扫描电镜制样方法-研究生

合集下载

扫描电镜SEM制样步骤

扫描电镜S E M制样步骤-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN扫描电镜观察制样步骤固定：1、用灭菌镊子挑出少量的的样品（碳粒/碳毡）,放入 5ml 的离心管中,2、加入2.5%戊二醛, 加量为淹没碳粒/碳毡样品为宜,室温固定1小时3、置于 4℃冰箱中固定12小时。

冲洗：用 0.2mol pH 7.4的磷酸缓冲溶液冲洗 3 次，每次 10 分钟。

每次冲洗时先用注射器缓慢吸走上一步骤的冲洗液。

Or 离心脱水：分别用浓度为30%， 50%，75%，90%, 95%, 100% v/v 的乙醇进行脱水，每次10分钟，干燥：将样品放在离心管里，置入干燥器中干燥 12 小时。

粘样：用双面胶将样品观察面向上粘贴在扫描电镜铜板上预处理好的样品放入干净离心管中待检。

SEM上机测样--测定条件参数设置分子克隆实验指南第三版，1568页：25度下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制；先配0.1mol/L K2HPO4，0.1mol/L KH2PO4配PH7.4，100ml磷酸钾缓冲液需：0.1mol/L K2HPO4，80.2ml0.1mol/L KH2PO4，19.8ml混合即是，不用酸碱调PH。

参考文献：DOI:?10.1021/es902165yMicrobial fuel cell?based on Klebsiella pneumoniae biofilmSelecting?anode-respiring bacteria based on?anode?potential: phylogenetic, electrochemical, and?microscopic?characterizationA severe reduction in the cytochrome C content of?Geobacter sulfurreducens?eliminates its capacity for extracellular electron transfer2。

场发射扫描电镜的样品制备和操作步骤

场发射扫描电镜的样品制备和操作步骤场发射扫描电镜（Field Emission Scanning Electron Microscopy）是一种高分辨率的电子显微镜技术，可用于观察和分析各种材料的表面形貌和微观结构。

为了获得清晰的显微图像，样品制备和操作步骤非常重要。

一、样品制备1. 样品的选择：场发射扫描电镜适用于不同种类的材料，如金属、陶瓷、聚合物等。

选择合适的样品很关键，它应具备研究对象的特性，并且能够承受电子束的辐照。

2. 样品的固定：为了保持样品的形状和结构不变，通常需要将其进行固定。

对于固态材料，可以使用金属夹片或导电胶进行固定。

对于液态材料，可以将其冷冻或凝胶化，以保持其形状。

3. 样品的切割和打磨：有时候，需要将样品切割成适当的尺寸，以便放入样品架中。

这可以通过使用金刚石切割机、电解或机械研磨仪器等设备来完成。

4. 样品的真空处理：在将样品放入场发射扫描电镜前，通常需要将其进行真空处理。

这可以通过将样品放入真空干燥器中、在低压下进行加热或冷冻干燥来完成。

真空处理有助于去除空气中的水分和气体，以减小背景干扰。

二、操作步骤1. 打开电镜系统：在开始操作前，需要将场发射扫描电镜系统打开并进行预热。

预热时间通常需要几十分钟，以保证系统内部达到稳定的工作温度。

2. 放置样品：将样品放置在样品架上，并确保其良好接触。

对于粉末状样品，可以使用导电胶将其固定在样品支架上。

对于固态样品，可以使用金属夹片固定在样品架上。

3. 调整显微镜参数：通过调整电子束能量、聚焦、工作距离等参数，来优化扫描电子显微镜的成像质量。

这些参数的选择取决于样品的特性和所需的分辨率。

4. 开始观察：一切准备就绪后，可以开始观察样品。

通过控制电子束的扫描和探测系统，可以获得样品的表面形貌和微观结构的信息。

在观察过程中，要注意避免样品表面的污染和损坏。

5. 数据分析：场发射扫描电镜获得的图像可以进一步进行数据分析。

可以通过对图像进行增强、测量尺寸和形状、进行结构分析等手段，来得到更详细的样品信息。

扫描电镜样品制备

扫描电镜样品制备扫描电子显微镜生物样品制备技术无论是透射电镜或是扫描电镜，样品均处于电镜镜筒的真空之中。

而大多数的生物样品都是柔软而且含大量水分的。

因此，也和透射电镜的样品一样，在进行扫描电镜观察前，必须对生物样品作相应的处理。

扫描电镜的功能很多，不同的功能对样品的要求不同。

例如二次电子像与背散射电子像和吸收电子像对样品的要求基本相同，而与X射线微区分析对样品的要求相差较远。

我们首先介绍二次电子像的生物样品制备技术。

此外，由于样品的性质不同，其处理方法和程序也有不同。

主要分两大类，一类为含水量少的硬组织，如毛发、牙齿及植物的花粉、孢子、种子等。

此类样品一般含硅质、钙质，角质，砝琅质和纤维素等成份，所以通常只经过表面清洁、装台(粘胶)、导电处理等简单过程即可进行观察。

如要观察其断面或内部结构时，经断裂、解剖或酶消化、蚀刻等再装台、镀膜处理，即可进行观察拍照。

另-类为含水分较多的软组织，如大多数的动植物器官、组织及细菌等均属此类。

对于此类样品，在金属镀膜前，一般都需经过固定、脱水、干燥等处理，如不经处理或处理不当，就会造成样品损伤和变形，出现各种假像，因此对每一处理步骤都应给予重视。

但是，不管是那一类样品的制备，都应达到以下要求：∙尽可能保持样品活体时的形貌和结构，以便如实地反映样品本来面目。

∙在样品的干燥过程尽可能减少样品变形。

∙样品表面应有良好导电性能和二次电子发射率，以防止和减少样品的荷电效应。

样品的前期处理扫描电镜样品的前期处理主要包括表面清洁、固定、漂洗和脱水等过程。

而每一过程的处理方法基本上都是沿用透射电镜样品的处理方法的，所以，这里不一一再作详述。

但是，由于两种电镜观察的要求不同，因此，在处理中也有不同之处：1. 透射电镜主要研究样品的内部结构要求内部结构保存好，因而样品宜尽可能小使固定液能迅时渗入固定。

扫描电镜观察表面形貌，而且为了操作方便选取较大样品。

一般在8～10mm2左右，高度可达5mm。

11.第六章扫描电镜样品制备技术

（2）、冷冻干燥法：本方法是将新鲜的样品或经固定、脱水的样品迅速冷冻后，放入真空环境中，使玻璃态的冰直接升华跑掉，最终样品干燥。在样品的干燥过程中不存在液体的挥发，也就消除了液体表面张力的作用了，从理论上讲可以最大程度的保存样品的原始形貌。但是本法的干燥速度太慢，有人做过试验一块0.5平方毫米生物样品，在－80度中干燥需要24小时。，如果样品块再大一些干燥需要的时间会更长。所以本法在扫描样品制备时也不常用。（3）、莰烯低真空干燥法：莰烯是一种具有樟脑味，无色透明的结晶。能溶于醚、环己烷、氯仿和丙酮中，它在室温下为固态，遇空气很易升华，升华的速度与温度成正比。
D.样品筐的底部和顶部要盖一层滤纸，防止样品的污染。 E.严格控制操作温度和压力，严守操作规程。 F.保证所用二氧化碳的纯度，不纯会使干燥失败。
5、粘托
样品干燥后，需要用胶粘物质将干燥的样品粘到样品托上。 1）、粘托时所选用的胶粘物质应具备以下条件：（1）、有一定的粘度，在室温下易干燥。（2）、具有较低的电阻率，导电性能好，颗粒细。（3）、干燥后收缩率小，胶膜平滑。（4）、化学性质稳定，受电子束轰击不分解。
1）、取材的方法
动物和植物组织的取材：方法与超薄切片的取材基本相同，只是因为扫描电镜主要是观察组织的游离表面形态结构，因此在取材时一定要保护好所需要的游离表面的部位，不能造成任何损伤；另外所取样品块可稍大一些，一般观察面大小可在长X宽大约为 3X5毫米（可根据样品的性质变化取材的大小）。离体培养的细胞取材：可在接种时把处理好的盖玻片放在培养瓶内，让细胞长在盖片上，把带有细胞的盖片直接进行制样处理。细菌的取材：平板和斜面培养的，可用牙签取菌落涂到干净的盖片上，进行制样。悬液培养的细胞或细菌要离心收集细胞或细菌，然后再进行制样。

扫描电镜细菌制样方法

细菌样品前处理取液体或固体培养基中培养20h左右、旺盛生长的菌体。

（1)收集菌体:①液体培养基中的菌体，可取培养液8000rpm离心3～5min，弃上清,倒入2。

5％戊二醛固定液;②固体培养基上的菌体，可在菌落表面滴几滴戊二醛固定液,轻刮菌落（注意不要刮下培养基)。

将菌液吸入小离心管，离心后换入新鲜戊二醛固定。

(2）固定，脱水按常规方法。

2.5%戊二醛,2～4h→磷酸缓冲液清洗3次→1%锇酸4～6h →缓冲液清洗3次→乙醇梯度脱水，30％,50％,70%,85％，95％各一次,100％乙醇2次,15～20min/次→乙酸异戊酯置换2次,20min/次（注意：每步均需离心,8000rpm，3～5min，弃上清，倒入下一种试剂，滴管来回吸几下,打散菌块）。

（3）临界点干燥：普通定性滤纸裁成35mm×18mm的纸条,将长边35mm平均分成3份，对折成小纸包,用订书钉将一端订牢,成小口袋状.将离心浓缩后的菌液滴入小纸包,立即用钉书器将另一端钉牢。

放入临界点干燥器样品室,进行CO2临界点干燥。

一般每次可同时处理10~20种不同菌样(注意，需用液态CO2置换2～3次）。

(4）离子溅射金：沿两端书钉剪开滤纸包，将干燥后粉末状纯菌体倒入平皿，轻摇尽量分散菌体。

碳导电胶带一面粘在1/4盖玻片上，另一面倒扣轻压在菌体粉末上,翻正后用镊子或牙签将菌体轻轻刮薄铺平。

离子溅射金后,即可进行扫描电镜观察。

细菌样品特殊制备方法；1，固体培养基中的菌体用镊子夹一小块盖玻片，轻轻放在旺盛生长的菌体上，粘附一定的细菌.然后用双面胶将此盖玻片贴在棕色瓶瓶盖内壁，在棕色瓶内加入适量1％锇酸，盖上含有样品的瓶盖,熏蒸固定2h以上。

然后用双面胶将盖玻片粘在样品台上，喷金,进行扫描电镜观察。

2，液体培养基中的菌体取一定的培养液，8000rpm离心3~5min,弃上清液，加入2.5％戊二醛固定2h,pH 7。

2磷酸盐缓冲液清洗，然后加入蒸馏水稀释，充分混合后用滴管取混合液一滴于小块盖玻片上，吸附2min，用滤纸吸去多余溶液。

扫描电镜细胞样品制备步骤

扫描电镜细胞样品制备步骤嘿，咱今儿就来讲讲扫描电镜细胞样品制备那些事儿哈！
你想想看，细胞那么小的玩意儿，咱要想好好观察研究它们，可得下一番功夫呢！就像咱要给一个小娃娃打扮得漂漂亮亮去参加重要活动一样。

首先呢，得把细胞好好地收集起来。

这就好比去果园摘果子，得小心翼翼地把果子从树上摘下来，不能弄伤了它们。

咱得用合适的方法把细胞从它们生长的地方轻轻地取出来，可不能太粗鲁啦！
然后呢，就是给细胞洗个澡啦！把它们身上那些不需要的杂质啥的都洗掉，让它们干干净净的。

这就像是咱自己洗澡一样，把身上的脏东西都洗掉，清清爽爽的。

接下来，就是固定啦！这可重要得很呢！就好像给细胞穿上了一件坚固的铠甲，让它们能保持住自己的形态，不会东倒西歪的。

不然等会儿咱观察的时候，它们都变形了，那可咋整呀！
再之后，就是脱水啦！把细胞里面多余的水分都去掉，就像咱把湿漉漉的衣服晾干一样。

这一步可得仔细着点儿，不能让细胞受损哦！
接着呢，是干燥啦！让细胞处在一个干燥舒适的环境里，这样它们才能好好地被我们观察呀！
再往下，就是镀膜啦！这就好像给细胞披上了一层神秘的外衣，让它们在电镜下能更好地显现出来。

最后，就可以把制备好的细胞样品放到扫描电镜里面去观察啦！哇塞，你能想象到吗，通过电镜看到细胞的那一刻，就好像打开了一个微观世界的大门，里面有着无数的奥秘等着我们去探索呢！
你说这是不是很神奇呀？咱通过这一步步的操作，就能看到细胞的各种奇妙之处啦！所以呀，可别小瞧了这扫描电镜细胞样品制备的步骤哦，每一步都马虎不得呢！咱得像对待宝贝一样精心地去处理这些细胞，这样才能得到最准确、最有价值的观察结果呀！这可不是闹着玩的事儿呢！大家可得认真对待哟！。

扫描电子显微镜的样品制备一些技术

2.样品室内压力达不到要求：（1）注入液态二氧化碳量过少：可能会使样品位于二氧化碳的气液面交界处，样品受到液体二氧化碳表面张力的作用，尽管比水的表面张力小的多，但仍会影响样品的精细结构。（2）样品室密闭不良：这可能是因为垫圈老化，有裂纹，或垫圈下有异物等。 3.注入液体二氧化碳困难：主要因为样品室的温度高，没有事先降温。夏季室温高于30度时更易造成注入困难。降温的办法有两种：一是用少许液体二氧化碳充盈2-3次，再放掉气体的二氧化碳；二是用控温钮调制低于室温10度。

脱水处理：对保证金属镀膜装置和电镜的镜筒真空度和防止样品在高真空状态下的龟裂和变形等有重要的作用。采用不同浓度的乙醇或丙酮梯度脱水逐步的除去样品中的水分。
6.2.2 样品的干燥：

1. 自然干燥法：把样品暴露在空气中直接干燥，只适用于表面比较坚硬或含水分较少的生物样品。如：昆虫、骨骼、牙齿、毛发、种子、果壳、花粉、植物标本，以及微小材料如细菌等。具体做法是：先将样品固定，并系列脱水到100％，在大气中让脱水剂自然挥发即可，但注意环境要干燥。因为脱水剂的表面张力系数比水小所以样品在脱水剂中不会过多变形而影响其结构。

6.1.4常规生物样品制备技术

制备过程如下： ①取材根据需要，切取适当大小的样品。专门的SEM备有灵活可动，范围较大的样品台，样品可大些。装在透射电镜上的扫描附件，活动范围较小，样品直径应在3～4mm左右。 ②漂洗用缓冲液把组织表面洗净，否则会影响正常形态，但以快速和轻巧为宜，尽量保护器官或组织的表面结构，使其不致因不慎的操作造成人为损伤。 ③固定用2.5～5％戊二醛/缓冲液在室温或4摄氏度下前固定。具体时间可根据样品的需要而定，一般单细胞10-30分钟，较大的或较硬的样品可达1-2h或更长时间。 ④漂洗用缓冲液洗3次，洗去未结合的戊二醛。 ⑤重固定 1％锇酸/缓冲液4摄氏度下后固定10～60min。有时为了提高样品的反差和固定效果，可以综合固定液，如随意选用戊二醛、多聚甲醛、锇酸等按照不同的比例混合使用。

扫描电镜的样品制备

扫描电镜的样品制备
扫描电镜（Scanning Electron Microscope，SEM）是一种高分辨率的显微镜，对于复杂的样品结构、微观形态和表面形貌的分析非常有用。

然而，要获得良好的扫描电镜显像效果，样品的制备至关重要。

下面将介绍几种常用的扫描电镜样品制备技术。

1. 金属喷涂法
金属喷涂法是扫描电镜样品制备的经典方法。

该方法使用金属喷涂仪将金属颗粒喷在样品表面，使其形成一层均匀、导电性良好的金属膜，以便在扫描电镜中观察样品的表面结构。

该方法适用于非导电样品，如细胞、生物组织、聚合物等。

2. 离子切割法
离子切割法利用离子切割机将样品切割成纤细的薄片，以便于在扫描电镜中观察。

这种方法适用于非常薄的样品，如材料薄片、芯片等。

它可以提供非常高分辨率的图像，并且可以通过纵向切割获得样品的三维结构。

3. 冷冻切片法
冷冻切片法是一种用于生物样品的扫描电镜制备方法。

该方法使用超低温技术将样品冻结，并使用超薄刀片切割成极薄的切片，通常为50~200纳米。

这可以保留样品的水感性和原始形态，并使其在扫描电镜中观察更加清晰。

4. 化学蚀刻法
化学蚀刻法是用于金属样品的扫描电镜制备方法。

该方法使用酸或碱对样品表面进行蚀刻，以去除不需要观察的材料，形成清晰的样品结构。

该方法适用于金属薄膜、晶体和合金等金属材料。

总之，良好的扫描电镜样品制备是获得高品质扫描电镜图像的关键。

每种样品都有其独特的制备方法，为了获得最好的结果，在选择合适的制备方法时需要谨慎选择。

扫描电镜样品制备方法

扫描电镜样品制备方法一、取材组织块小于3立方毫米（单细胞培养或收集展片于盖玻片或滤膜上）。

二、固定前固定：2.5%戊二醛（磷酸缓冲液配制）固定2小时或更长时间。

用0.1M pH7.4磷酸盐缓冲液漂洗三次，每次10分钟。

三、脱水＊脱水在4度冰箱内进行，所有脱水步骤建议在专用的冷冻干燥杯中进行，冷冻干燥杯请于实验前一天到电镜室领取。

＊整个过程，样品不要暴露于空气。

1.乙醇脱水，每一级10-20分钟：30%乙醇—50%乙醇—70%乙醇—90%乙醇—95%乙醇—100%乙醇；2.然后从乙醇逐步过渡到叔丁醇，纯叔丁醇每次10分钟，3次以上；此系列操作均在25度环境中进行；3.纯叔丁醇4度冰箱过夜，样品结晶。

四、冷冻干燥＊需事先预约冷冻干燥时间；第二天上午八点半讲冷冻结冰的样品用冰盒送至电镜室进行冷冻干燥。

五、喷金附件1：细菌类样品的前处理方法1.盖玻片泡酸，清洗，烘干。

用剪刀剪碎，挑出5mm*5mm大小玻片备用。

玻片过大或者过厚影响观察效果。

2.菌液或样品悬液离心，需要可进行清洗，加入固定液，吹散固定，于4度冰箱固定2小时左右。

3.固定结束后，去固定液，加入PBS浸泡清洗，10分钟。

离心去PBS，固体沉淀根据量多少，加入适量PBS，制成浓度较高的悬液（目测较混浊）。

样品浓度对后期吸附有较大影响，浓度过低可能吸附量会很少。

4.取鸡蛋清，稀释3-5倍（一定要稀释！蛋清过浓会包裹样品），之前准备好的玻片放入液体内蘸一下，取出晾干至触摸感觉有点黏的状态（快干的状态）。

将第3步取得的悬液滴在玻片上，吸附30秒到1分钟，用滤纸吸去多余液体。

（样品悬液在玻片上停留时间过长将导致样品被蛋清完全包裹而无法观察）。

5.在玻片上滴加固定液，固定10分钟，固定后用PBS浸泡清洗10分钟，放入干燥杯开始进行脱水。

磷酸盐缓冲液(PBS)a.磷酸盐缓冲液（0.2M）甲液：0.2M的磷酸氢二钠溶液乙液：0.2M的磷酸二氢钠溶液Na2HPO42H2O 35.61g (Na2HPO47H2O) 53.65g (Na2HPO412H2O) 71.64g NaH2PO4H2O 27.60g ( NaH2PO42H2O) 31.21g加蒸馏水溶解成1000ml 加蒸馏水溶解成1000ml按下表混合甲、乙两液既得所需pH的0.2M缓冲液0.2M磷酸盐缓冲液的配制将溶液用蒸馏水1：1稀释，则配得0.1M的缓冲液。

扫描电镜样品制备及图像质量影响因素分析①

扫描电镜样品制备及图像质量影响因素分析①扫描电镜是一种非常重要的分析工具，它可以用来观察微观颗粒和组织结构。

在使用扫描电镜进行观察时，样品的制备和图像的质量是非常重要的因素。

本文将介绍扫描电镜样品制备的方法，以及影响图像质量的因素，帮助读者更好地理解和掌握扫描电镜的应用。

一、扫描电镜样品制备的方法扫描电镜样品制备是观察样品的第一步，样品的制备质量直接影响到后续观察结果的准确性和可靠性。

目前扫描电镜样品制备的方法主要有化学固定法、膜支撑法以及冷冻切片法等。

1. 化学固定法化学固定法是通过用冰醋酸、乙醛等物质将样品固定在样品架上，使得样品的结构保持原状。

这种方法适用于大多数的样品，而且固定后的样品可以保存很长时间，方便后续的操作。

但是在使用化学固定法时需要注意，要避免过量的固定剂，以免对样品的形态产生破坏。

2. 膜支撑法膜支撑法是在样品的表面涂覆一层聚合物薄膜，使得样品表面平整并且增加样品的机械强度。

这种方法适用于软脆的样品，可以有效避免在样品处理过程中出现的形变和损坏。

但是在使用膜支撑法时需要注意，选择合适的薄膜材料和合适的涂覆方法，以免对样品造成干扰。

3. 冷冻切片法冷冻切片法是将样品冷冻并且切成很薄的切片，然后在扫描电镜中直接观察。

这种方法适用于生物样品或者含水样品的制备，可以有效保持样品的生物活性和结构完整性。

但是在使用冷冻切片法时需要注意，样品的冷冻和切片过程中必须迅速，并且要避免在样品表面生成冰晶，以免影响观察结果。

二、图像质量影响因素分析扫描电镜的图像质量是反映样品观察效果的重要指标，图像质量的好坏直接影响到对样品结构和特征的分析。

在扫描电镜图像质量的影响因素中，主要包括电镜参数、样品处理以及图像处理等几个方面。

1. 电镜参数电镜参数是影响扫描电镜图像质量的重要因素，主要包括电压、放大倍数和孔径等。

较高的电压可以提高电子束的穿透能力，对于较厚的样品可以选择较高的电压，而对于较薄的样品可以选择较低的电压。

扫描电镜制样方法研究生

常用的喷镀物质有：碳棒、金、铬、铂、银、铜等
能谱分析时，尽可能选择样品不含有的元素来做镀层，如测试AuAg矿，不能喷金，测试方解石，不能喷碳
导电性特差的物质或样品表面粗糙样品（如高分子材料）：喷金效果好
半导体：喷碳、金都可以照相倍数大于50K：建议喷碳或铬，金粒度大于50K时可见
购买铜网时注意使用要求
1、干法
干法适用于安装数微米级的大颗粒，制备步骤为“撒、刮、吹”三项。
直接撒粉法
将粉末直接撒在清洁光亮的样品台、导电截片上或导电胶、导电液上
把试样台水平轻轻晃动几下,使试样分布平整、均匀
用吸耳球吹，观察样品分布情况，如需照小倍数照片，最好在样品台一角撒较密集的样品
用电热风吹干或用电子枪吹掉没有粘劳的粉末
谢谢！请提宝贵意见
3.有毒物质（测试完毕需自行带走样品处理）
4.所有样品最好能在100度下干燥1-3小时或在白炽灯下照射3小时以上或自然风干半天（特别是用导电液一定要干燥）

一、能谱样品制样要求
扫描电镜能谱分析，能对样品进行微区化学分析，对于表面平整光滑的样品测试精度能达到半定量分析要求，而轻元素（Ｂ、Ｃ、Ｎ、Ｏ、Ｆ）仅能定性，即确定有无该元素与否，而对于不平整的样品，则测试精度较差，有些人将球状或不规则的样品，试图对其进行线、面扫描，以期了解成分的轻微变化，这种研究方法没有实际意义。
5.橡胶样品的制样橡胶是粘弹性物质,又是绝缘体，既会产生弹性，又极易产生荷电现象，要进行扫描电镜分析，其样品的前处理非常关键。
三、固体样品的安装步骤 1.将导电双面胶带（碳或铜）粘在样品台面上
2.剥去面纸，露出胶面
3.把样品直接粘到胶带上，粘结时要确保底面与胶面贴实，为此要求样品贴面保持平整，不平整可以事先用砂纸磨平，并将底部的粉末擦净。也可以用导电液抹在样品座上，然后将样品沾上会更牢固些。

实验十一扫描电镜样品制备

离子溅射镀膜法操作注意事项：离子溅射镀膜法操作注意事项： • 样品要充分干燥，否则，金属颗粒不但不能附着，反而会引起样品损伤，特别是能放出有机气体的样品，有机气体会因放电而分解，使样品引起碳化污染。 • 加高压时辉光放电的颜色应为蓝色或紫蓝色，若是红色，应立即停止加高压，继续抽气。 • 加高压后，若真空度下降幅度较大，应立即停止镀膜，待充分抽气后再继续镀膜。
4. 脱水从小瓶中吸出缓冲液，加入乙醇逐级梯度脱水，脱水剂的乙醇浓度依次为30%－50%－70%－ 80%－90%－100%乙醇（两次）逐级脱水；样品在每级停留15-30分钟。 5. 置换乙醇吸出乙醇，加入醋酸异戊酯与乙醇1：1的混合液，浸泡10-20分钟并适当摇动，再吸弃混合液，加入纯醋酸异戊酯浸泡10-20分钟并适当摇动。 6. 样品的干燥常规临界点干燥法。
临界点干燥法
• 临界点干燥法是一种消除了物相界面(液相／气相)，也就是消除了表面张力来源的干燥方法。这种方法由于没有表面张力的影响，所以样品不易收缩和损伤。具体处理步骤如下：装样：将样品从醋酸异戊酯中挑入(或倒入)样品笼中，用滤纸吸去样品笼外围的醋酸异戊酯，然后连笼移入仪器的样品杯(高压容器)内，盖上盖并拧紧以防漏气。(注：在装样前，应先打开仪器电源，将温度调节设定在0℃处预冷 10～15min，以保证液态二氧化碳有足够量进入样品杯中)。注入液体二氧化碳依次打开二氧化碳钢瓶排气阀和仪器的进气阀在0～10℃下，向样品杯注入液体二氧化碳。当液体二氧化碳充至样品杯容积的50％(通过刻度尺观察，以液面超过样品笼为度)时，关闭仪器进气阀，静置15～ 20min，让醋酸异戊酯向液态二氧化碳中充分扩散，然后，打开仪器排气流量计阀门和进气阀门，让其边排气边充液 10min左右，(让含有醋酸异戊酯的二氧化碳排出和充入新鲜的液态二氧化碳)再关闭排气阀；继续充入液体二氧化碳至样品杯的80％左右，关闭进液阀，停止充液。

扫描电镜测试生物样品制备技术.

扫描电镜测试生物样品制备技术大多数生物样品都含有水分,而且比较柔软,因此,在进行扫描电镜观察前,要对样品作相应的处理。

扫描电镜样品制备的主要要求是:尽可能使样品的表面结构保存好,没有变形和污染,样品干燥并且有良好导电性能。

一.样品的初步处理(一取材样品面积可为8mm×8mm,厚度可为5mm。

对于易卷曲的样品如血管、胃肠道粘膜等,可固定在滤纸或卡片纸上,以充分暴露待观察的组织表面。

(二样品的清洗用扫描电镜观察的部位常常是样品的表面,即组织的游离面。

由于样品取自活体组织,其表面常有血液、组织液或粘液附着,这会遮盖样品的表面结构,影响观察。

因此,在样品固定之前,要将这些附着物清洗干净。

清洗的方法有以下几种:1.用等渗的生理盐水或缓冲液清洗;2.用5%的苏打水清洗;3.用超声震荡或酶消化的方法进行处理。

例如清洗肠粘膜表面的粘液,可用下面的方法:清洗液配方:透明质酸酶300 (gα—糜蛋白酶 10 mg生理盐水 100 ml清洗液的pH为5.5~6。

清洗的方法是将样品浸泡在配好的清洗液中,边浸泡边震荡30分钟,最后用双蒸水洗3次。

无论用哪种清洗方法,注意在清洗时不要损伤样品。

(三固定固定样品的常用试剂为戊二醛及锇酸双固定。

由于样品体积较大,固定时间应适当延长。

也可用快速冷冻固定。

(四脱水样品经漂洗后用逐级增高浓度的酒精或丙酮脱水,然后进入中间液,一般用醋酸异戊酯作中间液。

二.样品的干燥扫描电镜观察样品要求在高真空中进行。

无论是水或脱水溶液,在高真空中都会产生剧烈地汽化,不仅影响真空度、污染样品,还会破坏样品的微细结构。

因此,样品在用电镜观察之前必须进行干燥。

干燥的方法有以下几种:(一空气干燥法空气干燥法又称自然干燥法,就是将经过脱水的样品,让其暴露在空气中使脱水剂逐渐挥发干燥。

这种方法的最大优点是简便易行和节省时间;它的主要缺点是在干燥过程中,组织会由于脱水剂挥发时表面张力的作用而产生收缩变形。

一种快速简便的扫描电镜样品制备法

17 (4) ∶341～ 342 1998 年
341
一种快速简便的扫描电镜样品制备法
李向党
(西安第四军医大学电镜室, 西安 710032)
为了研究生物样品凹凸不平的立体结构, 通常需要使用扫描电镜的样品制备技术, 常规扫描电镜的样品制备技术所需时间长, 操作复杂, 仪器昂贵, 基层单位无法承受。我们现采用六甲基二硅胺烷 (HM D S) 作干燥剂, 进行空气干燥, 获得满意的效果, 此法国内尚未见报道, 现介绍如下。材料和方法
[ 3 ] 李向党. 单用叔丁醇的扫描电镜样品制备法. 第四军医大学学报, 1993, 14 (5) ∶383—384.
342
17 (4) ∶341～ 342 1998 年
图 1 用 HM D S 方法处理的小鼠肾小球表面扫描电镜照片图 2 用常规方法处理的小鼠肾小球表面扫描电镜照片
经 HM D S 干燥的标本, 组织微细结构保存良好, 人工变化小, 细胞表面结构丰满, 人工损伤小, 层次清晰, 反差优良。
此法不需要贵重仪器临界点干燥器以及 CO 2 和液氮, 放置标本多且不易污染标本, 简化了组织置换和干燥过程。用 HM D S 作干燥剂, 能减少组织收缩变形, 并使干燥更加彻底。我们所用的 HM D S 为国内产品, 价格低廉, 容易购买, 易于推广, 适用于广大基层单位。HM D S 有毒且挥发性特强, 所以应在通风厨内进行干燥。在实验中, 要选用纯度高的干燥剂, 就可避免其杂质污染标本, 达到预期的效果。参考文献
[ 1 ]Boyde A and W ood C. P rep a ra tion of an im a l tissue fo r su rface scann ing electron m icro scop y. J. M icro sc. , 1969, 90∶221_ 249.

实验三扫描电子显微镜样品制备及观察

实验三扫描电子显微镜样品制备及观察实验三是关于扫描电子显微镜样品制备及观察的实验。

以下是一个超过1200字的实验报告范例：一、实验目的1.学习扫描电子显微镜（SEM）样品制备的方法。

2.理解SEM观察的原理并学会操作设备。

3.通过SEM观察不同样品的形貌结构，并分析其特点和应用。

二、实验原理扫描电子显微镜是一种通过电子束扫描样品来获得高分辨率图像的仪器。

其工作原理是将样品置于真空室中，利用极细电子束扫描样品表面，通过检测不同位置形成的信号来重建出样品的图像。

具体步骤如下：1.样品制备：常见的SEM样品制备方法有两种，即传统方法和无需真空方法。

传统方法包括金属涂覆、阴影蒸发、离子刻蚀等，而无需真空方法则是通过场发射扫描电子显微镜（FE-SEM）来实现。

根据实验需要和样品性质，选择合适的方法进行样品制备。

2.SEM操作：首先，打开SEM仪器，并进行必要的预热和真空抽气等准备工作。

接下来，将制备好的样品放置在SEM样品台上，调整样品位置和角度。

然后，通过SEM软件来控制电子束的扫描和信号的收集。

最后，进行图像的调整和保存。

3.SEM观察与分析：根据实验目的和要求，选择合适的放大倍数和扫描速度来观察样品的图像。

观察过程中，可以通过调整参数和改变扫描区域来优化图像质量。

观察完毕后，可以通过图像分析软件来进行样品表面形貌特征的定量分析。

三、实验步骤1.样品制备：根据实验要求，选择适当的样品制备方法进行。

在本实验中，我们选择了金属涂覆方法。

首先，将待观察的样品表面清洗干净，以去除附着物。

然后，将样品放置在真空腔内，并进行表面蒸发金属涂覆。

2.SEM操作：打开SEM仪器，并进行必要的预热和真空抽气等准备工作。

等待SEM仪器达到稳定状态后，将制备好的金属涂覆样品放置到SEM样品台上，调整样品的位置和角度。

接下来，通过SEM软件来控制电子束的扫描和信号的收集。

调整参数直至获得清晰的样品图像。

3.SEM观察与分析：根据实验要求，选择适当的放大倍数和扫描速度来获得样品的图像。

【实验】扫描电镜实验报告

【关键字】实验扫描电镜实验报告篇一：扫描电镜实验报告扫描电镜实验报告班级：材化11学号：姓名：李彦杰日期：XX 05 16一、实验目的1. 了解扫描电镜的构造及工作原理；2. 扫描电镜的样品制备；3. 利用二次电子像对纤维纵向形貌进行观察；4. 了解背散射电子像的应用。

二、实验仪器扫描电子显微镜（热发射扫描型号JSM-5610LV）、真空镀金装置。

扫描电镜原理是由电子枪发射并经过聚焦的电子束在样品表面扫描，激发样品产生各种物理信号，经过检测、视频缩小和信号处理，在荧光屏上获得能反映样品表面各种特征的扫描图像。

扫描电镜由下列五部分组成，主要作用简介如下：1．电子光学系统。

其由电子枪、电磁透镜、光阑、样品室等部件组成。

为了获得较高的信号强度和扫描像，由电子枪发射的扫描电子束应具有较高的亮度和尽可能小的束斑直径。

常用的电子枪有三种形式：普通热阴极三极电子枪、六硼化镧阴极电子枪和场发射电子枪。

前两种属于热发射电子枪；后一种则属于冷发射电子枪，也叫场发射电子枪，其亮度最高、电子源直径最小，是高分辨本领扫描电镜的理想电子源。

电磁透镜的功能是把电子枪的束斑逐级聚焦缩小，因照射到样品上的电子束斑越小，其分辨率就越高。

扫描电镜通常有三个磁透镜，前两个是强透镜，缩小束斑，第三个透镜是弱透镜，焦距长，便于在样品室和聚光镜之间装入各种信号探测器。

为了降低电子束的发散程度，每级磁透镜都装有光阑；为了消除像散，装有消像散器。

样品室中有样品台和信号探测器，样品台还能使样品做平移、倾斜、转动等运动。

2. 扫描系统。

扫描系统的作用是提供入射电子束在样品表面上以及阴极射线管电子束在荧光屏上的同步扫描信号。

3. 信号检测、缩小系统。

样品在入射电子作用下会产生各种物理信号、有二次电子、背散射电子、特征X射线、阴极荧光和透射电子。

不同的物理信号要用不同类型的检测系统。

它大致可分为三大类，即电子检测器、阴极荧光检测器和X射线检测器。

4. 真空系统。

扫描电镜制样及观察

扫描电镜1.固定：用2.5%（动物）或4%（植物）戊二醛固定液于4℃下固定6h以上（昆虫样也可以：选用卡诺固定液固定12h保存于70%酒精或波恩式固定液固定4-24h），然后转到70%酒精的标本，在解剖镜下解剖，得到自己所要观察的结构。

注：如材料中有空气不能沉入固定液时，则在真空泵下抽气至样品沉入瓶底。

2.清洗：PBS(0.1mol/L磷酸缓冲液)漂洗三次，每次5-10min (视材料的厚薄而定)。

依据研究部位、结构的不同在用超声波清洗仪中清洗，一般20s-10 min 不等。

PBS漂洗的目的是洗去残留的戊二醛，防止戊二醛的存在与下一步的俄酸固定液发生反应而影响固定效果。

3.后固定：在用1%锇酸固定2小时（需放入4℃冰箱中）（此步可以省略。

）。

4.清洗：如果用锇酸固定了，就要用PBS漂洗三次，每次5-10min。

5.脱水和酒精：在10％、30%、50％、70％、80％、90％、95％的酒精浓度梯度液中逐级脱水各10-20 min，100％两次，每次20-30 min（可保存于70%酒精过夜）；在25％、50％、75％叔丁醇浓度梯度液中逐级脱酒精各15min （叔丁醇浓度梯度：无水酒精和叔丁醇体积比是3:1；1:1；1:3，目的是脱酒精），纯叔丁醇30-40 min。

6.冷冻干燥：纯叔丁醇加入放有样品的样品仓，注意加入纯叔丁醇要没过样品，干燥约3h。

7.粘台：将干燥后的样品利用双面导电胶在显微镜下粘到样品台上。

8.喷金：在真空喷涂仪内喷金。

9.观察与照相：在S-3400N型电子显微镜（加速电压5-15KV）下观察并数码拍照。

注意：1）卡诺氏固定液(Carnoy's Fluid)：配方（v/v）：3份无水酒精：1份冰醋酸适用于一般植物组织和细胞的固定，常用于根尖，花药压片及子房石蜡切片等。

有极快的渗透力，根尖材料固定15-20min即可，花药则需1h左右，此液固定最多不超过24h，固定后用95%酒精冲洗至不含冰醋酸为止；如果材料不马上用，需转入70%酒精中保存。