第二章-3 目的基因获得
获取目的基因的方法
获取目的基因的方法目的基因的获取是分子生物学和遗传工程研究中的重要步骤，它对于揭示基因功能、研究疾病机制以及开发基因治疗等方面具有重要意义。
下面将介绍几种常用的获取目的基因的方法。
1. PCR扩增法。
PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种常用的目的基因获取方法。
通过PCR 技术，可以在体外迅速扩增目的基因，从而获得大量的目的基因。
PCR扩增法具有操作简便、快速、灵敏度高等优点，是获取目的基因的常用手段。
2. 限制性内切酶切割法。
限制性内切酶是一类能够识别特定DNA序列并在其特定位置切割DNA的酶。
通过选择合适的限制性内切酶，可以将目的基因从DNA中切割出来。
这种方法具有选择性强、操作简便等优点，被广泛应用于目的基因的获取。
3. 基因克隆法。
基因克隆是一种常用的获取目的基因的方法。
通过基因克隆技术，可以将目的基因插入到载体DNA中，形成重组DNA。
然后，利用细菌或酵母等生物体的复制机制，可以获得大量含有目的基因的重组DNA。
基因克隆法具有获取大量目的基因、易于保存和传播等优点，是获取目的基因的重要手段之一。
4. 基因合成法。
随着合成生物学的发展，基因合成技术逐渐成熟。
基因合成法是一种通过化学合成的方式获取目的基因的方法。
通过合成DNA序列，可以获得具有特定功能的目的基因。
基因合成法具有获取特定序列的目的基因、避免限制性内切酶位点的限制等优点，被广泛应用于基因工程和合成生物学领域。
5. 基因组克隆法。
基因组克隆是一种获取目的基因的重要手段。
通过基因组克隆技术，可以直接从生物体的基因组中获取目的基因。
这种方法适用于大片段DNA的获取，对于研究复杂基因组的结构和功能具有重要意义。
综上所述，获取目的基因的方法多种多样，研究者可以根据具体的实验目的和条件选择合适的方法。
随着生物技术的不断发展，相信将会有更多更高效的方法出现，为基因研究和应用提供更多可能性。
获取目的基因的方法
获取目的基因的方法要获取目的基因，首先需要明确目的基因的具体信息，包括基因序列、功能、表达模式等。
然后，可以通过以下几种方法来获取目的基因。
1. 基因克隆。
基因克隆是获取目的基因最常用的方法之一。
通过PCR扩增或文库筛选等技术，可以获得目的基因的DNA序列。
然后，将目的基因插入到适当的载体中，如质粒或病毒载体，从而获得重组DNA。
最后，通过转染、转化等手段将重组DNA导入宿主细胞，实现目的基因的表达。
2. 基因合成。
基因合成是一种人工合成目的基因序列的方法。
通过化学合成的方式，可以按照目的基因的DNA序列，合成相应的DNA片段。
然后，将合成的DNA片段插入到载体中，再转染、转化等手段导入宿主细胞，实现目的基因的表达。
3. 基因突变。
有时候，我们需要获取的是目的基因的突变体。
通过诱发突变、基因编辑等技术，可以得到目的基因的突变体。
然后，将突变体插入到载体中，再转染、转化等手段导入宿主细胞，实现突变目的基因的表达。
4. 基因提取。
有时候，我们需要从已有的生物样品中提取目的基因。
通过DNA提取技术，可以从细胞、组织等样品中提取出目的基因的DNA序列。
然后，将提取的DNA插入到载体中，再转染、转化等手段导入宿主细胞，实现目的基因的表达。
总之，获取目的基因的方法多种多样，可以根据具体需求选择合适的方法。
无论是基因克隆、基因合成、基因突变还是基因提取，都需要严格按照操作步骤进行，并注意实验条件的控制，以确保获取的目的基因是准确、可靠的。
希望本文对您有所帮助，谢谢阅读。
《目的基因的获得》课件
面对全球共同面临的生物技术挑战，国际 间的合作与交流将更加紧密，共同推动目 的基因技术的进步与应用。
THANKS.
《目的基因的获得》 ppt课件
contents
目录
• 目的基因的概述 • 目的基因的分离与纯化 • 目的基因克隆的方法 • 目的基因的应用与展望
目的基因的概述
01
目的基因的定义
目的基因
是指通过基因工程技术，人为设计和改造的特定基因，用于表达特定的蛋白质 或RNA分子。
目的基因的获取
是指通过各种方法，从生物体的基因组中分离出所需的目的基因的过程。
化学合成法在基因合成、基因治疗等 领域有广泛应用。
化学合成法的优点是速度快、效率高 ，适用于短片段基因的合成。但该方 法成本较高，对于长片段基因的合成 存在难度。
PCR技术
PCR技术是一种通过体外扩增特定DNA片段的技术，也称为聚合酶链式 反应。该技术可以在短时间内大量扩增目的基因，提高检测的灵敏度和 特异性。
目的基因的重要性
01
02
03
基础研究
目的基因可用于研究生物 体的生物学特性和分子机 制，有助于深入了解生命 本质。
生物技术
目的基因可用于构建基因 工程菌、细胞、植物和动 物模型，为生物技术的开 发和应用提供基础。
医学应用
目的基因可用于基因治疗 、药物研发和疾病诊断等 医学领域，有助于提高疾 病治疗效果和预防水平。
通过筛选和况，是一种有效的目的基因分离方法 。
化学合成法
化学合成法是一种通过化学手段合成 目的基因的方法。根据已知的基因序 列，利用化学合成技术合成目的基因 的全部或部分片段。
PCR技术的基本原理是利用一对引物，在DNA聚合酶的作用下，对目的 基因进行选择性扩增。PCR技术具有操作简便、特异性强、灵敏度高、
《目的基因获取》课件
目学合成法 • 基因组测序法
01 目的基因获取概述
目的基因获取的定义
目的基因获取是指从生物体内分离出 特定的基因片段，通常是为了进行基 因克隆、表达或功能研究。
目的基因可以是已知序列的基因，也 可以是未知序列的基因，需要通过基 因筛选、PCR扩增等技术手段进 行分离。
编辑技术。02 基因法基因的构建1
基因的构建是目的基因获取的第一步，通常 采用基因克隆技术将所有择适当的载体、酶和引物 等工具，以确保基因片段能够正确质量和完整性。
02
在遗传学研究中，基因组测序可用于鉴定基因突变、遗传疾病关联和 进化机制等。
03
在疾病诊断与治疗中，基因组测序可用于检测致病基因突变、预测疾 病风险和指导个性化治疗。
04
在生物进化研究中，基因组测序可用于比较不同物种间的基因组差异 ，揭示物种进化历程和机制。
THANKS FOR WATCHING
PCR的反应条件
温度
PCR循环包括高温变性（95℃）、低温复性（50-65℃） 和适温延伸（72℃），每个步骤的温度和时间都有严格 要求。
dNTP
PCR需要四种脱氧核糖核苷酸作为原料，它们的浓度和纯 度会影响PCR产物的质量和产量。
引物
设计特异性良好的引物是PCR成功的关键，引物长度、特 异性、浓度等都会影响PCR结果。
01
基因组测序法是一种基于高通量测序技术的基因组 分析方法。
02
它通过将基因组DNA进行片段化、建库、测序和数 据分析，获取基因组的序列信息。
03
基因组测序法的原理基于碱基互补配对原则和测序 技术平台的多重独立测序反应。
基因组测序法的步骤
样本准备
包括基因组DNA提取、片段化、末端修复和质量评估、序列比对和变异 检测等分析，提取目的基因序列。
目的基因的4种获取方法
目的基因的4种获取方法目的基因的4种获取方法目的基因是指科学家们在研究某种生物学现象时，所需要的特定基因。
获取目的基因是进行分子生物学研究和基因工程实验的前提条件之一。
本文将介绍四种常见的获取目的基因的方法。
一、PCR扩增法PCR扩增法是一种常见且简便的获取目的基因方法。
其原理是利用DNA聚合酶在模板DNA上进行反复扩增，从而获得大量目标序列。
PCR扩增法适用于已知序列或有已知序列片段可供引物设计的情况下。
具体步骤如下：1. 设计引物：根据目标序列设计出适当长度、互补性良好、不含二级结构和非特异性引物。
2. 提取模板DNA：从样品中提取出含有目标序列DNA片段的模板。
3. PCR反应：将引物与模板DNA加入PCR反应体系，通过多轮温度循环反复扩增出目标序列。
4. 纯化PCR产物：通过凝胶电泳等手段纯化出PCR产物。
二、限制性内切酶消化法限制性内切酶消化法是一种利用限制性内切酶切割DNA，从而获得目标序列的方法。
其原理是在DNA双链中寻找特定的核苷酸序列，并将其切割成特定长度的DNA片段。
具体步骤如下：1. 设计引物：根据目标序列设计出适当长度、互补性良好、不含二级结构和非特异性引物。
2. 提取模板DNA：从样品中提取出含有目标序列DNA片段的模板。
3. 选择限制性内切酶：根据目标序列中存在的限制性内切酶位点，选择合适的限制性内切酶。
4. 消化反应：将模板DNA与选择好的限制性内切酶加入反应体系，进行消化反应。
5. 纯化产物：通过凝胶电泳等手段纯化出所需长度的DNA片段。
三、基因克隆法基因克隆法是一种将外源基因插入到载体中并进行繁殖复制的方法。
其原理是通过PCR扩增或限制性内切酶消化等手段获取目标基因，并将其插入到载体中，再通过细胞培养等手段进行繁殖复制。
具体步骤如下：1. 设计引物：根据目标序列设计出适当长度、互补性良好、不含二级结构和非特异性引物。
2. 提取模板DNA：从样品中提取出含有目标序列DNA片段的模板。
目的基因的获取方法
目的基因的获取方法获取目的基因的方法。
目的基因的获取是基因工程研究的重要环节，它对于生物学研究和生物技术的发展具有重要意义。
在进行目的基因的获取过程中，需要注意一些关键步骤和技术，以确保目的基因的准确获取和稳定表达。
本文将介绍目的基因的获取方法，希望能够对相关领域的研究者和学习者有所帮助。
首先，目的基因的获取可以通过基因克隆技术实现。
基因克隆是指将感兴趣的DNA片段插入到载体DNA中，形成重组DNA分子的过程。
常用的基因克隆方法包括限制性内切酶切割、DNA连接、转化等步骤。
通过这些步骤，可以将目的基因从原始DNA中分离出来，并插入到载体DNA中，实现目的基因的获取。
其次，目的基因的获取还可以通过PCR扩增技术实现。
PCR扩增是一种体外合成DNA的方法，通过DNA聚合酶酶的作用，可以在体外将目的基因扩增成大量的复制产物。
通过PCR扩增技术，可以从极少量的DNA样品中扩增出目的基因，为后续的分析和研究提供充足的材料。
另外，目的基因的获取还可以通过基因合成技术实现。
基因合成是指利用化学合成的方法，将目的基因的核苷酸序列按照设计要求进行合成，得到人工合成的目的基因。
基因合成技术可以克服目的基因长度过长、重复序列等问题，为基因工程研究提供了更多的可能性。
除了以上提到的方法，还有一些其他的方法可以用于目的基因的获取，如基因文库筛选、原核表达系统、真核表达系统等。
这些方法各有特点，可以根据具体的研究需求和实验条件选择合适的方法进行目的基因的获取。
总的来说，目的基因的获取是基因工程研究的重要环节，它涉及到多种技术和方法。
在进行目的基因的获取时，需要根据实际情况选择合适的方法，并严格按照操作步骤进行实验操作，以确保目的基因的准确获取和稳定表达。
希望本文介绍的方法对相关领域的研究者和学习者有所帮助，促进基因工程研究的发展和进步。
目的基因的获得策略
目的基因的获得策略随着基因编辑技术的不断发展，目的基因的获得变得越来越容易。
目的基因是指通过人工操作得到的、具有特定功能的基因。
获得目的基因的策略主要包括以下几种：1. 转录因子介导的重编程策略转录因子是一种可以影响细胞命运的蛋白质。
通过引入特定的转录因子，可以使细胞发生转化，并获得目的基因。
例如，通过转化成为神经元的细胞可以获得与神经元相关的基因。
2. 基因敲除和基因靶向策略基因敲除是指通过人工操作使特定基因失活的过程。
基因靶向则是利用RNA介导的Cas9蛋白质来精准切割特定基因。
这两种策略都可以用来获得目的基因。
例如，敲除或靶向特定的基因可以获得对应的基因功能。
3. 合成生物学策略合成生物学是指通过生物学、工程学和计算机科学等多学科交叉的手段，对生物体进行人工设计和构建。
通过合成生物学策略，可以获得具有特定功能的基因序列。
例如，可以利用合成生物学的方法获得具有特定酶活性的基因。
4. 基因重组策略基因重组是指将两个或多个不同的基因序列重新组合成一个新的序列。
通过基因重组策略，可以获得具有新的功能的基因。
例如，将来自不同生物体的基因重新组合，可以获得具有新的生物功能的基因。
5. CRISPR策略CRISPR是一种新兴的基因编辑技术，可以精准地切割DNA序列。
通过CRISPR策略，可以获得具有特定功能的基因。
例如，利用CRISPR技术可以精准地切割特定基因，从而获得具有特定功能的基因。
获得目的基因的策略有很多，每种策略都有其特定的应用场景。
未来，随着基因编辑技术的不断发展，获得目的基因的效率和精准度将会不断提高，这将为生命科学和医学研究带来更多的可能性。
目的基因的获得PPT课件
1.1 已知序列基因的PCR扩增 ⑴引物设计； ⑵引物效果检验和PCR参数确定。
5
1.2 RT-PCR
原理： 利用逆转录酶能将mRNA逆转录成
cDNA的特性，通过合适的引物，将细胞 内的mRNA逆转录成cDNA。
然后，通过PCR技术，将痕量的cDNA 扩增成大量的双链DNA。
6
逆转录步骤
cDNA 链合成： 一般利用polyT作为引物，也可用特异 性的序列作为引物
1
目的基因
需要克隆的DNA片段。
编码某种蛋白质
研究某基因结构 和功能的关系
研究某基因与 疾病的关系
2
目的基因
1.1 已知序列基因的PCR扩增 1.2 RT-PCR 1.3 RACE (cDNA末端的快速扩增)
然后根据核心序列设计引物。 来源：蛋白质、cDNA
10
RACE的技术流程
⑵ 设计简并引物和扩增核心区域
11
RACE的技术流程
⑶ 设计RACE引物并进行3‘RACE和5’RACE
扩增的核心区域克隆和测序后，既获得目的基因 中间部分的序列，根据这一序列分别设计RACE引物。
3‘RACE：
上游引物：根据中间核心序列设计 下游引物：oligo（dT） 利用cDNA第一链为模板将cDNA3’端扩增出来
17
思考题：
目的基因的获得方式有哪些？
18
个人观点供参考，欢迎讨论！
M=A、C、G N=A、G、C 、T 2.2 以5‘端随机引物和3’锚定引物进行PCR 2.3 PAGE 2.4 回收差异条带，利用差异条带法获取目的基因
1979年，Khornan等首次用化学的方法 合成了一种具有生物活性的大肠杆菌酪氨 酸转移酶核糖核酸基因，开创了基因化学 合成的先例。
基因工程目的基因获得的方法
基因工程目的基因获得的方法1. 引言基因工程是一种通过改变生物体的基因组来实现特定目的的科学技术。
基因工程的目的包括但不限于改善农作物品质、开发新药物、治疗遗传性疾病等。
在基因工程中，获得目的基因是关键步骤之一，本文将介绍几种常用的方法来获取目的基因。
2. 目的基因获得方法2.1 基因克隆基因克隆是最常用且经典的获得目的基因的方法之一。
该方法利用DNA重组技术，将感兴趣的DNA片段插入到载体DNA上，形成重组DNA。
通过转化等手段将重组DNA导入宿主细胞中，使其复制和表达。
具体步骤如下：2.1.1 DNA片段获取首先需要从源生物体中获取所需DNA片段。
可以通过PCR扩增、限制性内切酶切割、合成等方式获得。
2.1.2 载体构建选择适当的载体，如质粒或噬菌体，并进行线性化处理。
然后将待克隆的DNA片段与载体进行连接，形成重组DNA。
2.1.3 转化将重组DNA导入宿主细胞中。
常用的转化方法包括热激转化、电穿孔法、化学法等。
转化后，通过筛选和鉴定，获得含有目的基因的克隆。
2.2 基因合成基因合成是一种直接合成目的基因序列的方法。
该方法适用于无法通过其他方式获取目的基因序列的情况，或者需要对基因序列进行修改和优化时使用。
具体步骤如下：2.2.1 设计和优化根据所需功能和特定要求，设计目标基因序列。
可以根据已有序列进行修改和优化，如引入特定限制性内切酶切位点、调整密码子使用频率等。
2.2.2 合成将设计好的目标基因序列提交给合成公司进行合成。
合成公司通常采用化学方法或PCR扩增方法来合成目标基因。
2.2.3 克隆将合成好的目标基因插入到载体中，并进行转化过程，获得含有目的基因的克隆。
2.3 基因编辑基因编辑是一种通过直接修改生物体基因组来实现目的基因获取的方法。
常用的基因编辑技术包括CRISPR-Cas9系统、TALENs和ZFN等。
具体步骤如下：2.3.1 设计和构建编辑工具根据目的基因序列，设计适当的编辑工具。
基因工程中的目的基因获得的方法
基因工程中的目的基因获得的方法
基因工程中获得目的基因的方法有以下几种：
1. PCR扩增法：利用聚合酶链反应（PCR）从一个已知源
DNA扩增目的基因的特定片段。
这种方法需要已知目的基因
的序列或者已知相关基因的序列来设计引物，通过PCR扩增
特定片段。
2. 基因合成法：利用化学合成技术合成目的基因的DNA序列。
这种方法可以通过合成多个片段，再进行连接而合成完整的目的基因。
3. DNA文库筛选法：构建基因文库，将源DNA片段插入载体中形成DNA文库。
然后利用对目的基因编码的蛋白质进行筛选，找出含有目的基因的载体。
4. 基因克隆法：将目的基因从一个生物体中剪切出来，然后将其插入到另一个载体中，形成重组DNA。
这种方法通常使用
限制酶切和连接酶进行DNA分割和连接。
5. 基因编辑法：利用CRISPR-Cas9、TALENs或ZFNs等基因
编辑技术，直接对细胞或生物体进行基因编辑，将目的基因插入到细胞或生物体的基因组中。
这些方法可以根据具体的实验需求和技术可行性来选择合适的方法来获得目的基因。
目的基因的获取方法具体操作流程
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目的基因的获得
2. 合成引物（20 mer左右） 3. 合成探针序列 4. 定点突变合成
合成带有 定点突变的基因片断。
5. 合成人工接头或衔接物
含有各种酶切位点 人工接头 （Adaptor）或衔接 物（Linker）序列。
EcoR I Adaptor EcoR I Linker
第一步：溶菌
使用“溶液Ⅰ”溶解细菌细胞壁。
Solution I 成分：
50 mM葡萄糖， 25 mM Tris-HCl (pH8.0) ， 10 mM EDTA ， 4-5 mg/ml 溶菌酶， RNase A
第二步：破膜，蛋白质和DNA变性
溶液II 破坏细胞膜，使蛋白质和 DNA变性。 Solution II 成分：
二、 化学合成DNA片断的组装
化学合成的 DNA片断一般在 200bp以内。
1. 互补连接法
（1）互补配对
预先设计合成的片断之间都有 互补区域，不 同片断之间的互补区域能形成有 断点的完整双链
（2）5'端磷酸化
用T4多核苷酸激酶 使各个片段的 5'端带上磷酸 （合成的 DN单A 链的5'端是-OH）
5' ATCTTGAAC 3' TAGAACTTG
95oC
TGCATGCAT 3' ACGTACGTA 5'
5' ATCTTGAAC
模板
TGCATGCAT 3'
3' TAGAACTTG
ACGTACGTA 5'
模板（template）
2. DNA模板与引物复性 Nhomakorabea40-65 ℃
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高丰度mRNA： 目的mRNA在细胞中的含量占细胞
质总mRNA量的50-90%。
低丰度mRNA： 目的mRNA在细胞中的含量占细胞
质总mRNA量的0.5%以下。
步骤：
钓取目的基因的mRNA
逆转录酶催化合成cDNA第一链
逆转录酶去除mRNA-cDNA 杂交链中的mRNA链
第二章 基因工程的基本条件
一、用于核酸操作的工具酶 二、基因克隆载体 三、目的基因的获得 四、基因工程受体菌或细胞
三、目的基因的获得
限制酶酶切直接分离法 PCR扩增法 从mRN
对已克隆在载体中的目的基因，可根 据目的基因两侧的限制酶识别序列，选择适 当的限制酶酶切，获得目的基因。 注意：
变性：双链DNA解链为单 链DNA；
变性
退火：引 物 与 模 板 单 链 退火 DNA的特定互补部 位配对、结合； 延伸
延伸：以目的基因为模板， 合成互补的新DNA 链。
由于每一循环所产生的DNA片段均能成为 下一次循环的模板，故PCR产物以指数方式增 加，即Y=2n (n为循环次数)。
3 0 th cycle ？ 230(109)copies
1986.05 冷泉港“人类分子生物学”专题研讨会
1987.01 Mullis KB, Faloona FA. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase catalyzed chain reaction. Methods in Enzymology. 1987,155:335-50.
1983.08 正式做有关PCR原理的报告 1983.09 Mullis开始动手做实验 1984.11 首次取得可信结果 1985.01 Randall Saiki加入，结果毋庸置疑
1985.03 Cetus公司申请专利
1985.12 Saiki RK, Scharf SJ, Faloona FA, Mullis KB, Horn GT, Erlich HA, Arnheim N. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. Science. 1985,230(4732):1350-4.
1986.06 Saiki等将耐热DNA聚合酶--Taq酶引入PCR技术 。 1986.09 Mullis离开Cetus公司
1988.01Saiki RK, Gelfand DH, Stoffel S, Scharf SJ, Higuchi R, Horn GT, Mullis KB, Erlich HA. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase. Science. 1988,239(4839):487-91.
1998.04 Mullis KB. Dancing naked in the mind fields.
The Nobel Prize in Chemistry 1993
1972 在加州大学伯克利分校获得博士学位 1979 进入私人生物技术公司Cetus
1983.03 开汽车时的联想： 蜿蜒崎岖的山路--DNA双螺旋 行驶的汽车--一小段DNA引物
目的基因内部不能有该限制酶的切点， 否则目的基因会被切成碎片！
Ampr
f1ori lacZ
pGEM-T/hVEGF165 hVEGF165 3.5 Kb
SnaB I EcoR I Avr II Not I
EcoR I Not I
5’AOX1 hVEGF165
Bgl II Ampr
pPIC9K/hVEGF165 9.8 Kb
HIS4
5’ AOX1
Bgl II
Ampr
pPIC9K
9.3 Kb
ColE1 Bgl II
3’ AOX1
Kanr
HIS4
ColE1
Bgl II 3’AOX1 Kanr
（二）PCR法扩增目的基因
PCR(polymerase chain reaction)： 利用耐热DNA聚合酶的反复作用，通
过变性-退火-延伸的循环操作，在体外迅 速将DNA模板扩增数百万倍的操作技术。
Klenow酶合成cDNA第二链
PCR技术的发明--DNA操作技术的革命 发明人：美国生化学家Kary B. Mullis
1990.04 Mullis KB. The unusual origin of the polymerase chain reaction. Scientific American. 1990,262(4):56-61,64-5.
问题：可能造成目的基因碱基序列的改变。
原因： Taq酶无3’→5’外切酶活性，无 阅读校正功能，在扩增过程中会引起错配， 30次循环Taq酶错配率约0.25％。
措施：选择高保真Taq酶，如Pfu。
由Taq酶扩增的PCR产物，3’末端总是带 有一个非模板依赖型的突出碱基，而这个碱基几 乎总是A因，Taq酶对dATP具有优先聚合活性。
1989
Science杂志将PCR列为十余项重大科学发明之首
，
1991.12比喻Ce1t9u89s年以为$3P亿C将R专爆利炸年卖。给Hoffmann-La Roche公 司
Eppendorf ABI
Bio-rad
PCR法扩增目的基因的前提：
已知目的基因全序列或其两侧序列， 化学合成与模板互补的上、下游引物。
可用T载体克隆。
5Hale Waihona Puke AA’5PCR扩增产物 ’
T7 lacZ MCS ori Ampr
5’
T
T
5’
T载体
（三）从mRNA合成cDNA
以目的基因的mRNA为模板，在逆 转录酶作用下合成cDNA第一链，然后在 Klenow酶作用下合成双链cDNA。
此法适用于mRNA丰度极高的目的 基因克隆，如血红蛋白珠蛋白基因。