卫生毒理学实验基本技能

卫生毒理学实验基本技能

gy

教学目的

掌握卫生毒理学实验所必需的基本理论知识和技能，培养从事卫生毒理学实验研究的基本素质。

基本理论

目前毒理学研究有三种手段：其中主要手段是动物实验，即体内试验或整体试验。它是以实验动物如大鼠、小鼠或狗为模型，最终目的是通过外源化学物对实验动物的毒性反应，向人(原型)外推，以期评估外来化学物对人的危害及危险性

毒理学动物实验包括一系列基本操作，如实验动物选择、染毒、生物材料收集和制备、动物处死、病理解剖和标本留取等。这些基本实验方法和技术是毒理学实验的基本功。

实验动物的选择

实验动物物种的选择

通常，实验动物物种选择的基本原则是：对受试物在代谢、生物化学和毒理学特征与人最接近的物种；选择自然寿命不太长的物种；易于饲养和实验操作的物种；经济并易于获得的物种。　

被试化学物质的理化特性与毒理特点（如：化学物质的结构、理化特性、毒性大小、特点等和实验动物的解剖、生理、生化等）通常是进行实验动物选择的二个基本依据。

在卫生毒理学领域中，最常使用哺乳动物，尤以大鼠、小鼠为主。此外，尚有兔、豚鼠、狗、地鼠、猫、猴等。在环境毒理学研究中，有的使用昆虫（如蜜蜂等）或水生动物（如鱼类等）。 实际上没有一种实验动物完全符合上述物种选择的原则，目前常规选择物种的方式是利用两个物种，一种是啮齿类，另一种是非啮齿类。常用实验动物的生物学和生理学参数见表1-1。系统毒性研究最常用的啮齿类是大鼠和小鼠，非啮齿类是狗。

新西兰兔wistar 大鼠C57BL/6J 小

鼠比格犬

小型猪

豚鼠裸小鼠恒河猴

实验动物品系的选择

品系（strain）是实验动物学的专用名词，指用计划交配的方法，获得起源于共同

祖先的一群动物。

实验动物按遗传学控制分类可分为：

¾近交系

¾杂交群动物(杂交1代，F1)

¾封闭群

近交系：指全同胞兄妹或亲子之间连续交配20代以上而培育的纯品系动物。如小鼠有津白Ⅰ、津白Ⅱ、615，DBA/1和DBA/2，BALB/C，C3H，C57B/6J，A和A/He等。

②杂交群动物(杂交1代，F1)，指两个不同的近交系之间有目的进行交配，所产生的第一代动物。

③封闭群：一个种群在五年以上不从外部引进新血缘，仅由同一品系的动物在固定场所随机交配繁殖的动物群。如昆明种小鼠、NIH小鼠、Wistar大鼠、SD (Sprague-Dauley)大鼠、F344大鼠等。　

实验动物的抓取与固定

小鼠的抓取方法-1

小鼠的抓取方法-2

小鼠的徒手固定

小鼠固定板固定

小鼠固定筒固定

豚鼠抓取的方法

豚鼠的徒手固定

豚鼠的徒手固定

家兔的抓取

操作要点：

1.将颈背部被

毛和皮肤一起

抓住提起，并

用左手托住兔

腹部。

2.防止利爪抓

伤。

3.不能只提兔

双耳或双后腿，

也不能仅抓腰

或提背部皮

毛。

家兔的盒式固定盒

家兔的盒式固定盒

家兔的台式固定

动物性别鉴定与日龄判断

大、小鼠性别判断

豚鼠、兔性别判断

动物的编号、标记与去毛方法

动物编号与标记

常用方法：

1.皮毛染色法

--较小动物，一般编号在100内。

2.耳打孔法

--小动物，编号在200内。

3.颈部挂牌法

--大动物，任意编号。

4.剪脚趾法

--小动物，编号在100内。

皮毛染色法

是用化学染料对动物皮毛进行染色，根据不同染色部位、不同颜色等来区别每个动物的方法。

常用的标记液有：

①3％-5％苦味酸乙醇饱和溶液(黄色：个位)。

②0.5％中性红或碱性品红溶液(红色：十位)。

③2％硝酸银溶液(咖啡色，涂后需光照10分钟)。

④煤焦油酒精溶液(黑色)。

适用范围：实验周期较短、动物数量不多的情况。

优点：简单、无损伤。

缺点：容易褪色。

耳打孔法

是用动物耳孔机直接在动物耳朵上打孔或打成缺口，根据打孔位置和孔的数量来进行编号的方法。

一般习惯在耳缘内侧打小孔，按前、中、后分别表示为1、2、3号，在耳缘部打成一缺口，则分别表示4、5、6号，打成双缺口状则表示7、8、9号。

右耳表示个位数，左耳表示十位数。再加上右耳中部打一孔表示100，左耳中部打一孔表示200，按此法可编至200号。

打孔法标记

12号动物264号动物

戴项圈标记编号

实验动物随机分组 随机数目表方法随机分组：

按上法分组后，A组有动物7只，B组7只，C组6只，D组与E组各2只，F组6只。为使各组动物数均达到5只，再依随机分配原则选A组2只，C组1只给D组。B组选2只，F组选1只给B组。继续抄下随机数字分别除以A、B、C、F各组动物数。计算如下，56／7除尽，即将A组第7只动物(25号)给D组；再下50／6，余数为2，即将A组第2只动物(4号)给D组；再下26／6余数为2，即将C组第2只动物(9号)给D组。余类推，最后调整归组如下表(表1－4)：

动物去毛方法

常用方法：

1.剪毛法

2.拔毛法

大、小鼠皮下注射或家兔耳缘静脉注射或取血时使用。

3.剃毛法

4.脱毛法

脱毛法主要采用各种化学脱毛剂将动物所需部位的被毛脱去。