单克隆抗体和基因工程抗体

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基因工程抗体名词解释

基因工程抗体名词解释基因工程抗体是利用基因工程技术对人工合成抗体进行定制和改造的一种生物工程技术。

抗体是一种由免疫系统产生的蛋白质，它可以识别和结合体内外的异物，从而协助机体进行免疫防御。

基因工程抗体通过选择性克隆和定制抗体基因序列，可以产生特异性更强、稳定性更好、生产成本更低的抗体。

基因工程抗体包括以下几种：1. 单克隆抗体（Monoclonal Antibodies）：基因工程技术可以使得单个淋巴细胞克隆产生大量相同的抗体，从而获得具有高度特异性的单克隆抗体。

这种抗体广泛应用于医学诊断、疾病治疗和科学研究等领域。

2. 重链抗体（Recombinant Antibodies）：重链抗体是利用基因工程技术使抗体重链蛋白的编码基因与其他蛋白的编码基因相融合，生成融合抗体。

这种重链抗体可以通过改变其结构和功能来提高其生物活性和稳定性。

3. 组合抗体（Bispecific Antibodies）：基因工程技术可以将两种不同的单克隆抗体的编码基因进行融合，产生具有双特异性的组合抗体。

这种抗体可以同时结合两个不同的目标分子，从而实现更强的疗效和更多样化的应用。

4. 人源化抗体（Humanized Antibodies）：由于小鼠源抗体和人类抗体在体内效价和安全性方面存在差异，基因工程技术可以通过改造抗体的基因序列，使得抗体具有更接近人类抗体的结构和功能。

这种人源化抗体更适合在治疗和预防疾病时使用。

基因工程抗体的应用广泛，其中的一些常见应用包括：1. 肿瘤治疗：通过基因工程技术，可以定制针对特定肿瘤抗原的单克隆抗体，用于治疗癌症。

2. 自身免疫性疾病治疗：基因工程抗体可以定制具有特异性和高效的抗体，用于治疗自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等。

3. 传染病治疗：通过基因工程技术，可以改造抗体的结构和功能，用于治疗传染病，如艾滋病、流感和乙肝等。

4. 分子诊断：基因工程抗体可以用于检测和诊断疾病，如癌症标志物的检测和感染性病原体的检测等。

基因工程制备抗体方案有哪些

基因工程制备抗体方案有哪些引言抗体是一种可以识别并结合特定抗原的蛋白质，具有重要的生物学功能和临床应用价值。

传统制备抗体的方法主要是从动物（如小鼠、兔子等）中提取抗体，但该方法存在一些缺点，如周期长、成本高、质量不稳定等。

因此，基因工程技术的发展使得制备抗体的方法得到了革命性的改变，可以通过基因工程技术在体外合成抗体，提高了抗体的质量和稳定性。

本文将介绍基因工程制备抗体的方法和流程，包括抗体的选择和克隆、表达、纯化和鉴定等环节。

通过基因工程方法获得的抗体，可以应用于药物研发、医学诊断、生物学研究等领域，具有广阔的应用前景。

1. 抗体的选择和克隆（1）抗原的选择制备抗体的第一步是选择合适的抗原。

抗原是引发免疫反应的物质，可以是蛋白质、多肽、多糖、药物等。

根据需要制备的抗体类型，可以选择相应的抗原。

例如，如果需要制备单克隆抗体，可选择单个抗原蛋白作为抗原进行制备。

（2）抗体基因的克隆在选择了合适的抗原后，下一步是将抗体基因克隆到表达载体中。

通常可以利用PCR方法从免疫细胞中扩增出抗体基因，并将其插入表达载体中。

选择合适的表达载体是非常重要的，通常选择在哺乳动物细胞或大肠杆菌中表达。

2. 抗体的表达（1）表达载体的构建在决定抗体表达载体后，接下来是进行表达载体的构建。

通常表达载体包括启动子、终止子、选择标记基因等，通过合成或限制性内切酶切割等方法将抗体基因插入表达载体中。

（2）转染和筛选将构建好的表达载体导入宿主细胞中，可以通过转染等方法实现。

转染后，需要进行筛选，筛选出表达抗体的稳定细胞株。

通常可以利用克隆技术选取高表达的细胞株。

3. 抗体的纯化（1）细胞培养和收获经过筛选的稳定细胞株可以进行大规模培养，收获细胞培养上清液。

（2）亲和层析纯化常用的抗体纯化方法包括亲和层析纯化。

可以利用蛋白A/G或其他具有特异性结合抗体的配体进行纯化。

通过这种方法可以高效地将目标抗体从细胞培养上清液中纯化出来。

4. 抗体的鉴定（1）免疫印迹（Western blot）通过Western blot方法，可以验证纯化得到的抗体是否具有结构完整，是否与目标抗原结合。

基因工程抗体的例子

基因工程抗体的例子
基因工程抗体是通过基因重组技术将特定抗体基因导入至其他生物细胞中，使其具备产生抗体的能力，从而实现大规模生产高效、高纯度的抗体。

以下是一些基因工程抗体的例子：
1. 重组抗体药物：例如，重组人源单克隆抗体药物，如阿达木单抗（Adalimumab）和帕尼单抗（Panitumumab），用于治疗自身免疫疾病和某些癌症。

2. 基因工程抗体治疗疫苗：例如，COVID-19疫苗中使用的mRNA 疫苗，通过基因工程技术将病毒的抗原编码序列导入到人体细胞中，诱导免疫系统产生抗体来抵抗病毒感染。

3. 重组抗体诊断试剂：例如，基因工程技术可用于生产特定病原体抗体，如新冠病毒SARS-CoV-2抗体，用于开发快速诊断试剂盒，帮助早期检测和诊断疾病。

4. 基因工程抗体治疗：例如，CAR-T细胞疗法，通过基因工程技术将患者自身T细胞中的受体基因改造，使其能够识别和杀死癌细胞，用于治疗某些血液恶性肿瘤。

5. 基因工程抗体生产：基因工程技术可用于大规模生产特定抗体，如重组人源单克隆抗体，用于研究和治疗领域。

这些基因工程抗体的例子说明了基因工程技术在抗体研究、生产和
应用中的重要性和广泛应用性。

单克隆抗体和基因工程抗体

疾病诊断和治疗
基因工程抗体可以用于疾病的诊断和治疗，如肿瘤免疫治疗、自身免疫性疾病治疗等。
药物研发
基因工程抗体可以作为药物研发中的靶点筛选、药物设计和优化等环节的重要工具。
基因工程抗体的优缺点
优点
基因工程抗体具有高度的特异性和亲和力，能够针对特定抗原进行高灵敏度检测和靶向治疗；同时，基因工程抗体可以通过基因工程技术进行改造和优化，提高其稳定性和功能。
抗体的分类和发展历程
天然抗体
由免疫系统自然产生的抗体，类型多样，特异性各异。
单克隆抗体
通过杂交瘤技术制备的单一抗体，具有高度特异性，可用于治疗和诊断。
基因工程抗体
利用基因工程技术改造的抗体，如人源化抗体、小分子抗体等，具有更好的治疗潜力和应用前景。
抗体的分类和发展历程
单克隆抗体技术最初诞生于20世纪70年代，由两位科学家Kohler 和Milstein发明。该技术通过将具有特定抗体的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，进而筛选出能够持续稳定产生单一抗体的细胞系。单克隆抗体在临床治疗和诊断领域发挥了重要作用，如治疗癌症、自身免疫性疾病等。
100%
生物治疗
用于治疗肿瘤、自身免疫病、感染性疾病等，通过与药物结合或直接作用于靶点发挥作用。
80%
免疫学研究
用于研究免疫应答机制、细胞信号转导等。
单克隆抗体的优缺点
优点
高度特异性、易于制备和纯化、可大量生产、稳定性好等。
缺点
制备过程复杂、成本高、可能引发免疫反应等。
03
基因工程抗体
挑战
机遇
单克隆抗体和基因工程抗体的研发和生产成本较高，同时存在免疫原性和副作用等问题，需要进一步研究和改进。

抗体工程 - 1

B淋巴细胞融合
骨髓瘤细胞
多种杂交细胞
选择培养基上培养
专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞体外培养
克隆杂交细胞
注射到小鼠体内
单克隆抗体
基因工程抗体
基因工程抗体制备
基因工程抗体(Genetic engineering antibody)
根据研究者的意图，采用基因工程方法，在
抗体攻击病毒
凝集细菌
抗 SARS 的单抗 SARS-CoV
整体水平抗体生成技术
多克隆抗体（抗血清）
细胞工程抗体生成技术
单克隆抗体
嵌合抗体、改形抗体
基因工程抗体生成技术
“小型化抗体”（单链抗体）
组合抗体库技术
噬菌体抗体库技术抗体真核表达技术
多克隆抗体
多克隆抗体（polyclonal antibody）
基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。主要包括嵌合抗体、单链抗体、人源化抗体、双价抗体和双特异性抗体。
一、人源化抗体
将小鼠Ig基因敲除，转染人Ig基因，在
小鼠体内产生人Ab，再经杂交瘤技术，产生
大量完全人源化抗体
（一）嵌合抗体
方法：从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因，与人Ig恒定区基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人 -鼠嵌合抗体特点：减少了鼠源性抗体的免疫原性保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力
小结
杂交瘤单克隆抗体制备技术的原理是利用聚乙二
醇作为细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细胞与具有在体外不断繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体，在HAT 选择性培养基的作用下，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经过反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养（克隆化）,最终获得既能产生所需单克隆抗体,又能不断繁殖的杂交瘤细胞系，将这种细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，在其产生的腹水中即可得到高效价的

单克隆抗体和基因工程抗体

如：人-鼠嵌合抗体(chimeric antibody) 改型抗体 (reshaped
humanized antibody) 小分子抗体： Fab片段
Fc片段 Fv片段双特异性抗体(bispecific antibody)：如：Ig-融合蛋白，抗体导向酶等。
树立质量法制观念、提高全员质量意识。20.12.2320.12.23Wednes day, December 23, 2020
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。05:54:4705:54:4705:5412/23/2020 5:54:47 AM
安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦绷。20.12.2305:54:4705:54Dec-2023-Dec-20
加强交通建设管理，确保工程建设质量。05:54:4705:54:4705:54Wednesday, December 23, 2020
实际意义：
（1）抗原的纯化和结构分析；（2）细胞发生、分化及功能的阐明；（3）临床疾病的诊断和治疗，
如：免疫分子检测；免疫导向药物治疗恶性肿瘤 --- McAb抗癌药物(毒素或放射核素偶联)。
三、基因工程抗体
（genetic engineering antibody）
在DNA水平对Ig基因进行切割、拼接或修饰，导入受体细胞表达的抗体。
专注今天，好好努力，剩下的交给时间。20.12.2320.12.2305:5405:54:4705:54:47Dec-20
牢记安全之责，善谋安全之策，力务安全之实。2020年12月23日星期三5时54分 47秒 Wednesday, December 23, 2020
相信相信得力量。20.12.232020年12月 23日星期三5时54分47秒20.12.23

基因工程抗体

高特异性和高亲和力（ L/M）高特异性和高亲和力（Kd=108~1010L/M）对人没有免疫原性，对人没有免疫原性，不诱导机体对抗体的排斥反应游离抗体不激活补体一旦结合到靶抗原上，一旦结合到靶抗原上，能诱导效应功能细胞系稳定，细胞系稳定，适合在无血清培养基中进行大规模培养抗体符合生物制品标准
VH和VL是抗原决定簇结 VH和VL是抗原决定簇结合位点高变区 HVR 决定簇互补区CDR 决定簇互补区CDR 骨架区FR 骨架区FR CH1和CL：Ig同种异型 CH1和CL：Ig同种异型的遗传标志 CH2： CH2：补体结合位点 CH3：某些细胞Fc受体 CH3：某些细胞Fc受体 Fc 结合部位
Ag
ScFv应用 ScFv应用：应用：用于肿瘤的导向治疗肿瘤的影像分布基因治疗研究基因结构与功能的关系
三、单域抗体抗体与抗原的结合主要由Ig 抗体与抗原的结合主要由Ig的V区决定， Ig的区决定，因此只含V区基因片段的小分子抗体，因此只含V区基因片段的小分子抗体，即只有VH或 VL一个功能结构域，也能保持原单 VH或 VL一个功能结构域一个功能结构域，克隆抗体的特异性。这种小分子的抗体片段克隆抗体的特异性。就称为单域或单区抗体，就称为单域或单区抗体，其分子量仅为整个 Ig分子的 12，故也称之为小抗体。 Ig分子的1／12，故也称之为小抗体。分子的1
双特异性抗体的特点
* 将免疫细胞锚着于肿瘤部位，提高肿瘤部位的效靶比。 * 不受MHC的限制，直接激活免疫细胞的杀瘤机制。
2 1
3
提高抗体效应功能
双特异性抗体抗体融合蛋白
提高抗体效应功能
细胞内抗体
偶连细胞毒物质
抗体融合蛋白：抗体的一部分被非抗体序列替代，抗体融合蛋白：抗体的一部分被非抗体序列替代，

new单克隆抗体与基因工程抗体-han

三.功能区（domain）
轻链:VL，CL 重链:VH，CH1，CH2，CH3(IgG、IgA 和IgD) 多一个CH4（IgM和IgE）
功能区的主要功能：
VH和VL --- 抗原结合部位；
CH1～3和CL --- Ig遗传标志所在；
CH2(IgG)、CH3(IgM)---C1q结合部位；
CH2～CH3(IgG) --- 结合并通过胎盘； CH3(IgG)/CH4(IgE)--- FcR结合部位.
单价小分子抗体
• Fab抗体 • 单链抗体 • 单域抗体
单价小分子抗体
一、Fab抗体
Fab 段由重链 V 区及 CH1 功能区与整个轻链以二硫键形式连接而成，主要发挥抗体的抗原结合功能。Fab抗体只有完整IgG的 1/3。
二、单链抗体(ScFv) 单链抗体 (ScFv) 是由 VH 和 VL 通过连接肽（接头）重组并表达而成的
同分为可变区（V）和恒定区（C）：可变区（V区）：氨基酸排列顺序随抗体特异性不同变化较大恒定区（C区）：氨基酸数量、种类、排列顺序及含糖量都比较稳定
V区的结构
• 超变区 • 决定簇互补区（CDR）：
– 三个高变区共同组成 – Ig的抗原结合部位， – 该部位也称为CDR Ig的独特型决定簇骨架区(framework region,FR)
在嵌合抗体的基础上将鼠McAb V区中 FR替换成人的FR，保留与抗原结合的CDR 部位 (即CDR移植)
嵌合抗体图示
1-鼠MAb的可变区
+人抗体的恒定区
2-FR(framework region) 替换成人的FR
Fab抗体单链抗体单域抗体
种类
原理
嵌合抗体评价

基因工程抗体名词解释

基因工程抗体名词解释
基因工程抗体是由人工合成或修改的基因来产生的抗体，也称为重组抗体。

与传统的抗体不同，基因工程抗体不受限于动物来源，可以通过人工合成的方式来获得。

基因工程抗体的制备过程包括选择目标抗原、构建重组抗体基因、转染宿主细胞、高效表达和纯化等步骤。

因为基因工程抗体可以定制化地设计和制备，具有高度特异性和亲和力，因此在生物医学研究、临床诊断和治疗等方面具有广泛的应用前景。

常见的基因工程抗体包括单克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体和重组抗体等。

其中，单克隆抗体是指由单一克隆细胞产生的抗体，具有高度特异性和一致性；人源化抗体是将动物源的抗体人源化，避免了人体免疫系统对异种抗体的攻击；嵌合抗体是将两种或以上不同来源的抗体结合起来产生的新型抗体，具有更广泛的抗原覆盖范围和高亲和力；重组抗体则是根据目标抗原的结构和性质，设计并合成新的抗体基因来产生新型抗体，具有更高的特异性和亲和力。

基因工程抗体的发展将会在生物医学领域带来更多的应用和发展机会，同时也将推动基础研究和药物研发的进步。

克隆抗体与基因工程抗体

03 克隆抗体与基因工程抗体的比较
制备方法的比较
克隆抗体
通过动物免疫反应，提取B淋巴细胞，分离出单克隆抗体。
基因工程抗体
利用重组DNA技术，设计和构建抗体基因，在细胞或微生物中表达抗体。
特异性的比较
克隆抗体
通常具有高特异性，针对特定抗原表位。
基因工程抗体
可以通过基因突变和亲和力成熟进一步提高特异性，实现更精细的抗原识别。
基因工程抗体的定义
基因工程抗体是指利用基因工程技术，在体外对免疫系统进行模拟或对抗体基因进行克隆和表达，进而获得的抗体分子。
基因工程抗体是通过人工方法将抗体的基因进行重组、克隆和表达，从而在体外获得具有特定结构和功能的抗体分子。
基因工程抗体可以克服传统抗体制备方法的限制，实现大规模、高效、定向的抗体生产。
将产生抗体的B细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，通过筛选和培养获得稳定产生单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
转基因技术
将抗体基因克隆到表达载体中，转染到宿主细胞中，通过表达和纯化获得抗体分子。
噬菌体展示技术
利用噬菌体展示技术将抗体片段展示在噬菌体表面，通过筛选获得具有特异性的抗体分子。
02 基因工程抗体的概念
新型克隆抗体的研
发
针对不同疾病和靶点，研发具有特殊功能的新型克隆抗体，以满足临床治疗和诊断的需求。
降低免疫原性
通过基因工程手段对克隆抗体进行改造，降低其免疫原性，提高其在临床应用中的安全性和有效性。
基因工程抗体的发展方向
1 2 3
人源化抗体
通过基因工程技术将鼠源抗体的可变区与人源抗体的恒定区进行重组，形成人源化抗体，降低免疫排斥反应。
克隆抗体与基因工程抗体

单克隆抗体与基因工程抗体的制备技术

单克隆抗体与基因工程抗体的制备技术掌握：1.杂交瘤技术的基本原理2.抗体工程的基本技术一、单克隆抗体技术（Monoclonal antibody，McAb）（一）概述：克隆（clone）：由单个细胞繁殖、扩增而形成性状均一的细胞集落的过程称为克隆。

多克隆抗体（polyclonal antibody，PcAb）：大多数抗原分子具有多个表位，每一种表位均可刺激机体一个B细胞克隆产生一种特异性抗体。

传统制备抗体的方法是用包含多种表位的抗原物质免疫动物，从而刺激多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。

因此，所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物，称为多克隆抗体。

单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）：由一个仅识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体，称为单克隆抗体−−→单个克隆→B−）淋巴细胞化学性质单一、特异性强的抗体（单克隆抗体细胞群①哺乳动物在感染病原体后，体内会形成多种相应的B淋巴细胞（浆细胞），因而产生多种特异性抗体。

②每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。

多克隆抗体：劣势：均一性差、特异性低、排斥副反应强。

单克隆抗体：优势：活性专一、特异性强、纯度高、副反应弱。

（二）杂交瘤技术的基本原理1.杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞后同时保持两者的主要特性。

2.细胞的选择与融合：(1)亲本1：经过抗原免疫的B细胞，通常来源于免疫动物的脾细胞。

(2)亲本2：肿瘤细胞，通常选择多发性骨髓瘤细胞（Sp2/0）。

其具备以下特点为：①与B细胞为同一体系，可增加融合的成功率②稳定、易培养③自身不分泌Ig或CK④融合率高⑤是HGPRT缺陷株3.融合剂（fusogen）①引起融合的病毒：副粘病毒②化学制剂：聚乙二醇（PEG）③细胞电融合技术：电脉冲（三）选择培养基的应用1.细胞融合是一个随机的物理过程。

融合后可能出现以下情况：①脾细胞与瘤细胞②瘤细胞与瘤细胞③脾细胞与脾细胞④未融合的瘤细胞⑤未融合的脾细胞⑥细胞多聚体形式2.杂交瘤细胞的选择性培养基——HAT培养基细胞的DNA合成一般有两条途径：(1)主要途径：糖和氨基酸→核苷酸→DNA(2) 替代途径：1) 细胞融合的选择培养基中有三种关键成分：①次黄嘌呤（hypoxanthine，H）②甲氨蝶呤（aminopoterin，A）③胸腺嘧啶核苷（thymidine，T）2)三者取前缀缩写为HAT培养基3)原理：叶酸作为重要的辅酶参与DNA主要合成过程，氨基喋呤是叶酸的拮抗剂，能阻断该主要合成途径。

简述抗体的种类

简述抗体的种类：抗体分类：抗体分为天然抗体、多克隆抗体、单克隆抗体及基因工程抗体四类
（1）天然抗体，正常个体未经免疫而在血清中存在的抗体称为天然抗体。

典型的实例是ABO血型系统的天然抗体。

（2）多克隆抗体由多种抗原分子组成的、或是由多种决定簇组成的抗原可刺激具有相应抗原受体的不同淋巴细胞，因此所产生的抗血清是多种抗体的混合物，即多克隆抗体。

（3）单克隆抗体，是指识别一种抗原决定簇的细胞克隆所产生的均一性抗体，称为单克隆抗体，应用杂交瘤技术可获得几乎所有的抗原的单克隆抗体，只要这种抗原能引起小鼠的抗体应答。

单克隆抗体由于具有高度的单一性和均一性，在很大程度上提高了各种血清学方法检测抗原的敏感性及特异性，短短几年内在许多不同领域发挥巨大作用。

（4）基因工程抗体，由于绝大多数单克隆抗体是鼠源的，临床重复给药时体内产生抗鼠抗体，使临床疗效减弱或消失。

因此临床应用理想的单克隆抗体应是人源的，但人一人杂交瘤技术是目前未获得突破，即使研制成功，也还存在的人一人杂交瘤体外传代不稳定，抗体亲和力低及产量不高等问题.较好的解决办法是研制基因工程抗体来代替鼠源单克隆抗体。

基因工程抗体这一技术是在对工g基因结构与功能的充分了解的基础上与DNA重组技术相结合，然后根据研究者的意图在基因水平对Ig分子进行剪切、连接或修饰，甚至是在人工全合成后导入受体细胞表达，产生新型抗体，也称为第三代抗体。

单克隆抗体的制备和应用PPT课件

McAb的纯化
➢盐析沉淀 ➢亲和层析 ➢离子交换层析
McAb的鉴定
➢Ig类型、亚类测定：双扩法或ELISA法 ➢特异性测定：抗原类似物的交叉反应 ➢效价测定：用腹水或培养液的稀释度表示 ➢表位测定：几株单抗是否为不同表位特异的,用竞争抑制法，相加指数法及微机集群分析 ➢亲和性测定：测定亲和常数K ➢杂交瘤细胞染色体：秋水仙素裂解法，小鼠B细胞染色体40条，SP2/0细胞68条，杂交瘤细胞一般100多条 ➢McAb靶抗原分子量：常用western blot
流程
培养液
➢RPM1640培养液 ➢DMEMPEG是最常用的细胞融合剂 ➢ 作用机理：诱导细胞膜上脂类物质结构重排，使细胞膜易打开而有助于细胞融合 ➢ 作用特点：随机发生的，不同厂商、批号、分子量的PEG，其纯度与毒性有所不同
HGPRT酶与TK酶
细胞冷冻的意义
➢防止污染 ➢避免染色体丢失 ➢防止非分泌细胞的过度生长 ➢防止细胞密度过高而死亡
第二节单克隆抗体制备
培养骨髓瘤细胞
➢选择对数生长期的细胞进行传代培养 ➢细胞形态：浑圆、透亮、均一、排列整齐 ➢避免细胞返祖：定期用8-AG处理细胞 ➢注意事项：切忌过多传代培养，可将细胞分装冻存于-80℃ 或液氮及干冰中
➢动物接种每次用BALB/c或F1代小鼠，5-10 ╳105/只
免疫小鼠
➢ 细胞性抗原：1-2 × 107/只，不加佐剂，2-3周重复一次
➢ 可溶性抗原：首次，完全福氏佐剂+100微克抗原，3-6周 ➢ 100-200微克抗原，融合前3天，加强免疫
腹腔注射法
高滴度腹水
➢前5天进行,预先腹腔注射pristane ➢1~5×106细胞 ➢1~3w形成腹水
。

单克隆抗体和基因工程抗体的制备 ppt课件

课件
11
(二) 杂交瘤细胞的选择性培养

杂交瘤细胞的筛选：两种亲本细胞经PEG或其他方法处理后，可融合成不同类型的融合体，正常的脾细胞在培养基中存活仅5~7天，无需特别筛选，细胞的多聚体形式也容易死去。而未融合的瘤细胞则需进行特别的筛选去除。要从中筛选出真正的杂交瘤细胞，必须进行选择性培养。目前，常用HAT培养基。 HAT培养基：
课件 13
细胞DNA生物合成途径示意图
糖+氨基酸
正常途径
氨基喋呤(A)
次黄嘌呤(H) HMP
HGPRT
核苷酸Βιβλιοθήκη 核苷酸前体DNA应急途径
TK
胸腺嘧啶(T) 课件
TMP
14

用来融合的瘤细胞是经毒性培养基选择出来的缺乏 HGPRT 的细胞株，所以在 HAT选择培养基中不能生长。只有杂交瘤细胞具有亲代双方的遗传特性，即既有骨髓瘤细胞在体外无限繁殖的生命力又有 B细胞经辅助途径合成 DNA 的能力，故可在HAT培养基中长期存活并繁殖。
课件
7
2．小鼠骨髓瘤细胞

骨髓瘤细胞为B细胞系恶性肿瘤，能在体外长期增殖并容易与B细胞融合。
课件
8
用于杂交瘤技术的骨髓瘤细胞应符合的条件
①本身不分泌免疫球蛋白； ②为次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转化酶（hypoxanthine-guanine- phospheribosyl-transfer ase ， HGPRT ）或胸腺嘧啶激酶（ thymidinekinase，TK）缺陷的细胞株； ③瘤细胞能与B细胞杂交形成稳定的杂交瘤细胞； ④与B细胞融合率高。
课件
3
第一节杂交瘤技术的基本原理

克隆抗体与基因工程抗体的制备

基因工程抗体的制备流程
抗体基因的克隆和表达载体构建
从免疫动物或细胞中分离出抗体基因，并将其插入到表达载体中，以便在宿主细胞中表达。
抗体分子的分离和纯化
从表达抗体分子的细胞中提取、分离和纯化抗体分子，确保其质量和特异性。
ABCD
宿主细胞的转化和筛选
将构建好的表达载体导入宿主细胞，通过筛选获得能够表达目标抗体的细胞株。
生物药物
单克隆抗体可以作为药物载体，用于导向治疗和放射免疫显像技术等领域。
02
基因工程抗体的制备
基因工程抗体的概念
基因工程抗体是指利用基因工程技术，通过人工设计和合成抗体分子，以实现对特定抗原的特异识别和结合。
基因工程抗体可以克服传统抗体制备方法的限制，实现大规模、高效、定向的抗体生产，为生物医学研究和治疗提供更多可能性。
克隆抗体与基因工程抗体的制备
目录
• 克隆抗体的制备 • 基因工程抗体的制备 • 克隆抗体与基因工程抗体的比较 • 未来展望
01
克隆抗体的制备
克隆抗体的概念
抗体克隆
指将免疫动物的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，并筛选出能产生所需抗体的细胞系的过程。
单克隆抗体
杂交瘤细胞
融合后的杂交瘤细胞既具有瘤细胞无限增殖的能力，又具有B淋巴细胞产生抗体的功能。
03
克隆抗体与基因工程抗体的比较
制备方法的比较细胞中提取出B淋巴细胞，经融合后形成杂交瘤细胞，再筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞株，进行培养制备。
基因工程抗体
利用基因工程技术，将抗体的基因在细胞或微生物中进行表达，通过基因重组技术构建抗体库，筛选出所需抗体。
抗体偶联技术
发展新型的抗体偶联技术，将抗体与其他药物或放射性标记物偶联，实现精准治疗和诊断。

克隆抗体与基因工程抗体制备

单抗生产的方法：
01
动物体内诱生法：小鼠腹腔注射降植丸或液体石蜡，1周后腹腔注射杂交瘤细胞，7-10天后出现腹水，无菌采集。
02
体外培养法：5%CO2，37℃孵育数天，收集上清，离心。但收集的抗体含量不高
03
单克隆抗体的纯化
亲和层析法
辛酸沉淀法
盐析
凝胶过滤
离子交换层析
用中性盐使蛋白质沉淀析出的方法为盐析。大量的盐加入到蛋白溶液中，高浓度的盐离子有很强的水化力，可夺取蛋白质的水化层，使蛋白质胶粒失水发生凝聚而沉淀析出。血清 50%饱和度硫酸胺上清（清蛋白）沉淀（球蛋白） 33%饱和度硫酸胺上清沉淀拟球蛋白 r球蛋白
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单克隆抗体特性
第二步
第一步
缺点：
制备复杂，价格昂贵；反应强度不如多克隆抗体；应用有一定的局限性等等
优点：
理化性状高度均一，生物活性专一，只与一种抗原表位发生反应，特异性强，纯度高，易于实验标准化和大量制备
单克隆抗体在医学中的应用
检验医学诊断试剂
01
病原微生物抗原抗体的检测
02
肿瘤抗原的检测
03
免疫细胞及其亚群的检测
04
激素测定
05
细胞因子的测定
06
蛋白质的提纯
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肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术
08
基因工程抗体与抗体库技术
01
单抗体内应用和疗效受限原因：鼠源性单抗对人体有较强的免疫原性注入人体的单抗在肿瘤部位的摄取量甚少生产成本高,难于普及应用
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基因工程抗体的定义及种类

基因工程抗体的定义及种类一、基因工程抗体定义基因工程抗体是指通过基因工程技术对抗体基因进行克隆、表达和纯化，产生的具有高度特异性和稳定性的抗体。

与传统抗体相比，基因工程抗体具有更高的特异性和亲和力，并且可以克服传统抗体生产中的一些限制，如产量低、批次间一致性差等问题。

二、基因工程抗体种类1.单克隆抗体单克隆抗体（Monoclonal Antibody，简称mAb）是通过杂交瘤技术产生的单一特异性抗体。

杂交瘤技术是将免疫后的B淋巴细胞与肿瘤细胞融合，形成的杂交瘤细胞具有分泌特异性抗体的能力。

通过筛选和克隆，可以得到具有所需特性的单克隆抗体。

单克隆抗体具有高度特异性和亲和力，广泛用于治疗、诊断和科研等领域。

2.多克隆抗体多克隆抗体（Polyclonal Antibody）是来自免疫后的动物血清或脾脏组织的混合抗体。

多克隆抗体的制备相对简单，适用于大规模生产。

但是，由于是多克隆抗体，其特异性不如单克隆抗体高。

多克隆抗体通常用于基础研究和临床诊断等应用。

3.人源化抗体人源化抗体（Humanized Antibody）是通过基因工程技术将鼠源单克隆抗体的可变区基因插入到人抗体基因中，形成嵌合抗体基因，然后将嵌合抗体基因转染到人类细胞系中表达产生。

人源化抗体的免疫原性较低，可以在人体内保持较长时间的活性，并且副作用较小。

人源化抗体适用于治疗和诊断等领域。

4.功能化抗体功能化抗体（Functionalized Antibody）是通过基因工程技术对抗体可变区基因进行改造，引入新的功能基团或其他蛋白质，使其具有新的功能。

功能化抗体可以在保持原有抗体的特异性和亲和力的基础上，增加新的治疗或诊断功能。

例如，可以引入酶活性基团，使其具有细胞毒性作用；也可以引入荧光基团，使其具有荧光示踪功能。

功能化抗体在肿瘤治疗、自身免疫性疾病等领域具有广泛的应用前景。

克隆抗体与基因工程抗体

克隆抗体与基因工程抗体
• 克隆抗体的概念与历史 • 基因工程抗体的概念与历史 • 克隆抗体与基因工程抗体的比较
• 克隆抗体与基因工程抗体的应用 • 克隆抗体与基因工程抗体的未来发
展
01
克隆抗体的概念与历史
克隆抗体的定义
• 克隆抗体是指通过克隆技术获得的一组具有相同遗传特性的单克隆抗体，这些抗体由单一的B细胞克隆产生，具有高度均一性和特异性。
基因工程抗体的定义
基因工程抗体是指利用基因工程技术，在体外对抗体基因进行克隆、表达和筛选，获得具有特定结构和功能的抗体分子。
基因工程抗体可以通过重组DNA技术，将鼠源抗体的基因片段与人源抗体基因片段进行拼接，形成嵌合抗体、人源化抗体或完全人源抗体。
基因工程抗体的历史与发展
1
1986年，第一个鼠单克隆抗体被成功导入人体，引发了单克隆抗体药物的研发热潮。
克隆抗体可用于诊断疾病，如免疫组化、酶联免疫吸附试验等。
靶向治疗
克隆抗体可与特定抗原结合，用于癌症、自身免疫性疾病等的靶向治疗。
免疫疗法
克隆抗体可用于免疫疗法，如阻断免疫反应或激活免疫系统。
基因工程抗体在医疗领域的应用
人源化抗体
通过基因工程技术将鼠源抗体的可变区与人抗体的恒定区结合，形成人源化抗体，降低免疫排斥反应。
免疫原性。
完全人源抗体
利用人类免疫系统产生的抗体基因，通过基因工程技术构建的抗体分子，
具有最低的免疫原性。
人源化抗体
将鼠源单克隆抗体的可变区与人源抗体可变区进行拼接，进一步降低了免疫原性。
抗体药物
将单克隆抗体与药物结合，形成具有治疗作用的抗体药物，如免疫毒素、放射性核素等。
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