扫描电镜制样技巧
扫描电镜制样
扫描电子显微镜(SEM)常规样品制备技术SEM常规制样方法（一）——试样的取材、固定、脱水和置换一、实验目的掌握扫描电镜制样过程：从取材、固定、脱水、置换、干燥、喷涂这一过程中样品怎样保持生活状态，从而得出接近生活状态的样品。
二、实验原理不论动物或植物组织，要求取材时操作必须快速，组织表面要清洁，必要时需超声波清洗，原理同TEM取材，但需强调的是SEM观察表面结构，所以应注意表面结构的清洁、完整和电镜下反应真实的形貌。
取材时动作要快、轻、准、大小在1mm-1cm之间，所用的器械要锋利、洁静，避免任何牵拉和挤揉样品表面的损伤，常用的固定剂有2-4%戊二醛和1%锇酸。
三、实验器材样品（动物或植物）、双面刀片、培养皿、l.5ml离心管、牙签、2-4%戊二醛、1%锇酸、0. 1M PBS缓冲液，乙醇、乙酸异戊酯。
四、实验步骤1、取材要求动作轻、迅速、准确，为了保持生活状态，应在固定前清洗掉表面杂质，即，迅速将标本放在PBS缓冲液中冲洗，也可超声波器中超10s-30s，使样品所带的污物除去（如：气管内壁上的粘液、植物叶上的灰尘等）。
2、固定（前固定）经过清洗的样品迅速投入2-4%戊二醛囤定液中，间歇振荡且室温固定约2-4小时即可。
样品固定的目的：使样品细胞的微细结构完整真实地保存下来。
如果样品没有很好地固定，那么样品在脱水时可能变形，破坏了样品的生活状态，也就是说，固定不好的材料，电镜下不能反映真实结构，所以这一步很重要。
3、冲洗0. 1M PH7.2 PBS缓冲液洗：30分钟中间换3-4次，因戊二醛与锇酸反应生成细微的沉淀，所以在后固定之前，用0. IM PBS缓冲液洗去多余的戊二醛之后，样品才可能进入锇酸固定液。
4、后固定：1%四氧化锇后固定1-2小时。
5、冲洗：重蒸水冲洗30分钟中间换3-4次，因四氧化锇与乙醇反应，所以在脱水前充分洗去残留的四氧化锇，样品才能进行脱水。
6、脱水脱水剂为乙醇，室温进行为了减少人工损伤，需要梯度脱水：30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%，每级15-20分钟，如果是动物样品，脱水时间可5-10分钟，脱水要充分完全地进行直到除尽样品中的水份为止，最后100%乙醇要重复2-3次，保证样品绝对无水。
扫描电镜样品制备
扫描电镜样品制备扫描电子显微镜生物样品制备技术无论是透射电镜或是扫描电镜，样品均处于电镜镜筒的真空之中。
而大多数的生物样品都是柔软而且含大量水分的。
因此，也和透射电镜的样品一样，在进行扫描电镜观察前，必须对生物样品作相应的处理。
扫描电镜的功能很多，不同的功能对样品的要求不同。
例如二次电子像与背散射电子像和吸收电子像对样品的要求基本相同，而与X射线微区分析对样品的要求相差较远。
我们首先介绍二次电子像的生物样品制备技术。
此外，由于样品的性质不同，其处理方法和程序也有不同。
主要分两大类，一类为含水量少的硬组织，如毛发、牙齿及植物的花粉、孢子、种子等。
此类样品一般含硅质、钙质，角质，砝琅质和纤维素等成份，所以通常只经过表面清洁、装台(粘胶)、导电处理等简单过程即可进行观察。
如要观察其断面或内部结构时，经断裂、解剖或酶消化、蚀刻等再装台、镀膜处理，即可进行观察拍照。
另-类为含水分较多的软组织，如大多数的动植物器官、组织及细菌等均属此类。
对于此类样品，在金属镀膜前，一般都需经过固定、脱水、干燥等处理，如不经处理或处理不当，就会造成样品损伤和变形，出现各种假像，因此对每一处理步骤都应给予重视。
但是，不管是那一类样品的制备，都应达到以下要求：∙尽可能保持样品活体时的形貌和结构，以便如实地反映样品本来面目。
∙在样品的干燥过程尽可能减少样品变形。
∙样品表面应有良好导电性能和二次电子发射率，以防止和减少样品的荷电效应。
样品的前期处理扫描电镜样品的前期处理主要包括表面清洁、固定、漂洗和脱水等过程。
而每一过程的处理方法基本上都是沿用透射电镜样品的处理方法的，所以，这里不一一再作详述。
但是，由于两种电镜观察的要求不同，因此，在处理中也有不同之处：1. 透射电镜主要研究样品的内部结构要求内部结构保存好，因而样品宜尽可能小使固定液能迅时渗入固定。
扫描电镜观察表面形貌，而且为了操作方便选取较大样品。
一般在8～10mm2左右，高度可达5mm。
扫描电镜样品的制备课件PPT教学
取材 2.清洗液的类型与选择：蒸馏水、生理盐水、加酶清洗液等
清洗
➢ 选择原则：清洗液的pH值、渗透压、温度应该尽量接近样品材料的生理值， 以免样品因环境突变而产生形变。
固定
➢ 选择方法：
脱水 ✓植物材料：蒸馏水洗净尘埃；
✓动物材料：等渗生理盐水、5%碳酸钠或缓冲液洗去黏液等；
干燥
✓游离细胞：用等渗的缓冲液清洗(精子、血细胞、微生物)；
粘样
（5）超声波清洗：用于表面结构复杂、凹陷、皱折多的样品。 样品置清洗液中，超声波清洗器内清洗，必须控制功率
镀膜 （6）灌流清洗：观察管腔内壁结构的样品，避免血液、 组织液凝聚而影响观察效果。
镜检
通过动脉注入清洗液，直到排出液变清为止。必须控制压力
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取材 三、固定方法
清洗 固定
1.单固定：只用一种固定剂（通常戊二醛）固定的方法。
8000离心 2~5分钟
霉菌
切割菌落
戊二醛固定
常规固定 脱水干燥 粘样镀膜
常规脱水干燥
杆菌10μm
球菌10 μm 酵母菌5 μm
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曲霉20 μm
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第二节 特殊要求的扫描制样技术
——组织细胞的内部结构观察法
简易剖出法
切断法：多孔组织 掰开法：实质性组织 拉断法：纤维组织
（1）植物材料：根部水冲洗去泥土，地上部用水冲洗或滴洗。 观察气孔状态时应注意清洗后取材时机。
（2）较干净的样品：固定后20倍体积的清洗液轻摇，换液三次。
脱水 干燥
（3）表面附着大量黏液的样品：振荡法或喷射瓶壁加压冲洗。 （4）游离细胞、微生物：离心法清洗。
清洗液与样品混合摇匀 低速离心（反复三次）
sem制样方法及注意事项
sem制样方法及注意事项以SEM制样方法及注意事项为标题，我将介绍SEM制样方法的基本原理和操作步骤，并提供一些在实践中需要注意的事项。
SEM（扫描电子显微镜）是一种常用的表面形貌观察和分析技术，可以在纳米至微米尺度下观察样品的形貌和结构。
SEM制样是实施SEM观察的前提，它的目的是将样品制备成适合SEM观察的形式。
一、SEM制样方法1. 样品选择：首先需要确定要观察的样品类型，包括材料、形状、尺寸等。
不同样品可能需要不同的制样方法。
2. 样品固定：根据样品的特性和尺寸，选择合适的固定方法。
常见的固定方法包括化学固定、机械固定和冷冻固定等。
3. 前处理：根据需要，对样品进行预处理，如去除杂质、修整表面等。
这一步骤可以改善SEM观察的效果。
4. 制备导电层：由于SEM需要对样品进行电子束照射，所以样品表面需要制备导电层以避免电荷积累。
常用的导电层材料有金属薄膜、碳薄膜和导电胶等。
5. 制备薄片：将样品制备成适合SEM观察的薄片。
常用的制备方法有机械剥离、切割、研磨和离心等。
制备薄片的目的是获得样品的横截面或断面信息。
6. 脱水和干燥：对于水溶性样品，需要进行脱水处理以避免SEM 观察时的水蒸气干扰。
常用的脱水方法有自然蒸发、冷冻干燥和真空脱水等。
7. 导入SEM：将制备好的样品放入SEM中进行观察。
在导入过程中要注意样品的定位和对焦，以确保观察的准确性和清晰度。
二、SEM制样注意事项1. 样品处理时要注意避免污染和损坏。
使用无尘室或洁净台进行制样操作，避免灰尘和其它杂质的污染。
对于易损样品，要采取适当的操作方法和保护措施。
2. 制备导电层时要注意均匀涂覆和适当厚度。
导电层的均匀性和良好的导电性能对于SEM观察结果的准确性和清晰度非常重要。
3. 制备薄片时要控制厚度和平整度。
薄片的厚度和平整度对于SEM 观察的分辨率和细节展示有着重要影响。
制备过程中要小心操作，避免样品的破损和变形。
4. 脱水和干燥过程中要避免过度处理。
扫描电镜样品制备生物技术
离子溅射原理
优点：
喷镀颗粒较细，不至于掩盖样品的微细结构 喷镀均匀 二次电子收获量较高
组织导电技术：
原理：金属盐类化合物与生物样品中的蛋白
质、脂类、淀粉等呈化学性结合，使样品表面 离子化，或游离出金属分子镶嵌于生物分子之 间，使样品表面电阻降低，从而避免了样品充 电。可避免样品热损伤。
材料防止挤压，观察面做好标记
（二）样品清洁漂洗
一般：生理盐水、5％碳酸钠或与固定液相应的缓冲液 大量粘液：预固定，再用蛋白水解酶 表面形态复杂、皱折凹陷多，不易清洗的样品 ：低频超声波 观察组织、细胞内部结构（如血管等）：灌流清洗后再取材
（三）样品的固定
目的：保持生物样品的微细结构和外部形貌。
扫描电子显微镜样品制备技术
SEM结构
扫描电子显微镜原理
一、常规扫描电镜样品制备技术
样品表面必须清洁 样品要干燥而不失原形 样品要有良好的导电性能 注意辨认和保护观察面
（一）取材要点
材料大小适宜
观察表面结构：直径＜5mm，高度3～5mm 观察内部结构：直径＜2mm，高度3mm± 满足观察内容条件下，样品块尽量小。
原因： 表面张力 目的： 消除表面张力
方法： 空气干燥法 冷冻真空干燥法 临界点干燥法
临界点干燥法
原理：临界状态下表面张力为零 处理液： CO2
临界温度（31.1℃） 临界压力（73个大气压）
操作程序：
取材→双固定→丙酮脱水→中 间液（醋酸异戊酯）置换脱水 剂→液态CO2置换中间液→加 热气化（温度40℃，压力 95~100kg/cm2，3~5分钟） →缓慢放气取样→喷镀→观察。
分辨率为 25 Å （SEM 60 Å ） 4．复型膜由铂、碳粒子组成，可长期保存。
细胞扫描电镜制样方法
细胞扫描电镜制样方法：
1.清洗：某些生物材料表面常附血液、细胞碎片、消化道内的食物残渣、细菌、淋巴
液及粘液等异物，掩盖着要观察的部位，因而，需要在固定之前用生理盐水或等渗缓冲液等把附着物清洗干净。
亦可用5%碳酸钠冲洗或酶消化法去除这些异物。
2.固定：通常采用醛类（主要是戊二醛和多聚甲醛）与四氧化锇双固定，也可用四氧
化锇单固定。
四氧化锇固定不仅可良好地保存组织细胞结构，而且能增加材料的导电性和二次电子产额，提高扫描电子显微图象的质量。
为增强这种效果，可用四氧化锇-单宁酸或是四氧化锇-珠叉二胼等反复处理材料，使其结合更多的重金属锇，这就是导电染色。
3.干燥：固定后通常采用临界点干燥法。
其原理是：适当选择温度和压力，使液体达
到临界状态(液态和气相间界面消失)，从而避免在干燥过程中由水的表面张力所造成的样品变形。
对含水生物材料直接进行临界点干燥时，水的临界温度和压力不能过高（37.4℃,218帕）。
通常用乙醇或丙酮等使材料脱水，再用一种中间介质，如醋酸戊酯，置换脱水剂，然后在临界点干燥器中用液体或固体二氧化碳、氟利昂13以及一氧化二氮等置换剂置换中间介质，进行临界干燥。
4.喷镀金属：将干燥的样品用导电性好的粘合剂或其他粘合剂粘在金属样品台上，然
后放在真空蒸发器中喷镀一层50～300埃厚的金属膜，以提高样品的导电性和二次电子产额，改善图象质量，并且防止样品受热和辐射损伤。
如果采用离子溅射镀膜机喷镀金属，可获得均匀的细颗粒薄金属镀层，提高扫描电子图象的质量。
扫描电子显微镜的样品制备一些技术
2.样品室内压力达不到要求： （1）注入液态二氧化碳量过少：可能会使样品位于二氧 化碳的气液面交界处，样品受到液体二氧化碳表面张力的 作用，尽管比水的表面张力小的多，但仍会影响样品的精 细结构。 （2）样品室密闭不良：这可能是因为垫圈老化，有裂纹， 或垫圈下有异物等。 3.注入液体二氧化碳困难：主要因为样品室的温度高，没有 事先降温。夏季室温高于30度时更易造成注入困难。降温 的办法有两种：一是用少许液体二氧化碳充盈2-3次，再 放掉气体的二氧化碳；二是用控温钮调制低于室温10度。
脱水处理：对保证金属镀膜装置和电镜的镜筒真空度和防止 样品在高真空状态下的龟裂和变形等有重要的作用。采用不 同浓度的乙醇或丙酮梯度脱水逐步的除去样品中的水分。
6.2.2 样品的干燥：
1. 自然干燥法：把样品暴露在空气中直接干燥，只适用于表 面比较坚硬或含水分较少的生物样品。如：昆虫、骨骼、牙 齿、毛发、种子、果壳、花粉、植物标本，以及微小材料如 细菌等。具体做法是：先将样品固定，并系列脱水到100％， 在大气中让脱水剂自然挥发即可，但注意环境要干燥。因为 脱水剂的表面张力系数比水小所以样品在脱水剂中不会过多 变形而影响其结构。
6.1.4常规生物样品制备技术
制备过程如下： ①取材 根据需要，切取适当大小的样品。专门的SEM备有 灵活可动，范围较大的样品台，样品可大些。装在透射电 镜上的扫描附件，活动范围较小，样品直径应在3～4mm左 右。 ②漂洗 用缓冲液把组织表面洗净，否则会影响正常形态， 但以快速和轻巧为宜，尽量保护器官或组织的表面结构， 使其不致因不慎的操作造成人为损伤。 ③固定 用2.5～5％戊二醛/缓冲液在室温或4摄氏度下前固定。 具体时间可根据样品的需要而定，一般单细胞10-30分钟， 较大的或较硬的样品可达1-2h或更长时间。 ④漂洗 用缓冲液洗3次，洗去未结合的戊二醛。 ⑤重固定 1％锇酸/缓冲液4摄氏度下后固定10～60min。有 时为了提高样品的反差和固定效果，可以综合固定液，如 随意选用戊二醛、多聚甲醛、锇酸等按照不同的比例混合 使用。
扫描电镜的样品制备
扫描电镜的样品制备
扫描电镜（Scanning Electron Microscope，SEM）是一种高分辨率的显微镜，对于复杂的样品结构、微观形态和表面形貌的分析非常有用。
然而，要获得良好的扫描电镜显像效果，样品的制备至关重要。
下面将介绍几种常用的扫描电镜样品制备技术。
1. 金属喷涂法
金属喷涂法是扫描电镜样品制备的经典方法。
该方法使用金属喷涂仪将金属颗粒喷在样品表面，使其形成一层均匀、导电性良好的金属膜，以便在扫描电镜中观察样品的表面结构。
该方法适用于非导电样品，如细胞、生物组织、聚合物等。
2. 离子切割法
离子切割法利用离子切割机将样品切割成纤细的薄片，以便于在扫描电镜中观察。
这种方法适用于非常薄的样品，如材料薄片、芯片等。
它可以提供非常高分辨率的图像，并且可以通过纵向切割获得样品的三维结构。
3. 冷冻切片法
冷冻切片法是一种用于生物样品的扫描电镜制备方法。
该方法使用超低温技术将样品冻结，并使用超薄刀片切割成极薄的切片，通常为50~200纳米。
这可以保留样品的水感性和原始形态，并使其在扫描电镜中观察更加清晰。
4. 化学蚀刻法
化学蚀刻法是用于金属样品的扫描电镜制备方法。
该方法使用酸或碱对样品表面进行蚀刻，以去除不需要观察的材料，形成清晰的样品结构。
该方法适用于金属薄膜、晶体和合金等金属材料。
总之，良好的扫描电镜样品制备是获得高品质扫描电镜图像的关键。
每种样品都有其独特的制备方法，为了获得最好的结果，在选择合适的制备方法时需要谨慎选择。
扫描电镜使用技巧
扫描电镜使用技巧
扫描电镜是一种高分辨率的显微镜，被广泛用于表面形态、颗粒大小及其分布等的观测。
下面是一些扫描电镜使用的技巧：
1. 样品的制备：
在观察前，需要对样品进行制备以提高扫描电镜观察的质量。
首先，样品应该尽量纯净，避免杂质的干扰。
其次，样品需要被固定在导电性的基底上，以便进行导电镀膜。
一种常用的导电基底是碳薄膜。
最后，样品需要被干燥，以免过高的水分干扰电子束的透射。
2. 系统的准备：
在使用扫描电镜之前，需要先对仪器进行一些准备工作。
首先，检查仪器的真空度是否达到要求，以确保电子束的稳定性和样品表面的清晰度。
其次，根据样品的要求，选择合适的加速电压和放大倍数。
最后，确保电子束的聚焦和对准，以获得更好的图像质量。
3. 观察的技巧：
在进行观察时，需要注意一些技巧以获得更好的图像。
首先，选择一个合适的工作距离，以获得所需的放大倍数和深度。
其次，调整电子束的亮度和对比度，以获得清晰的图像。
最后，在观察过程中尽量减少样品的移动，以避免图像模糊。
4. 数据的分析：
扫描电镜观察得到的图像通常是黑白的，可以通过图像处理软件进行颜色增强和对比度调整。
此外，如果需要精确的测试样
品的尺寸和形态，可以使用扫描电镜配套的测量工具进行测量。
总结起来，扫描电镜使用的技巧包括样品制备、系统准备、观察技巧和数据分析。
通过正确地操作和调整仪器，并注意一些细节和技巧，可以获得高质量的扫描电镜图像，从而更好地观察和分析样品的微观结构和形态。
扫描电镜的样品制备
3。
1 试样制备技术试样制备技术在电子显微术中占有重要的地位，它直接关系到电子显微图像的观察效果和对图像的正确解释。
如果制备不出适合电镜特定观察条件的试样，即使仪器性能再好也不会得到好的观察效果.和透射电镜相比,扫描电镜试样制备比较简单。
在保持材料原始形状情况下，直接观察和研究试样表面形貌及其它物理效应（特征），是扫描电镜的一个突出优点。
扫描电镜的有关制样技术是以透射电镜、光学显微镜及电子探针X射线显微分析制样技术为基础发展起来的，有些方面还兼具透射电镜制样技术，所用设备也基本相同。
但因扫描电镜有其本身的特点和观察条件,只简单地引用已有的制样方法是不够的.扫描电镜的特点是：①观察试样为不同大小的固体（块状、薄膜、颗粒），并可在真空中直接进行观察。
②试样应具有良好的导电性能,不导电的试样，其表面一般需要蒸涂一层金属导电膜。
③试样表面一般起伏（凹凸）较大。
④观察方式不同,制样方法有明显区别。
⑤试样制备与加速电压、电子束流、扫描速度（方式）等观察条件的选择有密切关系。
上述项目中对试样导电性要求是最重要的条件.在进行扫描电镜观察时，如试样表面不导电或导电性不好，将产生电荷积累和放电，使得入射电子束偏离正常路径，最终造成图像不清晰乃至无法观察和照相。
3。
1。
1 块状试样制备1．导电性材料导电性材料主要是指金属,一些矿物和半导体材料也具有一定的导电性。
这类材料的试样制备最为简单.只要使试样大小不得超过仪器规定（如试样直径最大为φ25mm,最厚不超过20mm等)，然后用双面胶带粘在载物盘，再用导电银浆连通试样与载物盘（以确保导电良好）,等银浆干了（一般用台灯近距离照射10分钟，如果银浆没干透的话，在蒸金抽真空时将会不断挥发出气体，使得抽真空过程变慢）之后就可放到扫描电镜中直接进行观察。
但在制备试样过程中，还应注意：①为减轻仪器污染和保持良好的真空，试样尺寸要尽可能小些。
②切取试样时，要避免因受热引起试样的塑性变形，或在观察面生成氧化层。
sem制样方法及注意事项
sem制样方法及注意事项SEM(扫描电子显微镜)是一种常用的表征和分析材料表面形貌和结构的高分辨率显微镜。
在SEM制样过程中，样品的制备方法和注意事项是非常重要的，直接关系到SEM观察结果的准确性和可靠性。
一、SEM制样方法1. 样品的制备：首先，需要选择合适的样品进行制备。
常见的样品包括金属、陶瓷、聚合物、生物材料等。
对于不同类型的样品，制备方法也有所不同。
一般来说，样品需要进行切割、打磨、抛光等处理，以获得光滑的表面。
对于生物样品，还需要进行固定、脱水、干燥等处理。
2. 真空处理：SEM操作需要在真空环境中进行，因此在制样过程中需要对样品进行真空处理。
这可以通过将样品放入真空室中，然后抽取空气，以确保SEM观察时不会受到气体干扰。
3. 导电涂层：SEM观察需要样品具有良好的导电性，因此对于非导电样品，需要进行导电涂层。
常用的导电涂层材料有金、铂、碳等。
涂层方法可以通过溅射、蒸镀等技术进行。
4. 操作参数调整：在SEM观察之前，需要根据样品的特性和观察目的调整SEM的操作参数。
包括加速电压、放大倍数、探针电流等。
这些参数的选择需要根据样品的性质和所需的分辨率来确定。
二、SEM制样注意事项1. 样品的选择：样品的选择要考虑样品的性质和目的。
对于非导电样品，需要进行导电涂层处理；对于易挥发性样品，需要进行冷冻固化等特殊处理。
2. 制备过程中的污染：在制备样品的过程中，要注意避免污染的引入。
尽量避免手指接触样品表面，使用洁净的工具和实验室条件进行操作。
3. 制备的均匀性：样品的制备要保证表面的均匀性，以避免观察结果的误差。
在导电涂层过程中，要保证涂层的均匀性和厚度的一致性。
4. 真空处理的时间：在将样品放入SEM中进行观察之前，需要进行真空处理。
真空的抽取时间要足够，以确保SEM观察时不会受到气体的干扰。
5. 操作参数的选择：SEM的操作参数对于观察结果的准确性和分辨率有很大影响。
在选择参数时，要根据样品的特性和观察目的进行调整，以获得最佳的观察效果。
扫描电镜 样品制备方法
扫描电镜样品制备方法一、取材组织块小于3立方毫米（单细胞培养或收集展片于盖玻片或滤膜上）。
二、固定前固定：2.5%戊二醛（磷酸缓冲液配制）固定2小时或更长时间。
用0.1M pH7.4磷酸盐缓冲液漂洗三次，每次10分钟。
三、脱水＊脱水在4度冰箱内进行，所有脱水步骤建议在专用的冷冻干燥杯中进行，冷冻干燥杯请于实验前一天到电镜室领取。
＊整个过程，样品不要暴露于空气。
1.乙醇脱水，每一级10-20分钟：30%乙醇—50%乙醇—70%乙醇—90%乙醇—95%乙醇—100%乙醇；2.然后从乙醇逐步过渡到叔丁醇，纯叔丁醇每次10分钟，3次以上；此系列操作均在25度环境中进行；3.纯叔丁醇4度冰箱过夜，样品结晶。
四、冷冻干燥＊需事先预约冷冻干燥时间；第二天上午八点半讲冷冻结冰的样品用冰盒送至电镜室进行冷冻干燥。
五、喷金附件1：细菌类样品的前处理方法1.盖玻片泡酸，清洗，烘干。
用剪刀剪碎，挑出5mm*5mm大小玻片备用。
玻片过大或者过厚影响观察效果。
2.菌液或样品悬液离心，需要可进行清洗，加入固定液，吹散固定，于4度冰箱固定2小时左右。
3.固定结束后，去固定液，加入PBS浸泡清洗，10分钟。
离心去PBS，固体沉淀根据量多少，加入适量PBS，制成浓度较高的悬液（目测较混浊）。
样品浓度对后期吸附有较大影响，浓度过低可能吸附量会很少。
4.取鸡蛋清，稀释3-5倍（一定要稀释！蛋清过浓会包裹样品），之前准备好的玻片放入液体内蘸一下，取出晾干至触摸感觉有点黏的状态（快干的状态）。
将第3步取得的悬液滴在玻片上，吸附30秒到1分钟，用滤纸吸去多余液体。
（样品悬液在玻片上停留时间过长将导致样品被蛋清完全包裹而无法观察）。
5.在玻片上滴加固定液，固定10分钟，固定后用PBS浸泡清洗10分钟，放入干燥杯开始进行脱水。
磷酸盐缓冲液(PBS)a.磷酸盐缓冲液（0.2M）甲液：0.2M的磷酸氢二钠溶液乙液：0.2M的磷酸二氢钠溶液Na2HPO42H2O 35.61g (Na2HPO47H2O) 53.65g (Na2HPO412H2O) 71.64g NaH2PO4H2O 27.60g ( NaH2PO42H2O) 31.21g加蒸馏水溶解成1000ml 加蒸馏水溶解成1000ml按下表混合甲、乙两液既得所需pH的0.2M缓冲液0.2M磷酸盐缓冲液的配制将溶液用蒸馏水1：1稀释，则配得0.1M的缓冲液。
扫描电镜样品制备及图像质量影响因素分析①
扫描电镜样品制备及图像质量影响因素分析①扫描电镜是一种非常重要的分析工具，它可以用来观察微观颗粒和组织结构。
在使用扫描电镜进行观察时，样品的制备和图像的质量是非常重要的因素。
本文将介绍扫描电镜样品制备的方法，以及影响图像质量的因素，帮助读者更好地理解和掌握扫描电镜的应用。
一、扫描电镜样品制备的方法扫描电镜样品制备是观察样品的第一步，样品的制备质量直接影响到后续观察结果的准确性和可靠性。
目前扫描电镜样品制备的方法主要有化学固定法、膜支撑法以及冷冻切片法等。
1. 化学固定法化学固定法是通过用冰醋酸、乙醛等物质将样品固定在样品架上，使得样品的结构保持原状。
这种方法适用于大多数的样品，而且固定后的样品可以保存很长时间，方便后续的操作。
但是在使用化学固定法时需要注意，要避免过量的固定剂，以免对样品的形态产生破坏。
2. 膜支撑法膜支撑法是在样品的表面涂覆一层聚合物薄膜，使得样品表面平整并且增加样品的机械强度。
这种方法适用于软脆的样品，可以有效避免在样品处理过程中出现的形变和损坏。
但是在使用膜支撑法时需要注意，选择合适的薄膜材料和合适的涂覆方法，以免对样品造成干扰。
3. 冷冻切片法冷冻切片法是将样品冷冻并且切成很薄的切片，然后在扫描电镜中直接观察。
这种方法适用于生物样品或者含水样品的制备，可以有效保持样品的生物活性和结构完整性。
但是在使用冷冻切片法时需要注意，样品的冷冻和切片过程中必须迅速，并且要避免在样品表面生成冰晶，以免影响观察结果。
二、图像质量影响因素分析扫描电镜的图像质量是反映样品观察效果的重要指标，图像质量的好坏直接影响到对样品结构和特征的分析。
在扫描电镜图像质量的影响因素中，主要包括电镜参数、样品处理以及图像处理等几个方面。
1. 电镜参数电镜参数是影响扫描电镜图像质量的重要因素，主要包括电压、放大倍数和孔径等。
较高的电压可以提高电子束的穿透能力，对于较厚的样品可以选择较高的电压，而对于较薄的样品可以选择较低的电压。
扫描电镜制样技巧
6.固体样品的安装
将导电双面胶带（碳或铜）粘在样品台面，剥去背 纸，露出胶面，把样品直接粘到胶带上即可，粘结时要 确保底面与胶面贴实，为此要求样品贴面保持平整，可 以事先用砂纸磨平。一些不规则的样品可自制专用样品 夹持台，利用螺钉从三个方向坚固样品。 不导电样品可从样品表面粘一个导电胶带延申至样 品座上表面，在样品表面与样品台之间形成导体。不导 电样品在能代表样品形貌的情况下要尽量小，体积大了 更容易产生荷电现象。
2.陶瓷样品清洁：
陶瓷在烧结时有正反面之分，拿出来时一 定注意不要将反面拿来观察。陶瓷样品在预烧 处理时会加上一定的粘结剂，如要观察陶瓷的 结晶颗粒，也需要用一定量的酸或碱将所要观 察的陶瓷面浸泡，做热腐蚀处理，将粘结剂溶 蚀掉，才能观察到陶瓷的晶粒。水泥等块状样 品也是一样的道理。
超细陶瓷的制样
将铜网在溶液中捞出将正面粘到导电
将分散的碳钠米管滴在微栅中再粘到导电胶上
四、样品截面
为了研究样品的内部结构、测定镀层厚度、元素扩散、 填料是否均匀等，必须将样品断开，露出截面，按固体
样品中的方法将断口面朝上安装，注意样品要垂直
安装在样品台上，同时样品一定要固定牢 固不能晃有动，才可得到清晰的图像。
长在污泥中的生物扫描电镜像
4．镀膜样品处理
由于镀膜样品容易脱落，在制样过程中要特别注意裁截 方式，如镀件较小往往可以直接观察，如样品较大用剪 刀裁剪的话，应尽量观察样品的中心部位。
硫化锌镀膜扫描电子像
5.橡胶样品的制样
• 橡胶是粘弹性物质,又是绝缘体，既会产生弹性 ，又极易产生荷电现象，要进行扫描电镜分析 ，其样品的前处理非常关键。 • 目前常用的橡胶制样方法有冷冻、撕裂、快速 切割和刻蚀等方法。 • 如将橡胶冷冻到脆性温度以下,才能保证橡胶断 裂面的真实性,避免橡胶本身弹性状态下拉断的 凸凹断面干扰橡胶的观察。
扫描电镜测试生物样品制备技术.
扫描电镜测试生物样品制备技术大多数生物样品都含有水分,而且比较柔软,因此,在进行扫描电镜观察前,要对样品作相应的处理。
扫描电镜样品制备的主要要求是:尽可能使样品的表面结构保存好,没有变形和污染,样品干燥并且有良好导电性能。
一.样品的初步处理(一取材样品面积可为8mm×8mm,厚度可为5mm。
对于易卷曲的样品如血管、胃肠道粘膜等,可固定在滤纸或卡片纸上,以充分暴露待观察的组织表面。
(二样品的清洗用扫描电镜观察的部位常常是样品的表面,即组织的游离面。
由于样品取自活体组织,其表面常有血液、组织液或粘液附着,这会遮盖样品的表面结构,影响观察。
因此,在样品固定之前,要将这些附着物清洗干净。
清洗的方法有以下几种:1.用等渗的生理盐水或缓冲液清洗;2.用5%的苏打水清洗;3.用超声震荡或酶消化的方法进行处理。
例如清洗肠粘膜表面的粘液,可用下面的方法:清洗液配方:透明质酸酶300 (gα—糜蛋白酶 10 mg生理盐水 100 ml清洗液的pH为5.5~6。
清洗的方法是将样品浸泡在配好的清洗液中,边浸泡边震荡30分钟,最后用双蒸水洗3次。
无论用哪种清洗方法,注意在清洗时不要损伤样品。
(三固定固定样品的常用试剂为戊二醛及锇酸双固定。
由于样品体积较大,固定时间应适当延长。
也可用快速冷冻固定。
(四脱水样品经漂洗后用逐级增高浓度的酒精或丙酮脱水,然后进入中间液,一般用醋酸异戊酯作中间液。
二.样品的干燥扫描电镜观察样品要求在高真空中进行。
无论是水或脱水溶液,在高真空中都会产生剧烈地汽化,不仅影响真空度、污染样品,还会破坏样品的微细结构。
因此,样品在用电镜观察之前必须进行干燥。
干燥的方法有以下几种:(一空气干燥法空气干燥法又称自然干燥法,就是将经过脱水的样品,让其暴露在空气中使脱水剂逐渐挥发干燥。
这种方法的最大优点是简便易行和节省时间;它的主要缺点是在干燥过程中,组织会由于脱水剂挥发时表面张力的作用而产生收缩变形。
扫描电镜的试样制备方法
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Polaron SC7620 “Mini” Sputter Coater
Options: CA0762F carbon fibre evaporation attachment
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Polaron SC7620 “Mini” Sputter Coater Options: CA7615 power supply - to run CA0762F carbon fibre carbon evaporation attachment
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Polaron SC7640 Auto / Manual High Resolution Sputter Coater Options: FT7607 FTM stage Quartz crystal
Note: centrally located crystal ensures representative reading
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Polaron SC7640 Auto / Manual High Resolution Sputter Coater Options: Water cooled stage
Not generally needed as the SC7640 head produces little or no heat.
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Polaron SC7640 Auto / Manual High Resolution Sputter Coater Standard universal stage - height adjustment
Standard stage and FT7607 FTM stage are height adjustable .
扫描电镜制样
扫描电镜常规制样方法方法一：植物叶片单固定扫描电镜制样方法1．取材将叶子切成5-10mm长方形6-10片。
2．固定放入2.5%戊二醛+2%多聚甲醛固定液中进行抽气（样品无气泡产生，全部沉于底部即可），固定12小时以上。
3．脱水用乙醇逐级脱水30%→50%→70%→80%→90%乙醇，每20 分钟更换一次（70%以前放置4°C冰箱内），100%乙醇每20分钟一次，共5次（70%乙醇以后放置室温脱水）。
4.替换将乙醇倒掉，换叔丁醇，每20分钟一次，共5次。
第5次浸过样品即可，放置冰箱冷冻层（-20°C左右）30分钟或过夜。
5.干燥用JFD-310冷冻干燥仪进行干燥。
6.粘台将上下表皮分别粘在具有双面胶带的样品台上。
7.镀膜用JFC-1600离子溅射镀铂金膜厚约10nm。
8.观察并拍照利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。
注明：此方法适合植物根、茎样品方法二：植物叶片单固定扫描电镜制样方法1..取材将叶子切成5-10mm长方形6-10片。
2预固定放入2.5%戊二醛+2%多聚甲醛固定液中进行抽气（样品无气泡产生，全部沉于底部即可），固定12小时以上。
3．冲洗0.1M磷酸缓冲液进行冲洗3次，每40分钟一次。
4．双固定用1%四氧化锇（OsO4）进行固定2.5-3小时。
5．冲冼0.1M磷酸缓冲液进行冲洗3次，每5分钟一次。
6．脱水7.用乙醇逐级脱水30%→50%→70%→80%→90%乙醇，每20 分钟更换一次（70%以前放置4°C冰箱内），100%乙醇每20分钟一次，共5次（70%乙醇以后放置室温脱水）。
8.替换将乙醇倒掉，换叔丁醇，每20分钟一次，共5次。
第5次浸过样品即可，放置冰箱冷冻层（-20°C左右）30分钟或过夜。
9.干燥用JFD-310冷冻干燥仪进行干燥。
9．粘台将上下表皮分别粘在具有双面胶带的样品台上。
10.镀膜用JFC-1600离子溅射镀铂金膜厚约10nm。
扫描电镜制样技术
• 锇酸浸透性慢不强，较长时间处理，会 破坏生物样品精细结构。需根据样品情 况，灵活掌握锇酸处理样品时间。
直接观察法
直接观察法
• 特点：简便、快捷，损伤较少，比较常
用。
• 1．固体样品直接观察法：含水成
分少，本身比较干燥且又有一定的导电 能力的固体样品。 • 如：骨骼、牙齿、矿石、土壤、干果、 竹木以及植物的干标本等。 • 直接用普通胶水或双面胶带等将样品粘 到样品台上，省略喷涂就可用扫描电镜 观察。
离子溅射法和真空喷镀法比较
附：导电染色
• 导电染色------将极细的金属颗粒植入生 物样品中，以增强样品导电性的电子染 色过程。
• 要求：染液既不污染组织、又能完好保存组 织的精细结构，并且使样品有良好的导电性。 • 特点：经导电染色样品，释放较多的二次电 子，加强图像的亮度和反差。 • 常用导电染液：缓冲液／固定液配制而成， 同时具有固定作用。
3．注入液体二氧化碳困难：
• 样品室温度高，没有事先降温。 • 降温办法： • 一是用少许液体二氧化碳充盈2—3 次，再放掉气化的二氧化碳； • 二是用控温钮调至低于当时室温 10℃。
冷冻干燥
• 样品中的水分直接由冰态升华为气态，样 品也不受表面张力的影响。 优点：保存水溶性和脂溶性物质。 不足：样品中的水分易形成冰晶而破坏超微结构。
游离细胞的观察法
• 关键：如何把样品粘在样品台？
• 1．滤纸吸附法： • 用1％戊二醛／缓冲液固定---1 000g 10min离心---去上清---细胞浓悬液滴在 一小片滤纸上---系列乙醇脱水---临界 点干燥---喷涂----观察。 • 优缺点：简便易行，图像中容易混杂 滤纸纤维。
2．金属片法 • 与第一种方法类似； • 只是将细胞浓悬液滴在有微孔的金属 片上(微孔直径4 µm)； • 进行一系列操作。 • 优点：可以减少污染
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长在黄铜矿裂隙中自然金的背散射电子像
影响测量结果不确定度的因素
• • • • • • a.试样的不均一性 b.试样粗糙度：颗粒大、不平 c.抛光假象：污染、化学影响 d.导电膜：镀膜材料不同影响分析结果 e.试样荷电：接地不良 f.错误的几何位置：工作距离、倾斜
二、扫描照像样品的清洁处理
样品表面常常附着灰尘、硅酸盐或油污，特别是经过切 割或敲碎的样品，粘有大量浸染物和碎片，可用洗耳球 吹拂或者将样品放入盛有酒精或丙酮的容器，超声清洁 至少10 min，若溶液仍污浊，还要更新溶液重复超声。
银掺杂线扫描图
如对样品Na以后的元素进行半定量分析， 对样品的要求是：
1. 表面无油污和复盖物（如从器械上拆卸下 来的元件，一定要将油污清洗干净；如地 质类的薄片，需将盖玻片去除，并将其表 面的粘胶用酒精不断反复洗净） 2. 表面平整光滑，成分均一（n个微米范围） 3. 成分不均一者，分析结果只能是代表测试 点小于１平方微米的结果；做微区分析时 是微区区域范围的平均值。 4. 粉末样品必须压成片状、块状
• 陶瓷表面与样品座铜柱之间用导电胶连接
水泥或陶瓷自然断面样品之间用导电胶连接
大块不导电样品扫描电子像
不导电小块样品品多为粉末状，制备样品时应该保证粉料 与样品台粘劳（特别要控制样品的量，保证样品不重 叠），否则样品在真空中飞起污染电镜。另外粉末状样 品容易团聚，制备过程应该尽量使其分散。目前常用的 分散方法有：干法、湿法
• 比如对ZrO2晶粒比较细致的陶瓷体,烧结出来时,表面往 往十分光滑,没有什么衬度,晶粒与玻璃相之间结合致密, 在观察晶粒晶形时,只做简单的制样,就不能达到较好的 分析目的。那么对于像ZrO2这类陶瓷样品,如何制样才 能比较有利于观察目的呢?为了分析ZrO2晶粒的形成情 况,希望比较好地暴露出晶粒与晶粒之间的轮廓,可以先 用清水加入适量的洗涤剂,对样品做清洁处理,之后,再用 10%的HCl水溶液处理样品表面,将晶粒之间的玻璃相腐 蚀掉,以使晶粒暴露的更加充分。但一定要把握好处理 的强度,可以选取不同浓度的HCl溶液,按不同的时间梯 度制备几组样品,选择其中处理较好的样品做为分析用 样。在以上处理完成之后要用清水(蒸馏水为好)分次对 酸蚀后的样品做清洗,再用超声波清洗机对样品做超声 处理,以彻底清洁样品表面后,将样品放入干燥箱进行干 燥处理之后,就可以做样品表面导电层处理了.
• 可将粉末颗粒放在酒精或乙醚等清洁且 又不与粉末发生反应的溶剂中,加入少许 分散剂(偏磷酸钠等),并均匀摇动或用超 声波振荡器和手动搅拌器结合等分散方 式,使其分散均匀。用吸管将含粉粒的溶 液
• 滴到清洁光亮的样品台上,再用一根小小 的木棒粘上少许酒精在样品台表面上留 下一层较均匀的粉粒,滴一滴0· 5%火棉胶 醋酸戊脂溶液于试样边沿,并用电热风吹 干即可放入电镜内进行观察,这种方法特 别适合于观察单颗粒的细微粒子。
6.固体样品的安装
将导电双面胶带（碳或铜）粘在样品台面，剥去背 纸，露出胶面，把样品直接粘到胶带上即可，粘结时要 确保底面与胶面贴实，为此要求样品贴面保持平整，可 以事先用砂纸磨平。一些不规则的样品可自制专用样品 夹持台，利用螺钉从三个方向坚固样品。 不导电样品可从样品表面粘一个导电胶带延申至样 品座上表面，在样品表面与样品台之间形成导体。不导 电样品在能代表样品形貌的情况下要尽量小，体积大了 更容易产生荷电现象。
分散后的样品固定： 2.1将超声分散溶液用吸管取出，滴在清洁的载玻片上，待 干后将玻片粘在粘有导电胶的样品台上。 2.2 用镊子镊住铜网或微栅在超声溶液中捞一下，将铜网或 微栅再粘到样品座上，这种方法分散的效果相对较好，但 浓度不好撑握，多了出现团聚现象，少了颗粒又太少。 2.3 将铜网或微栅置于干净的滤纸上，将超声分散溶液用滴 管滴在铜网或光栅上，待干后用镊子将铜网或微栅粘到样 品柱上。此时溶液的浓度一定要少，一般是有颜色的物质 是液体有轻微的颜色即可。（注意铜网有正反面之分，反 面比较粗糙，正面较为光滑） 2.4样品直接滴在样品台或导电胶上，缺点是台面的划痕或 残留物以及胶带的结构使你不能辩认超细材料的形貌。滴 在载玻片上能提供一个干净的承载面，但溶液的量多了会 重新产生团聚，而且玻璃的导电性稍差，图像效果不好。
水泥或陶瓷自然断面样品
经处理后的陶瓷断面像
3.生物样品处理
针对观察目的不同来进行处理，如珍珠要观察碳酸盐的 排列方式要将有机质溶蚀掉；要观察有机质的排列方式 则将碳酸盐溶掉。有些细菌或微生物样品，则要了解该 生物的形状，才能在样品中确认。如果不能确认，最好 是先进行生物样品的扫描，然后再在样品中寻找。
2．抛光截面
许多样品要观察金相组织、表面强化层结构、镀层质 量与厚度测量、印制电路板的缺陷、粉料几何形状、X 射线成分检测等，必须把样品断口表面抛光，为此要 把样品断口夹持妥当之后进行研磨抛光，可利用以下 几种方法进行：树脂镶嵌法、金属夹板法、离子束抛 光法
• 树脂镶嵌法：把样品放在塑料套管中央，利用树脂把 样品和塑料管填满，待树脂干透后用砂纸研磨抛光露 出样品面，砂纸从粗到细，直到样品表面平整，把样 品洗净即可。 • 金属夹板法：适用于形状规则的样品，利用两块金属 夹板将样品夹持，用螺栓固紧再抛光。 • 离子束抛光法：离子束抛光是借助截面抛光机或聚集 离子束仪进行，利用离子束刻蚀样品表面，去除磨痕、 碎屑和加工应变层，清晰显示截面的原貌，可以在手 工研磨基础上对表面精加工。
长在污泥中的生物扫描电镜像
4．镀膜样品处理
由于镀膜样品容易脱落，在制样过程中要特别注意裁截 方式，如镀件较小往往可以直接观察，如样品较大用剪 刀裁剪的话，应尽量观察样品的中心部位。
硫化锌镀膜扫描电子像
5.橡胶样品的制样
• 橡胶是粘弹性物质,又是绝缘体，既会产生弹性 ，又极易产生荷电现象，要进行扫描电镜分析 ，其样品的前处理非常关键。 • 目前常用的橡胶制样方法有冷冻、撕裂、快速 切割和刻蚀等方法。 • 如将橡胶冷冻到脆性温度以下,才能保证橡胶断 裂面的真实性,避免橡胶本身弹性状态下拉断的 凸凹断面干扰橡胶的观察。
• 导电胶粘结法 • 对于150~500μ的粉末可采用一薄层导电胶将粉 末粘在已抛光的铜样品台上,其基本做法是先在 样品台上均匀涂上一层导电胶(Ag胶、石墨孔 胶等),然后将粉末撒在上面,把试样台面朝下使 不与胶层接触的粉粒脱落,这样,在表面留下被 导电胶粘结的均匀一层。制样的关键在于导电 胶涂敷要均匀,平整,尽可能薄一些,否则会造成 视场起伏或颗粒下陷于胶体内,造成立体失真
• 直接撒粉法 • 将粉末直接撒在清洁光亮的样品台上,滴一滴 0· 5%火棉胶醋酸戊脂溶液于试样边沿,火棉胶液 立即浸润粉末,再把试样台水平轻轻晃动几下, 使试样分布平整、均匀,并用电热风吹干,粉末 固定在样品台上即可放入电镜内进行观察,其优 点:制样方法简单,但均匀性差,适应于一般要求 的粗颗粒样品的观察。
将铜网在溶液中捞出将正面粘到导电
将分散的碳钠米管滴在微栅中再粘到导电胶上
四、样品截面
为了研究样品的内部结构、测定镀层厚度、元素扩散、 填料是否均匀等，必须将样品断开，露出截面，按固体
样品中的方法将断口面朝上安装，注意样品要垂直
安装在样品台上，同时样品一定要固定牢 固不能晃有动，才可得到清晰的图像。
2.陶瓷样品清洁：
陶瓷在烧结时有正反面之分，拿出来时一 定注意不要将反面拿来观察。陶瓷样品在预烧 处理时会加上一定的粘结剂，如要观察陶瓷的 结晶颗粒，也需要用一定量的酸或碱将所要观 察的陶瓷面浸泡，做热腐蚀处理，将粘结剂溶 蚀掉，才能观察到陶瓷的晶粒。水泥等块状样 品也是一样的道理。
超细陶瓷的制样
• 溶液均匀法 • 细粉末的分散好坏是决定测量结果准确 性的重要因素。当粉末粒子为0·5~4μm和 细微粉末粒子小于0·5μm时,其表面活性很 大,常常是以互相粘附的二次粒子状态存 在。若用直接撒粉法往往聚集在一起,造 成测定结果的假象,使测定偏粗。
粉末样品平整的铺在碳导电胶上
2.湿法
湿法适用于亚微米或纳米级粉料，此类粉料的分散是个 难题，常用超声分散法。超声分散液有酒精、蒸馏水、 洗洁精、六偏磷酸钠、丙酮、苯等，还有粘滞性的物质， 如液体石蜡、钟表油、松节油等，还有能形成固体膜的 物质，如醋酸、酯火棉胶溶剂、“C－N”共晶溶液等。针 对不同的样品自行选择，以样品不溶于该溶液并能达到 分散为目的。在使用蒸馏水和挥发性的分散介质时，用 量多少不影响微粒的成像，视场也比较清晰，但它不能 将样品牢固的固定在样品台上，容易造成颗粒脱落。而 粘滞性的分散介质，用量必须合适，用量多了会发生粒 子由于相互碰撞而团聚在一起。同时油膜对光有吸收作 用，会影响视场的清晰度。对于极性极强而易于团聚的 超细颗粒，往往需要在分散剂中加入一定的分散助剂。 分散时间不小于30分钟。样品的分散程度取决于样品的 特性、分散浓度和超声时间。
5.成分衬度像：在检测表面光滑平整的样品时， 没有微区形貌干扰，如果样品是由二种以上的 物质组成，则可以获得成分衬度像。背散射电 子像既可以用来显示形貌衬度，也可以用来显 示成分衬度。成分衬度是由试样微区的原子序 数或化学成分的差异所形成的。对于不平整样 品和亚微米级以下的粉末样品，则成分衬度效 果不好。
1.直接断口 • 1.1如果样品为1~3mm的脆性薄片，例如铜片、硅片、 玻璃镀膜片、陶瓷板等可以直接将其掰断或打断。断 口表面凹凸不平，注意保持原始断面清洁，垂直安装 在样品台上直接观察 • 1.2对于高分子材料可以冲断或冷冻断裂获得断口，例 如塑料或橡胶制品，将断面朝上垂直粘劳。
玻璃镀膜断面扫描电子像
1.金属材料样品清洁
金属材料的陈旧表面多有锈斑或浸染物覆盖，在观 察前必须清理干净，利用蘸有丙酮的AC纸（醋酸纤维素 膜）紧压表面，待其干透后把AC纸剥下，浸染物被剥离， 有时需要反复粘附和剥离几次，再将样品放入丙酮中超 声清洗，溶掉表面残余的AC纸，露出断口的原始表面。 粘油污的元器件可用酒精或丙酮擦洗后超声。
扫描电镜制样技巧