可以进行稀释（如2：3，3：4 这样稀释）
4. 特异性
1）验证方法：选取20份正常健康人血清（一般取自
健康体检者），计算其检测阴性结果所占百分率。
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Leabharlann Baidu
3.几个重要概念
诊断试验：通常用于临床怀疑某种特定疾病或 状况是否存在的诊断性定性试验。例如各种微 生物培养就是用于检查感染情况的诊断试验。 临床上对治疗的要求，诊断试验应具有很 好的敏感性和特异性。如果诊断试验后还进行 确认试验，那么诊断试验的特异性要求可以稍 微降低。
3.几个重要概念
阳性预示值：即测定为阳性的标本实际上为阳 性的可能性。 =[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100% 阴性预示值:则为一份给出阴性结果的样本实 际上为阴性的可靠性。 = [真阴性/（真阴性+假阴性）]×100%
临床诊断（金标准） 总计
阳性
阳性 验证方法 A
阴性
B A+B
阴性
总计
浓度±20%的范围处于95%区间内。
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如何获得系统或试剂的“临界点”
检测试剂或系统的说明书可能会注明分析 物的临界浓度。 如果临界浓度未知，则可以将阳性样本进 行一系列稀释，然后将他们进行重复检测 以确定能够获得50%阳性和50%阴性结 果的那个稀释度。这一稀释度的分析物浓 度即为临界点。
验证的内容: 1.正确度（准确度） 2.精密度 3.敏感性 4.特异性 5.CUTOFF值验证 6.其他（需要时）
涉及免疫定性检测评价方法标准
EP15A2 EP17A EP12
医学实验室精密度和准确度的确认 检出限与定量限的评价 定性检测评价
临床实验室标准化协会
Clinical Laboratory and Standards Institute (CLSI)
95%
95%
95%
95%
阳性预示值 TP/[TP+FP]
阴性预示值 TN/[TN+FN]
950/[950+4950]=16%
9500/[9500+4500]=67.9% 85500/[85500+500]=99.4 % 94050/[94050+50]=99.9%
二.定性检测系统的性能验证
“预示值”对临床检验结果影响
预示值对一个有95%敏感性和95%特异性的 试剂检测结果的影响（100,000人）
结 果 + － 10%感染率 检出 (+) 9,500 4,500 未检出 (－) 500 85,500 950 4,950 1%感染率 检出(+) 未检出(－) 50 94,050
敏感性 (TP/[TP+FN])
性能验证的合格标准从何而来？
试剂盒说明书 国际和／或国际标准
性能验证前样本的准备
质控品：使用商品化质控物进行，包括阴 性和阳性。
样本的采集和保存：采集时间、保存方式 等必须保证一致性。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临床免疫定性检测 的性能验证
高速列车性能验证
空气动力学 速度 车体转向架运行 固定、悬挂的零部件强度 稳定性 舒适感 故障率 ……
测定系统的关键要素
方法学 试剂
测定系统
操作程序
校准品
仪器
第 3页
医学检验为什么需要“性能验证”？
评价检测系统是否满足临床检测和认 可组织的要求（ISO15189）；
这里的临界点指的是一个处于试剂检测临界 点的样本浓度，其一旦确定，是不变的。 试剂盒CUT-OFF值指的是一个判断某一次测 定结果的由阴性和阳性对照信号值按一定公 式计算出来的信号值，每次测定都会有所差 异。
(1) CUT-OFF重复性验证
CUT-OFF的重复性（同时包含测定下限 的验证） 批内变异的验证
2、定性实验的临床分类
筛查实验：如便潜血、TP 诊断实验：如微生物学培养与细菌鉴定 确认实验：对以上已做出的检验结果进行验 证和确认
3.几个重要概念
筛查试验：临床上筛查方法通常用于检测整个人 群（或者人群中的特定部分）中特定指标的情况。 例如对需输血患者样本做HIV血清学试验。 一般来说，这些用于筛查的定性试验必须具有 高敏感性以确保真阳性结果的检出。如果筛查试 验的假阳性结果所造成的社会及经济后果不是非 常严重，这种低特异性可通过特异性较好的确认 试验加以弥补。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
(2) 测定下限的验证
处于测定下限浓度（如临界点浓度 +20%）的样本，重复检测20次， 应至少有18次以上(>90%)为阳性 反应。
1. 准确度验证
1）检测已知值的参考物质
室间质评材料 (卫生部或者CAP)
厂商提供的已赋值的参考材料 分析用参考方法或决定方法定值的材料。
2） 方法比较试验：样本数为10-20个，两种方法 同时测定同样的样品，用KAPPA检验方法分析 两种方法检测结果一致性.(比如HBV酶免法和发 光法比对)
特异性验证（干扰）
特定病原体以外感染性疾病患者的样本。 含有干扰性物质的样本：类风湿因子（RF） 阳性、含异嗜性抗体、溶血、脂血、高胆红 素样本。 结果判断：非特定病原体感染患者样本均应 为阴性。含一定浓度干扰物质的样本检测应 为阴性。
5. CUT-OFF重复性和测定下限验证
CUT-OFF重复性验证：样本浓度应接近临 界值。不宜用阴性或强阳性样本。 批内和批间变异验证：高、中和低三个浓度 （与试剂盒说明书中所述相适应）
批间重复性的验证
高、中、低三个浓度的样本，在10天以上时间 内单次（孔或管）重复进行20批检测，计算所 得S/CO值的均值和SD，计算批间CV%。 判断结论：应≤试剂说明书所标明的批间变异。 ELISA的批间变异CV%应≤15%。
3. 敏感性
1）验证方法:
取10-20份已知真阳性的样本，用常规检测方法检测，计
2）样本来源:体检样本,体检者确认符合要求后即可. NOTE:部分项目在健康体检人群中阳性率也很高,此 类项目特异性验证很难执行,建议引用厂家说明书.
比如麻疹病毒IgG,CP-IgG,MP-IgG等一系列病毒抗体IgG.因为很难 确认体检者既往是否有过感染史,而IgG抗体在体内存留时间长.因此很 难收集到真正意义上的阴性样本.
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
3.几个重要概念
确认试验：确认试验用于验证筛查试验或者诊 断试验结果。如果确诊试验证实了之前的检测 结果，临床医生即可作出诊断。确认试验通过 设计使其具有较高的特异性（有时甚至以牺牲 敏感性为代价）以及高阳性预测值。免疫印迹 试验就是一种用于HIV血清学试验等筛查试验 之后的确认试验。
批间变异的验证
验证步骤
制备足够40次重复检测的3份样本：分别 为处于临界浓度、高于临界浓度20%和低 于临界浓度20%的样本。 重复检测样本40次，确定每一份样本结果 为阳性和阴性的百分比。 评价临界浓度是否准确？评价+20至20%的浓度范围是否包含于、位于或者超 出这种方法的95%区间？
方法比较用样本数量
取决于评价者的目的。作为最低要求，检 测要持续到至少用比较方法获得50个阳性 样本。
并且至少用比较方法获得50例阴性样本以 确定此种检测方法的特异性。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
Note:
用S/CO比值进行统计计算.
最好选择临界值,或弱阳性样本.
判断标准:批内CV小于15%,批间CV小于25%.
批内重复性的验证
高、中、低三个浓度的样本，在一批检测 内，重复检测20次（孔），计算所得 S/CO值的均值和SD，计算批内CV%。
判断结论：应≤试剂说明书所标明的批内变 异。ELISA的批内变异CV%应≤10%。
选取40份（20份）样本,最好阴阳性各半 ↓ 随机盲法重新分号 ↓ 检测样本 ↓ 将所有检测结果汇总填表 ↓ 计算评价性能指标
2. 精密度验证
1）批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重复检 测10次.然后计算均值,SD和CV. 2）批间精密度:同一份样本连续检测10天,每天平行 检测双孔.然后计算均值,SD和CV.
性能验证前的准备
应熟悉待验证的试剂或系统 进行必要的培训，包括样本的处理和储存、 试剂的处理和储存、合理的检测方案、对结 果合理的解释以及系统的质量控制等。 制定质量保证计划 确定患者样本的数量及强弱（评价重复性） 确定比较的方法
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
C
A+C
D
B+D
C+D
N
敏感度 = 100%×[A/（A+C）] 特异性 = 100%×[D/（B+D）] 相关样本的患病率 = 100%×[（A+C）/N] 阳性预测值（PVP） = 100%×[A/（A+B）] 阴性预测值 （PVN）= 100%×[D/（C+D）] 方法效率（正确率） = 100%×[（A+D）/N]
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C50是否准确？
40次测试 1 阳性结果 =<13/40(32.5%) C50 不正确
>=27/40(67.5%) 2 阳性结果 （14-26）/40（35%-65%） 正确
验证厂家提供的试剂参数能否在本实 验室得到重现。
什么时候进行性能验证
使用新的检测试剂或系统时； 更换检测试剂或系统时。
更易于操作 更高的检测性能
更换新的试剂或系统意义：
更经济
更能满足实验室测定要求
一.
定性临床应用与分类
1、定性测定的临床应用
免疫学测定：感染性疾病、肿瘤标志物 核酸和基因检测 微生物检验 细胞学检验 寄生虫检验
3.几个重要概念
敏感性或阳性测定能力指数（DI（＋））： 可定义为一实验对阳性标本测定后给出阳性 结果的能力。 DI（＋）=[真阳性/（真阳性+假阴 性）]×100% 特异性或阴性测定能力指数（DI（－））： 则为对阴性样本测定给出阴性结果的能力 DI（－）= [真阴性/（真阴性+假阳 性）]×100%
临界点的定义
同样一份样本，在多次重复实验中各有
50%的几率获得阳性或阴性的结果时该
分析物的浓度。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临界点（CUT-OFF)与试剂盒判断值 （CUT-OFF值）的区别
不同C50重复检测次数与检出 阳性数的关系
阳性结果
重复性 检测总 次数 次数 百分比 真正百分比 样本的实际 浓度
20 40 100
10 20 50
50% 50% 50%
30%-70% 35%-65% 40%-60%
C30-C70
临界点（CUT-OFF）的重复性指的是什么？
是为正在评价的检测试剂或系统建立分 析物的临界浓度(C50)，并且确保临界
算检测阳性的样本占样本总数的比例。
2）样本来源:
临床诊断的阳性病人血清； 厂家提供的阳性对照； 决定性参考方法检测阳性的样本；
以上阳性样本来源紧张时，可以进行稀释（如2：3，3：4 这样稀释）
4. 特异性
1）验证方法：选取20份正常健康人血清（一般取自
健康体检者），计算其检测阴性结果所占百分率。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
Leabharlann Baidu
3.几个重要概念
诊断试验：通常用于临床怀疑某种特定疾病或 状况是否存在的诊断性定性试验。例如各种微 生物培养就是用于检查感染情况的诊断试验。 临床上对治疗的要求，诊断试验应具有很 好的敏感性和特异性。如果诊断试验后还进行 确认试验，那么诊断试验的特异性要求可以稍 微降低。
3.几个重要概念
阳性预示值：即测定为阳性的标本实际上为阳 性的可能性。 =[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100% 阴性预示值:则为一份给出阴性结果的样本实 际上为阴性的可靠性。 = [真阴性/（真阴性+假阴性）]×100%
临床诊断（金标准） 总计
阳性
阳性 验证方法 A
阴性
B A+B
阴性
总计
浓度±20%的范围处于95%区间内。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
如何获得系统或试剂的“临界点”
检测试剂或系统的说明书可能会注明分析 物的临界浓度。 如果临界浓度未知，则可以将阳性样本进 行一系列稀释，然后将他们进行重复检测 以确定能够获得50%阳性和50%阴性结 果的那个稀释度。这一稀释度的分析物浓 度即为临界点。
验证的内容: 1.正确度（准确度） 2.精密度 3.敏感性 4.特异性 5.CUTOFF值验证 6.其他（需要时）
涉及免疫定性检测评价方法标准
EP15A2 EP17A EP12
医学实验室精密度和准确度的确认 检出限与定量限的评价 定性检测评价
临床实验室标准化协会
Clinical Laboratory and Standards Institute (CLSI)