实验02 孚尔根核反应染色法

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固定的作用？
固定好的材料用蒸馏水冲洗后，放入1 N HCl， 60℃解离8~10 min。 作用
使细胞间果胶质分解，细胞壁软化或分解，从而 使染色体容易分散压平，便于观察
解离时间
按材料和解离液成分定。时间短，细胞不易压散； 时间长，细胞容易压碎，影响染色。
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Cells in the body reproduce by mitosis.
Mitosis produces cells with exact copies of the parental cell chromosomes and genes.
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染色30min~4h； 漂洗液漂洗2~3次，每次2~5min，待用。
五、实验步骤
以下各人独立完成： 将根尖置载玻片上，切取适当部位； 加45%醋酸洋红1滴； 压片； 镜检； 作图（实验报告）。
有丝分裂各时期
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有丝分裂各时期
间期
前期
中期 ——侧面
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有丝分裂
G0期：休眠期
S
G1期：DNA合
G1
成前期 G2 S 期：DNA合
成期
G0
G2期: DNA合
成后期
M
M 期：有丝分 裂期
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Cell cycle checkpoints
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四、原理
孚尔根反应是鉴别细胞中DNA的组织化学方 法，细胞内的DNA在1mol/L HCl，60℃下水解， 部分地破坏了脱氧核糖与嘌呤碱基之间的糖苷 键，嘌呤碱基脱掉，使脱氧核糖的第一个碳原 子上潜在的醛基获得自由状态；
Schiff试剂中的无色亚硫酸品红分子与活性醛 基反应而呈现为紫红色化合物。该产物能特异 地吸收峰值为550~570nm的光波。并在一定的 浓度范围内，在550~570nm光波的吸收值与 DNA含量成正比，即符合化学计量学关系。
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四、原理
此法既可定位用于细胞或组织化学染色反应， 观察DNA的分布，又可用显微分光光度计和图 像分析仪对细胞或组织中DNA的含量进行定量 分析。紫红色的产生，是由于反应产物的分子 内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具有颜 色。对照组或采取不经盐酸处理，或预先用热 三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA 而得到阴性反应。
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五、实验步骤
以下分组：每6~10人一组 以2~3个根尖/人为标准，取根尖置于1.5ml离心管中； 蒸馏水荡洗2~3次； 加1mol/L HCl（材料浸入），室温2~3min，倾弃； 加预热到60±0.5℃的1mol/L HCl，放入恒温水浴锅
中， 60±0.5℃水解5~15min，倾弃； 加1mol/L HCl（材料浸入），洗1~2min，倾弃； 蒸馏水荡洗2~3次，倾弃蒸馏水； 加Schiff试剂，盖紧离心管，黑暗、10 ℃左右条件下
有丝分裂器是指有丝分裂时产生的，由微管及 其结合蛋白所组成的星体和纺锤体。星体是指 围绕中心体向外辐射状放射的微管。纺锤体是 由大量微管在赤道面垂直排列所形成的中部宽 阔、两极缩小的细胞器，形如纺锤。
有丝分裂是一个核改组的连续动态过程，包括 交替出现间期和分裂期，并可分为几个不同阶 段。
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Feulgen反应对DNA染色稳定、颜色鲜明、能 定量，因此在细胞化学和组织化学中成为一个 既古老、传统又经久不衰的DNA标记方法。
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有丝分裂
前期 中期 后期 末期 子细胞
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有丝分裂
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Cells reproduce by a cell cycle
实验二 孚尔根核反应染色法
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一、实验目的
1. 学习和了解孚尔根（Feulgen）反应的原理； 2. 掌握对植物组织及细胞中鉴别DNA分布的 孚尔根反应染色方法； 3. 掌握压片方法； 4. 了解制作玻片标本的方法； 5. 观察细胞中DNA的分布。
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五、实验步骤
材料
培养的植物根尖长到2cm左右时，切下；或取幼小 花药或叶表皮或愈伤组织，或动物组织，或果蝇唾 腺等材料。
固定
将取出的材料放入新配制的Carrnoy固定液（无水 乙醇:冰醋酸=3:1）处理2~24hr→95%乙醇洗2次， 每次10min→80%乙醇洗1次，10min→70%乙醇， 冰箱保存。
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二、实验材料
植物（大蒜）根尖（或其他材料），经预处理。
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三、仪器药品
显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、刀片、 载玻片、盖玻片、吸水纸 染液（醋酸洋红）、卡诺固定液、HCl、 Schiff试剂、醋酸、乙醇、亮绿，等
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四、原理
有丝分裂又称间接分裂，特征是有丝分裂器的 产生。
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七、实验报告
绘制2张（或以上）实验观察到的不同时期 （或阶段）的有丝分裂图片。 要求：
为简化实验报告，不需要写目的、原理、材料、 方法等文字，只需图并注明时相，不需根据放大倍 数绘制，也不必注明放大倍数。
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5. 实验成功的玻片标本可制备为永久玻片标 本。
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为什么视野中大部分细胞没有进行有丝分裂？
细胞周期分为包括间期和分裂期，大部分细胞 处于间期，分裂期只占10%。比如蚕豆的细胞 周期为19.5 h，分裂期只有2h。
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秋水仙素的作用？
降低细胞质黏度，使染色体缩短分散。 抑制纺锤体形成，让更多细胞处于分裂中期。
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有丝分裂各时期
中期 ——极面
后期
末期
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子细胞
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有丝分裂各时期
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20Baidu Nhomakorabea
六、注意事项
1. 水解时间和温度是实验的关键因素；
2. Schiff试剂中SO2的含量影响孚尔根反应的 颜色表现；
3. 压片技术是视野观察清晰与否的关键；
4. 材料的不同（DNA含量的不同），是影响 显色反应强度的根本因素；